Método de Willis

Concentração Por
Flutuação Em Solução De
Cloreto De Sódio Saturada
Técnicas de Concentração por Flutuação

 fundamentam-se no princípio da diferença de densidade específica entre

os ovos de helmintos, cistos e oocistos de protozoários e o material fecal,
a fim de que esses organismos flutuem na superfície dos reagentes com
densidade específica

 Os procedimentos de flutuação usam reagentes de alta densidade para a

concentração dos ovos, cistos e oocistos de parasitos
Técnicas de Concentração por Flutuação

Vantagens: formação na superfície do tubo de uma membrana clara com

poucos detritos fecais e a remoção seletiva de ovos e cistos, mesmo quando
presentes em pequeno número no bolo fecal, resultando em quantidade
maior de organismos de certas espécies.

Desvantagens: A alta densidade dos reagentes é a mais significativa

desvantagem dos procedimentos de flutuação

 A parede dos ovos e dos cistos, com muita frequência, entra em colapso e
os parasitos tornam-se distorcidos na aparência, dificultando a
identificação
 Os trofozoítose os ovos operculados não são isolados através dessa
técnica; flutuam somente os pequenos ovos de trematódeos, como o
Clonorchis e o Heterophyes.

 Ovos pesados, como os de Ascaris, Taenia, Schistosoma, Fasciola e

Fasciolopis, não flutuam;

 alguns cistos delicados e as larvas são distorcidos.

 As gorduras e os óleos presentes nas fezes flutuam com os ovos e cistos,

tornando a preparação algumas vezes insatisfatória para o exame.
Nas técnicas de flutuação são usadas principalmente as soluções saturadas:
 Cloreto de sódio,
 Sacarose,
 Sulfato de zinco
 Sulfato de magnésio

 A densidade específica dessas soluções saturadas variam de 1,18 a

1,26g/ml.
Técnica de Willis Flutuação em Solução Saturada de Cloreto de
Sódio
Fundamenta-se na dupla propriedade que apresentam certos ovos de
helmintos de flutuarem na superfície de uma solução de densidade elevada
e de aderirem ao vidro

 Indicado para a pesquisa de ovos com densidade específica baixa, como

os de ancilostomídeos e de Trichostrongylus orientalis, embora não seja
recomendado para os ovos pesados de trematódeos, ovos de E.
vermicularis e ovos inférteis de A. lumbricoides.
 Os cistos de protozoários se retraem, ficando irreconhecíveis.
Amostra
Material fecal não preservado (fezes frescas)

Reagente
Cloreto de sódio (NaCl)
 A solução saturada de cloreto de sódio (NaCl) com densidade específica de
1,20g/ml
 40g de NaCl em 100ml de água (destilada)
Material
 Laminas de microscopia
 Lamínulas
 Becker
 Bastão de vidro
 Solução saturada de NaCl
 Peneira
 Tubos de vidros
Procedimentos
1. Usar luvas durante todas as etapas do procedimento.
2. Colocar uma quantidade de fezes frescas de aproximadamente 1 a 2g,
coletada de várias partes do bolo fecal, em um Becker. Completar 1/4 da
capacidade do recipiente com solução saturada de cloreto de sódio.
3. Suspender as fezes na solução saturada salina até haver uma total
homogeneização.
4. Passar uma quantidade de amostra homogeneizada para um tubo de de vidro
até cria um menisco
5. Colocar uma lamínula (22 x 22mm) ou uma lâmina sobre a borda do tubo
6. A lamínula deve ficar em contato com o menisco durante 30 a 45 minutos; não
deverá haver formação de bolhas de ar entre a lamínula e a superfície do
líquido. A gota contendo os ovos se adere à face inferior da lamínula
7. Remover a lamínula e inverter rapidamente sua posição sobre uma lâmina.
Examinar ao microscópio com objetiva de pequeno aumento.
Observações
1. Os ovos não flutuam na superfície do reagente quando a homogeneização
do material fecal é incompleta, havendo uma imperfeita separação dos ovos
e dos detritos fecais.
2. A flutuação dos ovos não se realiza quando o período de flutuação é
muito curto (menos de 30 minutos) ou muito longo (mais de 60 minutos).
Nesse caso os ovos que flutuam na superfície podem descer para o fundo
Do tubo