Histologia&Embriologia

Padres Citoqumicos

Padres Citoquimicos
Corantes: substncias com a propriedade de associar selectivamente uma cor a elementos celulares Padres citoqumicos: modelos nos quais a um corante corresponder a colorao de determinados elementos celulares. se faz

Hemalmen-Eosina
A hematoxilina um corante indirecto, de aco progressiva, associado a um mordente, o almen de potassio. Desta associao resulta uma laca, o hemalmen: Cora estruturas carregadas negativamente (cidas) de azul-arroxeado (ex.: DNA, RNA) Comporta-se como um corante bsico, corando o ncleo, o retculo endoplasmtico rugoso e ribossomas (devido elevada concentrao em DNA e RNA, respectivamente) coram organelos que apresentam basofilia

A eosina: um corante directo mas de aco igualmente progressiva. Comporta-se como um corante cido Cora estruturas carregadas positivamente (bsicas) de vermelho ou rosa (ex.: maioria das protenas citoplasmticas e algumas fibras da matriz extracelular)

Em termos gerais, a aplicao do hemalmen-eosina em clulas animais cora os ncleos de azul e o citoplasma de rosa ou vermelho.

Azul de Toluidina

Corante bsico, Em alguns casos produz uma colorao distinta da sua prpria cor (metacromasia) Cora molculas carregadas negativamente como os glicosaminoglicanos de vermelho-prpura. Destacam-se metacromasias ao nvel das granulaes dos mastcitos existentes no tecido conjuntivo do eixo das vilosidades intestinais e nos grnulos de secreo das clulas caliciformes. Os ncleos so corados duma forma ortocromtica, ou seja, num azul transmitido pelo prprio grupo cromforo do corante.

Pgina 1 de 6

Histologia&Embriologia

Padres Citoqumicos

Azul ciano

um corante da mucina. Certos tipos de mucina, mas no todos, so corados de azul por este mtodo (ex:cartilagem). Pode ser usado em conjugao com outros mtodos de colorao como H&E ou van Gieson. Qd esta tcnica combinada com a de van Gieson, a cor deste corante torna-se verde.

cido Peridico-Schiff (PAS)

O cido peridico um agente oxidante que quebra as ligaes C-C dos grupos 1,2glicol, transformando-os em di-aldedos. Os aldedos resultantes podem assim combinar-se com o reagente de Schiff. Todas as substncias que contm estes grupos 1,2glicol, so PASpositivas: Polissacridos (glicognio, amido, celulose) Glicoconjugados (glicolpidos, glicoprotenas e glcidos fosforilados). Estruturas PAS-positivas: Prato estriado com o seu glicoclix Clulas caliciformes devido existncia de mucina Membrana basal pela presena da laminina

Feulgen

uma tcnica especfica para o DNA que cora de roxo mais ou menos intenso, consoante o estado de condensao da cromatina. A colorao pelo reagente de Schiff requer uma hidrlise moderada do DNA com cido clordrico (expondo grupos aldedo livres nas molculas de desoxiribose). Os grupos aldedo dos cidos nucleicos, combinam-se ento com o reagente de Schiff (composto por fucsina e cido sulfuroso), originandose uma cr prpura arroxeada nos locais onde existe DNA.

Verde de Metilo-Pironina
Par de corantes de aco directa e progressiva, que apresentam uma grande afinidade para os cidos nucleicos. O verde de metilo um corante bsico, que apresenta especifidade para o DNA. A pironina tambm um corante bsico, mas que cora o RNA de vermelho. Assim, os ncleos das clulas coram de roxo (verde + vermelho), enquanto o citoplasma cora de vermelho. Clulas com um grande contedo citoplasmtico em RNA, como os plasmocitos situados no eixo conjuntivo das vilosidades e as clulas

Pgina 2 de 6

Histologia&Embriologia

Padres Citoqumicos

epiteliais das criptas de Lieberkuhn, so intensamente coradas pela pironina

Tricrmios
Mistura de 3 corantes. Esta tcnica uma das chamadas tcnicas para o tecido conjuntivo, j que usada para demonstrar elementos do tecido de susteno, principalmente colagneo. P.ex., na cirrose heptica aumenta a quantidade de tecido conjuntivo fibroso, o que facilmente observvel com esta tcnica. H dois grupos: Van Gieson: cora colagneo de vermelho Masson/Mallony/Cajal: coram colagneo de verde/azul

Tricrmio de masson
Azul: ncleos e outras estruturas basfilas Verde/azul (dependendo de qual das variantes da tcnica for utilizada): colagneo Vermelho brilhante: citoplasma, msculo, eritrcitos, ceratina.

Van Gieson
colagneo corado de vermelho ncleos corados de azul eritrcitos e citoplasma de amarelo Quando usado em combinao com um corante para fibras elsticas (Weigert), a elastina cora de azul/preto, para alm dos resultados acima decritos. Essa tcnica de colorao particularmente til para vasos sanguneos e pele.

Colorao para reticulina

Demonstra as fibras de reticulina do tecido de sustentao que se coram de azul/preto. Os nucleos podem ser contracorados em azul pela hematoxilina ou de vermelho, pelo corante vermelho neutro.

Alcian Blue
Cora certos tipos de mucina de azul

Azan
Mtodo para tecido conjuntivo, mas excelente para demonstrao de detalhes citolgicos finos, especialmente no epitlio: Nucleos vermelho brihante Colagnio e membranas azul Musculos e eritrcitos laranja a vermelho.

Pgina 3 de 6

Histologia&Embriologia

Padres Citoqumicos

Giemsa
Mtodo padro para corar clulas sanguineas e outros esfregaos de clulas Nucleos azul escuro a violeta Citoplasma azul palido Eritrcitos rosa palido

Hematoxilina frrica
a principal substncia utilizada no mtodo de Bharadway-Love. um corante indirecto, que recorre ao almen de ferro amoniacal em soluo aquosa como mordente. De aco regressiva, tem grande afinidade para protenas, corando com maior intensidade as mitocndrias de cor negra. Num procedimento de elevada diferenciao, destaca sobretudo lipoprotenas.

Metodo de Nissl e do azul de metileno

Utilizam a substncia de Nissl para corar o reticulo endoplasmtico rugoso encontrado nos neurnios.

Preto do Sudo e Tetrxido de smio

Evidenciam estruturas contendo lipidos, com a mielina, numa cor preto acastanhado.

Sais de prata

Cora o colagneo tipo III Reticulina Este mtodo demonstra as fibras de reticulina do tecido de sustentao, que se coram de azul/preto por esta tcnica. Os ncleos podem ser contracorados em azul pela hematoxilina ou em vermelho pelo corante vermelho neutro.

Mtodos da prata e do ouro

Hoje em dia so ocasionalmente usados para demonstrar estruturas finas como prolongamentos celulares, p.ex. em neurnios, placas motoras terminais e junes intercelulares.

Pgina 4 de 6

Histologia&Embriologia

Padres Citoqumicos

Dependendo do mtodo utilizado, o produto final preto, marrom ou dourado.

Tcnicas imuno-histoquimicas
Permite identificar qualquer substncia (antigenio), desde que haja anticorpos disponiveis contra a mesma. Os anticorpos so produzidos atravs da injeco da substncia humana que se pretende distinguir noutro animal. Esse animal reconhece-a como estranha e comea a produzir anticorpos contra o antignio. Desse modo pode ser criada uma fonte inextinguivel, usando-se a tecnologia monoclonal. Coloca-se um corte de tecido numa lmina de vidro e uma soluo de anticorpos colocada sobre a preparao. O anticorpo fixa-se ao antignio e o excesso de anticorpos lavado, de modo que apenas as clulas que tm o antignio tm o anticorpo fixado a si. Para demonstrar a posio do anticorpo na clula existem vrios mtodos: Metodo imunofluorescncia: os anticorpos so previamente marcados com uma substncia fluorescente (fluorescena) sendo indentificado posteriormente com um microscopio de fluorescncia. Mtodo imunoperoxidase: os anticorpos so marcados com uma enzima, com a peroxidase) que converte um substrato incolor num produto colorido.

Citoqumica de Enzimas
Caracteriza-se por uma identificao enzimtica selectiva, recorrendose habitualmente a cortes por congelao num cristato para evitar a desnaturao proteica.

Fosfatase alcalina A actividade fosfatase alcalina apresenta-se associada a protenas

secretadas, sendo ancorada no exterior da clula pelo glicoclix. No existe, portanto, em lisossomas. A sua concentrao aumenta ao longo da vilosidade intestinal desde a sua poro basal at poro apical onde a colorao castanho/cinzento-escuro, mais intensa, denota um papel na absoro intestinal. Simultaneamente, demonstra a progressiva diferenciao que os enterocitos sofrem no seu trajecto de migrao da base para o topo das vilosidades.

Fosfatase cida A actividade fosfatase

cida apresenta-se predominantemente associada a enzimas de degradao intracelular, embora possa encontrar-se associada ao glicoclix e, neste caso, com marcao do prato estriado.

Pgina 5 de 6

Histologia&Embriologia

Padres Citoqumicos

Tal como acontece para a fosfatase alcalina, observa-se um progressivo aumento da actividade fosfatase alcalina no prato estriado da base para o topo das vilosidades. Como esperado, o mtodo determina a colorao dos lisossomas de castanho/laranja-escuro.

Autoradiografia
Permite identificar o percurso e o destino de substncias radioactivas introduzidas na clula, por impresso de emulses fotogrficas pela radiao emitida. Utilizam-se para o efeito istopos radioactivos previamente incorporados em precursores de molculas biolgicas. Aplica-se habitualmente a tcnica de pulso-caa, na qual aps um perodo de administrao do istopo radioactivo (pulso - neste caso, timidina tritiada) este substitudo pela forma no radioactiva (caa na qual se segue o trajecto do istopo incorporado). As imagens referem-se a material recolhido em epitlio intestinal de ratinho, ao fim dum perodo de 2 horas, 6 horas, 1 dia e 3 dias, onde visvel a migrao centrpeta de gros de autoradiografia da zona basal para a extremidade apical das vilosidades. O facto observado deve-se incorporao da timidina em clulas com actividade mittica que, no caso das vilosidades intestinais, se encontram exclusivamente nas criptas de Lieberkuhn da sua extremidade basal. A migrao posterior dos gros de autoradiografia resulta da deslocao de clulas j diferenciadas, por presso de clulas recm-diferenciadas a partir das clulas estaminais da base da vilosidade.

Pgina 6 de 6