ENZIMAS

Profª. Regina Helena Pires

ENZIMAS

Chamamos de enzimas
as proteínas complexas
(heteroproteínas ou
proteínas derivadas)
que atuam como
catalisadores nos
processos biológicos. A
enzima e a substância
sobre a qual vai agir
(chamada substrato)
formam um composto
intermediário que,
posteriormente, sofre
um desdobramento,
regenerando a enzima.
 ENZIMAS – SÍTIO ATIVO

O sítio de ligação do substrato de

uma enzima é dado por um arranjo
tridimensional especial dos
aminoácidos de uma determinada
região da molécula, geralmente
complementar à molécula do
substrato, e ideal espacial e
eletricamente para a ligação do
mesmo. A zona sombreada são os
aminoácidos desta enzima
(proteína) que configuram, neste
caso, o sítio ativo da enzima.

Centro ativo
Ligação da Enzima com o Substrato

Modelo
chave- fechadura
-Prevê um encaixe
perfeito do
substrato no sítio de
ligação, que seria
rígido como uma
fechadura (Emil
Fisher, 1894).
Ligação da Enzima com o Substrato
Modelo ajuste induzido

-MODELO DO AJUSTE INDUZIDO: prevê um sítio de ligação não

totalmente pré-formado, mas sim moldável à molécula do substrato
(Kosland). Evidências experimentais sugerem um terceiro modelo
que combina o ajuste induzido a uma "torção" da molécula do
substrato, que o "ativaria" e o prepararia para a sua transformação
em produto.
 APLICAÇÕES CLÍNICAS DE
ENZIMAS

I- ENZIMAS PLASMÁTICAS: Está presente no plasma em

concentração elevada, é específica do plasma e tem papel
funcional no plasma (Ex. trombina)

II- ENZIMAS TECIDUAIS: Normalmente os níveis

plasmáticos dessas enzimas são muito baixos ou ausentes.
Uma patologia pode causar alterações na permeabilidade
da membrana celular ou, a morte celular resultando no
extravasamento destas para o plasma. Depuração
ocorrerá em função da estabilidade da enzima e de sua
captação.
 DISTRIBUIÇÃO DE ALGUMAS ENZIMAS DE IMPORTÂNCIA DIAGNÓSTICA
Enzima Principal fonte
Amilase Glândulas salivares,
pâncreas, ovários
Aminotransferases Fígado, músculo esquelético,
coração, rins, eritrócitos
Antígeno prostático Próstata
específico
Creatinoquinase Músculo esquelético,
cérebro, coração, músculo
liso
Fosfatase ácida Próstata, eritrócitos
Fosfatase alcalina Fígado, osso, mucosa
intestinal, placenta, rim
γ-glutamiltranspeptidase Fígado, rim
Lactato-desidrogenase Coração, fígado, músculo
esquelético, eritrócitos,
plaquetas, nódulos linfáticos
Lipase Pâncreas
Aplicação(ões) clínica(s)
Enfermidade pancreática
Doenças do fígado, infarto do
miocárdio, doença muscular
Carcinoma de prostáta
Infarto do miocárdio,
enfermidades musculares
Carcinoma de próstata
Doenças ósseas,
enfermidades hepáticas
Enfermidade hepatobiliar,
alcoolismo
Infarto do miocárdio,
hemólise, doenças hepáticas
Enfermidade pancreática
 ENZIMAS DE INTERESSE
CLÍNICO
 Pancreáticas
 Diagnóstico
 Cardiovasculares
 Prognóstico  Hepáticas
 Acompanhamento de tratamentos  Musculares
 Detecção da cura de doenças  Ósseas

 Renais

 Outros tecidos

 Malígnas
 Principais causas de erro nas
determinações enzimáticas

Coleta da Amostra

Uso de
Estase Coagula- Soro
Anticoa- Hemólise
venosa ção Lipêmico
gulante
Principais causas de erro nas
determinações enzimáticas
Conservação da
Amostra

Determinação Não
4oC Estabilidade Proteólise
rápida congelar
 Principais causas de erro nas
determinações enzimáticas

Medida da Atividade

Estabilidade
Condições Limpeza Espectrofotô
dos Pipetagem
da Reação da Vidraria metro
Reagentes
 Principais causas de erro nas
determinações enzimáticas

Avaliação do Resultado

Trabalho Controle de Linearidade Valores de

Criterioso Qualidade da reação Referência
 Metodologias
Determinação da atividade enzimática

Métodos Colorimétricos
Medida da quantidade de produto formado
 Produto formado é um composto corado
 Ex: Método Bessey-Lowry – PAL (Fenilalanina amônioliase)

p-nitrofenil-fosfato PAL p-nitrofenol + Pi

(incolor) (amarelo)

 Produto formado é transformado em composto corado

 Ex: Método de Roy – PAL
Timolftaleína monofosfato PAL Timolftaleína + Pi
NaOH + Na2CO3 (azul)
 Metodologias
Determinação da atividade enzimática

Métodos Colorimétricos
Medida da quantidade de substrato
consumido
Substrato não consumido é transformado em
composto corado
Ex: Método de Caraway
Amido AMS glicose + maltose + dextrinas + Iodo

Complexo coloidal (azul)

 Metodologias
Determinação da atividade
enzimática
Método Cinético
Medida da variação da concentração da coenzima
 Método de Wacker - LDH

COOH COOH
 
CHOH LDH C=O
 
CH3 CH3

NAD NADH + H+

Ácido lático Ácido pirúvico

 ESPECTROFOTOMETRIA POR ULTRA-VIOLETA
REAÇÕES CINÉTICAS

FUNDAMENTO: capacidade de óxido-redução de NADH.

FORMA REDUZIDA: absorve a 340 nm, enquanto que a forma oxidada não tem
absorbância significativa a esse comprimento de onda (280 nm).