PESQUISA

LEOS
ESSENCIAIS

Antnio Carlos Siani

siani@gene.dbbm.fiocruz.br

Andr Luiz Franco Sampaio

sampaio@gene.dbbm.fiocruz

Mariana Conceio de Sousa

mcsouza@far.fiocruz.br

Maria das Graas Mller Oliveira Henriques

henrique@gene.dbbm.fiocruz.br
Laboratrio de Qumica de Produtos Naturais e Farmacologia Aplicada de Far-Manguinhos, Fundao Oswaldo
Cruz, Rio de Janeiro

Mnica Freiman de Sousa Ramos

mfreiman@pharma.ufrj.br
Departamento de Medicamentos, Faculdade de Farmcia,
Universidade Federal do Rio de Janeiro

Potencial anti-inflamatrio
Fotos cedidas pelos autores

s leos essenciais constituem os elementos volteis contidos em vrios

rgos das plantas e assim
so denominados devido
composio lipoflica que apresentam, quimicamente diferentes da composio glicerdica dos verdadeiros leos e gorduras. Esto associados a vrias

funes necessrias sobrevivncia do

vegetal em seu ecossistema, exercendo
papel fundamental na defesa contra
microorganismos e predadores, e tambm na atrao de insetos e outros
agentes fecundadores. Na prtica mdica popular, os leos essenciais possuem
uma larga tradio de uso.
Quimicamente, em sua maioria, so

constitudos de substncias terpnicas e

eventualmente de fenilpropanides, acrescidos de molculas menores, como lcoois, steres, aldedos e cetonas de cadeia
curta. O perfil terpnico apresenta normalmente substncias constitudas de
molculas de dez e de quinze carbonos
(monoterpenos e sesquiterpenos), mas,
dependendo do mtodo de extrao e da
composio da planta, terpenos
menos volteis podem aparecer
na composio do leo essenciUTILIZAO TERAPUTICA DOS LEOS ESSENCIAIS
al (assim como podem se perder os elementos mais leves).
O uso dos leos essenciais como agentes medicinais conhecido desde a remota
De acordo com a famlia a
antigidade. H registros pictricos de seis mil anos atrs, entre os egpcios, de prticas
que
pertencem, as diversas esreligiosas associadas cura de males, s unes da realeza, e busca de bem estar
pcies de plantas acumulam
fsico, atravs dos aromas obtidos de partes especficas de certos vegetais, como resinas,
esses elementos volteis em rfolhas, flores, sementes, etc. As substncias aromticas tambm j eram populares nas
gos anatmicos especficos. Do
antigas China e ndia, centenas de anos antes da era crist, quando eram incorporaponto de vista de explorao da
dos em incenso, poes e vrios tipos de acessrios, usados diretamente sobre o corpo.
biodiversidade vegetal, quando
No entanto, foi apenas a partir da Idade Mdia, atravs do processo de destilao,
esse rgo representa um subsintroduzido pelos cientistas muulmanos, que se iniciou a real comercializao de
trato renovvel (ex: resina, fomateriais aromticos (Tyrrel, 1990).
lha, flor, fruto, semente), posA primeira obra contendo referncias para o uso mdico de ervas e leos de sementes
svel extrair-se a essncia sem
aromticas, o Kraterburch, foi publicada em 1551, pelo alemo Alan Lonicir. O
eliminar a planta. Isso a torna
uma fonte de leo essencial
termo Aromaterapia foi cunhado pelo qumico francs M. Gatefoss, a partir da
ecologicamente correta. No enexperincia em acelerar sua prpria convalescena das queimaduras sofridas aps um
tanto, a grande parte dos leos
grave acidente em seu laboratrio, atravs do uso da essncia de lavanda.
essenciais mundialmente comerH cerca de duas dcadas, vem se consolidando nos meios cientficos o termo
cializados so atualmente oriunAromacologia, que trata do estmulo, por intermdio do olfato, ao sistema lmbico
dos de cultivos racionalizados
cerebral e ao hipotlamo, respectivamente o responsvel pelo controle do comportae, sempre que possvel, estabilimento emocional e impulsos motivacionais do ser humano, e o controlador da maioria
zados genetica e climaticamendas funes vegetativas e endcrinas do corpo (Corazza, 2000).
te, o que garante a reprodutibiA Aromacologia lida com os efeitos resultantes de estmulos alcanados atravs das
lidade do perfil qumico do provias olfativas at o crebro. No trata dos efeitos alcanados por intermdio da
duto.

introduo de agentes ativos na corrente sangnea, ou atravs da ingesto ou da

absoro transdrmica, resultante da aplicao por massagem (Jelinek, 1994). Os
experimentos com o sistema olfativo e inalaes so principalmente efetuados no
Japo, Estados Unidos e Europa.. Fora a indstria de cosmticos, poucos trabalhos
foram desenvolvidos sobre a aplicao tpica dos leos, e so concentrados em seus
efeitos teraputicos, associados s prticas de massagens em pacientes hospitalizados.
A maior parte da pesquisa realizada com leos essenciais ingeridos executada pelas
indstrias de alimentos e bebidas, e no visam exatamente seus aspectos farmacolgicos
(Buckle, 1993).
38

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

A FAMLIA MYRTACEAE
Dentre as famlias que concentram seus elementos volteis nas folhas destaca-se a famlia Myrtaceae, que contm uma
centena de gneros e cerca de
3.500 espcies distribudas por

Tabela 1: Principais constituintes dos leos essenciais de folhas de rvore de

jambolo (EJ), goiabeira (PG) e araazeiro (PW)
Abundncia relativa2 IR3
Constituinte1

EJ

PG

PW

a-pineno
Limoneno
1,8-cineol
cis-b-ocimeno
trans-b-ocimeno
a-terpineol
b-cariofileno
a-humulene
a-selineno
d-Eudesmol
cedr-8 (15)- en-9-a-ol
b-eudesmol
a-eudesmol
5-epi-neo-intermedeol

22
7.3
10
5.9
7.0
9.5
5.5

1.6
0.21
12
15
10
7.6
5.6

14
3.7
8.4
1.3
21
3.7
8.5
6.8
8.2
-

934
1024
1028
1036
1045
1188
1415
1446
1493
1625
1633
1644
1648
1653

Componentes que apresentaram rea acima de 5% em ao

menos uma das espcies.
2
Calculada a partir das reas dos sinais nos cromatogramas
(injees: 1ml de soluo de 6 mg de leo em 100ml de CH2Cl2).
As anlises foram realizadas em um equipamento Hewlett
Packard 6890, sob as seguintes condies: coluna capilar HP5 MS (30m x 0.32 mm x 0.25 mm espessura do filme); gs
carreador He, fluxo 0,5 ml/min; Tinjetor 250 oC; Tinicial 70 oC;
Tfinal 280 oC; taxa de aquecimento 3o/min, razo de split 1/20.
3
IR: ndice de Reteno (Adams, 1995).

todo o mundo, preferencialmente nas

zonas tropicais e subtropicais da Amrica
e Austrlia (Joly, 1979).
Largamente espalhadas nas florestas
brasileiras, muitas de suas espcies so cultivadas por conta
de seus frutos comestveis, com Figura 1
finalidade ornamental, como
fonte de madeira e lenha, ou
precisamente como fonte de
essncias de valor comercial.
Quatro gneros so os mais
importantes na famlia: Eucalyptus, Melaleuca, Eugenia e
Psidium; fazendo parte dos dois
ltimos a goiabeira (Psidium
guajava), um dos tipos de araazeiro (Psidium widgrenianum) e a rvore de jambolo,
jamelo ou azeitona (Eugenia
jambolana, reclassificado
como Syzygium cumini ).
O leo essencial de muitas espcies do
gnero Eucalyptus encontra inmeras
aplicaes na indstria de materiais de
limpeza, como desinfetantes sanitrios e
outros. O gnero Melaleuca, de origem
australiana, rene as espcies denominadas mundialmente de tea tree. Possuem

alto poder germicida e chegaram a ser

extensivamente aplicados nas prticas
odontolgicas (Guenter, 1976).
Muitas espcies dessa famlia so

Mais recentemente foram comprovadas, em camundongos e cobaias, as

atividades antiinflamatria, antipirtica
e depressora do sistema nervoso central, pelo extrato alcolico das folhas de
goiaba (Olajide et al., 1999), pelo seu
leo essencial e de duas outras espcies
de ara (Meckes et al., 1996; Santos et
al., 1996a). O leo essencial das folhas
de Psidium guyanensis e P. pohlianum
(araazeiros que ocorrem no Nordeste
do Brasil) apresentam aes anticonvulsivante e analgsica e antiinflamatria em animais (Santos et al. 1996b;
Santos et al., 1998; Teixeira et al., 1994).
Os decoctos de Eugenia jambos (jambo) e de Eugenia uniflora (pitanga)
demonstraram atividade antiinflamatria e diminuio do trnsito intestinal,
alm de aumentarem o tempo de sono
induzido por pentobarbital (Olajide et
al., 1999). Mais recentemente, testes
farmacolgicos em animais com o extrato dessa planta demonstraram confirmar seu uso folclrico em determinadas
regies como agente anti-hipertensivo
(Consolini et al., 1999). O extrato de
folha de Eugenia uniflora ainda recomendado popularmente contra a gota
(Schmeda-Hirchmann et al., 1987) e
possui efeito como antioxidante (Theodoluz et al., 1998). As folhas de Eugenia
brasiliensis (grumixama) so reportadas como anti-reumticas (Corra, 1984).
Apesar de um largo espectro de
atividades biolgicas j ter sido descrito
para os leos essenciais, (principalmente a atividade antimicrobiana), existem
pouqussimos estudos sobre a
atividade antiinflamatria desses compostos (Gil et al., 1989;
Siani et al., 1999); e essa explorao farmacolgica foi o objeto do presente trabalho, utilizando-se, para isso, os leos
essenciais de trs espcies da
famlia Myrtaceae.
A REAO INFLAMATRIA

A reao inflamatria um
fenmeno estereotipado, cujos
sinais cardinais foram primeiro
descritos por Celsus (178 AC),
A. L. F. Sampaio
como sendo rubor, tumor, calor e dolor. A estes, Galen adiusadas na medicina popular. Por exemcionou a perda de funo (Rocha e
plo, as folhas de Psidium guajava (goiSilva, 1978; Sedgwick & Willoughby,
aba) so usadas como agente estimu- 1985). Hoje em dia, j est bem estabelante, antiinflamatrio, antibacteriano; lecido o fato de que estes sinais so
e para tratar hemorragias, diabetes, diconsequncia da liberao de substnarria e infestaes de vermes intesticias qumicas no local da injria (por
nais (Gupta, 1995).
exemplo, histamina, bradicinina, PAF,
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

39

Tabela 2: Composio terpnica geral dos leos essenciais de folhas de rvore de jambolo (EJ), goiabeira (PG) e
araazeiro (PW)
Composio Terpnica*
Monoterpenos hidrocarbonetos
Monoterpenos oxigenados
Monoterpenos totais
Sesquiterpenos hidrocarbonetos
Sesquiterpenos oxigenados
Sesquiterpenos totais

% EJ
57
12
69
19
12
31

% PG
0.37
0.55
62
33
95

% PW
20
15
34
33
32
66

*Baseada nas reas relativas dos sinais dos cromatogramas

prostaglandinas e leucotrienos), originando os dois componentes bsicos da
inflamao: as alteraes vasculares e o
acmulo de clulas.
As alteraes vasculares iniciam-se
imediatamente e desenvolvem-se durante as primeiras horas aps o estmulo
inflamatrio e; consistem em vasodilatao, aumento do fluxo sanguneo segui-

mo, especialmente por suas aes de fagocitose e destruio de agentes patognicos,

como, por exemplo, bactrias que atingem
o tecido. No entanto, nos casos em que o
processo inflamatrio persistente, o acmulo de clulas pode ser lesivo ao tecido.
o que ocorre na asma, com intenso
acmulo de eosinfilos, e na artrite reumatide, com o acmulo de leuccitos mononucleares. Nos dois casos, a
presena constante de clulas
ativadas no foco inflamatrio
PROPRIEDADES BIOLGICAS DOS LEOS ESSENCIAIS
conduz liberao de enzimas lisossomais e de mediaSem dvida, os leos essenciais encontram sua maior aplicao biolgica como agentes
dores endgenos, que cauantimicrobianos. Esta capacidade, presente na grande maioria destes compostos, de certa
sam intenso dano tecidual,
maneira representa uma extenso do prprio papel que exercem nas plantas, defendendoconduzindo cronificao da
as de bactrias e fungos fitopatognicos. A maior parte dos trabalhos sobre atividades
reao.
biolgicas atribudas aos leos essenciais, que so descritos na literatura especializada,
Diversos modelos experiversam sobre este aspecto (Janssen et al., 1987).
mentais tm sido utilizados no
Em experimentos in vitro, realizados na ndia, o leo essencial das folhas de jambolo
estudo da reao inflamatria.
foi efetivo em inibir o crescimento do vibrio da clera (Vibrio cholerae) at a diluio de
Dentre estes, destaca-se a pleu1:500, com moderado efeito quando 1:1000. Um efeito ainda maior foi conseguido com o
risia (Spector, 1956), um moleo de Eugenia bracteata.. Ambos ainda exibiram uma eficcia contra Salmonella typhi
delo clssico muito utilizado
no estudo do processo infla(Rao et al., 1970).
matrio agudo e no screening
Recentemente, os leos essenciais de dezessete espcies de mirtceas foram testados
de drogas, que permite a avacontra seis microorganismos, entre bactrias e fungos. Os melhores resultados revelaram as
liao de diversos parmetros,
boas inibies do crescimento de Staphilococcus aureus e S. epidermidis, sendo que a espcie
como: extravasamento de proMarlierea eugeniopsoides foi a mais efetiva, estendendo o poder inibitrio a vrios outros
tenas, migrao de leuccitos
microorganismos (Limberger et al., 1998). Por outro lado, os leos essenciais de trs espcies
e envolvimento de mediadode Psidium foram ativos contra Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa (Santos
res qumicos; no s qualitatiet al., 1997b). O leo de Melaleuca alternifolia demonstrou um poder germicida superior ao
vamente, mas tambm quantifenol, quando testado frente ao Bacilus typhosus (Guenter, 1976).
tativamente (Mikami & MiyaAlguns leos essenciais foram ativos em testes in vitro contra o Plasmodium falciparum,
saka, 1983). Este modelo, utio agente infectante da malria.. Este efeito atribudo provavelmente a um sinergismo entre
lizado em ratos, foi adaptado
as substncias terpenides neles presentes (Milhau et al., 1997). Tambm h registros da
para camundongos e tem sido
efetividade in vitro de leos essenciais sobre Entamoeba histolytica (De Blasi et al., 1990) e
utilizado no estudo de reasobre a cercria do Schistosoma mansoni (Frischkorn et al., 1978).
es inflamatrias induzidas
Entre muitas outras atividades farmacolgicas especficas descritas para os leos
por diversos agentes, como:
essenciais, ainda so dignas de meno as atividades inibidoras do crescimento de clulas
carragenina (Henriques et al.,
1990), zimosan (parede do funneoplsicas (Siani et al., 1999; Saens et al. 1996) e de alguns tipos de vrus, incluindo herpes
go Saccharomyces cereviseae),
simplex tipo 1 (Siddiqui et al., 1996), influenza e HIV (Hayashi et al., 1995).
endotoxina de Escherichia coli
Seguindo um paradigma anlogo ao papel dos terpenides nas plantas, a
(LPS), alergeno (Bozza et al.,
pesquisa dos leos essenciais como agentes repelentes de insetos vem revelando o potencial
1994; Siani et al., 1999), e Mycodestes compostos nesta rea (Don-Pedro, 1996). Recentemente, vm sendo realizados com
bacterium
bovis BCG (Menesucesso alguns testes biolgicos de repelncia aos insetos vetores de doenas como os
zes-de-Lima
Jr. et al., 1997),
mosquitos do gnero Aedes, transmissores da dengue (Matsuda, 1996) e o transmissor da
entre outros. Neste modelo,

doena de Chagas (Fournet, 1996).

40

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

do por estase, aumento de permeabilidade vascular e exsudao de plasma.

Estes eventos tm como principal funo facilitar o acesso ao stio inflamatrio pelos mediadores plasmticos e clulas sanguneas.
A mobilizao adequada dos leuccitos circulantes para o local da injria
fundamental para a defesa do organis-

A. L. F. Sampaio

os leos so administrados por via oral

(100 mg/Kg), na forma de lipossomas,
num volume final de 500 L, 1 hora antes
da injeo do estmulo (Figura 2).
O nosso grupo de trabalho tem como
uma das linhas de pesquisa, verificar,

na Lamk. (EJ), Psidium guajava L. (PG)

e Psidium widgrenianum Berg (PW),
atravs do modelo de pleurisia induzida
por estmulos de origem fngica (zimosan), bacteriana (LPS ou BCG) e de
origem alrgica.

A. L. F. Sampaio & M. C. Souza

Figura 3: Inibio do acmulo de neutrfilos e eosinfilos na inflama-

o induzida por LPS, aps o tratamento com o leo essencial PG

entre outras potencialidades, a atividade
antiinflamatria apresentada pelos componentes volteis das plantas. Estes so
normalmente provenientes de partes renovveis dos vegetais, como folhas, frutos, sementes e resinas, o que contribui
para o aproveitamento medicinal sustentado das espcies.
Neste mbito, este estudo relata a
anlise qumica e a avaliao farmacolgica de leos essenciais das folhas de trs
espcies de mirtceas: Eugenia jambola-

Os leos essenciais foram obtidos

de folhas frescas por hidrodestilao,
utilizando-se o aparato de Clevenger. A
caracterizao qumica e a identificao
dos componentes presentes nos leos
essenciais foi realizada por cromatografia gasosa acoplada espectrometria de
massas e clculos de ndice de Reteno
(Adams, 1995).
A composio dos leos das trs
espcies pode ser observada na Tabela
1. As folhas do jambolo (EJ) apresen-

tam o maior contedo de monoterpenos

totais (69%), seguidas pelas folhas do
araazeiro (PW; 34%), enquanto as de
goiabeira (PG) so constitudas quase
totalmente por sesquiterpenos (Tabela2).
Entre estes ltimos, destacam-se o bcariofileno, o a-humuleno (em EJ e PG)
e o a-selineno (em PG). Das trs espcies,
o PW apresenta um alto contedo (24%)
de lcoois do tipo eudesmano, j descritos em espcies congneres e relatadas
como responsveis pela atividade anticonvulsivante (Andrade-Neto et al., 1994;
Santos et al., 1997a). Os monoterpenos
mais abundantes no araazeiro so o apineno e o 1,8-cineol. Em EJ este ltimo
d lugar principalmente aos b-ocimeno e
limoneno, aparecendo o a-terpineol como
espcie monoterpnica oxigenada relevante.
Na avaliao da atividade antiinflamatria no modelo de edema induzido na
pata de ratos pela injeo carragenina, o
uso dos leos essenciais diminuiu a formao do edema e, no caso especfico do
leo de Psidium guyanensis, tambm
observa-se uma atividade analgsica (Martin et al., 1993; Santos et al., 1996b).
Entretanto, no modelo de pleurisia em
camundongos induzido pela injeo de
zimosan, o tratamento dos animais por
via oral com os leos essenciais das trs
espcies de mirtceas, no alterou a formao do edema pleural induzido pela
injeo do zimosan. Isto aparentemente,
se deve ausncia de efeitos dos leos
sobre a migrao de neutrfilos (Figura
3), pois, neste modelo inflamatrio, a
formao do edema depende do acmulo destes leuccitos. Estes dados sugerem
que os leos essenciais parecem atuar
como antiinflamatrios em alguns tipos
de reaes inflamatrias agudas.
As reaes inflamatrias induzidas por
bactrias, micobactrias ou seus polissacardeos, caracterizam-se por um acmulo mais tardio de leuccitos mononucleares (moncitos e linfcitos), neutrfilos
e eosinfilos (Bozza et al., 1994; Penido et
al., 1997; Menezes-de-Lima Jr. et al., 1997).
Uma das caractersticas mais marcantes
de doenas de origem alrgica, parasitria, e nas inflamaes pulmonares de

Figura 4
A. L. F. Sampaio

Figura 2

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

41

Cortes transversais das folhas das espcies (a) Eugenia jambolana (base da nervura mediana, aumento
200x), (b) Psidium widgrenianum (mesfilo, aumento 100x), (c) Psidium gajava (base da nervura mediana,
aumento 100x); destacando-se a presena das bolsas secretoras de origem esquizognica, onde se acumula
o leo essencial. - Fotos obtidas em microscpio tico acoplado a sistema de microfotografia, corantes
verde-iodo e vermelho do Congo.
Cortes histolgicos e fotos por Jos Lus Pinto Ferreira, LQPN, Far-Manguinhos, FIOCRUZ
origem bacteriana, a presena de eosinfilos no foco inflamatrio. O acmulo
deste leuccito tem sido considerado
como uma das principais causas de dano
ao tecido pulmonar, que uma caracterstica marcante destas patogenias.
Na reao inflamatria induzida pelo
LPS, tanto o acmulo de leuccitos mononucleares quanto o de eosinfilos so
inibidos pelo tratamento com o leo EJ,
enquanto o leo PW inibe o acmulo de
clulas mononucleares, neutrfilos e eosinfilos, sugerindo uma atividade destes
leos sobre o acmulo de leuccitos em
reaes pouco mais tardias (Figuras 3 e
4).
A reao inflamatria induzida pela
injeo intratorcica do Mycobacterium
bovis (BCG) apresenta um perfil bifsico
quanto ao fluxo de leuccitos para a
cavidade pleural de camundongos. A
primeira fase tem incio em 4 horas,
quando se observa uma migrao seletiva dos neutrfilos. Aps 24 horas, o
acmulo celular mais intenso, observando-se o influxo de clulas mononucleares, neutrfilos e eosinfilos, que
mantido at 48 horas, sendo que o acmulo de eosinfilos depende de outros
mediadores inflamatrios envolvidos no
processo. A segunda fase observada
aps 15 dias e caracteriza-se pelo acmulo predominante de leuccitos mononucleares e de neutrfilos (Menezes-deLima Jr. et al., 1997).
O tratamento dos animais com o leo
essencial PW inibe de forma significativa
a migrao de eosinfilos induzida pela
injeo intratorcica do BCG em 24h,
sem, no entanto, interferir com a migrao de neutrfilos. Por outro lado, o
tratamento com EJ potencializa a reao
inflamatria induzida pelo BCG, induzindo um aumento do acmulo de leuccitos mononucleares e eosinfilos. Apesar
deste efeito pr-inflamatrio de EJ no
42

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

modelo de pleurisia induzida por BCG,

este leo suprime completamente a produo de citocinas e de xido ntrico in
vitro. A inibio destes mediadores, que
desempenham um papel importante na
defesa do organismo contra infeco
por micobactrias, poderia acarretar um
aumento do acmulo de leuccitos para
tentar conter a infeco.
J na reao inflamatria alrgica,
que caracterizada por um intenso
acmulo de eosinfilos, EJ e PW no
foram eficazes, apesar do efeito inibitrio do ltimo sobre o acmulo deste tipo
celular induzido por LPS ou BCG. Portanto, entre os leos essenciais avaliados, EJ e PW apresentaram a atividade
antiinflamatria mais eficiente, principalmente em reaes inflamatrias de
origem bacteriana.
A relao entre a capacidade antiinflamatria e a presena de alguns dos
principais componentes dos leos, o apineno e o b-cariofileno, foi ento investigada atravs da avaliao da atividade destes terpenos frente pleurisia
induzida por LPS. O tratamento com o
monoterpeno a-pineno no foi capaz
de inibir a migrao de eosinfilos,
enquanto que o sequisterpeno b-cariofileno inibiu de forma significativa a
migrao de eosinfilos induzida por
LPS. H descries do efeito inibitrio,
por estes terpenos, do edema de pata
induzido pela carragenina em ratos (Ocete et al., 1989; Martin et al., 1993).
Como concluso geral, os leos essenciais apresentaram atividade inibitria sobre a formao de edema, apesar
de no serem eficazes na reao inflamatria aguda com envolvimento de
componentes celulares, ou na reao de
origem alrgica. Os leos de E. jambolana e de P. widgrenianum so eficazes
no controle da reao tardia de origem
bacteriana, sugerindo que alguns leos

essenciais podem vir a ser teis no controle do processo inflamatrio exacerbado,

que acompanha determinadas infeces
bacterianas.
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