ANALTICA AVANADA 2S 2011

Aulas 5 e 6
Espectrofotometria no UV
UV--Vis

Prof. Rafael Sousa

Departamento de Qumica - ICE
rafael.arromba@ufjf.edu.br

Notas de aula: www.ufjf.br/baccan

ESPECTROFOTOMETRIA
ABSORO molecular no UV
UV--Vis
FLUORESCNCIA molecular no UV
UV--Vis

Plano de aula:
aula:
- Definio de espectrofotometria
- Aspectos conceituais da ABSORO MOLECULAR
- Medidas de absoro e anlises quantitativas
- Instrumentos para anlises espectrofotomtricas
- Aspectos prticos
- A quimioluminescncia
- Espectrofluorimentria (princpios e aplicaes)
- Instrumentao para espectrofluorimetria

Bibliografia

Anlise Instrumental
F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000

Vogel - Anlise Qumica Quantitativa
GH Jeffrey e col., 6a ed., Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2002

Anlise Qumica Quantitativa
D. Harris; 7a ed., 2008

Principles of Instrumental Analysis
Analysis
DA Skoog, FL Holler, TA Nieman; 5th ed., 1998

Tutoriais dos fabricantes de espectrofotmetros

Espectrofotometria - DEFINIO
Espectrofotometria:
Espectrofotometria:
Medida da luz que absorvida ou emitida por uma espcie qumica

Espectro obtido para o -caroteno

Espectro obtido para Ag

coloidal

Espectrofotometria - APLICAES
 ANALITOS ORGNICOS
Alguns exemplos:
Compostos nitrogenados
Frmacos (c
(c.. acetil saliclico)
Fenis
Gorduras (colesterol)
 ANALITOS INORGNICOS
Alguns exemplos:
on cloreto
amnia, fosfato, nitrato e sulfaTO
Elementos metlicos em geral, As e B

ASPECTOS CONCEITUAIS
LUZ  O espectro eletromagntico

(nm)

Aspecto ondulatrio da radiao eletromagntica

 Relao entre comprimentos de onda e energia

 Ondas com dif. comprimentos de onda ()  dif. cores (Vis)

 Anlises instrumentais: medidas de fraes especficas de luz
(visvel ou no)  MXIMOS DE ABSORO

Aspecto ondulatrio da radiao eletromagntica

Relao entre comprimentos de onda () e energia (E)
Modelo matemtico

hc

h= constante de Planck (6,63 10-34 Js)

E=h=
c= veloc. luz no vcuo (2,99 108 ms-1)

 E inversamente proporcional ao

Na espectrofotometria os mximos de absoro so a principal

diferena que se observa no espectro de substncias diferentes:
fenmeno menos energtico

Espectro obtido para o -caroteno

Espectro obtido para Ag

O que faz a absoro da luz

ser diferente ?

coloidal

As substncias absorverem radiao por causa dos

Grupos Cromforos
Cromforos
Grupos cromforos:
So grupos funcionais que apresentam absoro caracterstica na regio do
ultra--violeta ou do visvel
ultra
Ex:
Ex: Carboxila (- COOH):
COOH): 200 210 nm

Absorve em vrios
comprimentos de onda diferentes
(vrios grupos funcionais)

As substncias absorverem radiao por causa dos

Grupos Cromforos
Outros grupos cromforos:
Carboxila ((- COOH): 200 210 nm
Aldedo ((-CHO): 210; 280 300
Amino (-NH2): 195
Brometo ((-Br
Br):
): 208
Dissulfeto (-S-S-): 194; 255
ster ((-COOR): 205
ter ((-O-): 185
Nitro ((-NO2): 210
Nitroso ((-NO): 302
Tiocarbonila (=C=S
(=C=S--): 205
Tioeter (-S-): 194; 215
Tiol ((-SH): 195

 Substncias diferentes
 Diferentes grupos funcionais

As substncias absorverem radiao por causa dos

Grupos Cromforos
Processo de absoro da radiao: diferentes tipos de transies eletrnicas
Cada transio eletrnica vem acompanhada de uma transio rotacional e
vibracional  Espectros na forma de banda

Nveis de energia
vibracional

Nveis de energia
eletrnicos

As substncias absorverem radiao por causa dos

Grupos Cromforos
Exemplificando as diferenas entre as substncias:
substncias:
Composto

Orbitais envolvidos na
transio eletrnica

mx (nm)

CH4

*

122

CH3Cl

n*

173

CH2=CH2

*

162

Me2C=O

*
n*

185
277

H2C=CH-CH=CH2

*
*
*

180
200
255

Essas transies eletrnicas ocorrem entre nveis de energia que

diferem de 10 a 100x em energia

As substncias absorverem radiao por causa dos

Grupos Cromforos
 Processo de absoro da radiao envolvem:
 Transies eletrnicas (UV
(UV--Vis
Vis))
 Transies vibracionais (Infravermelho
(Infravermelho mdio e prximo)
prximo)

Envolvem diferenas
energticas menores

Cada nvel de
ENERGIA VIBRACIONAL (e
(en):
Subnveis de
ENERGIA ROTACIONAL

Envolvem diferenas
energticas ainda menores

ENTRETANTO tomos no estado gasoso tambm podem absorver

radio no UV
UV--Vis
Exemplos de medidas ESPECTROSCPICAS

EspectroMETRIA
Espectro
METRIA ATMICA

EspectroFOTO
Espectro
FOTOMETRIA
METRIA MOLECULAR

ENTRETANTO tomos no estado gasoso tambm podem absorver

radio no UV
UV--Vis
Representao das transies eletrnicas que podem ocorrer no tomo de sdio

 NaCl

Representao genrica para os eltrons que sofrem

transies em medidas espectroscpicas:

 NA PRTICA, a regio do UVUV-Vis importante para a

espectrofotometria no UVUV-Vis vai de 180 a 780 nm

PARA CASA
1) Explicar porque os espectros abaixo apresentam perfis diferentes,
considerando que os espectros de absoro moleculares so geralmente bandas
e no picos estreitos.

O processo de absoro da luz no laboratrio

1 etapa:
etapa:
excitao eletrnica da molcula M
M + hv  M*

2 etapa:
etapa:
relaxao
M*  M + calor
M*  M + M (fotodecomposio
fotodecomposio))
M*  M + hv
hv

(luminescncia)

Caracterstica dos processos de absoro na regio do visvel

 A cor de uma espcie em soluo a cor complementar
quela do comprimento de onda que absorve:
Soluo verdeverde-amarelada absorve violeta
amarela
violeta--azul
violeta
laranja
azul
vermelha
azul--verde
azul
prpura
verde
violeta
verde
verde--amarelo
violeta--azulado
violeta
amarelo
azul
laranja
azul--esverdeado
azul
vermelho
verde
prpura

 A regio que contem o de mxima absoro de uma espcie de

interesse pode ser prevista se a soluo da amostra for colorida...

Medida de absoro e anlise quantitativa

Medidas de absoro (A):

- Obtidas a partir de medidas de transmitncia (T)

- Quanto maior a transmitncia,
menor a absorbncia

A= - log T= log P0/P

A absorbncia aumenta com a conc. da espcie absorvedora
- depende da substncia (absortividade molar)
- depende do espao fsico ocupado pela amostra (caminho ptico)

Medida de absoro e anlise quantitativa

Representao grfica para solues de KMnO4 em = 545 nm e um caminho

ptico de 1 cm.
a) Em %Transmitnci
%Transmitncia
a versus c
a) b) Em Absorbncia versus c

Relao entre absoro e concentrao = ANLISE QUMICA

(Lei de LambertLambert-Beer
Beer))

Johann Heinrich Lambert (1728 1777

1777)) observou que
a intensidade da luz transmitida por um meio absorvedor
era proporcional espessura do meio pelo qual a luz passava

August Beer (1825 1863

1863)) observou que a intensidade da
luz transmitida por um meio absorvedor era proporcional
concentrao da espcie absorvedora

Relao entre absoro e concentrao = ANLISE QUMICA

(Lei de LambertLambert-Beer
Beer))
A

 A=abC

a= absortividade molar (
(: L mol -1cm-1)
b= caminho ptico (cm)
C= concentrao em (mol L-1)

=ab
Concentrao
Relao linear entre A e Conc. se as medidas so feitas em
condio de caminho ptico constante 

 APLICAES DA equao da reta: A = C

- Concentraes desconhecidas
- OU determinar o valor de a para se obter o de

Determinao da Concentrao
1) PREPARAR PADRES DE CALIBRAO  TCNICA INSTRUMENTAL
PADRES: Solues semelhante soluo de amostra
PADRES:
com concentrao conhecida da espcie de interesse (ANALITO
(ANALITO))

AMOSTRA ou SOLUO DE AMOSTRA ?

Geralmente a amostra analisada na forma de uma soluo aquosa
Ex:
Ex: Determinao de Fe3+ em tecido animal

amostra
laboratorial

preparo (ou tratamento)

da amostra

soluo de amostra

Determinao da Concentrao
2) Calcular os limites de deteco (LD) e de quantificao:
Menor quantidade que pode ser detectada com razovel certeza para um dado
procedimento analtico (IUPAC)
y = ybco + 3xSdbco em termos de sinal
LD = (C
(Cbco + 3xSdbco)/S em termos concentrao
LQ = (C
(Cbco + 10xSdbco)/S em termos concentrao
LD = limite de deteco
LQ = limite de quantificao (o INMETRO recomenda usar o primeiro ponto da curva analtica de calibrao)
y = menor sinal medido
ybco = sinal do branco
Cbco = concentrao do branco (considerado = zero)
Sdbco = desvio padro do branco (n= 10 no mnimo)
S = Sensibilidade do mtodo (coef
(coef.. angular da curva analtica (
())

Determinando a Concentrao de Misturas

(Dois analitos
analitos:: M e N: ADITIVIDADE DA LEI DE BEER)
A

 s devem ser conhecidos em

todos os comp. onda (
( e )

Considerar as espcies
independemente (no existe interao)

A = M . b . cM + N . b . cN
A = M . b . cM + N . b . cN

Resultado  clculos matemticos (resoluo de sistemas ou Quimiometria)

Quimiometria)

OUTROS ASPECTOS DA LEI DE LAMBERT

LAMBERT--BEER
Vlida para:
para:
- Solues diludas (C < 0,01 mol L-1)
- Radiao monocromtica
- Meio homognio e estvel

 Todas as medidas (padres e amostras) : celas o mais parecidas possveis

Para compensar perdas de potncia da radiao incidente por reflexo e espalhamento

Desvios da Lei de LambertLambert-Beer ...

1) Interaes entre os centros absorvedores e instabilidade qumica
 DESVIO REAL DA LEI DE BEER
Ex de instabilidade qumica
qumica::
equilbrio entre os nions dicromato e cromato

Cr2O72- + H2O
350 nm

2H+ + 2CrO
CrO42373 nm

 Espcies que podem participar de equilbrio qumico em soluo

devem ser analisadas em um meio onde apenas uma espcie predomine

PARA CASA
2) Suponha que a anlise de um frmaco deva ser feita em triplicata, por um
mtodo espectrofotomtrico e que a espcie absorvedora apresenta um mximo de
absorbncia que varia com o pH da soluo de amostra. Descreva
Descreva,, resumidamente,
como essa anlise deveria ser feita, considerando desde o preparo da amostra at a
obteno do resultado final.

Desvios da Lei de LambertLambert-Beer

2) Influncia de erros instrumentais
( inadequado, radiao policromtica ou espria)
 DESVIO APARENTE
Ex de erro instrumental
instrumental::

II

I
I
A

Comprimento de onda

Concentrao

II

Instrumentao (ESPECTROFOTOMETRIA = TCNICA INSTRUMENTAL)

FOTMETROS
(COLORMETROS)

ESPECTROFOTMETROS

Visvel
-Filtros pticos (380 780 nm)
nm)

Ultra-violeta e visvel
Ultra- Monocromadores (200 1000 nm)
nm)

Componentes bsicos (duas configuraes: a e b):

Fonte de
Luz

Amostra

Seletor de
Comprimento
de Onda

Fonte de
Luz

Seletor de
Comprimento
de Onda

Amostra

Detector

Processador

Fotomtrico

0.102 UA

Detector

Processador

Fotomtrico

0.102 UA

Instrumentao
1) FONTE DE LUZ

REGIO DO ULTRAULTRA-VIOLETA
200 nm

REGIO DO VISVEL

390 nm

800 nm

Lmpadas de Deutrio Lmpadas de filamento de Tungstnio

Lmpadas de Hidrognio
320 2500 nm
podem ser halgenas (W-I2)
160 375 nm
- maior durabilidade
LEDs
(diodos emissores de luz)

Lmpadas de Xennio

FONTE DE LUZ
Emisses, por comprimento de onda, das principais lmpadas
para espectrofotometria

Instrumentao
2) SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA
 Isolar faixas estreitas de comprimentos de onda
 Diferentes dispositivos
complexidade e largura da faixa de

- Filtros
- Monocromadores

FILTROS:

- Constitudos por uma ou mais substncias

- Isola bandas com no mn. 50 nm de largura
- Usado na regio do visvel
- Baixo custo

Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA
FILTROS:

 Fluoreto de clcio ou magnsio

 Constitudo por vrias camadas

Dieltrico com espessura de
mesma ordem do desejado
- Passa apenas 1 e seus mltiplos
- Isola bandas com at 10 nm de largura
- Pode ser usado tanto no UV como no visvel
- Custo maior que o filtro de absoro
t= espessura do dieltrico
= ndice de refrao
n= ordem de interferncia

Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA

FILTROS
os de interferncia so mais eficientes:
(larguras a meia altura)

 Filtros servem para faixas especficas de

 Monocromadores: isolam bandas estreitas ao longo do espectro
- Mais versteis
- Custo mais elevado que os filtros

Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA
MONOCROMADORES: PRISMAS E REDES (GRADES) DE DIFRAO

Diferenas entre os ndices de refrao

Fenmeno da interferncia
n = d(sen
d(sen i + d sen r)
 300 2000 ranhuras
 ngulo de incidncia

FORMA DE USO
1) Prisma (instrumentos mais antigos)
2) Grade (custo menor, espectrofotmetros mais compactos)

Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA
MONOCROMADORES: PRISMAS E REDES (GRADES) DE DIFRAO
 Dependendo dos demais componentes pticos: largura de banda de 1 20 nm
POSICIONAMENTO DA FENDA DE SADA
Isolar o comprimento de onda separado
Ex:
Ex:

 Monocromador de Czerny-Turner

Instrumentao
3) COMPARTIMENTO (OU SUPORTE) DA AMOSTRA
CELAS OU CUBETAS DE QUARTZO (UVUV-Vis
Vis))
CELAS OU CUBETAS DE VIDRO (Vis)
CELAS OU CUBETAS DE ACRLICO (Vis)

face para
manipulao

 FACES PLANAS E PERPENDICULARES RADIAO

INCIDENTE
 CILNDRICAS
menor custo mas que conferem menor repetibilidade
CAMINHOS PTICOS VARIVEIS
mais comum: 1 cm
LIMPEZA:
1- gua e detergente diludo
2- enxague com gua purificada e, depois, com a prpria amostra

Instrumentao
4) DETECTORES (TRANSDUTORES) DE SINAL
 CONVERSO DA RADIAO EM SINAL ELTRICO
- Intensidade da corrente proporcional intensidade da radiao
- Fototubos
Fototubos,, fotomultiplicadoras e semicondutores de silcio
Juno pn

eCatodo

Anodo
Feixe de Ftons

+
+

_
_

Amplificador
-

90 V DC
+

 Fototubo < Sensibilidade que os semicondutores < Fotomultiplicadora

Instrumentao
DETECTORES (TRANSDUTORES) DE SINAL

Espectrofotmetro com arranjo linear de diodos

Instrumentao
 O FEIXE DE RADIAO UTILIZADO PARA A MEDIDA DO BRANCO E DA AMOSTRA
DEVEM TER A MESMA INTENSIDADE

INSTRUMENTOS FEIXE
FEIXE NICO
NICO E DUPLO
DUPLO FEIXE
FEIXE

ajuste 100% T

cela do
solvente
%T
a. fotmetro de feixe
nico

lmpada de
tungstnio

filtro

espelho semi-prateado

detector

b. Fotmetro de feixe duplo

cela do
solvente
detector
%T

detector de zero

ESPECTROFOTOMETRIA NO UVUV-Vis
CONSIDERAES GERAIS
 Instrumentos atuais operam em transmitncia ou absorbncia
 Quando so utilizados outros solventes alm de gua os mesmos devem ser
de grau espectroscpio e inerte no meio
 Anlises de rotina: utilizar sistema de anlise por injeo em fluxo (FIA)
Pequenas quantidades de amostras e reagentes
= Menor custo e gerao de resduos
Maior preciso (repetibilidade
(repetibilidade)) e velocidade analtica

 Pode ser combinada com outras tcnicas analticas, instrumentais ou no,

geralmente como ferramenta de deteco

 Pode ser utilizada em anlises no quantitativas e diretamente sobre slidos

(reflectncia difusa em produtos acabados)

ESPECTROFOTOMETRIA NO UVUV-Vis

ANLISE DE SLIDOS POR REFLECTNCIA DIFUSA NA REGIO DO UVUV-Vis

- Utilizada para materiais opacos
Papis
Plsticos
Pigmentos para tintas
Filmes polimricos
Medicamentos
Alimentos (leite em p)
...
- Princpio: a radiao no absorvida refletida e detectada na forma
de um espectro
- Equipamentos de laboratrio e portteis

REFLECTNCIA DIFUSA
Aplicaes importantes no setor
parmetros de qualidade:

de tintas para determinao de

DETERMINAO DE OUTROS PARMETROS:

- ndice de brancura e amarelamento: ASTM EE-313313-73
- ndice de brancura: ASTM EE-313313-CIE modification
- ndice de brancura: ASTM DD-1925
- ndice de amarelamento: ASTM EE-313313-98

REFLECTNCIA DIFUSA
Tipos de equipamentos
Portteis

De bancada

Anlise de materiais/ produtos acabados

Anlise quantitativas tambm so possveis a partir de calibrao

PARA CASA
3) Ao desenhar a curva analtica de um mtodo espectrofotomtrico o analista
atribuiu ao branco (reagentes utilizados em gua) o valor de transmisso
100%. Voc concorda com esta atribuio? Justifique.

4) Em termos de configurao instrumental, comente sobre as vantagens de se

utilizar um espectrofotmetro com um detector do tipo arranjo de diodos.

Bibliografia utilizada

Principles of Instrumental Analysis
Analysis

DA Skoog, FL Holler, TA Nieman; 5th ed., 1998

Anlise Instrumental
F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000

Vogel - Anlise Qumica Quantitativa
GH Jeffrey e col., 6a ed., Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2002

Anlise Qumica Quantitativa
D. Harris; 7a ed., 2008

Tutoriais de fabricantes de espectrofotmetros

Slides didticos fornecidos pelo Prof. Dr. Jlio C. J. Silva (UFJF)

Figuras da Apostila didtica da disciplina QA 581, do IQ - Unicamp