Noes bsicas de cultura de clulas

Dinmica Intracelular 2007/2008

Culturas celulares
Culturas celulares: em que consistem? Vantagens e limitaes do uso de culturas celulares Tipos de culturas celulares Requisitos necessrios para manuteno de clulas em cultura Consideraes experimentais

Culturas celulares: em que consistem?

Um tipo de cultura de tecidos que envolvem um conjunto de tcnicas que permitem cultivar e/ou manter clulas isoladas fora do organismo de origem

Desagregao do tecido original por forma a obter as clulas isoladas, podendo estas ser cultivadas em monocamada aderente ou em suspenso

Vantagens e limitaes do uso de culturas celulares

Vantagens - Controlo das condies ambientais - Anlise independente de parmetros - Elevado nmero de testes num pequeno intervalo tempo - Reduo dos ensaios com animais - Menos dispendiosas que a experimentao animal

Desvantagens - Perda de caractersticas fenotpicas - Sistema biolgico fora do ambiente natural - Ausncia de sinais importantes

Tipos de culturas celulares

Culturas primrias
- Obtidas directamente dos tecidos - Culturas heterogneas - Mantm-se pouco tempo em cultura - Propicias ao desenvolvimento de contaminaes

Linhas celulares
- Obtidas de culturas primrias - Clulas imortalizadas (alterao gentica) - Crescimento rpido e contnuo - Proliferao ilimitada ou limitada a um elevado nmero de passagens

COS-7

HeLa

HSB-2
Clulas ciliadas do epitlio nasal Linfcitos humanos Clulas do epitlio renal de smios transformadas pelo vrus SV-40 Leucemia linfoblstica aguda T Clulas epiteliais de carcinoma cervical humano

Neurnios de rato (hipocampo)

Requisitos necessrios para manuteno de clulas em cultura

Instalaes, equipamento e material
- Zona de recepo de material

Instalaes

- Zona de trabalho (Sala de cultura) - Zona de lavagens e tratamento de material

- Cmaras de fluxo laminar

Equipamento
(Sala de cultura)

- Incubadoras - Centrfugas, microscpio

Requisitos necessrios para manuteno de clulas em cultura

Condies de cultura (meios de cultura e parmetros ambientais)

Meios de Cultura

- Sais Inorgnicos - Hidratos de Carbono - Aminocidos - Vitaminas - Protenas e peptdeos - Lpidos e cidos gordos - Soro - Tampes - Antibiticos - Indicador de pH

- Temperatura

Parmetros ambientais
(Incubadora)

- Humidade - Nveis de CO2 - pH

Consideraes experimentais
Preparao de meios de cultura e solues estreis Criopreservao e descongelamento
- Fase exponencial de crescimento - Elevada viabilidade celular - Maior concentrao de soro

Congelamento

- Crioprotector - Lento - Armazenamento a baixas temperaturas

- Rpido

Descongelamento

- Meio de cultura - Incubadora com parmetros adequados

Consideraes experimentais
Subcultura (clulas em suspenso vs clulas aderentes)
- Meio de cultura

Subcultura
(Clulas aderentes)

- Meio de dissociao ou tripsina - Meio de cultura

Determinao da densidade celular (azul tripano)

Hemocitmetro

Nmero de Clulas/ml = n x d x 104