Campus Campos-Centro

Curso Tcnico em Qumica

Microbiologia

Ao de diferentes temperaturas sobre os microrganismos

urea, Daniele, Flavia e Ingrid. Mdulo II Tarde

Laci Gonalves Viana
26 de Abril de 2010.
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Sumrio

1- OBJETIVOS................................................................................................................03
2- FUNDAMENTOS TERICOS..................................................................................03
3- MATERIAIS, VIDRARIAS.......................................................................................10
4- EQUIMAMENTOS....................................................................................................11
5- REAGENTES USADOS............................................................................................11
6- MEIOS DE CULTIVO...............................................................................................12
7- AMOSTRA.................................................................................................................12
8- PROCEDIMENTO.....................................................................................................13
9- REAES..................................................................................................................16
10- CLCULOS E RESULTADOS..............................................................................16
11- DISCUSSES E CONCLUSES..........................................................................17
12-ATIVIDADES DE VERIFICAO.......................................................................19
13- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS....................................................................21

Ao de diferentes temperaturas sobre os microrganismos

1- OBJETIVOS

Preparar meios de cultivo lquidos e solidificados;

Realizar o plaqueamento dos meios de cultivo solidificados, assim como realizar a

esterilizao dos mesmos por autoclavao;

Avaliar as alteraes promovidas no meio lquido a partir do crescimento de

microrganismos.

Avaliar o efeito de diferentes temperaturas sobre os microrganismos;

Realizar a tcnica do esgotamento do inoculo;

Realizar colorao de Gram.

2- FUNDAMENTOS TERICOS

Conceito de esporos
Esporos so formas dormentes de uma clula bacteriana e so produzidos por certas

espcies de bactrias em situaes de escassez de nutrientes. O esporo resistente a condies

adversas, incluindo altas temperaturas e solventes orgnicos. A esporulao, processo pelo qual
alguns gneros de bactrias formam esporos, ocorre quando estas bactrias esto em situaes
crticas para sua sobrevivncia, ou seja, as condies ambientais so adversas para o crescimento
bacteriano. De maneira geral, isto ocorre quando h falta de nutrientes, como carbono ou
nitrognio.
Os esporos apresentam-se sob a forma de corpsculos esfricos ou ovides, livres ou no
interior da bactria. Formam-se pela invaginao de uma dupla camada de membrana celular, que
se fecha para envolver um cromossoma e uma pequena quantidade de citoplasma, garantindo a
sobrevivncia da espcie. Esta camada responsvel pela resistncia colorao e ao ataque dos
agentes fsicos e qumicos da esterilizao e desinfeco.

Apresentam algumas caractersticas, decrscimo na quantidade total de gua em

comparao com o estado vegetativo, refratividade, alta resistncia a condies ambientais
adversas, habilidade de germinar e produzir clulas vegetativas aps longos perodos de
estocagem.
Na fase esporulada, as bactrias no realizam atividade biossinttica e reduzem sua
atividade respiratria. Nesta fase tambm no ocorre multiplicao e crescimento bacteriano.
As bactrias podem permanecer viveis na forma de esporos durante anos, se mantidos a
temperaturas usuais e em estado seco. Entretanto, assim que o ambiente se torna favorvel, estes
esporos podem voltar a se reproduzir e multiplicar.
A estrutura do esporo constituda de uma primeira camada interna, prximo ao cerne
do esporo a parede do esporo composta de peptidoglicano, a qual vai dar origem parede da
clula vegetativa, por ocasio da germinao. Envolvendo a parede do esporo fica a crtex,
camada espessa, composta de um peptidoglicano diferente que apresenta menos ligaes
cruzadas que o peptidoglicano existente na parede da clula que o originou.
Externamente a crtex fica a capa do esporo, estrutura rgida composta de protena rica
em ligaes de dissulfetos intramoleculares; ela confere resistncia aos agentes qumicos. A
camada mais externa recebe o nome de exsporo e consiste numa membrana lipoprotica que
contem aminoaucares.

Tipos de bactrias no solo

Existem vrios tipos de microorganismos que habitam o solo e realizam importantes

mudanas bioqumicas. Eles so essenciais para vrios processos bioqumicos que reciclam
importantes elementos como o enxofre, o nitrognio e o carbono.
O solo pode abrigar microorganismos patognicos, dependendo da natureza do animal,
dos tecidos das plantas e das excretas presentes nas plantas. A maioria destes vive 10 centmetros
acima do solo onde a matria orgnica est presente.
As bactrias so alguns dos menores e mais abundantes micrbios no solo. Em um nico
grama de solo, h bilhes de bactrias, uma estimativa de 60 mil espcies diferentes de bactrias,
a maioria no nomeada, e cada uma tm sua prpria funo e capacidade.
Algumas espcies de bactrias so muito frgeis e podem ser mortas por pequenas
mudanas no ambiente do solo. Outras espcies so extremamente resistentes, capazes de resistir
4

a calor severo, frio ou secagem, podendo permanecer dormentes por dcadas espera de
condies favorveis.
As bactrias desempenham um papel importante na decomposio de materiais orgnicos,
especialmente nas fases iniciais de decomposio quando os nveis de umidade so elevados.
Bacillus subtilis e Pseudomonas fluorescens so exemplos de bactrias decompositoras.
A bactria Rhizobium pode ser inoculada em leguminosa semente para fixar nitrognio no
solo. Estas bactrias fixadoras de nitrognio vivem em ndulos de raiz em especial as
leguminosas, tais como o trevo, feijo. . Elas extraem gs nitrognio do ar e o converte na forma
que as plantas podem usar. Esta forma de fixao de nitrognio pode adicionar o equivalente a
mais de 100 kg de azoto por hectare por ano. Azotobacter, Azospirillum, Agrobacterium,
Gluconobacter,

Flavobacterium,

Herbaspirillum

Gluconobacter,

Flavobacterium

Herbaspirillum so exemplos de bactrias fixadoras de nitrognio.

Bactrias actinomicetes, incluindo espcies de Nocardia, Streptomyces, e Micronospora
- em milhes por grama esto presentes nos solos secos e quentes. Esses organismos so
responsveis pelo odor caracterstico de mofo e de terra seca de um campo arado. Os
actinomicetes podem degradar muitas substncias complexas e, desta forma, so importantes no
melhoramento da fertilidade do solo.
Os actinomicetes so conhecidos pela capacidade de produzir antibiticos em
laboratrio, mas quantidades detectveis de antibiticos so raramente encontradas no solo. E
possvel que os antibiticos possam estar presentes e ativos somente em reas localizadas
imediatamente junto as das clulas dos actinomicetes.

Tcnica de colorao de Gram

O mtodo de colorao de bactrias foi desenvolvido pelo mdico dinamarqus Hans

Christian Joachim Gram, em 1884, que consiste no tratamento sucessivo de um esfregao
bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, iodo, etanol-acetona e fucsina
bsica. Essa tcnica permite a separao de amostras bacterianas em Gram-positivas e Gramnegativas e a determinao da morfologia e do tamanho das amostras analisadas.
O mtodo da colorao de Gram baseado na capacidade das paredes celulares de
bactrias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta durante um tratamento com etanolacetona enquanto que as paredes celulares de bactrias Gram-negativas no o fazem.
5

O mtodo consiste no tratamento de uma amostra de uma cultura bacteriana crescida em

meio slido ou lquido, com um corante primrio, o cristal violeta, seguido de tratamento com um
fixador, o lugol. Tanto bactrias Gram-positivas quanto Gram-negativas absorvem de maneira
idntica o corante primrio e o fixador, adquirindo uma colorao violeta devido formao de
um complexo cristal violeta-iodo, insolvel, em seus citoplasmas. Segue-se um tratamento com
um solvente orgnico, o etanol-acetona que dissolve a poro lipdica das membranas externas
das bactrias Gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo removido, descorando as
clulas. Nas Gram-positivas o solvente desidrata as espessas paredes celulares e provoca a
contrao dos poros da peptidoglicana, tornando-as impermeveis ao complexo, o corante
primrio retido e as clulas permanecem coradas. Em seguida, a amostra tratada com um
corante secundrio, a fucsina bsica. Ao microscpio, as clulas Gram-positivas aparecero
coradas em violeta escuro e as Gram-negativas em vermelho ou rosa escuro.
Deve ter ateno na etapa da descolorao, pois a exposio prolongada ao solvente ir
provocar a remoo do cristal violeta dos dois tipos de bactrias, podendo produzir resultados
falsos. A reteno ou no do corante primrio , portanto, dependente das propriedades fsicas e
qumicas das paredes celulares bacterianas tais como espessura, densidade, porosidade e
integridade.
O uso de material fresco importante, pois clulas de bactrias Gram-positivas, clulas
velhas, mortas ou com envelopes danificados por agentes fsicos ou qumicos, tendem a perder o
cristal violeta e uma mesma amostra bacteriana pode exibir parte ou todas as clulas coradas
como Gram-negativas.
Por outro lado, resultados do tipo "falso Gram-positivo" s so obtidos se o tratamento
com etanol-acetona for omitido.
O corante cristal violeta pode ser substitudo, com os mesmos resultados, pelo azul de
metileno e a fucsina bsica pode ser substitudo pelo corante vermelho safranina. A fucsina cora
muitas bactrias Gram-negativas mais intensamente que a safranina, que por sua vez no cora
prontamente algumas espcies de bactrias. O solvente etanol-acetona pode ser substitudo por
lcool 95%.
A colorao de Gram um dos mais importantes mtodos de colorao utilizados em
laboratrios de microbiologia, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterizao de
amostras de bactrias. A tcnica tem importncia clnica uma vez que muitas das bactrias
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associadas a infeces so prontamente observadas e caracterizadas como Gram-positivas ou

Gram-negativas em esfregaos de pus ou de fluidos orgnicos. Essa informao permite ao
clnico monitorar a infeco at que dados de cultura estejam disponveis. possvel a anlise de
vrios esfregaos por lmina, o que facilita a comparao de espcimes clnicos. As lminas
podem ser montadas permanentemente e preservadas como documentao.

Bactrias coradas pelo mtodo de Gram

Bactria Gram-positiva Bacillus brevis

Bactria Gram-negativa Aeromonas hydrophila

Tipos de crescimento em meio lquido

Aerbias, que dependem de oxignio para conseguir energia e no sobrevivem sem esse
gs.
Anaerbias facultativas, que podem viver com ou sem oxignio; se houver oxignio no
ambiente, podem realizar respirao aerbia; caso contrrio, sobrevivem custa de processos
anaerbios, embora a quantidade de energia obtida seja inferior obtida na respirao aerbia.
Um exemplo so os lactobacilos, que realizam fermentao lctica, usada na produo de
iogurtes, coalhadas, queijos e outros produtos.
Anaerbias obrigatrias ou estritas, que no possuem as enzimas necessrias ao
aproveitamento do oxignio e, por isso, morrem com determinada concentrao de oxignio no
ambiente, porque, ficando livre na clula, esse gs pode danificar molculas importantes, como o
DNA e as enzimas.
Em condies adversas (temperatura muito alta ou muito baixa, meio muito acido ou
bsico, presena de substncias txicas no ambiente, etc.), algumas bactrias formam esporos,
estruturas de parede resistente e com pouca gua no citoplasma, nas quais a bactria permanece
em estado de vida latente, com as funes reduzidas ao mnimo.

Mesfilas, psicrfilas e termfilas

Bactrias mesfilas
Bactrias mesfilas apresentam crescimento timo em temperaturas variando entre 25C e
40C, ou seja, a faixa de temperatura mais comum na superfcie da Terra e nos organismos
animais.
A maioria dos patgenos humanos apresenta crescimento timo em temperaturas
prximas de 37C. Bactrias termodricas, tais como Bacillus cereus, Clostridium botulinum e
Listeria monocytogenes, geralmente vivem como mesfilas, mas podem suportar temperaturas
elevadas por curtos perodos de tempo.

Se o processo de aquecimento de alimentos envasados em recipientes metlicos ou de

vidro for inadequado, tais bactrias podem sobreviver e deteriorar o produto, representando uma
sria ameaa segurana dos alimentos.
Bactrias psicrfilas obrigatrias
Bactrias psicrfilas obrigatrias requerem baixas temperaturas para seu crescimento. Um
timo crescimento se d em temperaturas abaixo de 15C.
Algumas espcies marinhas toleram temperaturas negativas uma vez que a gua do mar
permanece lquida em temperaturas abaixo de 0C. Tais organismos morrem quando expostos
temperatura ambiente.
Sua adaptao a baixas temperaturas devido ao alto contedo de cidos graxos
insaturados em suas membranas. Estas molculas permanecem fluidas em temperaturas nas quais
membranas contendo cidos graxos saturados no so funcionais.
A bactria Bacillus globisporus no cresce em temperaturas
acima de 20C.
Bactrias psicrfilas facultativas
Bactrias psicrfilas facultativas ou psicrotrficas apresentam crescimento timo em
temperaturas abaixo de 20C, mas podem crescer, embora mais lentamente, em temperaturas de
refrigerador e tm alta probabilidade de contaminar e estragar produtos resfriados tais como
alimentos (por exemplo, Bacillus cereus) e sangue.
Bactrias termfilas
Bactrias termfilas so aquelas cujas taxas de crescimento timo esto entre 50C e
60C; so encontradas em pilhas de adubo orgnico.
Algumas espcies toleram temperaturas de at 110 C em fontes termais.
As enzimas dos organismos termfilos apresentam propriedades de termo-estabilidade
que lhes permitem atingir um pico de atividade entre 60C e 80C. Dentro dessa categoria
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encontram-se os organismos termfilos obrigatrios que s crescem em temperaturas acima de

37C e os termfilos facultativos que podem crescer em temperaturas abaixo de 37 C.
A bactria Bacillus stearothermophillus cresce otimamente entre 65 e 75C, mas pode
apresentar um pequeno crescimento e deteriorar alimentos em temperaturas em torno de 30C.
Os esporos dessa bactria so utilizados para controlar o funcionamento de autoclaves em
laboratrios de microbiologia.
Dentre os termfilos obrigatrios encontram-se as bactrias hipertermfilas que
apresentam crescimento timo em temperaturas em torno e acima dos 85C. H apenas trs
gneros de bactrias hipertermfilas: Aquifex, Thermocrinis e Thermotoga.
Nenhum psicrfilo sobrevive no corpo humano.Do ponto de vista prtico, altas e baixas
temperaturas so utilizadas para evitar o crescimento de microrganismos.
A refrigerao de alimentos a 4C impede o sua deteriorao por organismos psicrfilos e
pela maioria da bactrias. Mas, em casos de armazenamento por longos perodos de tempo, e se o
material suportar congelamento, a temperatura ideal 30C negativos.
Altas temperaturas so utilizadas para esterilizao de materiais, como aqueles utilizados
em laboratrios e na prtica mdica.

3- MATERIAIS, VIDRARIAS

Erlenmeyer de 250 mL;

2 Beckers de 250 mL;

4 estantes de tubos de ensaio;

Pina;

Bucha de algodo hidrofbico;

7 tubos de ensaios com tampa;

Fsforo;

2 suportes para lminas;

Bico de Bunsen;

4 Placas de Petri;
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4 alas de nichrome;

8 Lminas;

Papel de filtro;

Trip;

Pipeta graduada 10 mL;

Pra de suco ou repipetador de plstico com trs vias;

Bero de colorao de lminas;

4- EQUIMAMENTOS

Estufa bacteriolgica Olidef CZ 220V 37C;

Microscpio ptico binocular 110V;

Geladeira;

Autoclave;

5- REAGENTES USADOS

Soluo salina (NaCl) 0,5 %m/v;

leo de cedro (imerso);

Solues para a colorao de Gram:

I. Cristal violeta: (segundo Hucker) - corante de Gram

a) Cristal violeta
lcool a 95o

4g
20mL

b) Oxalato de amnio 0,8g

gua destilada

300mL

Para uso, misturar partes iguais de a e b.

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II. Lugol - Mordente

a) Iodo metlico

1g

Iodeto de potssio 2g
gua destilada

300mL

III. Descorante - Diferenciador

a) lcool etlico a 95o ou partes iguais de acetona e lcool etlico
IV. Fucsina - Contracorante
a) Fuscina bsica

0,3g

lcool a 950

10mL

b) Fenol fundido

5mL

gua destilada

95mL

Para uso, mistura a e b e diluir a 1:10

6- MEIOS DE CULTIVO

Meio slido

APC Agar para contagem de microorganismos em placas

Composio g/L
Peptona de casena

5,0 (fonte de protena)

Extrato de levedura

2,5 (fonte de vitaminas)

Glicose

1,0 (fonte de carbono e energia)

Agar bacteriolgico 15,0 (meio solidificante)

Meio Liquido

Extrato de levedura (nitrognio)

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25g 1000ml
7- AMOSTRA

Solo 10g;

8- PROCEDIMENTO
A- Plaqueamento

Derramar o meio de cultivo na quantidade necessria para cobrir o fundo da

placa de Petri (em torno de 20 mL);

Deixar as placas temperatura ambiente para que haja solidificao (15 min);

Armazenar as placas j embrulhadas em geladeira (+ ou 4 C) at posterior

utilizao;
B- Inoculao da amostra

Transferir 10g de terra de jardim para o caldo nutritivo armazenado em

Agitar a mistura por 5 minutos e em seguida, deixar o Erlenmeyer em repouso

Erlenmeyer.

por mais 5 minutos.

Utilizando manobra assptica, transferir 10mL da mistura preparada para 5 tubos

de ensaio previamente esterilizados.

Etiquetar os tubos de ensaio, colocando no rtulo o nome dos alunos, nmero do

tubo e o volume transferido.

C- Ao de diferentes temperaturas sobre microrganismos

O tubo nmero I dever ficar a temperatura ambiente at a prxima aula.

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O tubo II dever ser fervido por 5 minutos em banho-maria e em seguida dever

ser colocado a temperatura ambiente at a prxima aula.

O tubo III dever ser autoclavado e em seguida, dever ser exposto a

temperatura ambiente at a prxima aula.

O tubo IV dever ir para estufa bacteriolgica regulada a 60

C e vai

permanecer nesta temperatura at a prxima aula.

O tubo V ir para a geladeira e l permanecer at a prxima aula.

D- Interpretao do crescimento em caldo nutritivo

Arrumar os tubos de ensaio na estante tendo o cuidado de no agit-lo. Coloque-

os na ordem crescente numrica.

Comparar os cinco tubos e anotar a ordem crescente de turbidez, pelcula e

avalie o odor aps o crescimento microbiano.

Verificar tambm se houve alterao da cor do meio.

E- Inoculao pela tcnica do esgotamento do inculo

Flambar a ala de Nichome e deix-la prxima chama do bico de Bunsen.

A placa de Petri contendo o meio de cultivo a ser inoculado deve ser dividida, ou

mentalmente ou por intermdio do lpis dermogrfico (fundo da placa), em quatro quadrantes.

Utilizando a tcnica assptica, coletar uma alada do material a ser inoculado e,

mantendo a placa de Petri prxima chama, "riscar" de maneira ordenada, em zigue-zague, sem
ferir o meio, o 1 quadrante, esgotando o contedo de microrganismos da alada na superfcie do
meio solidificado.

Imediatamente, tocando-se no zigue-zague do 1 quadrante com a ala,

realizaremos o segundo e assim sucessivamente, at a realizao do ltimo quadrante.

Aps incubao deste material durante 48 horas a temperatura ambiente

poderemos visualizar colnias isoladas umas das outras atingindo o nosso objetivo que a

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multiplicao a partir de 1 microrganismo e a colnia s possui indivduos geneticamente

idnticos, isto , toda a descendncia igual.
F- Observao macroscpica das colnias

Em regio assptica, observar as placas de Petri inoculadas. Comear

observando a placa com amostra do tubo I, verifique quantas colnias diferentes aparecem nesta
placa.

Anote suas caractersticas (forma, elevao, cor, tamanho e brilho) e prepare

uma lmina de cada colnia diferente. Repita o procedimento acima para as demais placas. No
h necessidade de realizar esfregaos de colnias que se repetem em mais de uma placa.

Fixar as lminas, identific-las e em seguida realizar a colorao de Gram.

G- Colorao de Gram

O mtodo consiste em adicionar lmina contendo os esfregaos, as seguintes

substncias, observando a ordem:

1. Soluo de cristal violeta - cobrir todo o esfregao e deixar por 1 minuto. A seguir, lavar com
gua corrente.
2. Lugol - (mordente): cobrir todo o esfregao e deixar por 1 minuto. A seguir, lavar com gua
corrente.
3. lcool-acetona - (diferenciador): lavar a lmina por 15 segundos e em seguida lavar com
gua.
4. Fucsina - (contra-colorao): cobrir todo o esfregao, deixar por 30 segundos e
lavar com gua corrente para retirar o excesso de corante.

Terminada a colorao de Gram, deixar a preparao secar ao ar e observar ao

microscpio com objetiva de imerso (100 x de aumento).

H-Tcnica de observao por imerso:

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Colocar uma gota de leo de imerso sobre o esfregao;

Fixar a lmina na platina;

Mover a lmina com o auxlio do charriot de forma que o leo de imerso fique

na direo da objetiva;

Girar o revlver e posicionar a objetiva de 100x;

Olhando pela lateral, girar o macromtrico at que a objetiva mergulhe no leo

de cedro e encoste na lmina;

Girar o macromtrico no sentido contrrio at achar o foco inicial;

Se necessrio mova o charriot para analisar toda a lmina;

Ao final da observao limpe a objetiva com solvente apropriado (Xileno ou

lcool/eter).;
9- REAES
No houve reaes nesta prtica.
10- CALCULOS E RESULTADOS
Observao do crescimento de microorganismos nos tubos
I- Temperatura ambiente
II- Fervura/temperatura ambiente
III- Autoclave
IV- Estufa bacteriolgica 60C
V- Geladeira
Tubo
I

Turvao
+++

Pelcula
+++

Odor
+++

Houve crescimento em todo o tubo:

Outros aspectos observados

II

++

Bactrias aerfilas facultativas

Crescimento do meio do tubo para

III
IV

++

baixo: Bactrias micro-aerfilas

No houve crescimento.
Crescimento em todo o tubo:

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Bactrias aerfilas facultativas

No houve crescimento.

Legenda:
+ + + Muito
+ + Mdio
+ Pouco
Nenhum

Esfregao

Tubo

Forma

Arranjo

Gram

Bacilos

Paliada

Positovo

Cocos

Estafilococos

Negativo

Bacilos e esporos

Isolados

Negativo

Bacilos e esporos

Isolados

Negativo

Esboo das visualizaes:

11- DISCUSSES E CONCLUSES

Os meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial dos microorganismos. Estes meios
fornecem os princpios nutritivos indispensveis ao seu crescimento. As exigncias nutritivas
esto relacionadas a uma fonte de carbono, de nitrognio, de energia e de sais minerais. Alguns

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microorganismos tambm necessitam de fatores de crescimento que so substncias que eles no

podem sintetizar, tais como vitaminas, aminocidos etc.
Outras condies inerentes ao meio de cultura necessrio ao desenvolvimento so as
condies de pH, presso osmtica e grau de umidade.
As bactrias representam a maior parte da populao microbiana do solo, tanto em
quantidade e quanto em variedade. Pela contagem por meio de cultura em placa de uma amostra
fornece apenas uma frao desse numero(milhes).
A quantidade e os tipos de microorganismos no solo dependem de muito fatores
ambientais:
1.Quantidade e tipo de nutrientes disponveis.
2.Umidade disponvel.
3.Grau de aerao.
4.Temperatura.
5.pH
6.Praticas e eventos que podem introduzir grande numero de microorganismos no solo,
como a aplicao de adubos ou dejetos de esgoto e a ocorrncia de enchentes, ou aqueles que
podem remover os microorganismos, como as tempestades de poeiras.
O esporo bacteriano uma clula de parede espessa formada no interior de algumas
bactrias. muito resistente ao calor, dessecao e a outros agentes qumicos e fsicos; capaz
de permanecer o estado latente por longos perodos e, em seguida, dando origem a uma nova
clula vegetativa.
A finalidade da colorao facilitar a observao microscpica das bactrias e
diferenci-las de acordo com suas caractersticas tintoriais.
Em todo mtodo de colorao h vrios fatores que podem influenciar nos resultados
como, por exemplo, o pH das solues de lavagem, a limpeza das lminas, a pureza dos
reagentes, o modo de preparao do corante e mesmo o tempo dispendido na preparao desse
corante.
A colorao de Gram muito utilizada por que a maioria das bactrias cora-se por este
mtodo, permitindo observar sua morfologia e fornecendo informaes a respeito do
comportamento do material celular diante de corantes bsicos (corantes de Gram).

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Foi observado que apenas um tubo conteve crescimento de microorganismos Grampositivos. Este mesmo tubo apresentou pelcula formao de esporos forte odor e crescimento
uniforme. Conclui-se que este teve melhores condies de temperatura e pH, alm de nutrientes.

12-ATIVIDADES DE VERIFICAO
a) Por que precisamos ferver os meios solidificados?
Para que o Agar se dissolva uniformemente em todo o meio.
b) Agar um nutriente utilizado pelos microrganismos?
No. O Agar apenas um meio solidificante.
c) Como sabemos que h crescimento de microrganismos em meio lquido e solidificado?
Basta observarmos a aparncia do meio. Em meios lquidos, a turvao e odor so
caractersticas aparentes, j em meios slidos a mudana de cor do meio e a apario de
colnias nos garantem crescimento.
d) Qual a diferena bsica entre preparo de meio de cultivo lquido e preparo de meio de
cultivo solidificado?
A diferena que o meio lquido no precisa ser aquecido, pois no contm Agar a ser
dissolvido, o que ocorre com o meio solido.
e) Qual a funo do banho-maria nesta prtica?
O banho-maria serve para evitar que o meio em preparo entre em ebulio e no dissolva
completamente o Agar, tambm para que o Agar no concentre caso superaquea.
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f) Por que no devemos aquecer o meio solidificado em excesso?

Para evitar que o meio fique concentrado.
g) Qual a finalidade de realizarmos a tcnica do esgotamento do inculo?
Para que possamos conseguir colnias isoladas com microorganismos geneticamente
idnticos.
h) Quanto temperatura de crescimento, a espcie termfila, mesfila ou psicrfila?
Mesfila
i) Defina inoculao.
Inoculao a introduo de um microorganismo em um meio a fim de conseguir
produzir uma colnia com microorganismos geneticamente idnticos.
j) Definir esfregao e alada.
Esfregao uma leve camada de matria orgnica colocada sobre lmina de vidro para ser
examinada ao microscpio.
Alada a retirada de uma parte da cultura para a inoculao em outro meio ou para
visualizao.
k) Citar os critrios de segurana a serem observados quanto realizao do esfregao.
O esfregao deve sempre ser feito prximo a zona de assepsia do bico de Bunsen. Devese flambar a ala de Nichrome constantemente, a fim de evitar contaminaes.

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l) Em que se baseia o mtodo de Gram?

O mtodo da colorao de Gram baseado na capacidade das paredes celulares de
bactrias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta durante um tratamento com etanolacetona enquanto que as paredes celulares de bactrias Gram-negativas no o fazem.
13- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Sites

http://ube164.pop.com.br/repositorio/4488/meusite/micro/microbiologia_pratica2.htm#Colorao
de Gram
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http://translate.google.com/translate?hl=pt-BR&langpair=en
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Dia: 02/05/2010
http://www.ucg.br/ACAD_WEB/professor/SiteDocente/admin/arquivosUpload/3909/mat
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Dia: 02/05/2010
http://www.knoow.net/ciencterravida/biologia/esporulacao.htm#vermais
Dia: 26/04/2010
http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_pos2003/const_microorg/bac
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Dia: 26/04/2010
http://translate.google.com/translate?hl=pt-BR&langpair=en
%7Cpt&u=http://www.dpi.nsw.gov.au/__data/assets/pdf_file/0017/41642/Soil_bacteria.pd
f
Dia: 26/04/2010
Livros
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Ribeiro, Mariangela Cagnoli; Microbiologia prtica: Roteiro e manual. Editora

Atheneu. Rio de Janeiro, 1993, p. 5 a 39.

PELCZAR, M.J.,CHAN ,E.C.S., KRIEG,N.R. Microbiologia: Conceitos e

aplicaes.2.ed.So Paulo: MAKRON Books, 1996, p.

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