UNIME

GUIA PRTICO DE
HEMATOLOGIA

2010

Hematologia - Guia Prtico - 2010

AULA 01 - CONFECO DO ESFREGAO HEMATOLGICO

MATERIAL - Lminas de vidro secas e virgens/ Lpis Grafite/ lcool/ Gaze/ Sistema Haemo Diff - sarstedt/
amostra de sangue.
PROCEDIMENTO
1) ESFREGAO SANGUNEO ESTENDIDO (OU GOTA ESTENDIDA)
O esfregao sanguneo pode ser feito com sangue no anticoagulado, ou anticoagulado. O uso do sangue
anticoagulado pelo EDTA preferencial quando se objetiva uma distribuio mais uniforme das plaquetas.
Ele feito para a anlise das clulas sanguneas e eventualmente para a pesquisa de alguns parasitas
(Plasmodium sp, Babesia sp, Trypanosoma sp, Leishmania donovani, Whuchereria bancrofti etc) bactrias
(Bartonella bacilliformis, Borrelia sp, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, etc) e fungos
(Candida sp, Histoplasma capsulatum, Penicillium marneffei etc) que podem ser encontrados livres entre as
clulas, ou dentro de eritrcitos, neutrfilos ou moncitos a depender do microorganismo. Ainda com uma
freqncia baixa podem ser observadas tambm clulas espiteliais, endoteliais e clulas malignas no
hematopoiticas.
Para a obteno de um bom esfregao sanguneo, so indispensveis os seguintes requisitos: a lmina
dever estar limpa, seca e desengordurada, a gota de sangue no deve ser grande e o esfregao deve ser
fino e homogneo. Um bom esfregao deve possuir: cabea, corpo, franja e bordas.

Bordas

Cabea

Franja
Corpo

1. Esfregar uma gaze seca sobre as lminas: distensora e a destinada ao esfregao.

2.

Usar um lpis grafite para fazer a identificao na lmina destinada ao esfregao sanguneo,
escrevendo por extenso, na parte fosca da mesma.

3. Inverter o tubo de sangue com EDTA por no mnimo cinco vezes de forma lenta.
4. Colocar uma gota de sangue sobre a lmina. Posicionar a lmina distensora na frente do sangue
formando um ngulo entre 30 a 45. O sangue preencher todo o espao angular formado entre as
duas lminas. Mantendo o mesmo ngulo, movimentar a lmina distensora para a frente, de forma
rpida, firme e uniforme, em um s movimento. Obs. Movimento muito rpido e ngulo maior que 40o

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deixam o esfregao muito fino; em contrapartida, movimento lento e ngulo menor que 30o deixam o
esfregao muito espesso.
5. Escrever a identificao na base do esfregao com o auxlio de um lpis grafite. Ex: iniciais do paciente/
dia / no ID. Usar letras pequenas e legveis de forma que no prejudique a observao do esfregao ao
microscpio.
6.

Deixar o esfregao secar espontaneamente ao ar ambiente, sem agitar a lmina.

7. O esfregao est pronto.

2) ESFREGAO SANGUNEO TIPO GOTA ESPESSA

Destina-se pesquisa de hematozorios.
1. Esfregar uma gaze seca sobre as lminas: distensora e as destinadas ao esfregao de gota espessa.
2.

Identificar as lminas da mesma forma descrita para o esfregao ESTENDIDO.

3.

Inverter o tubo de sangue com EDTA por no mnimo cinco vezes de forma lenta.

4.

Colocar 01 gota de sangue na extremidade da lmina e outra no centro da mesma.

5.

Com a lmina distensora, formar um ngulo inferior a 30. Distender cada gota fazendo esfregaos
curtos e espessos.

Identificao

6. Deixar o esfregao secar espontaneamente ao ar ambiente.

76 mm de comp. X 26 mm de largura.

OBSERVAES

Esfregaos feitos com sangue capilar devem ser feitos atravs de fluxo espontneo, sem
compresso local e sem contaminao com lcool.

As lminas devem ser conservadas sempre temperatura ambiente.

No usar lminas recicladas, arranhadas, com resduos de detergentes, corantes, lcool e/ou
gorduras.

Toda amostra biolgica deve ser considerada como potencialmente infectante.

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AULA 02 - COLORAO DO ESFREGAO HEMATOLGICO

1. PRINCPIO
Romanowsky idealizou um mtodo em que uma soluo de corantes poderia corar diferentes estruturas.
Misturas dos corantes eosina e azul de metileno so preparadas segundo proposio de vrios autores:
Leishman, May-Grunwald, Giemsa, Wright e outros (que do os respectivos nomes ao corantes, segundo
Leishman, Giemsa, etc....). Estes corantes so dissolvidos em lcool (em geral metanol). Na soluo
envelhecida, o azul de metileno se oxida em gradaes diferentes, originando diversos azures de
metileno. Teremos ento uma soluo alcolica de um complexo eosinato de azul e azures de metileno.
2. FASES DA COLORAO
Fixao: a preparao a ser corada dever ser previamente fixada. O fixador rotineiro mais usado em
hematologia o metanol, que deve ser aplicado sobre a lmina por 01 a 03 minutos. O corante, preparado
em soluo alcolica, quando aplicado sobre a lmina (nesse perodo de tempo) realiza esta etapa que a
de fixao. A colorao obtm-se adicionando-se gua de colorao (gua tamponada, pH=7,0 ou gua
destilada, recentemente fervida) sobre o corante, ionizam-se os sais contidos na soluo. A lavagem feita
aps a colorao, as lminas so lavadas sob jato de gua corrente e em seguida secas ao ar.
3. NOMENCLATURA USUAL
Quando uma estrutura se cora, revelando a mesma cor do corante, diz-se que uma colorao
ortocromtica; quando a estrutura toma uma cor diferente daquela do corante, diz-se que uma colorao
metacromtica. As estruturas celulares que tem afinidade pelo azul de metileno so chamadas basfilas,
corado-se em azul; as que tem afinidade pelos azures so chamadas azurfilas, corando-se em prpura
(metacromasia); as que tem afinidade pela eosina so chamadas acidfilas, corando-se em rosa e as que
tem afinidade pela mistura complexa so chamadas neutrfilas, corando-se em salmo.
4. METODOS
Leishman ou May-Grunwald-Giemsa, mod. por Rosenfeld (*)
- Fixao: sobre a extenso de sangue, secada ao ar, colocar um nmero x de
gotas (por ex. 30 gotas) do Corante de Leishman ou de Rosenfeld e aguardar alguns minutos (tempo
padronizado).
- Colorao: sem desprezar o corante, acrescentar um igual nmero de gotas de gua de colorao,
homogeneizar e aguardar alguns minutos (tempo padronizado).
Lavar sob jato de gua corrente. Secar ao ar.
gua de colorao (gua tamporada pH = 7,0)
KH2PO4................................................. 1 g
Na2HPO4. 2H2O.................................... 3 g
H2O destilada q.s.p................................ 1000 ml.
(*) Corante de May-Grunwald-Giemsa , mod. por Rosenfeld:
Giemsa........................................................... 0,97 g
May-Grunwald................................................ 0,53 g
Mentanol (p.a).qsp....................................... 1000ml
Homogeneizar. Armazenar em frasco mbar. Filtrar antes do uso.

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AULA 03 - MORFOLOGIA DAS CLULAS SANGUNEAS

1. SRIE ERITROCITRIA
1.1. PROERITROBLASTO: clula oval ou arredondada com 20 a 25de dimetro, citoplasma reduzido,
com basofilia atribuda ao RNA citoplasmtico dos ribossomas (persistem at RETICULCITO). O ncleo
ocupa cerca de 8/10 da clula, apresenta cromatina delicada e com a 1 a 2 nuclolos.
1.2. ERITROBLASTO BASFILO: clula geralmente com cerca de 16 a 18de dimetro, citoplasma
intensamente basfilo. O ncleo j no apresenta nuclolos visveis (por colorao panptica), a cromatina
se dispe em conglomerados de formas diversas, freqentemente pentagonais ou hexagonais, que se
distribuem no ncleo em forma semelhante aos raios de uma roda de carroa, mais ou menos regulares,
dando aspecto
caracterstico.
1.3. ERITROBLASTO POLICROMTICO: neste estgio de maturao, a hemoglobina est presente em
grande quantidade, mas os ribossomas ainda persistem e conseqentemente a colorao do citoplasma
varia de azul a cinza. A clula mede cerca de 9 a 12de dimetro, o ncleo ocupa cerca de 25% da clula,
cora-se mais intensamente, conservando sempre o aspecto caracterstico das condensaes cromatnicas
dispostas como roda de carroa .
1.4. ERITROBLASTO ORTOCROMTICO: nesta fase h uma grande diminuio do dimetro: a clula
mede cerca de 8 a 9, atinge o fim de sua capacidade de sntese de DNA e incapaz de atividade mittica;
o citoplasma saturado de hemoglobina com conseqente acidofilia. O ncleo constitudo por massa
homognea de cromatina, sem estrutura definida, de localizao excntrica, estgio que normalmente
precede sua expulso.
1.5. RETICULCITO: clula anucleada que em colorao pantica, apresenta citoplasma acidfilo, mas
quando quando corada com corantes vitais (ex.: Novo Azul de Metileno ou o Azul de Cresil Brilhante)
apresenta um retculo basfilo (RNAm) neste citoplasma.
1.6. ERITCITO: um disco bicncavo, anucleado, com cerca de 7de dimetro, de colorao rseo-clara
e com halo central mais claro.
2. SRIE PLAQUETRIA
2.1. MEGACARIOBLASTO: clula com cerca de 30 de dimetro, citoplasma basfilo, relao N/C
elevada. A clula pode apresentar-se com 1 ou 2 ncleos de forma irregulares, cromatina frouxa, reticular e
geralmente com 2 ou 3 nuclolos.
2.2. MEGACARIOCITO BASFILO: a clula aumenta de tamanho, o citoplasma apresenta granulaes e
intensa basofilia, presena de vrios ncleos, a cromatina condensa-se e, em geral, no se observam
nuclolos na microscopia ptica.
2.3. MEGACARIOCTO ACIDFILO: a clula apresenta dimetro de cerca de 50 , a relao
ncleo/citoplasma diminui, o citoplasma, agora abundante, torna-se acidfilo com inmeras granulaes, o
ncleo torna-se picntico. As clulas mais maduras apresentam plaquetas em sua periferia. Geralmente um
megacaricito origina cerca de 2.000 plaquetas.
2.4. PLAQUETAS: so estruturas de forma estrelada, com dimetro de 2 a 5geralmente; em casos
patolgicos podem apresentar 10 a 20; apresentam regio central mais escura e uma perifrica mais clara,
com muitas granulaes.

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3. SRIE GRANULOCTICA
3.1. MIELOBLASTO: apresenta dimetrto de 20-25 ; clula de aspecto irregular, arredondada ou ovalada,
citoplasma basfilo (menos que o do Hemocitoblasto), com granulaes azurfilas, relao
ncleo/citoplasma grande, ncleo de forma irregular (cromatina delicada), com2 a 3 nuclolos.
Origina as sries neutrfila, eosinfila e basfila. Os granulcitos neutrfilos, eosinfilos e basfilos
possuem as mesmas etapas de maturao, apresentando colorao do citoplasma e forma do ncleo
semelhantes, mas com diferentes granulaes especficas citoplasmticas.
GRANULAES ESPECFICAS
As granulaes especficas dos neutrfilos apresentam-se pequenas, s vezes pouco visveis, dispersas
pelo citoplasma, que apresenta colorao vermelho salmo.
As granulaes especficas dos eosinfilos, quando coradas por corantes panticos, apresentam
variao de cor conforme o estado de maturao: no incio so violceas, depois tornam-se azul-violeta e
finalmente tomam a cor laranja. So muito maiores que as do neutrfilo, com 0,4 0,8de dimetro, de
forma esfrica ou ovide, dispostas por todo
o citoplasma.
As granulaes especficas dos basfilos, so na realidade metacromticas, de cor violeta, de vrios
tamanhos, podendo atingir 2de dimetro, dispondo-se por todo o citoplasma e sobre o ncleo,
mascarando-o.
3.2. PROMIELCITO: apresenta cerca de 20de dimetro, forma arredondada ou ovalada; com colorao
pantica. O citoplasma se apresenta basfilo, com granulaes azurfilas e especficas (de neutrfilo ou
eosinfilo ou basfilo), ncleo pode apresentar forma ovalada, arredondada (cromatina delicada) , com ou
sem chanfradura e geralmente sem nuclolos evidentes.
3.3. MIELCITO: mede 12-18u de dimetro; o citoplasma a partir deste estdio acidfilo com granulaes
especficas evidentes (de neutrfilo ou eosinfilo ou basfilo), por colorao pantica. Ncleo geralmente
arredondado, podendo apresentar chanfradura e com cromatina mais
condensada.
3.4. METAMIELCITO: mede cerca de 15u, citoplasma acidfilo, com granulaes especficas evidentes
(de neutrfilo ou eosinfilo ou basfilo) por colorao pantica. Ncleo se apresenta reniforme e
cromatina condensada.
3.5. BASTONETE: mede cerca de 12 u, citoplasma acidfilo com
granulaes especficas evidentes (de neutrfilo ou eosinfilo ou basfilo) por colorao pantica, ncleo
em forma de ferradura.
3.6. SEGMENTADO: mede cerca de 12 u, citoplasma acidfilo com granulaes especficas evidentes (de
neutrfilo ou eosinfilo ou basfilo) por colorao pantica. Ncleo lobulado (a mdia para neutrfilos
de 3 a 4 segmentos e para eosinfilos cerca de 2 segmentos).
4 SRIE MONOCITRIA
4.1. MONOBLASTO: clula grande (geralmente maior que o Hemocitoblasto), com cerca de 30u,
arredondada, citoplasma basfilo (azul claro), podendo apresentar algumas granulaes azurfilas, ncleo
geralmente arredondado, podendo apresentar chanfradura, cromatina delicada, disposta em rede, com 1 a
2 nuclolos.
4.2. PROMONCITO: clula intermediria entre monoblasto e moncito.
4.3 MONCITO: apresenta dimetro de 20 a 30 u, cotoplasma azulacinzentado
com um nmero varivel de granulaes azurfilas e vacolos. Ncleo grande, freqentemente chanfrado,
cromatina delicada e disposta em
rede.

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5 SRIE LINFIDE
5.1. LINFOBLASTO: apresenta dimetro de cerca de 15-20u, citoplasma basfilo com halo claro
perinuclear podendo, raramente apresentar granulaes azurfilas; relao ncleo/citoplasma grande;
cromatina nuclear delicada mas, com tendncia a apresentar grumos, geralmente com 1 a 2 nuclolos..
5.2. PROLINFCITO: uma clula intermediria entre linfoblasto e linfcito; apresenta dimetro de 10 a
18u, relao ncleo/citoplasma grande mas tende a ser menor que a do LINFOBLASTO; citoplasma
basfilo, podendo tambm apresentar algumas granulaes azurfilas. O ncleo se apresenta arredondado
ou oval, com cromatina mais condensada que a do linfoblasto, mas mais delicada que a do linfcito;
geralmente apresenta um
nuclolo.
5.3. LINFCITOS: no sangue perifrico podem ser observadas as formas: pequeno linfcito (7-8u de
dimetro) e grande linfcito (10u de dimetro).
PEQUENO LINFCITO: clula arrendondada, apresenta relao ncleo/citoplasma grande (o ncleo ocupa
9/10 da clula); por isso, geralmente, o citoplasma no visualizado; o ncleo apresenta cromatina
densa.
GRANDE LINFCITO: uma clula arredondada, citoplasma basfilo (azul claro), geralmente com
granulaes azurfilas; ncleo arredondado (freqentemente apresenta-se ligeiramente excntrico); relao
ncleo/citoplasma menor do que a do pequeno linfcito.

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AULA 04 - ERITROSSEDIMENTAO
Sinonmia: Velocidade de Hemossedimentao dos Eritrcitos; Velocidade de Sedimentao Globular.
um teste inespecfico na documentao de processo inflamatrio, infeccioso ou neoplsico, servindo tambm
para inferncia de sua intensidade e, considerando-se as limitaes, da resposta teraputica.
A velocidade com que as hemcias sedimentam em um tubo depende do volume e da forma dos eritrcitos e
das protenas do plasma. O VHS no mede a viscosidade sangnea, mas influenciado por protenas
plasmticas na seguinte escala comparativa de valores: fibrinognio(10), -globulina(5), e -globulinas (2)
e albumina(1). Fatores que reduzem a sedimentao das hemcias incluem a rigidez e alteraes morfolgicas
celulares. Fatores que aumentam o VHS incluem estados de hemodiluio e a eventual presena de protenas
plasmticas assimtricas e de alto peso molecular que se ligam membrana celular, o que reduz o potencial
zeta e facilita a formao do rouleaux, constitudo por hemcias empilhadas e aderidas. Dessa forma, a simples
observao de rouleaux num esfregao de sangue j indicativo de VHS anormal.
A eritrossedimentao foi introduzida em 1918 por Fahraeus, em estudos sobre a gravidez. Em 1920
Westergreen descreveu a tcnica hoje adotada universalmente. Posteriormente outros mtodos foram propostos
como o de Wintrobe em 1935. No mtodo de Westwergreen mistura-se 1,6ml de sangue venoso mais 0,4ml de
citrato de sdio a 3,8% e coloca-se num tubo transparente com dimetro interno de 2,5mm e graduado em
milmetros. A marca zero da graduao fica na extremidade superior, exatamente a 200mm da ponta da pipeta.
A tcnica exige que o tubo com a amostra de sangue seja mantido exatamente na vertical e permanea em
repouso pelo menos durante uma hora. A leitura dada pela altura da coluna de plasma, no limite de separao
com as hemcias sedimentadas. O resultado, expresso em milmetros por hora (mm/h), mede a
eritrossedimentao, hemossedimentao ou VHS. O mtodo de Wintrobe possui duas utilidades bsicas: para
VHS segundo Wintrobe e para fazer o macro-hematcrito. Possui duas escalas, uma crescente e uma
decrescente, para se fazer as leituras nos prprios tubos. Os valores normais diferem dos valores do mtodo de
Westergren porque o tubo tem metade do comprimento e graduaes diferentes.
Em geral, o VHS encontra-se aumentado nos processos inflamatrios (aumento de fibrinognio e das protenas
de fase aguda; aumento de imunoglobulinas), na presena de protenas plasmticas anormais (mieloma mltiplo),
nas

neoplasias

(associao

de

mecanismos),

lipemias,

anemias

(hemodiluio),

hiperproteinemias,

hiperfibrinogenemias e gravidez. Tambm elevam o VHS o aumento da viscosidade sanguinea, a alcalose, a

presena de macrocitose, esfercitos, microcogulos. Encontra-se diminudo na presena de crioaglutininas,
microcitose, anisocitose, esferocitose, drepancitose e a poliglobulia. Pacientes com hemlise ou coagulao
intravascular disseminada podem ter VHS normal, devido reduo de haptoglobina ou do fibrinognio.Tambm
diminuem o VHS a acidose e o resfriamento do sangue.

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Recomendaes para colheita: Jejum de 4 horas recomendvel, mas no obrigatrio / Anotar uso dos medicamentos
utilizados nos ltimos 14 dias.
Interferentes: Volume desproporcional entre o anticoagulante e o sangue colhido / Garroteamento prolongado / Puno
traumtica / Lipemia.

Valores de Referncia:
Mtodo de Wintrobe
Homens 0 a 15 mm/ 1a. Hora.
Mulheres 0 a 25 mm/ 1a. Hora.

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Exames correlacionados: dosagem de fibrinognio, alfa-1-glicoprotena cida, hemograma, ASLO,

protena C reativa e mucoprotenas.
Toda amostra biolgica deve ser considerada como potencialmente infectante.

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AULA 05 TEMPO DE PROTROMBINA

PRINCPIO DO TESTE
O teste consiste na comparao da velocidade de formao da fibrina entre o plasma de referncia e
plasmas de pacientes, representando a medida da atividade dos fatores do complexo protrombnico (fatores
ll, V, Vll, X). Baseia-se na medida do tempo de coagulao do plasma depois de se adicionar uma fonte de
fator tissular (tromboplastina) e clcio.
A recalcificao do plasma na presena de fator tissular gera o Fator X ativado e posteriormente um
cogulo de fibrina.
A formao de fibrina macroscopicamente demonstrada pelo aparecimento de um cogulo.
APLICAO CLNICA
O teste muito empregado para monitorar pacientes fazendo uso de anticoagulantes orais devido
reduo na atividade dos fatores vitamina K dependentes (II, VII, IX, X, Protena C e Protena S).
SIGNIFICADO CLNICO
O tempo de protrombina (TP) empregado para avaliar as alteraes congnitas e adquiridas de fatores da
via extrnseca da coagulao, no controle da anticoagulao oral e como teste de triagem pr-operatria.
O TP est prolongado nas deficincias de fatores da via extrnseca da coagulao (I, ll, V, Vll e X), durante
o uso de anticoagulantes orais, na presena de inibidores especficos circulantes, em doenas hepticas,
nas desordens do metabolismo da vitamina K (deficincia de sntese ou absoro), na doena hemorrgica
do recm-nascido, ictercia obstrutiva, distrbio da absoro intestinal, antibioticoterapia, insuficincia
heptica, fibrinlise e coagulao intravascular.
O teste muito empregado para monitorar pacientes fazendo uso de anticoagulantes orais devido
reduo na atividade dos fatores vitamina K dependentes (II, VII, IX, X, Protena C e Protena S).
AMOSTRA
Colher sangue em citrato pela manh aps jejum de 4 horas, salvo orientaes mdicas.
COMPONENTES DO KIT
Tromboplastina - Contm extrato liofilizado de crebro de coelho e cloreto de clcio ajustado para atender
os requerimentos do teste.
PREPARO DE AMOSTRAS DE REFERNCIA
Preparar um pool (referncia) misturando plasmas citratados obtidos de, no mnimo 3 indivduos sadios.
No usar plasmas de portadores de doenas hepticas ou de mulheres grvidas ou em uso de
contraceptivos orais.
TCNICA DE ANLISE
1- Realizar o teste em tubos de vidro rigorosamente limpos.
2- A temperatura do banho-maria deve estar entre 36,5-38,5 C.
3- Incubar 200 L do Reagente de Trabalho (Tromboplastin reconstitudo) em tubos de ensaio 12 x 75
durante 2 minutos (mnimo) e 15 minutos (mximo).
4- Adicionar 100 L do plasma a ser medido (referncia ou paciente) e simultaneamente, disparar o
cronmetro. Misturar suavemente e manter no banho-maria por 9 segundos.
5- Remover o tubo, inclin-lo periodicamente e observar a formao de cogulo. Travar imediatamente o
cronmetro e anotar o tempo.
CLCULOS E RESULTADOS
Calcular a mdia do tempo da determinao de TP das duplicatas para cada plasma e anotar.
Os resultados do Tempo de Protrombina (TP) podem ser expressos em Atividade% do normal ou em RNI
(Relao Normalizada Internacional).
1- Relao dos Tempos de Protrombina (RP)
RP = Tempo em segundos (TP) do plasma do paciente dividido pelo Tempo em segundos (TP) do plasma
de referncia.

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2- Atividade de Protrombina (A%)

Utilizar a tabela anexa.
Tabela 1 - Clculo da Atividade (A%) - Converso de TP em segundos para Atividade (A%).
Relacionar o tempo em segundos do plasma de referncia com o tempo em segundos do plasma do
paciente e encontrar o valor de Atividade (%).
3- Relao Normalizada Internacional (RNI)
Para obter os resultados em RNI, temos 2 processos:
3a- Utilizar a tabela anexa.
Tabela 2 - Clculo da RNI - Converso da Relao do TP para RNI.
Relacionar a Relao dos Tempos de Protrombina (RP) calculada no item 1 de Clculos e Resultados com
o ISI (ndice Internacional de Sensibilidade) informado no rtulo do produto.
Ateno: O ISI pode variar de lote a lote.
Exemplo
TP do plasma de referncia = 12 s
TP do plasma do paciente = 13 s
1- RP = 13 12 = 1,08 1,1
2- Utilizando a Tabela 1 Interconverso de Tempo (s) X Atividade% .
Atividade de Protrombina (A%) = 82%
3- Utilizando a Tabela 2 Conveso para RNI
Se ISI = 1,22 1,2
RP calculado = 1,1
RNI = 1,12
3b- A RNI pode tambm ser calculada atravs das seguintes frmulas:
RNI = RPISI ou RNI = antilog (log RP x ISI)
VALORES DE REFERNCIA
Os valores de TP dependem do reagente utilizado e, portanto, esto sujeitos a variaes significativas entre
os laboratrios. Portanto, importante que os resultados sejam expressos em RNI para corrigir essa
variabilidade de resultados entre os laboratrios.
1- Tempo de Protrombina (TP): 10 a 14 segundos.
2- Atividade (A%) de Protrombina: 70 a 100%. Valores acima de 100% no tm significado patolgico.
3- RNI: entre 1,0 e 1,08.
Monitorao Laboratorial de Terapia com Anticoagulantes Orais
Para maximizar os efeitos teraputicos desejados e minimizar
sangramentos, a OMS recomendou o emprego da Relao Normalizada
Internacional (RNI) para padronizar o teste de tempo de protrombina e o
respectivo tratamento. Os resultados em RNI corrigem a variabilidade
existente entre os diversos reagentes de tromboplastina utilizados nos
laboratrios. O ndice Internacional de Sensibilidade (ISI) a medida da
sensibilidade entre tromboplastina/instrumento para fatores de coagulao.
Os valores de ISI so determinados por comparao a um material de
referncia de tromboplastina primria. Reagentes com alta sensibilidade
possuem valores de ISI baixos. A tabela fornecida na Instruo de Uso
original para determinar o RNI relativo ao TP obtido com o Tromboplastin
em diferentes valores de ISI. aconselhvel que pacientes em terapia
estabilizada com anticoagulante oral devam ter seu RNI mantido entre 2,0 e
3,5 dependendo da indicao clnica.

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AULA 06 TEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ATIVADA

PRINCPIO DO TESTE
O tempo de tromboplastina parcial ativada ( TTPA ) um teste que avalia o sistema intrnseco da
coagulao. O TTPA consiste na determinao do tempo de coagulao de um plasma a 37 C aps
recalcific-lo com cefalina e clcio. O teste TTPA sensvel as deficincias de atividades dos fatores II, V,
VIII, IX, X, XI, XII devido desordens hereditrias de coagulao, doenas hepticas, deficincia de vitamina
K e vrios frmacos.
O reagente contm substitutos de fosfolpides plaquetrios que, juntamente com um ativador solvel, cido
elgico, proporciona condies timas para a ativao por contato dos fatores da coagulao (via
intrnseca).
APLICAO CLNICA
Apesar de ser sensvel a deficincias de todos os fatores da coagulao, com exceo do fator VII, o TTPA
detecta desordens hemorrgicas secundrias principalmente deficincia dos fatores VIII, IX, XI, XII e Pr calicrena. O TTPA pode ser utilizado tambm com sucesso para monitorar pacientes em terapia com
heparina. O sistema suficientemente sensvel para discriminar diferentes concentraes deste
anticoagulante, apresentando prolongamento do tempo de coagulao proporcional concentrao de
heparina no plasma.
SIGNIFICADO CLNICO
Nveis de fatores entre 15% e 30% do normal prolongam o TTPA. O TTPA usado para deteco de
deficincias ou inibidores dos fatores da coagulao da via intrnseca ou comum, alm de se prestar para
monitorizao da anticoagulao com heparina e para rastreamento do anticoagulante lpico. Distrbios da
via intrnseca da cascata da coagulao so caracterizados pelo TTPA prolongado e o Tempo de
Protrombina (TP) normal. Formas hereditrias incluem a deficincia dos fatores VIII ou IX (hemofilias A ou B
respectivamente), fator XI, pr-calicrena, cininognio de alto peso molecular e fator XII. A deficincia dos
trs ltimos fatores no est associada com quadro de manifestao hemorrgica, constituindo-se apenas
uma anormalidade laboratorial. Distrbios adquiridos que cursam com TP normal e TTPA prolongado
incluem o inibidor lpico ou inibidores dos fatores VIII, IX e XI, alm do uso de heparina. Distrbios da via
comum causam o prolongamento do TP e TTPA, os quais, quando hereditrios, indicam formas raras de
deficincia de um dos seguintes fatores: fator X, fator V, protrombina ou fibrinognio. Por outro lado,
deficincias adquiridas de alguns destes fatores geralmente so acompanhadas por outras anormalidades
na via extrnseca ou intrnseca, como ocorre nas hepatopatias, na coagulao intravascular disseminada
(CIVD) e na deficincia de vitamina K. Alm disso, quando oTPe oTTPA esto prolongados, torna-se
importante a realizao da dosagem de fibrinognio e do tempo de trombina (TT), pois pode tratar-se de
afibrinogenemia, hipofibrinogenemia ou disfibrinogenemia.
AMOSTRA
Colher sangue em citrato pela manh aps jejum de 4 horas, salvo orientaes mdicas.
COMPONENTES
cido Elgico, Fosfolpide de Crebro de Coelho
PREPARO DE AMOSTRAS DE REFERNCIA
Preparar um pool (referncia) misturando plasmas citratados obtidos de, no mnimo 3 indivduos sadios.
No usar plasmas de portadores de doenas hepticas ou de mulheres grvidas ou em uso de
contraceptivos orais.

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TCNICA DE ANLISE
- TTPA ( reagente pronto para uso ) : homogeneizar o frasco antes do uso.
- Soluo de Cloreto de Clcio 0,025M : pronto para o uso.
Reagente de TTPA
Plasma

100 L
100 L

Homogeneizar e incubar de 3 a 5 minutos 37 C em

banho-maria
Cloreto de
aquecido )

Clcio

(pr-

100 L

Simultaneamente acionar o cronmetro e agitar o tubo dentro do banho-maria por aproximadamente 30

segundos. Retirar o tubo do banho e continuar agitando o tubo suavemente at o momento da formao do
cogulo. Parar imediatamente o cronmetro e anotar o tempo de coagulao.
INTERVALO DE REFER NCIA
Interpretao dos resultados
Os resultados podem ser expressos de modo distintos:
1 como tempo de tromboplastina parcial ativada em segundos;
2 como relao entre o tempo obtido com o desconhecido e o tempo de um plasma controle.
Tempo do desconhecido
R = -------------------------------------Tempo do teste
Cada laboratrio dever definir seus prprios valores normais a partir de plasmas de referncia ou pool de
plasmas frescos normais.
Valores de referncia
O intervalo de valores obtidos em indivduos normais variam entre 30 43 segundos e dependem do kit.
Consideram-se fora do normal os valores superiores 6 segundos de um plasma controle.

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AULA 07 CLASSIFICAO SANGUNEA

1. SIGNIFICADO CLNICO:
O sistema de classificao ABO demonstra o fentipo do indivduo resultante de herana gentica. Os
quatro mais comuns grupos deste sistema so A, B, AB, O, referindo-se a presena de determinado
antgeno na superfcie das hemcias. O sistema Rh refere-se, por sua vez, a presena ou ausncia do
antgeno D, sua presena indica o fentipo Rh positivo e sua ausncia, Rh negativo. O sistema ABO
o sistema sanguneo mais antignico por ter maior capacidade de produo de anticorpos, sendo
sempre requisitado como pr-operatrio, na terapia transfusional, e tambm na gestao como exame
pr-natal para evitar a incompatibilidade materno-fetal com desenvolvimento de doena hemoltica perinatal, nas anemias hemolticas auto-imunes e na excluso de paternidade. Alm da importncia na
transfuso sangunea muito importante nos transplantes renais, cardacos, de fgado e de medula
ssea.
2. PRINCIPIO ANALTICO:
As hemcias contendo antgenos de superfcie presente na membrana dos eritrcitos (aglutingenos)
A, B e Rh(D), sofrem aglutinao quando em presena de anticorpos especficos (aglutininas) dirigidas
contra eles. Assim,as hemcias dos grupos sangneos A,B e AB sofrem aglutinao pela presena
dos anti-soros Anti A, Anti B e anti-A/anti-B, respectivamente. A ausncia de aglutinao corresponde
ao grupo 0 (zero), tambm conhecido como O. Para a deteco do antgeno D (Rh) o princpio o
mesmo, utilizando-se de um anti-soro anti-Rh. A presena ou ausncia de aglutinao caracteriza as
hemcias testadas como Rh-positiva (presena) e Rh-negativa (ausncia).
Este teste tem como princpio a interao antgeno-anticorpo, evidenciada atravs da aglutinao das
hemcias que formam grumos a partir da ligao de anticorpos especficos a antgenos presentes na
sua membrana. Na primeira etapa os anticorpos se ligam aos antgenos sensibilizando as hemcias,
na segunda etapa os anticorpos formam pontes entre as hemcias sensibilizadas resultando na
aglutinao propriamente dita. Esta reao pode variar de intensidade.
Quando os antgenos no esto presentes na amostra em teste, a reao de aglutinao no
ocorrer.
3.
a)
b)
c)

AMOSTRA:
Tipo de amostra: sangue total venoso, arterial, ou sangue de cordo com anticoagulante EDTA.
Preservao da amostra: 02 dias em geladeira.
Tratamento ou Pr-Tratamento da Amostra: No se aplica.

4. MATERIAL REQUERIDO:
Tubos de ensaio 5 ml.
Galeria para tubos de ensaio.
Ponteiras.
Pipeta automtica de 50Ul.

Pipeta automtica de 500uL.

Centrfuga
Banho-maria
Anti-soro anti-A
Anti-soro anti-B
Anti-soro anti-Rh (D)
5. PROCEDIMENTO PROVA EM TUBO

Em tubo previamente identificado com no. e ordem do paciente, aliquotar 100 l de sangue total e
ressuspender em 2 ml de soluo fisiolgica 0,9% NaCl , homogeneizando e em seguida levar a
centrifugao por 2 minutos 1500RPM.

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Decantar o sobrenadante aps a centrifugao e repetir a operao de lavagem por mais duas
vezes;
Preparar uma suspenso de hemcias 5% (50 l da papa de hemcias + 950 l de soluo
fisiolgica).
Identificar 03 novos tubos com a mesma identificao do item 7,1 mais as letras A, B e D. Transferir
50l da suspenso 5% em cada tubo.
Adicionar 01 gota de cada anti-soro Anti-A, Anti-B e Anti-Rh em seu respectivo tubo previamente
identificado, homogeneizar e levar a centrifugao por 02 min a 1500RPM. OBS: Mantenha o contagotas ou a pipeta na posio vertical para que o volume dispensado seja exato e no escorra pelas
paredes do tubo.

LEITURA:
Agite o tubo de hemlise para ressuspender o boto de hemcias e, ao mesmo tempo, observe como
as hemcias se desprendem. S analise depois de suspender todas as hemcias do boto.
1- Se aglutinar apenas no tubo A, o tipo sanguneo A
2- Se aglutinar apenas no tubo B, o tipo sanguneo B
3- Se aglutinar nos tubos A e B, o tipo sanguneo AB
4- Se no aglutinar em nenhum dos tubos, o tipo sanguneo O.
5- Se houver aglutinao no tubo Rh o paciente Rh Positivo.
6- Se no houver aglutinao no tubo Rh ento fazer o teste de D.Fraco (antigamente chamado de
D.U., porm este termo est em desuso).
Teste de D Fraco.
1- Identificar 1 tubo com o nmero do paciente
2- Colocar 100 l da suspenso de hemcias 5% no tubo
3- Colocar 2 gotas do soro Anti-D e homogeneizar.
4- Colocar em Banho-Maria 37 C por 20 minutos.
5- Adicionar soluo salina a 0,95% at aproximadamente 1 cm da borda do tubo
6- Centrifugar o tubo a 3.400 r.p.m. entre 1 a 2 minutos.
7- Decantar completamente o sobrenadante por inverso do tubo.
8- Repetir os procedimentos 5, 6 e 7 por mais duas vezes.
9- Colocar 2 gotas do soro de Coombs
10- Centrifugar por 15 segundos a 3.400 r.p.m.
Leitura:
- Agite o tubo de hemlise para ressuspender o boto de hemcias e, ao mesmo tempo, observe como
as hemcias se desprendem. S analise depois de suspender todas as hemcias do boto.
- Se houver aglutinao no tubo ento o paciente Rh Positivo.
- Se no houver aglutinao no tubo ento ele Rh Negativo..
- Efetuar a leitura e anotar o resultado no mapa de trabalho. O tcnico ou bioqumico libera os
resultados.
6. PROCEDIMENTO PROVA EM LMINA
Colocar trs pequenas gotas de sangue (aproximadamente 25l) homogeneizado com distncia de
aproximadamente 02cm entre elas numa lmina ou placa de vidro, bem limpa e seca;
Colocar uma gota dos anti-soros anti-A, anti-B e anti-Rh rente s gotas de sangue;
Homogeneizar com o auxlio de uma ponteira ou um palito;
Promover movimentos de oscilao da placa/lmina e aguardar 01 minuto at a leitura;
Efetuar a leitura e liberar/transcrever os resultados .
7. CLCULO/LIBERAO DOS RESULTADOS:

Interpretao dos resultados

Positivo : Clulas aglutinadas.
Negativo : Ausncia de aglutinao

Obs. Se necessrio, observar a presena/ausncia de aglutinao em microscpio sob aumento 100 X.

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Reaes especficas para grupos sanguneos ABO.

PROVA DIRETA
A
B
AB
O

Anti-A
++++
+++++
-

Anti-B
++++
-

REAES ESPECFICAS PARA D (RHO)

D(Rh) positivo
++++

D fraco (Du)
+/- a +++

D(Rh) negativo
-

8. INTERFERENTES:
Lavagem inadequada das hemcias.
Bactrias ou outras formas de contaminaes.
Resduos de fibrina nas suspenses.
Suspenses de hemcias muito concentradas.
Os antgenos do sistema ABO somente estaro totalmente desenvolvidos aps os 2
anos de idade, podendo haver discrepncias antes dos 2 anos.
Existem subgrupos A1 e A2 e subgrupos A1B e A2B que dificultam a interpretao e
necessitam de soros especficos. De 1 a 8% dos indivduos A2 podem apresentar no
plasma anticorpos anti-B e anti-A1. No caso do subgrupo A2B de 22 a 35% dos
indivduos podem apresentar o anticorpo anti-A1 no plasma..
Pacientes com mieloma mltiplo, presena da gelia de Wharton, uso de expansores
plasmticos formam Rouleaux, dificultando a interpretao dos resultados
Doena hemoltica do recm-nascido, anemia hemoltica auto-imune, reao transfusional
hemoltica uso de medicamentos, podem causar problemas de leitura de
resultados.

Amostras hemolisadas no podem ser analisadas