Você está na página 1de 28

CDIGO PAGINA

SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE


1/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

1. CAMPO DE APLICAO
1.1. Este procedimento se aplica aos Laboratrios Qumicos de Controle da Qualidade

2. OBJETIVO
2.1. Verificar os mtodos analticos normalizados, cuja aplicao permanea dentro do escopo para o
qual foi desenvolvido;
2.2. Validar os mtodos analticos no normalizados, desenvolvidos pelo laboratrio, modificaes de
mtodos normalizados e/ou aqueles aplicados fora dos escopos para as quais foram concebidos.

3. EQUIPE RESPONSVEL
3.1. Todos os colaboradores dos Laboratrios de Controle de Qualidade da gua, incluindo estagirios
supervisionados, que tenham recebido treinamento para este PO.

4. HIGIENE E SEGURANA
4.1. Os equipamentos de proteo individual (EPIs) necessrios para a execuo desse procedimento
devem obedecer ao preconizado para a anlise de cada parmetro, conforme descrito em seus
respectivos POs.

5. DEFINIES
5.1. Ajuste: Conjunto de operaes efetuadas em um sistema de medio de modo que ele fornea
indicaes prescritas correspondentes a determinados valores de uma grandeza a ser medida;
5.2. Branco do Mtodo: gua ultrapura ou outra matriz contendo todos os reagentes que normalmente
esto em contato com a amostra durante todas as etapas do procedimento analtico;
5.3. Comparao Interlaboratorial: Organizao, desempenho e avaliao de medies ou ensaios nos
mesmos ou em itens similares por dois ou mais laboratrios, de acordo com as condies
predeterminadas;
5.4. Curva Analtica: Expresso da relao entre sinais analticos (indicaes) e o valor medido
(grandeza) ao longo de uma determinada faixa;
5.5. Ensaio de Proficincia: Determinao do desempenho de ensaios de laboratrios por meio de
comparao interlaboratorial;
5.6. Erro de Medio: Diferena entre o valor medido de uma grandeza e um valor de referncia;
5.7. Erro Sistemtico: Componente do erro de medio que, em medies repetidas, permanece
constante ou varia de maneira previsvel;
5.8. Exatido de Medio: Grau de concordncia entre um valor medido e um valor verdadeiro de um
mensurando;
5.9. Faixa de Trabalho: Faixa de concentrao do analito na qual o mtodo pode ser aplicado;
5.10. Fator: Varivel quantitativa ou qualitativa que pode afetar o resultado com base na matriz de
experimentos;
5.11. Grandeza: Propriedade dum fenmeno, dum corpo ou de uma substncia que pode ser expressa
quantitativamente sob a forma de um nmero ou referncia (unidade de medida, procedimento de
medio, material de referncia ou uma combinao destes);
5.12. Heterocedasticidade: Ausncia de homocedasticidade, isto , as varincias dos diferentes nveis de
concentrao no so homogneas. Infere-se que o modelo matemtico dos mnimos quadrados
ordinrios (regresso linear simples) aplicado na correlao entre as medies sob diferentes nveis
de concentrao no apropriado;

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
2/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

5.13. Homocedasticidade: Termo para designar a varincia homognea em diferentes nveis de


concentrao;
5.14. Incerteza de Medio: Parmetro no negativo que caracteriza a disperso dos valores atribudos a
um mensurando com base nas informaes utilizadas;
5.15. Indicao: Valor fornecido por um instrumento de medio ou por um sistema de medio (conjunto
de um ou mais instrumentos de medio frequentemente montado a outros dispositivos, reagentes e
insumos);
5.16. Limite de Deteco: Menor concentrao do analito, que sob uma determinada probabilidade, pode
ser detectada (discriminada a partir do rudo do branco do mtodo), mas no necessariamente
quantificada;
5.17. Limite de Quantificao: Menor concentrao de analito que pode ser determinado com preciso e
exatido aceitveis, sob condies experimentais especficas;
5.18. Limite de Repetibilidade: Parmetro que informa se h diferena significativa de preciso entre as
anlises realizadas sob condies de repetibilidade;
5.19. Limite de Reprodutibilidade: Parmetro que informa se h diferena significativa de preciso entre
as anlises realizadas sob condies de reprodutibilidade;
5.20. Linearidade: Caracterstica de um mtodo analtico em produzir resultados que sejam diretamente
proporcionais concentrao do analito em amostras, em uma dada faixa de concentrao;
5.21. Material de Referncia Certificado (MRC): Material de referncia acompanhado de uma
documentao emitida por um organismo com autoridade, a qual fornece um ou mais valores de
propriedades especificadas com as incertezas e as rastreabilidades associadas, utilizando
procedimentos vlidos;
5.22. Mensurando: Grandeza que se pretende medir;
5.23. Preciso: Grau de concordncia entre indicaes ou valores medidos, obtidos por medies
repetidas no mesmo objeto ou em objetos similares, sob condies especificadas (condies de
repetibilidade, preciso intermediria ou reprodutibilidade);
5.24. Preciso Intermediria: Condio de medio num conjunto de condies, as quais compreendem o
mesmo procedimento de medio, mesmo local e medies repetidas no mesmo objeto ou em
objetos similares, ao longo de um perodo extenso de tempo, mas pode incluir outras condies
submetidas a mudanas (ajustes, padres, operadores, sistemas de medio, tempo, etc.);
5.25. Quantis (plural de quantil): Conjunto de (n-1) valores ordenados e consecutivos de uma varivel que
dividida em n propores equivalentes, ou seja, n subconjuntos com a mesma quantidade de
valores. Quando representados em termos percentuais, os quantis so denominados percentis
(plural de percentil). A partir da funo de distribuio acumulada, tem-se: 4 quantis = 1 quartil = 25
percentil = 25% de um conjunto ordenado;
5.26. Recuperao: Medida de eficincia do processo de isolamento do analito de interesse na matriz na
qual se encontra presente;
5.27. Relatrio de Validao: Documento especfico de cada mtodo analtico que descreve os
procedimentos, parmetros e critrios de aceitao, bem como os resultados, a discusso e
concluso sobre o processo de validao;
5.28. Repetibilidade: Condio de medio num conjunto de condies, as quais compreedem o mesmo
procedimento de medio, o mesmo operador, o mesmo sistema de medio, as mesmas condies
de operao, o mesmo local, assim como medies repetidas no mesmo objeto ou em objetos
similares durante um curto perodo de tempo;
5.29. Reprodutibilidade: Condio de medio num conjunto de condies, as quais compreendem
diferentes locais, diferentes operadores, diferentes sistemas de medio (com procedimentos

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
3/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

analticos diferentes ou no) e medies repetidas no mesmo objeto ou em objetos similares. Trata-
se de um parmetro de validao obtido a partir de comparao interlaboratorial ou estudo
colaborativo;
5.30. Resduo: Diferena entre o sinal analtico medido e o sinal analtico previsto (aceito como
verdadeiro);
5.31. Robustez: Parmetro que mede a sensibilidade que um mtodo analtico apresenta em face de
pequenas variaes. Um mtodo diz-se robusto quando este for indiferente s variaes que por
ventura possam ocorrer durante a sua execuo;
5.32. Seletividade: Propriedade de um sistema de medio, utilizado com um procedimento de medio
especificado, segundo a qual o sistema fornece valores medidos para um ou vrios mensurandos,
tal que os valores de cada mensurando sejam independentes uns dos outros ou de outras
grandezas associadas ao fenmeno, corpo ou substncia em estudo;
5.33. Tendncia: Estimativa de um erro sistemtico;
5.34. Validao: Confirmao por exame e fornecimento de evidncia objetiva de que os requisitos
especficos para um determinado uso pretendido so atendidos (Verificao na qual os requisitos
especificados so adequados para um uso pretendido);
5.35. Veracidade: Grau de concordncia entre a mdia de um nmero infinito de valores medidos
repetidos e um valor de referncia;
5.36. Verificao: Avaliao de alguns parmetros de validao de mtodos analticos quando o mtodo
for normalizado e dentro do escopo (Fornecimento de evidncia objetiva de que um dado item
satisfaz requisitos especificados);
5.37. VMP: Valor mximo permitido.

6. PLANEJAMENTO DA VALIDAO
6.1. Os estudos para determinar os parmetros de validao devem ser realizados com pessoal
treinado, equipamentos calibrados e materiais de referncia certificados;
6.2. As etapas para a realizao de uma validao analtica so ilustradas pela Figura 1;

Nota 1: A validao pode incluir procedimentos para amostragem, manuseio e transporte.

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
4/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

Verificao

Validao

Figura 1: Etapas para validao e verificao de procedimentos analticos

7. PARMETROS DE VALIDAO
7.1. Os parmetros que precisam ser avaliados durante o processo de validao podem variar de acordo
com o tipo de ensaio, conforme mostrado no Quadro 1;

Tipo de ensaio
Componente Elementos
Parmetro Propriedades
Qualitativo (ou analito) menores e Verificao(2)
fsicas
em maior teor traos(1)
Preciso x x x x
Seletividade x x x x
Tendncia / recuperao x x x
Robustez x x x x
Sensibilidade / lineariedade / faixa de trabalho x x x x
Limite de deteco x x
Limite de quantificao x x
Quadro 1. Parmetros de validao conforme o tipo de ensaio
(1)
So considerados como de menor teor concentraes entre 0,01 a 1% e elementos traos, os elementos em concentrao abaixo de
0,01%
(2)
Referente aos mtodos analticos que permanecem dentro do escopo normalizado para o qual foram concebidos
Fonte: In-House Method Validation - A guide for Chemical Laboratories LGC / VAM, 2003

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
5/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

7.2. Se os dados de preciso (CVr e CRR) e exatido (expressa pela recuperao) desse mtodo no
estiverem disponveis, utilizar os critrios definidos na Tabela 2 conforme a faixa de concentrao do
analito nas amostras;

Tabela 2. Critrios de aceitao para preciso e exatido em funo da concentrao do analito


Analito Analito CVr CVR Recuperao
Unidade
[%] [frao] [%] [%] [%]
100 1 100 % 1,3 2 98-102
-1 Maior teor
10 10 10 % 1,8 2,8 98-102
-2
1 10 1% 2,7 4 97-103
-3
0,1 10 0,1% 3,7 5,7 95-105 Menor teor
-4
0,01 10 100 ppm 5,3 8 90-107
-5
0,001 10 10 ppm 7,3 11,3 80-110
-6
0,0001 10 1 ppm 11 16 80-110
-7
0,00001 10 100 ppb 15 22,6 80-110 Traos
-8
0,000001 10 10 ppb 21 32* 70-110
-9
0,0000001 10 1 ppb 30 45,3* 50-120
CVr = Coeficiente de variao estimado de Horwitz para repetibilidade
CVR = Coeficiente de variao estimado de Horwitz para a reprodutibilidade
*CVR =
Fontes: AOAC - Peer-Verified Methods Program, manual on policies and procedures, Arlington, VA, Nov. 1993
Official Journal of the European Communities, 2002/657/EC

Nota 2: Os coeficientes de variao estimados de Horwitz so vlidos para qualquer mtodo e independe
da matriz ou do analito.
Nota 3: Para fraes de analito abaixo de 100 ppb, a aplicao da equao de Horwitz resulta em valores
de CVR relativamente altos e faixas de recuperao relativamente extensas. Portanto, para esses
nveis de concentrao, os referidos critrios de aceitao tambm podero estar em consonncia
com as referncias normativas para a determinao de analitos nesses nveis de concentrao
(como em cromatografia gasosa, por exemplo).
Nota 4: No caso de avaliao interlaboratorial, a reprodutibilidade do mtodo analtico no deve ser maior
que o critrio de aceitao obtido a partir da metade da concentrao mxima estabelecida pela
legislao: CV (interlaboratorial) < CV (50% do VMP).
7.3. A validao dever ser realizada na sequncia ilustrada pelo fluxograma da Figura 2;
7.4. Registrar todos os clculos e dados experimentais no relatrio de validao;

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
6/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

Mtodo desenvolvido

Atende

No atende
Linearidade

Atende

No atende
Seletividade

Alterao no escopo analtico


Atende
No atende
Limite de quantificao

Atende
No atende
Preciso

Atende
No atende
Tendncia

Atende
No atende
Robustez

Atende

Mtodo validado

Incerteza de medio

Figura 2: Sequncia de realizao de parmetros de validao

Nota 5: Adotar apenas um procedimento para avaliao de cada um dos parmetros de validao, caso
contrrio justificar no relatrio de validao;

Nota 6: Para verificaes de mtodos analticos normalizados, adotar procedimentos de acordo com a
ordem em que so descritos neste documento, em consonncia com a viabilidade tcnica desses
mtodos.

8. PROCEDIMENTO
8.1. Linearidade
8.1.1. Preparar pelo menos 6 nveis de concentrao, preferencial e igualmente espaados, ao longo
da faixa de trabalho;

Nota 7: O branco do mtodo deve ser usado para verificar se analitos ou interferentes esto presentes no
sistema analtico, contudo no deve ser includo na curva analtica, salvo se a viabilidade tcnica
do mtodo assim determinar.
Nota 8: Se a faixa de trabalho do mtodo a ser validado for desconhecida ou se houver alterao no escopo
analtico, proceder conforme instrues do Anexo A.

8.1.2. Analisar 3 replicatas independentes para cada nvel de concentrao de acordo com o mtodo
a ser validado (PO);

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
7/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

Nota 9: Recomenda-se que as medies dos nveis de concentrao sejam realizadas em ordem aleatria,
desde que esta no comprometa o desempenho do sistema analtico;

8.1.3. Verificar a presena de valores discrepantes pelo teste de Grubbs (Anexo B). Esse teste
dever ser aplicado em cada nvel de concentrao, obedecendo a excluso mxima de at
22,2% de todas as medies da curva analtica;
8.1.4. Verificar a homogeneidade de varincias entre nveis de concentrao pelo teste de Cochran
(Anexo C). Se o resultado for homocedstico, proceder regresso linear com o nvel de
concentrao na abscissa e todas as respostas analticas de cada triplicata na ordenada do
grfico. Se o resultado for heterocedstico, utilizar a transformao ponderada (Anexo D);
8.1.5. Construir o grfico dos resduos, plotando o nvel de concentrao na abscissa e todos os
resduos de cada triplicata na ordenada (Equao 1). A distribuio dos valores em torno da
linha central deve ser aleatria. Tendncias nessa distribuio caracterizam a presea de erro
sistemtico ou que o modelo matemtico utilizado para a construo da curva inadequado;

e i = y i - y i (Equao 1)

Onde: ei = resduo referente replicata de cada sinal analtico medido


yi = sinal analtico medido
y i =sinal analtico previsto (estimado atravs da equao da regresso linear)

8.1.6. Verificar a normalidade dos resduos atravs do teste de Ryan-Joiner (Anexo E);
8.1.7. Verificar se os resduos so admissveis atravs do teste-t unilateral (Equaes 2 e 3). Excluir
as replicatas correspondentes aos resduos se tei > ttabelado para (n-2) graus de liberdade (Anexo
F);
n

(y i - y i )2
i=1
s res = (Equao 2)
n-2

ei
t ei = (Equao 3)
s res
n

Onde: sres = desvio padro dos resduos de todos os nveis de concentrao


n = nmero total de replicatas

8.1.8. Verificar a independncia dos resduos atravs do teste de Durbin-Watson (Anexo G);
8.1.9. Verificar se o intervalo de confiana para o coeficiente linear (IC a) contm a origem do grfico
(Equaes 4, 5 e 6). Os erros sistemticos no so significativos se a reta de regresso linear
passar por esse intervalo;
n

x 2
i
i=1
s a = s res n
(Equao 4)
n (x - x) i
2

i=1

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
8/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

x i
i=1
x= (Equao 5)
n

ICa = a tsa (Equao 6)

Onde: sa = desvio padro do coeficiente linear


x = mdia dos nveis de concentrao
n = nmero total de replicatas
a = coeficiente angular
t = valor de t-Student bilateral para (n-2) graus de liberdade (Anexo F)

8.1.10. Verificar se o coeficiente de correlao da regresso linear (Equao 7) atende ao critrio de


aceitao predefinido pelo mtodo;

(x - x)(y - y)
i i
i=1
r= onde -1 < r < 1 (Equao 7)
n n

(x - x) (y - y)
i
2
i
2

i=1 i=1

Onde: x = mdia dos nveis de concentrao


y = mdia dos sinais analticos

8.2. Seletividade

8.2.1. A Partir da Recuperao

8.2.1.1. Definir o ponto mdio da faixa de trabalho;


8.2.1.2. Definir a quantidade de padro a ser adicionado matriz empregada;

Nota 10: A limitao desse procedimento est no analito adicionado, pois ele no est necessariamente na
mesma forma que a do analito j presente na matriz. Quando adicionado em uma forma mais
facilmente detectvel, pode resultar em avaliaes superestimadas da recuperao.
Nota 11: Recomenda-se que a matriz contenha os demais parmetros com concentraes semelhantes
quelas determinadas na rotina analtica.

8.2.1.3. Analisar a matriz fortificada, em triplicata, de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.2.1.4. Estimar a recuperao (Equao 8);

c -c
Recuperao [%] 1 2 100
(Equao 8)
c3

Onde: c1 = concentrao do analito na amostra fortificada


c2 = concentrao do analito na amostra no fortificada
c3 = concentrao do analito adicionado amostra

8.2.1.5. Comparar o resultado com o critrio de aceitao predefinido (Tabela 2);


REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
9/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

8.2.1.6. Classificar como satisfatrio se a recuperao estiver contina no invervalo


correspondente ao nvel de concentrao;
Nota 12: A recuperao tambm poder ser estimada em diferentes nveis de concentrao da faixa de
trabalho, se necessrio.

8.2.2. A Partir da Linearidade

Nota 13: A curva analtica preparada para o estudo da linearidade deve ser empregada como referncia a
esse procedimento.

8.2.2.1. Seguir todo o item 8.1, substituindo a gua ultrapura pela matriz;
8.2.2.2. Verificar se os coeficientes angulares e lineares so estatisticamente iguais (Anexo H).

8.3. Limite de Deteco (LD)

8.3.1. A Partir da Linearidade

Nota 14: A curva analtica preparada para o estudo da linearidade deve ser empregada como referncia a
esse procedimento.

8.3.1.1. Estimar o limite de deteco (Equao 9).

s res
LD = 3,3 (Equao 9)
b

Onde: sres = desvio padro dos resduos de todos os nveis de concentrao (Equao 9)
b = coeficiente angular da curva analtica

Nota 15: O desvio padro do coeficiente linear (Equao 4) ou dos sinais analticos de 7 replicatas do
branco podero ser alternativamente empregados no numerador da Equao 9.

8.3.2. A Partir do Branco

8.3.2.1. Analisar 7 replicatas do branco de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.3.2.2. Estimar o limite de deteco (Equaes 10 e 11).

(x - x)i
2

i=1
s= (Equao 10)
n -1

LD x t s (Equao 11)

Onde: x = mdia das concentraes dos brancos


s = desvio padro das concentraes dos brancos
t = valor de t-Student unilateral para (n-1) graus de liberdade (Anexo F)

8.3.3. A Partir da Menor Concentrao Aceitvel do Analito no Branco

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
10/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

8.3.3.1. Analisar 7 replicatas do padro de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.3.3.2. Calcular o coeficiente de variao (Equao 12) e compar-lo com o critrio de
aceitao predefinido (Tabela 2);

s
CV = 100 (Equao 12)
x

8.3.3.3. Estimar o limite de deteco (Equao 13).

LD t s (Equao 13)

Onde: s = desvio padro da menor concentrao aceitvel do analito (Equao 10)


t = valor de t-Student unilateral para (n-1) graus de liberdade (Anexo F)

8.4. Limite de Quantificao (LQ)

8.4.1. A Partir da Linearidade

8.4.1.1. Estimar o limite de quantificao (Equao 14);

s res
LQ = 10 (Equao 14)
b

Onde: sres = desvio padro dos resduos de todos os nveis de concentrao (Equao 9)
b = coeficiente angular da curva analtica

8.4.1.2. Verificar se o LQ estimado atende aos critrios de aceitao para preciso e exatido
(Tabela 2) atravs da anlise de 7 replicatas preparadas a partir da concentrao
estimada.

Nota 16: O desvio padro do coeficiente linear (Equao 4) ou dos sinais analticos de 7 replicatas do
branco podero ser alternativamente empregados no numerador da Equao 14.

8.4.2. A Partir do Branco

8.4.2.1. Analisar 7 replicatas do branco de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.4.2.2. Estimar o limite de quantificao (Equao 15);

LQ = x + 10s (Equao 15)

Onde: x = mdia das concentraes dos brancos


s = desvio padro das concentraes dos brancos

8.4.2.3. Verificar se o LQ atende aos critrios de aceitao para preciso e exatido (Tabela 2)
atravs da anlise de 7 padres preparados com a mesma concentrao que foi
estimada para o LQ.

8.4.3. A Partir da Menor Concentrao Aceitvel do Analito no Branco

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
11/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

8.4.3.1. Analisar 7 replicatas do padro de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.4.3.2. Verificar se o LQ atende aos critrios de aceitao para preciso e exatido (Tabela 2);

8.4.4. A Partir das Adies de Quantidades Variadas do Analito Prximas ao LD

8.4.4.1. Estimar o LQ atravs da equao: LQ = 3LD;


8.4.4.2. Preparar 3 nveis de concentraes compreendidas entre 50-150% do LQ estimado;
8.4.4.3. Analisar 7 replicatas de cada nvel de concentrao de acordo com o mtodo a ser
validado (PO);
8.4.4.4. Atribuir ao LQ um valor para o nvel de concentrao que apresentar o menor coeficiente
de variao (Equao 12);

8.5. Tendncia / Recuperao

8.5.1. A Partir de Programas Interlaboratoriais

8.5.1.1. Verificar se o nvel de concentrao correspondente ao z-escore obtido pelo ensaio de


proficincia est contido na faixa de trabalho do mtodo a ser validado (PO);
8.5.1.2. Classificar como satisfatria a tendncia do mtodo se |z| 2; Se uma das etapas
desse procedimento no forem satisfeitas, avaliar a tendncia a patir de outro critrio.

8.5.2. A Partir do Erro Normalizado

8.5.2.1. Analisar 7 replicatas do nvel de concentrao a ser avaliado de acordo com o mtodo a
ser validado (PO);
8.5.2.2. Estimar o erro normalizado (Equao 16);

x - x verdadeiro
EN = (Equao 16)
U2 + U2verdadeiro

Onde: x = mdia das concentraes das replicatas


xverdadeiro = valor da concentrao aceito como verdadeiro
U = incerteza associada ao valor experimental
Uverdadeiro = incerteza associada ao padro

8.5.2.3. Classificar como adequada a tendncia do mtodo se |EN| 1; caso contrrio, avaliar a
tendncia a partir de outro critrio.

8.5.3. A Partir da Recuperao

8.5.3.1. Proceder ao item 8.2.1.4.

8.5.4. A Partir do Erro Relativo

8.5.4.1. Analisar 7 replicatas do nvel de concentrao a ser avaliado de acordo com o mtodo a
ser validado (PO);

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
12/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

8.5.4.2. Calcular o erro relativo (Equao 17);

x - x verdadeiro
ER[%] = 100 (Equao 17)
x verdadeiro

Onde: x = mdia das replicatas


xverdadeiro = valor aceito como verdadeiro a partir de um padro

8.5.4.3. Comparar o resultado com o critrio de aceitao predefinido (Tabela 2, Nota 14);

Nota 17: A tendncia tambm pode ser expressa atravs da recuperao analtica (Equao 18) onde, na
prtica, observa-se a seguinte equivalncia: ER = RA 100.

valorObservado
RA[%] = 100 (Equao 18)
valorEsperado

Nota 18: Recomenda-se que o nvel de concentrao esteja prontamente disponvel por um padro. Caso
contrrio, preparar o nvel de concentrao desejado.

8.5.5. A Partir do Teste de Hiptese

8.5.5.1. Analisar 7 replicatas do nvel de concentrao a ser avaliado de acordo com o mtodo a
ser validado (PO);

Nota 19: Recomenda-se que o nvel de concentrao esteja prontamente disponvel por um padro. Caso
contrrio, preparar o nvel de concentrao desejado.

8.5.5.2. Calcular o valor de t-Student (Equao 19);

( - x)
ti = (Equao 19)
s
n

Onde: = valor aceito como verdadeiro a partir de um MRC


x = mdia das replicatas
n = nmero de replicatas
s = desvio padro das replicatas

8.5.5.3. Classificar como satisfatria a exatido se ti < 2,447.

8.6. Preciso

8.6.1. A Partir da Estimativa do Limite de Repetibilidade

8.6.1.1. Definir o nvel de concentrao que ser avaliado;


8.6.1.2. Analisar 7 replicatas da amostra ou de um padro de acordo com o mtodo a ser
validado (PO);
8.6.1.3. Verificar a presena de valores discrepantes pelo teste de Grubbs (Anexo B);
REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
13/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

8.6.1.4. Calcular o coeficiente de variao (Equao 12) e compar-lo com o critrio de


aceitao predefinido (Tabela 2);
8.6.1.5. Classificar como satisfatrio se o CV CVr;
8.6.1.6. Determinar o limite de repetibilidade, r (Equao 20);

r = 2,748 s (Equao 20)

Onde: s = desvio-padro das replicatas

8.6.1.7. Classificar como satisfatria a repetibilidade se o mdulo do erro entre replicatas < r.

8.6.2. A Partir da Preciso Intermediria (Reprodutibilidade Interna)

8.6.2.1. Definir o nvel de concentrao que ser avaliado;


8.6.2.2. Analisar 7 replicatas da amostra ou de um padro, por dia e por analista (2 dias e 2
analistas), de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.6.2.3. Verificar a presena de valores discrepantes pelo teste de Grubbs (Anexo B);
8.6.2.4. Calcular o coeficiente de variao (Equao 12), aplicando o desvio padro dado pela
Equao 21;
8.6.2.5. Comparar o coeficiente de variao com o critrio de aceitao predefinido (Tabela 2);
8.6.2.6. Classificar como satisfatrio se o CV CVR;
8.6.2.7. Determinar o limite de reprodutibilidade interna, ri (Equao 20), aplicando o desvio
padro dado pela Equao 21;

2 7
si =
1
n(p - 1)
(x ji - xj )
2
(Equao 21)
j=1 i=1

Onde: n(p-1) = graus de liberdade


n = nmero de amostras
p = nmero de replicatas por amostra
j = nmero da amostra
i = nmero da replicata
xji = valor da replicata i para a amostra j
x j = mdia aritmtica das replicatas da amostra j

8.6.2.8. Classificar como satisfatria a preciso intermediria se o mdulo do erro entre


replicatas < r;
Nota 20: Na maioria dos casos, o valor de preciso intermediria funo do nvel de concentrao do
ensaio.

8.6.3. Reprodutibilidade

8.6.3.1. A partir de Programas Interlaboratoriais


8.6.3.1.1. Verificar se o nvel de concentrao da amostra fornecida pelo provedor est
contido na faixa de trabalho do mtodo a ser validado (PO);
REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
14/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

8.6.3.1.2. Analisar a quantidade de replicatas sugerida pelo provedor do ensaio de


proficincia (ou do estudo colaborativo, se for o caso) de acordo com o mtodo
a ser validado (PO);
8.6.3.1.3. Verificar a presena de valores discrepantes pelo teste de Grubbs (Anexo B);
8.6.3.1.4. Determinar o limite de reprodutibilidade, R (Equao 25);

R = 2,748 (s2dentro + s2entre ) (Equao 25)

Onde: s 2dentro = mdia das varincias dos resultados de cada laboratrio ( s 2dentro
deve ser menor que s 2entre )
s 2entre = varincia das mdias dos resultados de cada laboratrio

8.6.3.1.5. Classificar como satisfatria a reprodutibilidade do mtodo se a diferena


entre o valor mdio de nossas replicatas e o valor mdio de todo o grupo for
menor que o limite de reprodutibilidade.

8.6.4. A Partir do Teste de Hiptese

8.6.4.1. Definir o nvel de concentrao que ser avaliado;


8.6.4.2. Analisar 7 replicatas da amostra ou de um padro para cada um dos mtodos sob
comparao;
8.6.4.3. Verificar a presena de valores discrepantes pelo teste de Grubbs (Anexo B);
8.6.4.4. Comparar o valor calculado (Equao 26) com o F-tabelado (Anexo I). Se F < Ftabelado,
ento a preciso entre os mtodos considerada estatisticamente igual;

2
s res1
F= 2
(Equao 26)
s res 2

2
Onde: s res1 = maior valor encontrado de varincia das replicatas

2
s res 2 = menor valor encontrado de varincia das replicatas

Nota 21: Na inexistncia de mtodos de referncia validados com os quais possam ser comparadas as
caractersticas de preciso, os valores aceitveis de repetibilidade e reprodutibilidade podem
ser calculados a partir das equaes de Horwitz (Equaes 27 e 28). A forma mais adequada
para se avaliar a aceitabilidade da preciso de um mtodo consiste no uso do valor de HorRat
(Equao 29). Assim, considera-se a reprodutibilidade do mtodo satisfatria se HorRat 2.

( )
CVR = 2 1-0,5logC (Equao 27)

CVr = 0,67CVR (Equao 28)

CVR(exp erimental)
HorRat = (Equao 29)
CVR

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
15/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

Onde: CVR = coeficiente de variao estimado de Horwitz para reprodutibilidade obtida a partir de
estudo colaborativo (expresso em %)
CVr = coeficiente de variao estimado de Horwitz para repetibilidade (expresso em %)
C = concentrao (expressa em frao decimal)
HorRat = Horwitz Ratio
CVR (experimental) = coeficiente de variao do mtodo sob avaliao a partir de estudo intra ou
interlaboratorial (expresso em %)

Nota 22: Na impossibilidade de obteno do CVR (experimental), poder-se- aplicar o CVr (experimental)
ao numerador da razo de Horwitz (embora o primeiro procedimento seja o ideal),
considerando-se o mesmo denominador.

8.7. Robustez

8.7.1. Definir os fatores crticos ao mtodo analtico (por exemplo: temperatura, comprimento de
onda, etc.);

Nota 23: Dois valores sero atribudos por fator (por exemplo: temperatura A = 20C e temperatura a =
25C).

8.7.2. Preparar uma matriz de experimentos baseada na Tabela 3;

Nota 24: O nmero de experimentos ser igual ao nmero de fatores mais um (NE = NF + 1).

Tabela 3. Matriz de experimentos de Plackett-Burman


Experimentos
Valor dos fatores
1 2 3 4 5 6 7 8
Aa A A A A a a a a
Bb B B b b B B b b
Cc C c C c C c C c
Dd D D d d d d D D
Ee E e E e e E e E
Ff F f f F F f f F
Gg G g g G g G G g
Resultados s t u v w x y z

8.7.3. Realizar os experimentos em triplicata de acordo com o mtodo a ser validado (PO),
obedecendo s combinaes de fatores indicada pela matriz;
8.7.4. Calcular o efeito de cada fator (Equao 30);

resultados(Maisculo) resultados(Minsculo)
Dx i = - (Equao 30)
m m

Onde: Dxi = efeito do fator i


resultados (Maisculo) = resultados analticos correspondentes aos experimentos que
contemplam o fator identificado pela letra maiscula (para o fator C, por exemplo, os
resultados so: s, u, w e y)
resultados (Minsculo) = resultados analticos correspondentes aos experimentos que
contemplam o fator identificado pela letra minscula (para o fator c, por exemplo, os
resulados so: t, v, x e z)
REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
16/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

m = metade do nmero de experimentos

8.7.5. Verificar se h diferena na variao de cada fator atravs do teste-t (Equao 31),
comparando-os com o valor unilateral para (n-1) graus de liberdade (Anexo F). Se txi < ttabelado,
ento o efeito do fator xi no significativo;

Nota 25: Um exemplo de avaliao de robustez dado pelo Anexo J.

Dx i m
t xi = (Equao 31)
s 2

Onde: Dxi = efeito do fator i


m = metade do nmero de experimentos
s = desvio padro do mtodo

Nota 26: Empregar o desvio padro ponderado se o experimento contiver vrios nveis de concentrao.

9. REFERNCIAS
9.1. NBR ISO/IEC 17025 Requisitos gerais para competncia de laboratrios de ensaio e calibrao,
ABNT, 2005;
9.2. VIM Vocabulrio internacional de metrologia, 1 edio luso-brasileira, Inmetro, 2012;
9.3. RE 899 Guia para validao de mtodos analticos e bioanalticos, Anvisa, 2003;
9.4. NIE-DIMEL-064 Critrios para validao de mtodos de ensaio, Inmetro, 2005;
9.5. DOQ-CGCRE-008_04 Orientao sobre validao de mtodos analticos, Inmetro, 2011;
9.6. DOQ-CGCRE-020_05 Definies de termos utilizados nos documentos relacionados acreditao
de laboratrios, produtores de materiais de referncia e provedores de ensaios de proficincia,
Inmetro, 2011;
9.7. NIT-DICLA-57_01 Critrios para acreditao da amostragem de guas e matrizes ambientais,
Inmetro, 2010;
9.8. ISO 5725-2 Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard
measurement method, 1994;
9.9. Harmonized guidelines for single-laboratory validation of methods of analysis, IUPAC technical
report, Pure Appl. Chem., vol. 74, n. 5, pp. 835855, 2002;
9.10. Validao de mtodos de ensaios (Mery dos Santos Filho), apostila da Rede Metrolgica do
Estado de So Paulo, 2010;
9.11. Validao de mtodos analticos (Cleide Bassani Barros), apostila do Centro de Educao
Profissional, 2011;
9.12. Statistics and chemometrics for analytical chemistry, 5th edition, J. N. Miller & J. C. Miller, 2005;
9.13. Validao de metodologias para anlises fsico-qumicas (Roberto Gonalves Junqueira), IX
Simpsio internacional ABRAPA de inocuidade de alimentos, 2010;
9.14. Procedimento para validao intralaboratorial de mtodos de ensaio: Delineamento e
aplicabilidade em anlises de alimentos (Sheila Vitorino Carvalho de Souza), Tese de doutorado,
UFMG, 2007;

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
17/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

9.15. The fitness for purpose for analytical methods: A laboratory guide to method validation and related
topics, EuraChem, 1998;
9.16. How to meet ISO 17025 requirements for method verification: ALACC Guide, AOAC international,
2007;
9.17. Official journal of the european communities: Implementing council directive 96/23/EC concerning
the performance of analytical methods and the interpretation of results, 2002;
9.18. Technical note 17: Guidelines for the validation of quantitative and qualitative methods. NATA,
2012.

10. ANEXOS
10.1. Anexo A: Determinao da Faixa de Trabalho
10.2. Anexo B: Teste de Grubbs
10.3. Anexo C: Teste de Cochran
10.4. Anexo D: Transformao Ponderada
10.5. Anexo E: Teste de Ryan-Joiner
10.6. Anexo F: Distribuio t-Student
10.7. Anexo G: Teste de Durbin-Watson
10.8. Anexo H: Teste t-Student
10.9. Anexo I: Distribuio F-Snedecor/Fisher
10.10. Anexo J: Exemplo de Avaliao de Robustez

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
18/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO A: DETEMINAO DA FAIXA DE TRABALHO

a. Para qualquer mtodo quantitativo, existe uma faixa de concentraes do analito ou de valores de uma
dada propriedade na qual o mtodo pode ser aplicado. Essa determinao iniciada pela escolha de
uma faixa preliminar (Etapa 1 do Quadro A.1);

b. A faixa de trabalho deve cobrir a faixa de aplicao para a qual o ensaio vai ser usado, cuja
concentrao mais esperada deve, sempre que possvel, se situar no centro dessa faixa (Etapas 2 e 3
do Quadro A.1);

c. No limite inferior, o fator limitante o valor do limite de quantificao. No limite superior, os fatores
limitantes dependem do sistema de resposta do equipamento de medio;

d. Dentro da faixa de trabalho a resposta do sinal ter uma relao linear com o analito, onde sua
extenso deve ser estabelecida durante a avaliao dessa faixa.

Etapa
Matriz Procedimento
(replicatas)

gua ultrapura com adio de concentraes variadas do Objetivo: Identificar inicialmente, por observao visual, a
analito faixa linear aproximada e os limites inferior e superior da
faixa de trabalho
Etapa 1 Obs.: Preparar diferentes concentraes de modo
(n 7) independente e no alquotas da mesma soluo me i) Colocar no eixo x as concentraes do analito e no eixo
y, suas respectivas respostas de medio

ii) Ir para a etapa 2

Objetivo: Determinar a faixa de trabalho e confirmar a


linearidade

i) Colocar no eixo x as concentraes do analito e no eixo


y, suas respectivas respostas de medio

ii) Verificar visualmente a existncia de dispersos que


Etapa 2 Diferentes concentraes de materiais de referncia na possam interferir na regresso (antes de remover os
(n 7) faixa linear dispersos, fazer determinaes nas proximidades das
concentraes)

iii) Calcular os coeficientes da reta de regresso

iv) Calcular e fazer o grfico dos valores dos resduos

v) Ir para a etapa 3

Objetivo: Determinar o limite de quantificao (LQ), que


efetivamente forma o limite mais baixo da faixa de
trabalho
Etapa 3 gua ultrapura com adio de concentraes variadas do
(n 7) analito prximas ao limite de deteco (LD)
i) Expressar o LQ como a concentrao mais baixa do
analito que pode ser determinada com um nvel aceitvel
de incerteza

Quadro A.1: Mtodo para determinao da faixa linear e faixa de trabalho

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
19/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO B: TESTE DE GRUBBS

Procedimento:

a. Colocar os valores em ordem crescente;


b. Calcular a mdia e o desvio padro desses valores (Equaes 5 e 10);
c. Proceder ao teste de Grubbs para cada um dos valores das extremidades (Equao B.1);

xi - x
G calculado = (Equao B.1)
s

Onde: xi = valor suspeito


x = mdia das replicatas
s = desvio padro das replicatas

d. Comparar o valor obtido com o valor tabelado (Tabela B.1);

Tabela B.1: Valores crticos de Grubbs para um nvel de confiana de 95%


n Valor
3 1,154
4 1,481
5 1,715
6 1,887
7 2,020
8 2,127
9 2,215
10 2,290
11 2,355
12 2,412
13 2,462
14 2,507
15 2,549
16 2,586
17 2,620
18 2,652
19 2,681
20 2,708
30 2,908
n = nmero de amostras

e. Descartar o valor suspeito se Gcalculado > Gtabelado;


f. Reiniciar o procedimento, executando as etapas anteriores.

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
20/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO C: TESTE DE COCHRAN

Procedimento:

a. Calcular a varincia de cada um dos nveis de concentrao;


b. Proceder ao teste de Cochran (Equao C.1);

2
s mx
C calculado = 3
(Equao C.1)
s i2
i=1

2
Onde: s mx = maior valor de varincia dentre os nveis de concentrao
n

s 2
i = somatrio das varincias de todos os nveis de concentrao
i=1

c. Comparar o valor obtido com o valor tabelado (Tabela C.1);

Tabela C.1: Valores crticos de Cochran para um nvel de confiana de 95%


NC Valor (p=3)
2 0,9750
3 0,8709
4 0,7679
5 0,6838
6 0,6161
7 0,5612
8 0,5157
9 0,4775
10 0,4420
NC = nmero de nveis de concentrao ou varincias
p = nmero de replicatas por concentrao

d. Se Ccalculado < Ctabelado, ento haver homocedasticidade entre os nveis de concentrao; caso
contrrio, a condio ser de heterocedasticidade.

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
21/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO D: TRANSFORMAO PONDERADA

Procedimento:

a. Calcular o fator de ponderao para cada nvel de concentrao (Equao D.1);


1
s i2
wi = n
(Equao D.1)
1
n
s 1
2
i=1 i

Onde: wi = fator de ponderao do nvel de concentrao i


2
si = varincia do nvel de concentrao i
n = nmero total de replicatas
b. Calcular a mdia ponderada dos nveis de concentrao (Equao D.2);
n
xw =
1
n
w x i i (Equao D.2)
i=1

Onde: x w = mdia ponderada dos nveis de concentrao


xi = nvel de concentrao i
c. Calcular a mdia ponderada dos sinais analticos (Equao D.3);
n
yw =
1
n
w y i i (Equao D.3)
i=1

Onde: y w = mdia ponderada dos sinais analticos


yi = sinal analtico de cada replicata do nvel de concentrao i
d. Calcular o coeficiente angular ponderado (Equao D.4);
n

w x y i i i - nx w y w
i=1
bw = n
(Equao D.4)
w i x i2 - nx 2w
i=1

Onde: bw = coeficiente angular ponderado


e. Calcular o coeficiente linear ponderado (Equao D.5);
aw = y w - bw x w (Equao D.5)

Onde: aw = coeficiente linear ponderado


f. Determinar a concentrao do analito na amostra (Equao D.6)
y - aw
x= (Equao D.6)
bw

Onde: x = concentrao do analito na amostra


y = sinal analtico do analito na amostra

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
22/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO E: TESTE DE RYAN-JOINER

Procedimento:

a. Calcular os resduos de cada replicata (Equao E.1);

ei = y i - y i (Equao E.1)

Onde: ei = resduo correspondente replicata


yi = sinal analtico medido
y i = sinal analtico estimado atravs da equao da regresso linear

b. Ordenar os resduos em ordem crescente;


c. Calcular os quantis normais (Equao E.2);

3
i-
8 (Equao E.2)
qi =
1
n+
4
Onde: qi = quantil esperado
i = valor do resduo ordenado de posio i
n = nmero total de replicatas

d. Construir um grfico dos valores dos resduos versus os valores dos quantis estimados para uma
distribuio normal reduzida (quantis normais);
e. Calcular o coeficiente de correlao crtico para um nvel de confiana de 95% (Equao E.3);

0,1288 0,6118 1,3505


rcrtico 1,0063 - - + (Equao E.3)
n n n2
Onde: n = nmero total de replicatas

f. Comparar o valor obtido com coeficiente de correlao gerado pelo grfico. Se r > rcrtico, ento h
indcio de normalidade dos resduos da regresso linear.

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
23/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO F: DISTRIBUIO T-STUDENT

Tabela F.1. Valores crticos de t-Student para um nvel de confiana de 95%


Graus de liberdade Unilateral Bilateral
() (/2 = 0,025) ( = 0,05)
1 6,314 12,706
2 2,920 4,303
3 2,353 3,182
4 2,132 2,776
5 2,015 2,571
6 1,943 2,447
7 1,895 2,365
8 1,860 2,306
9 1,833 2,262
10 1,812 2,228
11 1,796 2,201
12 1,782 2,179
13 1,771 2,160
14 1,761 2,145
15 1,753 2,131
16 1,746 2,120
17 1,740 2,110
18 1,734 2,101
19 1,729 2,093
20 1,725 2,086
21 1,721 2,080
22 1,717 2,074
23 1,714 2,069
24 1,711 2,064
25 1,708 2,060
26 1,706 2,056
27 1,703 2,052
28 1,701 2,048
29 1,699 2,045
1,645 1,960
= nvel de significncia

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
24/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO G: TESTE DE DURBIN-WATSON

Procedimento:

a. Calcular o valor d (Equao G.1);

(e - e
n
2
i i -1 )
i =1
d= (Equao G.1)
e
n
2
i
i =1

b. Calcular os limites crticos dI (inferior) e dS (superior) em um nvel de confiana de 95% (Equaes


G.2 e G.3);

2,8607 3,4148 16,6400


dI 1,9693 - - + (Equao G.2)
n n n2

3,0547 1,3862 16,3662


dS 1,9832 - - + (Equao G.3)
n n n2

Onde: ei = resduo correspondente replicata


n = nmero total de replicatas

c. Avaliar os resultados com o seguinte critrio:

Se d estiver entre os limites crticos, ento o teste inconclusivo;


Se d < dI, ento h indcio de autocorrelao de resduos;
Se d > dS, ento h indcio de independncia de resduos.

Nota G.1: Se houver autocorrelao de resduos, ento o modelo matemtico dos mnimos quadrados
ordinrios (regresso linear simples) aplicado na correlao entre as medies sob diferentes
nveis de concentrao no apropriado.

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
25/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO H: TESTES DE F-FISCHER E T-STUDENT

Procedimento:

a. Verificar a homogeneinade de varincias de ambas as curvas analticas atravs do teste F de Fisher


(Equao H.1);

2
s res1
F= 2
(Equao H.1)
s res 2

2
Onde: s res1 = maior valor encontrado de varincia residual
2
s res 2 = menor valor encontrado de varincia residual

b. Comparar o valor obtido com o F-tabelado. Se F < Ftabelado (homocedasticidade), ento proceder ao
teste t de Student, empregando as Equaes H.2, H.3, H.4 e H.5. Caso contrrio
(heterocedasticidade), proceder ao teste t de Student, empregando as Equaes H.6, H.7 e H.8;
c. Comparar o valor calculado com o t-tabelado (Anexo F). Se ta e tb< ttabelado, ento a hiptese de
efeito da matriz rejeitada (as curvas analticas preparadas com a gua ultrapura e a matriz so
estatisticamente iguais). Caso contrrio, as medies devero ser realizadas com base na curva
analtica preparada a partir da matriz.

b1 - b 2
tb = (Equao H.2)
s p2 s p2
+
S xx1 S xx 2

n
S xx = (x - x)i
2
(Equao H.3)
i=1

Onde: x i = concentrao de cada replicata correspondente a todos os nveis de concentrao


x = mdia de todas as replicatas

(n1 - 2)sres
2
1 + (n 2 - 2)s res 2
2
s p2 = (Equao H.4)
n1 + n 2 - 4

Onde: b1 e b2 = coeficientes angulares

s p2 = varincia combinada

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
26/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

a1 - a 2
ta = (Equao H.5)
n n
s p2 x 2
1 s p2 x 2
2
i=1 i=1
+
n1S xx1 n 2 S xx 2

Onde: a1 e a2 = coeficientes lineares

b1 - b 2
tb = (Equao H.6)
2 2
s res1 s res 2
+
S xx1 S xx 2

a1 - a 2
ta = (Equao H.7)
n n
2
s res1 x 2
1
2
s res 2 x 2
2
i=1 i=1
+
n1S xx1 n 2 S xx 2

2 2
s res1 s res 2
+
n1 n2
= 2 2
(Equao H.8)
2 2
s res1 s res 2
n1 n2
+
n1 - 2 n2 2

Onde: = graus de liberdade

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
27/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO I: DISTRIBUIO F-SNEDECOR/FISHER

1 = graus de liberdade para o numerador


2 = graus de liberdade para o denominador

Quadro I.1. Valores para a distribuio unilateral F de Fisher-Snedecor com nvel de confiana de 95%

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951
CDIGO PAGINA
SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE
28/28
PROCEDIMENTO OPERACIONAL (PO)
REVISO EMISSO
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS 01

ANEXO J: EXEMPLO DE AVALIAO DE ROBUSTEZ

Dados:

a. Elaborao da matriz de experimentos para determinao do analito por cromatografia (Quadro J.1);
b. Experimentos avaliados atravs de 4 replicatas com padres em 3 nveis de concentrao (mg/kg);
c. Para cada replicata foi efetuado toda a sequncia do mtodo analtico;
d. Desvio padro ponderado = 0,167 mg/kg ( = 9 graus de liberdade);
e. Clculo do efeito dos fatores, bem como da estatstica t para cada um deles;
f. Comparao com o valor crtico (t = 1,833) e concluso.

Experimentos
Identificao dos fatores Valor dos fatores
1 2 3 4 5 6 7 8
Idade da coluna nova (A) velha (a) A A A A a a a a
Velocidade do fluxo 0,8mL/min (B) 1,2 mL/min (b) B B b b B B b b
Varivel imaginria (inerte) + (C) - (c) C c C c C c C c
Fase mvel (MeOH/gua) 90/10 v/v (D) 95/5 v/v (d) D D d d d d D D
Volume de injeo 15 L (E) 25 L (e) E e E e e E e E
Comprimento de onda do detector 320 nm (F) 330 nm (f) F f f F F f f F
Temperatura da coluna 30C (G) sem forno (g) G g g G g G G g
Resultados 5,47 5,33 5,35 5,07 4,59 4,75 4,79 5,09

Quadro J.1. Matriz de experimentos para determinao do analito X por cromatografia

Dx A =
5,47 + 5,33 + 5,35 + 5,07 - 4,59 + 4,75 + 4,79 + 5,09 = 0,50 tA =
0,50 4
= 4,23 efeito significativo
4 4 0,167 2

Dx B =
5,47 5,33 4,59 4,75 - 5,35 5,07 4,79 5,09 = -0,04 tB =
0,04 4
= 0,34 no significativo
4 4 0,167 2

Dx C =
5,47 5,35 4,59 4,79 - 5,33 5,07 4,75 5,09 = -0,01 tC =
0,01 4
= 0,08 no significativo
4 4 0,167 2

Dx D =
5,47 5,33 4,79 5,09 - 5,35 5,07 4,59 4,75 = 0,23 tD =
0,23 4
= 1,95 efeito significativo
4 4 0,167 2

Dx E =
5,47 5,35 4,75 5,09 - 5,33 5,07 4,59 4,79 = 0,22 tE =
0,22 4
= 1,86 efeito significativo
4 4 0,167 2

Dx F =
5,47 5,07 4,59 5,09 - 5,33 5,35 4,75 4,79 = 0 tF =
0,00 4
=0 no significativo
4 4 0,167 2

Dx G =
5,47 5,07 4,75 4,79 - 5,33 5,35 4,59 5,09 = -0,07 tG =
0,07 4
= 0,59 no significativo
4 4 0,167 2

REDAO ANLISE CRTICA APROVAO APROVAO

Adriano Ferreira da Cunha


Qumico Industrial, Eng. de Materiais
adriano.cunha@udo.edu
00 55 (21) 98214-3951