Biorreatores e

Processos Fermentativos

Aula 4 – Profa. Dra Ilana L. B. C. Camargo

Ciências Físicas e Biomoleculares
IFSC - USP
Biotecnologia do bioprocesso tem três estágios:

Processo “Upstream”

Biorreatores e biorreação

Processo “Downstream”
Parte I
 Estágios do processo produtivo

Bioprocesso – aplicação industrial de reações ou vias biológicas

mediadas por células vivas inteiras de animais, plantas ou
microrganismos, ou enzimas sobre condições controladas para a
biotransformação de matérias primas em produtos.

Produto – alimento, medicamento ou composto industrial

Bioprocesso também pode ocorrer sem resultar em um produto

direto – biorremediação, desintoxicação de resíduos ou de efluentes
com ou sem subproduto ou derivados

Escala laboratorial Escala industrial

Biorreatores, reatores bioquímicos, reatores biológicos são os

reatores químicos nos quais ocorrem uma série de reações

químicas catalisadas por biocatalisadores

Enzimas Células vivas

Reatores enzimáticos Biorreatores

Reatores bioquímicos Reatores Biológicos

 Biorreatores

Sistema não asséptico – onde não é absolutamente necessário

se operar com culturas inteiramente puras (sistemas de

descarte de efluentes);

Sistema asséptico – onde as condições de assepsia são pré-

requisitos para a formação do produto com sucesso;

 Nem todo processo de fermentação precisa
ser livre de contaminações!!

Produção caseira dos vinhos

Antigamente, a maceração das uvas era feita com os pés!!

Nem todo processo de fermentação precisa ser livre de contaminações!!
Produção artesanal de queijo, vinho, vinagre, iogurte e cerveja, muitas
vezes eram processadas satisfatoriamente, mesmo sob condições
precárias de assepsia

Queijo de leite de búfala

http://www.viagemesabor.com.br/noticias/roteiros/br/norte/para/marajo

Tanque de maceração das uvas

Produção de vinhos
(Hoje: prensa hidráulica)

Quanto mais controle se tem sobre o processo de fermentação, maior é a

facilidade em se manter a qualidade e garantir a reprodução do processo.
 Maceração das uvas

Hoje: prensa hidráulica

Dióxido de enxofre (conservante)

Biorreator ou fermentador
 Biorreator ou fermentador
Variação em forma e tamanho dependendo da aplicação

O design do biorreator depende de um número de fatores que incluem:

-Tipo de células
-Tipo de reação metabólica
-Informação sobre a transferência de massa e calor
-Viscosidade e homogeneização

Tamanhos:

-Frascos agitados (erlenmeyers): 100 – 1.000 mL

-Fermentadores de bancada: 1 L – 30L
-Fermentadores piloto: 100 – 1.000 L
-Fermentadores industriais: 1.000 – 1.000.000 L

Também podem ser bandejas, garrafas (fermentação sólida), colunas

(imobilização células ou enzimas)
Biorreator ou fermentador

Escala laboratorial
~1L

Biorreator de bancada
http://www.faperj.br/boletim_interna.phtml?obj_id=3930
 Biorreator ou fermentador

1943 – EUA, Primeira planta industrial de fermentação para produção de

penicilina em fermentadores de aço-carbono de 54 m3

•Reatores em aço-carbono

•Sistemas de agitação e aeração

•Fundo e tampa torriesféricos

esterilizáveis

•Entrada para a adição de inóculo

•Antiespumante

•Coleta de amostras

•Descarga e saída dos gases formados

durante a fermentação, etc.
 Biorreator ou fermentador
Padrões de materiais usados nos fermentadores sofisticados:

Todos os materiais que estão em contato com as soluções ou com a

cultura do organismo devem ser resistentes à corrosão para prevenir a
contaminação do processo com traços de metais;

Não podem ser tóxicos pois se houver alguma dissolução do material

ou componente não haverá inibição do crescimento da cultura;

Inspeção visual do meio e cultura é uma vantagem, por isso deve haver
materiais transparentes quando possível

O sistema de agitação, portas de entrada e de saída devem ser rígidas

o suficiente para não deformar ou quebrar sob estresse mecânico;

Materiais precisam suportar repetidas esterilizações por vapor em alta

pressão;
 Biorreator ou fermentador
Sistema de agitação

Reator agitado mecanicamente

(STR: stirred tank reactor)
Sonda pH
Sonda oxigênio dissolvido

Agitadores: turbinas

Camisa de
resfriamento
 Estudo atual

Aumento de escala

12 Kg  800 Kg

http://www.cetem.gov.br/publicacao/CTs/CT2005-084-00.pdf
Serpentinas
 Capacidade dos biorreatores de escala
industrial

1- Pequena escala: 1 a 2 m3 de capacidade – cultivo de microrganismos

patogênicos, ou para crescimento de células animais ou vegetais. Em geral, seu
uso tem como objetivo produtos ligados à área de saúde

2 – Escala intermediária: dezenas de metros cúbicos até 100 a 200 m3 –

especificamente empregado na produção de enzimas, antibióticos e vitaminas.

3- Grande escala: reatores com milhares de metros cúbicos de capacidade -

para processos que exigem poucos ou até mesmo nenhum cuidado de assepsia:
fermentação alcoólica ou do tratamento biológico de resíduos
 Para satisfazer a função primária de fermentação, que é a de
fornecer condições ambientais adequadas ao crescimento dos
microrganismos, 12 pontos devem ser observados:

1- O reator deve ser capaz de manter-se estéril por muitos dias, trabalhar sem
problemas por longos períodos e satisfazer todas as exigências legislativas de
contenção ambiental;

2- As exigências metabólicas dos microrganismos, quanto a aeração e agitação,

devem ser plenamente satisfeitas, mantendo porém a integridade física dos
mesmos;
3- A potência absorvida deve ser a menor possível;

4- Um eficiente sistema de controle de temperatura deve estar disponível;

5- Um sistema de controle de pH deve estar disponível;

6- Um sistema de tomada de amostras à prova de contaminação do conteúdo

do fermentador deve ser parte integrante do equipamento
 Para satisfazer a função primária de fermentação, que é a de
fornecer condições ambientais adequadas ao crescimento dos
microrganismos, 12 pontos devem ser observados:

7- Perdas por evaporação devem ser mantidas ao mínimo;

8- Eficiente sistema de controle dos gases e saída do fermentador devem estar

disponíveis;

9 - O reator deve exigir o mínimo em mão-de-obra para sua operação, limpeza e

manutenção;

10 – O reator deve preencher, sempre que possível, a característica de multi-

propósito, contudo, a regulamentação de contenção ambiental e a possibilidade de
contaminações cruzadas podem ser fatores limitantes
 Para satisfazer a função primária de fermentação, que é a de
fornecer condições ambientais adequadas ao crescimento dos
microrganismos, 12 pontos devem ser observados:

11- O reator deve ter as superfícies internas polidas e todas as suas conexões, na
medida do possível, devem ser soldadas e não rosqueadas;

12- Na medida do possível, o reator deve manter uma geometria similar à dos
reatores menores ou maiores, a fim de facilitar a ampliação de escala do processo.
 Fermentação microbiana: um sistema de três fases

1. Fase líquida: contém sais, substratos e metabólitos dissolvidos.

Pode também possuir substrato imiscível em água;

2. Fase sólida: consiste nas células, substratos ou produtos insolúveis;

3. Fase gasosa: oxigênio, CO2

 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

Sistema de agitação
Fatores importantes:
Sondas para
determinação de
pH
pO2
1 - Oxigênio Sistema de aeração

Entrada de
2 - Temperatura Inóculo
meios/nutrientes Sistema de
anti-espumante colheita
3 - pH de amostras
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

1- Oxigênio
Processos aeróbios têm destaque na Biotecnologia Industrial, pois
estão envolvidos no cultivo de microrganismo para produção de
antibióticos, enzimas, vitaminas, fermentos e inoculantes, proteínas
recombinantes (hormônios, insulina), etc.

Processos fermentativos envolvendo cultivo de células aeróbias ou

aeróbias facultativas visando formação de produtos ou tratamento
biológico de águas residuárias têm em comum o aspecto de exigirem
um adequado dimensionamento do sistema de transferência de
oxigênio (fase gasosa  fase líquida)
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial
1- Oxigênio Último elemento a aceitar elétrons

Permite:
- Armazenamento de energia – ATP;
- Reoxidação das coenzimas que participam
das reações de desidrogenação.

NADH

Participam das reações de síntese de

NADH moléculas levando à sobrevivência
das células e ao surgimento de novas
NADH células no processo de proliferação da
biomassa microbiana, para a qual a
energia é fundamental.
Diagrams:
Prokaryotic Mariana Ruiz
(Tortora, Funke & Case, 2000) Binary Fission, JW Schmidt6
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial
1- Oxigênio C6H12O6 + 6O2  6CO2 + 6H2O
Para a oxidação de 1 mol de glicose, é necessário o consumo de
6 mols de O2

Glicose é bastante solúvel, já O2 é pouco solúvel em água.

A concentração de oxigênio dissolvido na saturação é apenas da
ordem de 7 mg O2/L (7ppm), ao se borbulhar ar atmosférico à
pressão de 1 atm e a 35oC.

Nada adianta alimentar o biorreator se não houver um ótimo

sistema de transferência de oxigênio

- Transferência entre fases gasosa e aquosa;

- Oxigênio dissolvido deve chegar às células;
- Oxigênio deve penetrar nas células;
- Oxigênio deve ser consumido na reação
http://www.pptechnologygroup.com/cfd_engineering.htm
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

1- Oxigênio Em reatores não aerados, o oxigênio é

transferido do espaço livre acima do
líquido.

A agitação quebra continuamente a

superfície do líquido e aumenta a área de
transferência.

O efeito da velocidade de agitação na

entrada do gás em um biorreator de 2 L :

300 rpm 450 rpm 750 rpm

 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

1- Oxigênio Chicanas/Baffles
Aumentam a turbulência e assim,
melhoram a oxigenação do meio
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

1- Oxigênio Chicanas, quebra vórtice ou “baffles”

Aumentam a turbulência e assim,

melhoram a oxigenação do meio

Normalmente:

4 chicanas equidistantes

Largura: 10% do diâmetro do reator

Devem ser fixadas a 1 ou 2 cm do corpo do

fermentador para evitar zonas de estagnação

Análise computacional de dinâmica de fluxos

 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

1- Oxigênio Chicanas afastadas da parede do biorreator

Evita zonas de estagnação
 Concentração de Oxigênio
dissolvida aumenta com a agitação
Concentração de O2

Co
Co

Co 1

t0 t1 Tempo
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

1- Oxigênio

Injetar ar esterilizado

Devagar rápida

Quando a velocidade de agitação é pequena, as bolhas não

serão quebradas tendendo a subir direto para a superfície.
Além disso, irão se acumular no eixo do agitador, coalescendo e
diminuindo a transferência de oxigênio.

Quando a velocidade de agitação é grande, as bolhas pequenas

irão circular por todo o reator e terão o seu tempo de residência
aumentado.
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

1- Oxigênio
Métodos para aumentar a taxa de transferência de
oxigênio (kLa) no sistema:

kLa diminui com o kLa aumenta com a kLa é maior quando as

aumento do volume do área superficial do pequenas chicanas estão
líquido líquido presentes
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

Métodos para aumentar a taxa de transferência de oxigênio (kLa)

no sistema:

-Aumento da pressão;
-Aumento da concentração de O2 no ar inserido no reator;
-Aumento da agitação;
-Aumento do fluxo de ar;
-Redução de espumas e remoção de bolhas de ar da superfície.
 Biorreator ou fermentador
Sistema de Controle de espuma

Formação excessiva de espuma pode:

1. Bloquear os filtros de saída de ar;

2. Aumentar a pressão do biorreator

O controle é feito com a adição de agentes antiespumantes baseados em

silicone ou óleos vegetais que desestabilizam a espuma pela redução
da tensão superficial.

ON-OFF. Uma parte fica no meio e a

outra acima do nível do líquido.
Quando a espuma atinge a superfície
do sensor que está em cima, existe a
produção de uma corrente elétrica
que é detectada pelo controlador,
resultando na ativação da bomba.
Biorreator ou fermentador
Sistema de Controle de espuma

Fatores que favorecem a formação de espuma:

•Meio de fermentação: meios ricos em proteínas tendem a

formar mais espuma. Muitas células produzem moléculas tipo
detergente (ácidos nucléicos e proteínas excretadas após lise
das células ou compostos lipídicos produzidos durante o
crescimento);

•Taxa de aeração e velocidade do agitador (↑,↑ formação de

espuma);
 Biorreator ou fermentador
Sistema de Controle de espuma

Fatores que auxiliam na diminuição da formação da espuma:

• O volume livre no reator: em sistemas nos quais a espuma é formada facilmente,

o volume de trabalho deve ser reduzido para facilitar o controle de espuma.
Quanto maior o volume livre, maior a probabilidade da espuma colapsar por causa
do seu próprio peso;

• Temperatura do condensador: em reatores de laboratório, uma temperatura mais

baixa pode ajudar no controle da espuma. A densidade da espuma aumenta
quando ela se move de uma região mais quente para a região fria do condensador,
causando o colapso da espuma;

• Quebradores mecânicos de espuma: agitador de alta velocidade. A bolha é

puxada para o agitador e colapsa por ação de forças mecânicas. Em pequenos
reatores de laboratório são utilizados quebradores ultrasônicos, que geram
vibrações de alta frequência responsáveis por quebrar as bolhas da espuma
Fatores que alteram a aeração de
uma cultura microbiana
 Geometria do biorreator
DT

WB

Geralmente cilíndricos. São construídos

em dimensões padrão publicadas pela
Wi
Li HL
International Standards Organisation e
British Standards Institution.
Di
C

Reatores do tipo STR, em geral:

-Tanque cilíndrico

-Relação de altura:diâmetro (H:D)

2:1 ou 3:1
 Geometria do biorreator
DT

WB
Esquema de tanque agitado por turbinas de pás
planas, com indicação de dimensões importantes
na transmissão de potência ao líquido

Li HL Máxima potência com mais de um impelidor:

Wi

Di
C Di < Hi < 2Di

Hi = distância entre impelidores

Di = Diâmetro do impelidor (m)

DT = Diâmetro do tanque (m)
HL = altura da coluna do líquido (m)
C = distância do impelidor ao fundo do reator (m)
Wi = altura da pá da turbina (m)
WB = altura da chicana (m) Número
de impelidores para uma
máxima transferência de potência
HL – Di HL – 2Di
> N˚Impelidores >
Di Di
 Geometria do biorreator

Valores
Razão OBS
Típicos
Depende do nível de espuma
Altura do líquido do reator e altura do reator Ht/Hl ~ 0,7 - 0,8
produzido durante a fermentação
Reatores europeus tendem a ser
Altura do reator e diâmetro do tanque Ht/Dt ~1-2 mais altos que os projetados nos
EUA
Reatores com turb. Rushton são
geralmente 1/3 do diâmetro do
Diâmetro do impelidor e diâmetro do tanque Da/Dt 1/3 – 1/2
tanque. Os de fluxo axial são
maiores

Diâmetro das chicanas e diâmetro do tanque Db/Dt ~0,08 – 0,1

Altura da pá do impelidor e diâmetro do impelidor W/Da 0,2

Largura da pá do impelidor e diâmetro do impelidor L/Da 0,25

Distância média entre o impelidor e a saída de gás e

E/W 1
altura da pá
Geometria do biorreator

Fluxos: Axial e Radial

Geometria do biorreator

Fluxo axial: o líquido é dirigido para

a base do reator, isto é, paralelo ao
eixo do agitador. São deficientes em
gerar turbulência e quebra das
bolhas de ar, o que os tornam
indesejáveis para cultivos aerados.

Algumas marcas comerciais:

Impelidor Lightnin 320, Impelidor
KPC – KROMA, Impelidor Pitched

Impelidor Lightnin 
Geometria do biorreator
No fluxo radial, o líquido é inicialmente
dirigido a parede do reator, isto é, ao
longo do raio do tanque. Não é tão
eficiente quanto o fluxo axial. Maior
quantidade de energia é necessária
para gerar o mesmo fluxo que o axial;

Algumas marcas comerciais: tipo

Arrowhead, de pás curvas, de pás retas
verticais, Impelidor Rushton, Impelidor
Smith.
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

2- Temperatura

A reação que ocorre no biorreator pode ser exotérmica ou endotérmica,

por isso, os equipamentos deve ser equipados com um sistema de
transferência de temperatura.

- Sistema de circulação de vapor e água quente podem aquecer o sistema

e também pode ser útil para esterilização do biorreator antes do início do
processo da fermentação;
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

2- Temperatura

Para o resfriamento de culturas, o

biorreator pode possuir uma camisa ou

serpentina de resfriamento por onde

podem passar água, por exemplo, com

temperaturas menores.
 Fatores físico-químicos que devem ser
considerados em uma fermentação industrial

3- pH

No biorreator deve haver um sistema de determinação de pH

assim como uma entrada para balancear a reação com
ácido/base que não ofereça nenhum risco de contaminação
para o sistema.

Temperatura e pH também ficam mais homogêneos com a agitação

 Importância da agitação e mistura

Agitação adequada é essencial pois proporciona os seguintes

efeitos nas três fases:

1- Dispersão do ar no meio de cultivo

2- Homogeneização para igualar a temperatura, pH e

concentração de nutrientes

3- Suspensão dos microrganismos e dos nutrientes sólidos

4- Dispersão de líquidos imiscíveis

 Importância da agitação e mistura

Quanto maior a agitação, melhor será o crescimento?

CUIDADO!!
Agitação excessiva pode romper as células e
aumentar a temperatura o que ocasiona uma
redução na viabilidade celular!!

Deve-se buscar o equilíbrio entre a necessidade

de mistura do meio evitando-se o dano celular.
Características básicas de biorreatores

1. Sistema de agitação;
2. Sistema de distribuição de O2;
3. Sistema de controle de espuma;
4. Sistema de controle de temperatura;
5. Sistema de controle de pH;
6. Portas de amostragem;
7. Sistema de limpeza e esterilização;
8. Linhas para esvaziar o biorreator.
 Bibliografia

Schmidell W, Lima UA, Aquarone E, Borzani W. Biotecnologia

Industrial: Engenharia Bioquímica. Volume 2. Ed Edgard
Blücher LTDA, São Paulo, 2001. Cap. 8

Smith JE. Biotechnology. 4th ed. Cambridge University Press,

2004. Cap. 4