Universidade Federal da Paraba

Centro de Cincias da Sade

Departamento de Cincias Farmacuticas
Disciplina: Biotecnologia das Fermentaes
Docente: Prof. Dra. Celidarque Dias

Produo de
Bioinseticidas
Discentes:
Mayara Castro de Morais

Fevereiro 2015

Produo de
Bioinseticidas

Introduo
Introduo
O uso inadequado dos chamados inseticidas qumicos para o
controle de muitos insetos vem causando nos ltimos anos
um desequilbrio nos ecossistemas por polurem o meio
ambiente, atuarem sobre os inimigos naturais e
promoverem o surgimento de populaes de insetos
resistentes. Neste sentido os agentes biolgicos surgem
como uma alternativa importante e mais segura para o
controle de pragas.

Produo de
Bioinseticidas

Introduo
Em conjunto com o desenvolvimento da agricultura nos
ltimos trinta anos ocorreu tambm a intensificao do uso
de pesticidas qumicos, devido ao grande aumento do
ataque de insetos, estima-se que os mesmo representa em
torno de 30% das perdas em colheitas e na estocagem. Com
esse aumento surgiram os problemas de toxidez, devido as
resduos que permanecem na rea aplicada e ao seu uso
indiscriminado.
O uso intenso de agrotxicos pode levar a degradao dos
recursos naturais, em alguns casos de forma irreversvel,
levando a desequilbrios biolgicos e ecolgicos, entre eles a
contaminao dos lenis freticos e claro do prprio solo.

Produo de
Bioinseticidas

Introduo
Outro problema paralelo a capacidade das pragas em se
adaptarem aos pesticidas, tornando-os resistentes, o que
obriga a utiliza de novos produtos, cada vez mais txicos e
prejudiciais ao meio ambiente.

Introduo

Produo de
Bioinseticidas

Visando uma alternativa para esse problema, surgiram outras

formas de combate a pragas, como o uso de feromnios e
entomopatogenos esses so:
Especficos
Baixa ou nenhuma toxidez a vertebrados e insetos benficos
Porm s 1% do mercado desse tipo de inseticida
Requer grande quantidade de agente ativo
Deve ter fcil produo e estocagem
Os entomopatogenos (agentes capazes de provocar doenas
em insetos) sero o foco deste estudo, neles esto includos
especilamente vrus, bactrias e fungos
Se desenvolvido in vitro permite produo em larga escala
Variabilidade e mutabilidade so vantagens sobre o inseticida
qumico
Os processos de produo doinseticidaqumico podem ser
adaptados paramicroorganismos
Requisito: manter o patgeno vivo
Obstculo: os microorganismos sosuscetveis fatores como
radiao, temperatura, presso

Introduo

Produo de
Bioinseticidas

Os entomopatogenos (agentes capazes de provocar doenas

em insetos) sero o foco deste estudo, neles esto includos
especilamente vrus, bactrias e fungos.
So usadas as bactrias formadoras de esporos nesse
processo:
Vantagens: altaresistncia a condiesambientais
adversas, maior controle biolgico, facilidade no
processamento industrial.
So um problema na indstria alimentcia e muito usadas
nas indstrias de solventes, antibiticos, enzimas e
inseticidas
Principais gneros: Bacillus,Sporolactobacillus, Clostridium,
Desulfoto maculum, Bacillus thuringiensis (Bt), o
ingrediente mais utilizado naproduao dos bioinseticidas

Produo de
Bioinseticidas

Introduo
Os bioinseticidas se dividem em 3 grupos, de acordo com os
microorganismos utilizados na fabricao:
1- aps introduzido no ambiente o microorganismo e reciclado
naturalmente (Bacillus popilliar)
2- depois de introduzido omicroorganismo desaparece e deve ser
reaplicado (Variedades do Bt)
3- o microorganismo pode secomportar das duas maneiras
anteriores (Bacillus sphaericus)

Produo de
Bioinseticidas

Produ
Por ser um processo de seleo natural a aplicao de
bioinseticidas requer
grandes quantidades do agente ativo, e
o
para que se torne um processo vivel economicamente, alm
de ambientalmente, sua produo deve ser relativamente
simples e apresentar boas caractersticas de estocagem.
Interesse surge ao perceber que a velocidade de produo do
bioinseticida estaria muito prxima do qumico

Facilidades
Fcil produo
Viabilidade e eficcia no controle de insetos
O ingrediente ativo e obtido diretamente de organismos vivos
Metarhizium anisopliae

Produo de
Bioinseticidas

Produ
Na produo industrial
de produtos microbianos, h a
o
necessidade de seleo de uma linhagem, seja ela isolada de
fontes naturais como solo ou insetos, seja obtida por
manipulao gentica, que seja bem adaptada ao processo
fermentativo e variaes a fim de maximizar a produo e
realizar o crescimento fermentativo sob condies
econmicas.

Pontos importantes da produo:

Controle da fermentao para evitar produtos indesejados;
Produtos no esperados da fermentao podem ser txicos
Etapas de otimizao dos processos so feitas em reatores
pequenos em seguida intermedirios, que permitam o
controle das condies de reao.

Produo de
Bioinseticidas

Processo
Fermentativo

Os processos fermentativos envolvem vrias etapas na

obteno de grandes quantidades de clulas e/ ou seus
metablitos. Para Bt a forma mais usual o processo
submerso, no qual no meio nutritivo lquido utilizado para
suspender e propagar a biomassa bacteriana.
Cada linhagem mantida como uma cultura-estoque na forma
liofilizada. Uma pequena quantidade desse material pode ser
transferida para um meio de propagao, por exemplo,
sorotipagem, sensibilidade e bacterifagos, observao quanto
presena de contaminantes e confirmao da atividade
inseticida.
As condies de produo devem ser cuidadosamente
monitoradas para a segurana quanto ao andamento e
manuteno da produtividade. Aps o perodo de crescimento
analisa-se o caldo quanto s propriedades fsicas e
microbiolgicas, para assegurar qualidade e integridade antes

Produo de
Bioinseticidas

Processo
Produ
Fermentativo
o

Pode-se esquematizar a produo comercial da Bt por processo submerso ou

semi-slido, conforme segue:
Meio de cultura

Pr-fermentao do inculo

Inoculao e incubao (fermentador)

Recuperao dos esporos e toxinas
Padronizao e bioensaio
Formulao

Produo de
Bioinseticidas

Processo
Produ
Fermentativo
Fermentao Submersa Descontnua:
o
A fermentao descontnua ou fermentao em batelada
em termos de biotecnologia industrial, um processo
fermentativo que caracterizado pela inoculao e incubao
de microrganismos de modo que fornea condies timas
para a fermentao.
O modo de operao dividido em 3 partes:
A soluo nutriente esterilizada inoculada com o
microrganismo desejado de modo que permita a
fermentao em boas condies.
Durante o processo fermentativo, apenas o oxignio (O2)
adicionado (em processos aerbicos), antiespumante e
cido ou base tambm so adicionados para efetuarem o
controle do pH. (Evitando a morte dos microrganismos).
O fim da fermentao obtido e ocorre o descarregamento
da dorna e o fermentado segue para tratamentos finais.

Produo de
Bioinseticidas

Processo
Produ
Fermentativo
Uma das principais
caractersticas da fermentao
descontnua o seu volume que permanece constante, tendo
oadio de solues para o controle do
em vista que no h
processo e nem perdas de material por evaporao. A adio
total do substrato pode ocasionar um baixo rendimento
fermentativo, pois pode gerar efeitos de inibio e produtos
metablicos no desejveis no processo fermentativo. Uma
das principais vantagens da fermentao descontnua os
menores riscos de contaminao e permite grande
flexibilidade de operao.

Produo de
Bioinseticidas

Processo
Produ
Meio deFermentativo
cultura:
o
Nitrognio
Estimula o crescimento e promove liberao de bases orgnicas
Fontes: sais de amnio, gua de macerao de milho e
farinhode soja.
Carbono
Fonte: triptona, farinha de soja e torta de algodo
Para a produo noBrasil interessante ouso de melao de
cana
Sais minerais
Clcio, zinco, mangans e magnsio
O clcio necessrio para a termo estabilidade do esporos de
Bt
Magnsio requerido para a esporulao
Oxignio
Deve ser continuamente suprido para atingir alto rendimento

Produo de
Bioinseticidas

Processo
Produ
Fermentativo
Operao
e acompanhamento:
pH inicial de 7,2
oa 7,6.

Volume de inculo varia de 2 a 10% do volume total de

fermentao.
Temperatura ideal de 30 2C.
Aerao varivel dependendo do tipo de fermentador.
Ciclo de fermentao varia de poucas horas (8 a 10h) at 3
dias.

Inoculao e incubao
Cada linhagem mantida como cultura-estoque na forma
liofilizada.
Parte desse material transferido para meio de
propagao, e d origem clula-me.
O processo de fermentao d incio com transferncia da
cultura-me para oerlenmeyer (1L). Aps perodo de
fermentao ser o inculo de um reator maior (50 L) e

Produo de
Bioinseticidas

Processo
Produ
Fermentativo
Fermentao
submersa contnua
A fermentao contnua caracteriza-se por uma alimentao
o
de forma contnua de meio de cultura a uma dada vazo
constante, o volume da reao deve ser mantido constante
atravs da retirada sistemtica de caldo fermentado, a
manuteno deste volume vital para que o sistema atinja
a condio de estgio estacionrio (Steady state), onde,
neste estado, as variveis do processo (concentrao de
clulas, de substrato limitante e produto) so constantes.
A operao do sistema dura longos perodos de tempo no
seu estado estacionrio.
O sistema de manuteno do volume constante
determinado por transbordamento
Grande formao de espumas, que podem prejudicar o
processo fermentativo alterando o volume. Utilizar
antiespumantes, mas h tambm a possibilidade de ao
mecnica para a quebra das espumas formadas.

Produo de
Bioinseticidas

Processo
Produ
Fermentativo
Utiliza-se a reciclagem das clulas, ou seja, um processo
contnuo em mltiplos
estgios permite a obteno de
o
elevados rendimentos e grande produtividade.
Possibilidade do tratamento de resduos gerados pelo
processo atravs de reatores de fluxo ascendente do tipo
UASB

Produo de
Bioinseticidas

Processo
Produ
Fermentativo
Fermentao
semi-slida
O termo fermentao em estado slido, ou fermentao
o ao processo de crescimento de
semi-slida, aplica-se

microrganismos sobre substratos slidos sem a presena

de gua livre. A gua presente nesses sistemas encontrase ligada fase slida, formando uma fina camada na
superfcie das partculas.
A FSS oferece caractersticas atrativas como processo
alternativo da fermentao submersa: meio de cultura
muitas vezes natural e simples, utilizando resduos
agroindustriais e aerao facilitada pelos espaos vazios
entre as partculas do substrato.
Na FSS produtos de origens agricolas so utilizados como
suporte para o crescimento microbiano, sendo que os
microorganismos crescem internamente no substrato,
sendo assim, dificil de avaliar sua massa diretamente.
Calcular o crescimento microbiano atravs de consumo

Produo de
Bioinseticidas

Separao de
Toxinas

As toxinas produzidas podem ser classificadas em

endotoxinas, aquelas ligadas clula microbiana, e em
exotoxinas, so aquelas excretadas no meio de cultura. No
caso da Bt possui uma endotoxina denominada deltaendotoxina e uma exotoxina denominada de betaexotoxina.
Independente da forma de separao desejada ou possvel,
ela envolver etapas de purificao e concentrao do caldo
fermentativo, uma vez que este contm gua,
remanescentes do meio de cultura (slidos e materiais
dissolvidos), fragmentos celulares e os esporos e cristais.
Essa separao uma outra etapa crtica no
desenvolvimento do processo produtivo, caso o desenho
aplicado separao no seja adequado.
, , e .
Delta-endotoxina
Cristal protico

Produo de
Bioinseticidas

Separao de
Toxinas
Delta-endotoxina

DL 50 para Pieris brassicae da ordem de0,25g/g de

inseto.
Megna. Separao por filtrao do mostofermentado,
com auxiliar de filtrao.
Centrifugao do mosto, e o creme obtido foisuspenso
em soluo de 4 a 6% de lactose eprecipitado com
acetona. Precipitado lavado.
Purificao e concentrao. Potncia doproduto pode
ser reduzida

Betaexotoxina
Termoestabilidade a 121C por 15 min.
Espectro das espcies de insetos suscetveis.
Sintomas diferentes.
Existncia de alguns sorotipos de Bt no produtores do
complexo endotxico que so produtores da exotoxina
termoestvel.
McConnel & Richards. O sobrenadante autoclavado,

Produo de
Bioinseticidas

Separao de
Toxinas

Briggs.Sobrenadantes esterilizado inibia larva da mosca.

Fly toxin ou fly factor.
Produtos Bt ministrados em galinha e vacas.
Em algumas espcies atividade txica tanto injetado como
na alimentao.
Produo de exotoxina se d duranta a fase exponencial
do crescimento.
Esporulao.

Produo de
Bioinseticidas

Ensaio e
Formulao
Inseticidas qumicos.
Produo pode ser bem controlada
Quimicamente definidos
Efeitos bem determinados

Inseticidas Bt
Trs princpios ativos
Esporo, cristal e exotoxina
Caldo fermentado estabilizado atravs da remoo dos
fragmentos.
Lavagens e centrifugaes sucessivas com solues de
pH controlado [7 e 8]
Controle vital para minimizar as variaes.
Os bioensaios de padronizao com protocolos da OMS ou
USDA.
Barjac &Burgerjon.Amostra referncia.

Produo de
Bioinseticidas

Comercializao
Searao de e
aplicao
Toxinas
2/3 dos pesticidas qumicos EUA geram preocupao com
segurana alimentar.
Biopesticidas apresentam 1% mercado mundial.

Vantagens que favorecem biopesticidas:

Preferncia por produto sem pesticidas qumicos
Aumento do mercado para produtos Orgnicos
Estabilizao para regulamentao governamental
Presena de companhias de grande porte no mercado

Produo de
Bioinseticidas

Comercializao
Searao de e
aplicao
Toxinas
Declnio de pesticidas qumicos aquece mercado de
biopesticidas.
Principais participantes: que produzem Bt
Maiores: Novo 23%, Sandoz 20%, Abott 15%
Menores: Ecogen 7%, Mycogen 3%, Outros 2%
60,70Mercado exclusivo pra Bt Lepidoptera(mariposas)
80Novas variedades de BtDiptera (mosquito emoscas),
Coleoptera(besouros).
Ampliao de novos mercados, tecnologias de produo e
inovao dos produtos
Brasil: 0,5% do mercado para bioinseticidas
Mercado melhor para bioinseticidas para mosquitos
Bioinseticidas no podem garantir inocuidade absoluta

Produo de
Bioinseticidas

Principais
Searaoavanos
de
e
Toxinas
limitaes
Avanos:
Desenvolvimento de plantas transgnicas
Incentivo financeiro pra persuadir agricultores
Dificuldade em solues rpidas
Bt o foco principal de estudo.
Uso da Eng. Gentica e tcnicas no recombinantes.
Insero de Bt em Escherichia Coli, B. subtilis, e algas.
Anteriormente: Bt em Clavibacter xyli var. cynodontis (bac.
Milho)

Inserir genes do Bt para sntese de -endotoxinanos tecidos de

plantas dealgodo, tomate,batata, fumo.

Produo de
Bioinseticidas

Principais
Searaoavanos
de
e
limitaes
Toxinas

Limitaes plantas transgnicas:

Dificuldade em produzir rapidamente
Nem todas espcies so sensveis aos cristais
Risco de expor a altas doses de toxinas

Existem estratgias para retardar o aparecimentode

resistncia
Principais Avanos x Processo Fermentativo
Processo fermentativo: Importante para produo em
massa de novos micro-organismos.