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Alta Eficiência
Alimentos
Pesticidas
Compostos tóxicos
Detecção/quantificação
Corantes e conservantes
de resíduos pesticidas em
Macro e micronutrientes
diferentes culturas
Antibióticos e seus resíduos
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Como é composto um CLAE?
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Requisitos do analito para uso em CLAE
Ser solúvel em algum solvente líquido (na fase móvel utilizada)
Força de eluição
FM forte: é um solvente ou uma solução pura que logo elui um analito retido
na coluna (o analito tem maior interação com a FM do que com a FE).
FM fraca: é um líquido que elui devagar o analito retido na coluna (o analito
tem maior solubilidade na FE do que na FM).
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Composição da FM
Isocrático: composição da fase móvel permanece constante ao longo da análise.
Capaz de separar um número limitado de analitos.
Garantia de reprodutibilidade
de vazão Polaridade adequada à separação
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Reservatório do Solvente
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Bombas
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REQUISITOS:
Ser de material inerte
Misturador a
Alta Pressão
Misturador a
Baixa Pressão
Tipos de bombas
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Bomba recíproca:
Bomba de seringa (rosca): Fluxo pulsado que deve ser atenuado
Saída livre de pulsação ↓ volume interno
↓ capacidade de volume (250 mL) ↑ pressão de saída (10.000 psi)
Difícil troca de solventes Eluição por gradiente
Vazões constantes
Injeção manual
As amostras são introduzidas com seringas.
Após virar a alça, a amostra é carregada pela
fase móvel até o início da coluna.
ALÇA TROCÁVEL
Volumes de 2 a 1000 µL
Sistema de injeção
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Para aproveitamento de todos os pratos que uma coluna possui, não se deve injetar um
volume maior que 1% do volume da coluna vazia.
Funções:
Remover partículas;
Pode reter solutos polares tão fortemente que são adsorvidos de modo irreversível. Ex.
água.
Fase estacionária
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Cromatografia de Partição (líquido-líquido)
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Os solutos são separados com base na partição entre a FM líquida e uma FE revestida
em um suporte sólido FE é líquida e imiscível a FM
Fase reversa
Fase estacionária quimicamente ligada
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Fase estacionária quimicamente ligada
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Fase estacionária quimicamente ligada
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Efeito do comprimento da cadeia na retenção
Fase estacionária quimicamente ligada
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Cromatografia de troca iônica
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Solutos são separados por sua adsorção a um suporte contendo cargas fixas na superfície
Trocador de cátions - grupo com carga
negativa separa íons positivos.
FE
Trocador de ânions - grupo com carga
positiva separa íons negativos.
Alta sensibilidade
Boa estabilidade e
reprodutividade
Resposta linear e rápida,
independente da vazão
Insensível a variações de
temperatura e pressão
Desvantagens
Detecta somente substâncias que
absorvem no UV-Vis
Exercício
Detector por Índice de refração
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SNYDER, L.R; KIRKLAND, J.J.; DOLAW, J.W. Introduction to modern liquid chromatography. 3ª
edição, Wiley, 2009.