Eletroforese de Proteínas do Soro
Eva Dias - evamldias@gmail.com – 52592
Mariana Moura - marianagracamoura@gmail.com - 52541
I. Resumo
Esta atividade experimentar foi baseada
numa técnica analítica de identificação e
deteção de proteínas, sendo esta
apelidada de Eletroforese. Neste
processo recorremos ao facto de
partículas carregadas migrarem na
presença de um campo elétrico. Através
do estudo a sua disposição ao longo da
fita podemos inferir acerca da sua
dimensão forma e quantidade. Existindo
um conjunto de fatores que
influenciarão a migração da proteína,
tornando-se importante o conhecimento
a cerca dos mesmos para que possamos
inferir corretamente através dos
resultados obtidos.
II. Materiais e Metodologia
A eletroforese é uma técnica de
cromatografia que se baseia na migração
de partículas carregadas, nesta
experiência utilizamos proteínas, ao
longo de um campo elétrico.
Uma vez que existem várias técnicas de
eletroforese é importante salientar que
a que utilizamos foi a eletroforese de
fronteira móvel ou eletroforese em
solução, na qual utilizamos uma solução
tamponada das moléculas que
desejamos estudar.
A migração que observamos baseia-se
no facto de moléculas com carga devido
á ionização de um protão se desloquem
para o cátodo ou para o ânodo do
sistema eletroforético. Esta deslocação
apresenta uma dada velocidade sendo
esta influência por vários fatores como a
carga elétrica da molécula, tamanho de
forma da molécula, natureza do meio e
temperatura. O conceito de mobilidade
eletroforética está intimamente
relacionado com a velocidade de
migração das partículas, sendo esta
diretamente proporcional á sua carga e
inversamente proporcional á sua
dimensão e à viscosidade do meio.
Na atividade experimental começamos
por preparar o sistema eletroforético,
enchendo a tina com o tampão e
marcando a tira de acetato.
Aplicamos de seguida a amostra de soro
de coelho recorrendo á utilização de
uma micropipeta (3 µL).
Após a verificação de que o sistema se
encontrava corretamente montado e de
que este se tratava de um sistema
isolado ligamos os fios elétricos á fonte
de alimentação, fixando a voltagem nos
200V durante 40min.
Após este tempo retiramos as bandas e
mergulhamo-las numa solução de
Ponceau, durante cerca de 5minutos,
seguidamente colocamos a tira em ácido
acético a 5% para remover o excesso de
corante e fixando as proteínas coradas á
fita.
Por fim colocamos a fita sobre uma placa
de vidro, acompanhada de um fundo
branco, permitindo uma observação
mais fácil e mais correta da fita (Figura
1).
Figura 1 – Esquema ilustrativo do sistema
eletroforético
Materiais e Reagentes:
 Soro de coelho
 Tampão barbital sódico 0.04M,
pH 8.6, força iónica 0.05
 Solução de coloração (0.5g
Ponceau S em 100mL de uma
solução diluída de ácido
tricloroacético a 5%)
 Solução de ácido acético a 5%
 Tiras de acetato de celulose
 Tina de eletroforese
III. Apresentação de
Resultados
Após a realização de todo o processo
anteriormente descrito obtivemos como
produto da experiência diversas fitas,
debruçamo-nos então sobre
duas(Figuras 2 e 3), sendo uma
corresponde ao conjunto que tinha
ficado no interior do sistema for
eletroforético durante 60 minutos e uma
outra do conjunto que tinha ficado 40
minutos. Realizando uma análise mais
detalhada das mesmas.
Figura 2 – Fita proveniente da eletroforese –
60 minutos
Figura 3 – Fita proveniente da eletroforese –
40 minutos
Os nossos serão apresentados em dois
gráficos que relacionam a percentagem
de proteína e a sua quantidade quer na
fita correspondente aos 40 minutos
(gráfico 1), quer a correspondente aos
60 minutos (gráfico 2). Sendo possível
inferir sobre que proteínas se
depositaram através são da sua
localização ao longo da fita(tabela 1). De
 seguida encontramos um último que
relaciona a percentagem de proteína Intensidade das cores das Marcas (40 min)
com a intensidade da cor das marcas na 3.5
3
fita(gráfico 3). 3

Intensidade da Cor
2.5
2
2
Quantidade de proteína (40 minutos)
1.5
1600 1
1397 1
1400 1247 0.5
Quatidade de Proteína

1200 0
15 20 25 30 35 40 45
1000
Percentagem de proteína
800 654
600
400
200
0
15Quantidade
20 de25proteína
30 (60 minutos)
35 40 45
2500 Percentagem de Proteína
Quantidade de Proteína (em pixels)

1990
2000 1827

1500
1147
1000 Gráfico 3 - Quantidade de proteína (60
722
minutos
500

0
10 15 20 25 30 35 40
Percentagem de proteína

Gráfico 2 – Intensidade das cores das

marcas
Gráfico 1 - Quantidade de proteína (40
minutos

Intensidade da Cor das Marcas (60 min)
4.5
4 tiras de acetato de celulose ´com
3.5
Intensidade da Cor
3 eletroforese do soro de coelho foi
2.5
2 mesmas moléculas num meio de
1.5
1 sódico (pH=8,6) e obter a massa
0.5
0 estudo uma vez que a mobilidade
10 15 20 25 30
Percentagem de Proteínas
Gráfico 4 – Intensidade da cor das
Marcas ( 60 minutos)
Os processos de eletroforese em estudo
foram realizados com o objetivo de separar
as proteínas do soro do sangue do coelho.
Foram realizados dois ensaios. Em ambos os
ensaios as amostras foram sujeitas a uma
diferença de potencial de 200V; uma das
amostras foi sujeita a esta diferença de
potencial durante 40 min, o processo de
eletroforese da outa amostra decorreu
durante 60 min. O ensaio em que amostra
foi sujeita a corrente elétrica durante mais
tempo obteve- um maior grau de separação
das proteínas. A Figura 1 e a Figura 2
apresentam os resultados obtidos nos
ensaios em Que as amostras foram sujeitas a
40 e a 60 minutos de eletroforese
respetivamente.
Para ser possível identificar as
proteínas correspondentes às
várias bandas de cor presentes nas
as quais se realizou o processo de
necessário calcular a carga dessas
pH igual ao do tampão barbital
molecular das proteínas em
35 40
eletroforetica depende da razão
entre a carga e a massa de uma
molécula de cada proteína.
Quanto maior a a carga a pH igual a 8,6 e
menor a massa molecular maior a
mobilidade eletroforética. Assim a Tabela 1
mostra a massa molecular em kD e o ponto
isoelétrico de cada uma das proteínas
presentes no soro. Com base nos dados
Tabela 1 (dados teóricos sobre as proteínas
em estudo) os resultados esperados seriam
a presença de albumina em quantidade
maior quantidade de albumina na amostra
(uma vez que a quantidade média de
albumina no soro de um coelho normal
ronda os 60%) relativamente às
quantidades das outras proteínas e uma
maior migração da albumina na fita de
acetato de celulose uma vez que a albumina
é a proteína em estudo com menor massa
molecular e maior carga num meio de
pH=8,6 e a mobilidade eletroforética se
pode avaliar através da razão entre a carga
da proteína no pH do meio e a sua massa
molecular.
Tabela 1
Tabela 2

Tabela 3
Figura 1.1- Variação da figura 1
mostrando todas a fitas durante o
ensaio de 40min de eletroforese
A razão pela qual o pH da solução tampão é
8,6 é o facto de as proteínas séricas serem
negativamente carregadas quando
colocadas num meio com este valor de pH
serem negativamente carregadas o que leva
a que migrem para a extremidade da fita de
acetato de celulose que foi colocada mais
próxima do polo positivo da tina de
eletroforese. Esta característica das
proteínas séricas também justifica o facto de
se colocar a amostra de soro na extremidade
mãos próxima do polo negativo da tina de
eletroforese .
Na amostra sujeita ao processo de
eletroforese durante 60min a marca mais
escura deverá corresponder à albumina uma
vez que a marca mais escura se encontra
mais próximo da extremidade da fita que foi
colocado junto ao polo positivo do aparelho
o que se justifica pelo facto de o ponto
isoelétrico ser menor que o pH do tampão
( o ponto isoelétrico da albumina é o mais
baixo no conjunto das proteínas do soro do
coelho) o que leva a que a carga da
albumina seja negativa neste meio e
portanto que esta proteína seja a mais
atraída pela carga positiva do polo positivo
do aparelho.
Assim a mancha a seguir àquela que se
presume ser a marca correspondente à
albumina deverá corresponder às proteínas
α1 globulina e α2 globulina, que devido aos
seus pontos isoelétricos próximos (o que
leva a uma mobilidade eletroforética
semelhante) podem não se ter separado na
tira de acetato de celulose. Esta junção pode
ter conduzido à maior extensão e
quantidade de pixels contabilizado nesta
marca relativamente à marca
correspondente à albumina ( discrepância a
qual
Figura 2.1- Variação da figura 1 não
mostrando todas a fitas durante o está
ensaio de 60min de eletroforese de
acordo com os resultados previstos na
literatura teórica) uma vez que a albumina é
teoricamente a proteína mais abundante no
soro do sangue do coelho.
A marca seguinte deverá corresponder à β
globulina uma vez que é mais escura do que
a marca correspondente às α globulinas pelo
facto de a β globulina ser mais abundante
do que estas últimas proteínas. Além disso,
o facto de esta marca se situar a seguir às α
globulinas deve-se ao facto de o ponto
isoelétrico da β globulina ser maior, a massa
molecular ser menor e consequentemente a O gráfico 1, o gráfico 2, o gráfico 3 e o gráfico 4
mobilidade eletroforética ser também ilustram a relação entre os resultados
menor do que o da proteínas anteriormente apresentados nas tabelas 1 e 2. Note- se que
referidas. a falha no cálculo das percentagens se deve
à contagem pouco precisa do número de
A γ globulina tem uma massa molecular
pixels da das marcas.
maior do que a β globulina e um maior
ponto isoelétrico assim situa-se abaixo desta
proteína pois estas duas características
levam a γ tenha uma menor mobilidade
IV. Bibliografia
eletroforética do que a da β globulina.

No ensaio sujeito a apenas a 40 minutos de Protocolo das aulas práticas de

eletroforese apresentou um menor grau de
separação das proteínas o que é evidenciado
pelo facto de apenas serem visíveis 3 marcas
diferentes na fita de acetato de celulose. A
marca mais escura presume-se mais uma vez
pertencer à albumina peças razões já
referidas anteriormente.
A segunda marca será constituída pelas
proteínas α1 globulina, α2 globulina e β
globulina uma vez que as 3 proteínas têm
pontos isoelétricos relativamente próximos
e consequentemente mobilidades
eletroforéticas similares o que levou a que
pelo menor tempo de eletroforese não só as
proteínas α1 e α2 como também a β
globulina se manifestassem numa só marca.
Bioquímica (Biologia e EBB) (2017-2018)
Sites de Apoio Consultados:
http://tamirismoreirafisiologica.blogspot.co
m/2017/05/meio-interno-e-proteinas-
plasmaticas.html
http://homepage.ufp.pt/calmeida/BC/BC5
.pdf 
http://www2.iq.usp.br/docente/flaviam/Au
las/QBQ_0313/Exercicios_Proteinas2.pd
f
http://www.hemoglobinopatias.com.br/tec
nicaslab/tecnicaslab-index.htm 

A proteína γ globulina tendo um ponto

isoelétrico mais distante dos das restantes
globulinas e por consequência uma
mobilidade eletroforética menor
manifestou-se numa marca distinta e mais
clara do que a anterior uma vez que é a
proteína menos abundante no soro do
coelho.

As percentagens de cada proteína no soro

não correspondem aos valores previstos
teoricamente (Tabela 2

e Tabela 3) . Este acontecimento pode dever-

se a uma separação insuficiente das
proteínas ou a uma seleção deficiente das
secções da imagem contabilizar os pixels
para obter o número de partículas.