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Terceira edição
12.09.2016
Versão corrigida
15.08.2017
Documento impresso em 08/04/2021 16:36:00, de uso exclusivo de OXITENO S/A IND & COMÉRCIO
Número de referência
ABNT NBR 14029:2016
12 páginas
© ABNT 2016
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reproduzida ou utilizada por qualquer meio, eletrônico ou mecânico, incluindo fotocópia e microfilme, sem permissão por
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Sumário Página
Prefácio................................................................................................................................................iv
1 Escopo.................................................................................................................................1
2 Referências normativas......................................................................................................1
3 Termos e definições............................................................................................................1
4 Requisitos............................................................................................................................3
5 Procedimento......................................................................................................................3
5.1 Seletividade.........................................................................................................................3
5.2 Linearidade..........................................................................................................................3
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Tabelas
Tabela 1 – Critérios de aceitação........................................................................................................7
Tabela 2 – Parâmetros de validação...................................................................................................7
Tabela 3 – Resultados de validação...................................................................................................8
Tabela 4 – Valores críticos (Gc).........................................................................................................10
Prefácio
A ABNT chama a atenção para que, apesar de ter sido solicitada manifestação sobre eventuais direitos
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de patentes durante a Consulta Nacional, estes podem ocorrer e devem ser comunicados à ABNT
a qualquer momento (Lei nº 9.279, de 14 de maio de 1996).
Ressalta-se que Normas Brasileiras podem ser objeto de citação em Regulamentos Técnicos. Nestes
casos, os Órgãos responsáveis pelos Regulamentos Técnicos podem determinar outras datas para
exigência dos requisitos desta Norma.
A ABNT NBR 14029 foi elaborada pela Comissão de Estudo de Especial de Agrotóxicos e Afins
(ABNT/CEE-171). O Projeto circulou em Consulta Nacional conforme Edital nº 05, de 16.05.2016
a 14.07.2016.
Esta terceira edição cancela e substitui a edição anterior (ABNT NBR 14029:2005), a qual foi tecnica-
mente revisada.
Scope
This Standard establishes the procedure for method validation for active ingredient assay in technical
product, active ingredient assay in formulations and content of impurity in pesticides.
1 Escopo
Esta Norma estabelece o procedimento para validação de métodos para determinação do teor de
ingrediente ativo em produto técnico, teor de ingrediente ativo em formulação e teor de impureza em
produtos agrotóxicos e afins.
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2 Referências normativas
Os documentos relacionados a seguir são indispensáveis à aplicação deste documento. Para refe-
rências datadas, aplicam-se somente as edições citadas. Para referências não datadas, aplicam-se
as edições mais recentes do referido documento (incluindo emendas).
ABNT NBR 13073, Limpeza de vidraria para uso em ensaios de produtos agrotóxicos e afins
3 Termos e definições
Para os efeitos deste documento, aplicam-se os seguintes termos e definições.
3.1
amostra
substância-teste
objeto sob investigação em um estudo
3.2
analito
grandeza específica submetida à medição
3.3
branco amostra
matriz do produto contendo todos os componentes da formulação, exceto o ingrediente ativo
3.4
branco reagente
reagentes e solventes utilizados em etapas de preparação e diluição de amostra e substâncias de
referências, que são analisados isoladamente para verificar se eles apresentam sinal analítico que
possa interferir na resposta do analito de interesse
3.5
exatidão
recuperação
relação entre a quantidade do componente de interesse analisado e a quantidade teórica na amostra,
expressa em porcentagem
3.6
impureza
substância diferente do ingrediente ativo, derivada de seu processo de produção e proveniente de
matérias-primas remanescentes, subprodutos provenientes de reações secundárias, sais inorgânicos,
produtos de degradação e solventes residuais
3.7
ingrediente ativo
agente químico, físico ou biológico que confere eficácia aos agrotóxicos e afins
3.8
limite de detecção
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LD
menor concentração ou quantidade de um analito que pode ser detectada com segurança
3.9
limite de quantificação
LQ
menor concentração ou quantidade de um analito que pode ser determinada com precisão e veracidade
3.10
linearidade
habilidade de um método analítico de produzir resultados que sejam diretamente proporcionais à con-
centração do analito, em uma dada faixa de concentração
3.11
padrão analítico
material de referência com concentração definida
3.12
precisão
termo geral para avaliar a dispersão de resultados entre ensaios independentes, repetidos de uma
mesma amostra, amostras semelhantes ou padrões (materiais de referência), em condições definidas
3.13
precisão intermediária
grau de concordância entre os resultados das medições de um mesmo mensurando, efetuadas no
mesmo laboratório e sob condições variadas de medição
3.14
produto formulado
formulação
agrotóxico ou afim obtido a partir de produto técnico ou de pré-mistura, por intermédio de processo
físico, ou diretamente de matérias-primas, por meio de processos físicos, químicos ou biológicos.
É constituído do ingrediente ativo e impurezas provenientes de seu processo de fabricação, além dos
componentes utilizados para compor o produto final
3.15
produto técnico
produto obtido diretamente de matérias-primas por processo químico, físico ou biológico, destinado a
obtenção de produtos formulados ou de pré-misturas e cuja composição contém teor definido de ingre-
diente ativo e impurezas, podendo conter estabilizantes e produtos relacionados, como isômeros
3.16
repetividade
grau de concordância entre os resultados de medições sucessivas de um mesmo mensurando, efe-
tuadas sob as mesmas condições de medição
3.17
reprodutibilidade
grau de concordância entre os resultados das medições de um mesmo mensurando, efetuadas sob
condições variadas de medição em diferentes laboratórios
3.18
seletividade
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3.19
validação
confirmação por exame e fornecimento de evidência objetiva de que os requisitos específicos para um
determinado uso pretendido são atendidos
4 Requisitos
4.1 A vidraria utilizada deve estar limpa de acordo com a ABNT NBR 13073.
4.2 Na manipulação de materiais de referência, produtos técnicos e formulações, devem ser tomados
os cuidados prescritos na ABNT NBR 13075.
4.3 Os materiais de referência devem ter rastreabilidade nos seus certificados e prazo de validade
em vigor.
5 Procedimento
5.1 Seletividade
Fazer no mínimo uma leitura de uma solução de branco reagente e branco amostra.
Caso existam interferentes que não possam ser eliminados durante o desenvolvimento do método,
descrever a forma de eliminar seus efeitos ou justificar que os interferentes não são relevantes.
Caso o branco de amostra não esteja disponível, a seletividade deve ser complementada através
de alguma outra ferramenta analítica, como, por exemplo, a obtenção de pureza de pico, quando
é empregado o detector de arranjo de diodos (DAD) ou detector de massas (EM).
5.2 Linearidade
5.2.1 Ingrediente ativo em produtos técnicos e ingrediente ativo em formulação
Preparar no mínimo cinco soluções de padrão analítico em diferentes níveis de concentração, incluindo
a faixa de concentração nominal de 80 % a 120 % do analito de interesse.
5.2.2 Impureza
Analisar cada solução no mínimo uma vez (uma leitura). A solução de calibração mais diluída deve ser
analisada no mínimo cinco vezes (cinco leituras) a fim de determinar o limite de quantificação (LQ),
conforme descrito em 5.4.
Para ambos os casos, construir gráfico de resposta analítica versus concentração e obter a equação
da reta de regressão linear, com seu respectivo coeficiente de correlação (r), o qual deve ser ≥ 0,99.
NOTA Para alguns analitos e/ou técnicos, a proporcionalidade entre concentração e resposta analítica
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pode não ser linear. Nestes casos, aplicar o modelo matemático mais adequado.
Aplicável somente para análise de analitos em baixas concentrações (impureza e ingrediente ativo
em baixas concentrações).
Por exemplo, na técnica de cromatografia, determinar a relação entre sinal/ruído (S/R) na injeção
do padrão analítico de menor concentração da curva analítica. O limite de detecção do método é deter-
minado pela seguinte equação:
3 × (Cstd )
LD = × 100
(S/R) × Cs
onde
LD é o limite de detecção do método expresso pela porcentagem de massa por massa (% m/m);
(S/R) é a razão entre a altura do sinal e a altura do ruído para o analito no cromatograma
da solução de calibração mais diluída;
NOTA C = concentração do analito (% m/m) dividido por 100: por exemplo, se a concentração do analito
for 99 % m/m, utilizar C = 0,99 na equação estendida de Horwitz.
5.5 Recuperação
É o procedimento ou processo que expressa quanto os valores obtidos encontram-se próximo do valor
real, sendo determinada como a recuperação do analito.
Através da adição de padrão analítico do analito de interesse à amostra, preparar no mínimo dois
níveis de fortificação e analisar no mínimo uma vez cada solução (uma leitura).
Para casos em que for impossível seguir estes níveis, justificar a utilização de níveis mais adequados.
Através da adição de material com concentração definida do analito de interesse à amostra, preparar
três níveis de fortificação (que estejam compreendidos dentro da faixa de concentração da curva
analítica) e analisar no mínimo uma vez cada solução (uma leitura).
O valor de recuperação para impurezas e ingrediente ativo é determinado pela seguinte equação:
C − C2
Recuperação (%) = 1 × 100
C3
onde
5.6 Precisão
A precisão é medida por meio de ensaios de repetitividade e precisão intermediária.
5.6.1 Repetitividade
Preparar no mínimo cinco soluções independentes de um mesmo lote da amostra, conforme descrito
no procedimento específico.
Fazer o tratamento estatístico, pelos dos cálculos de média, estimativa do desvio-padrão, teste de
Grubbs para verificação de valores dispersos e o desvio-padrão relativo, o qual deve estar em confor-
midade com o valor determinado pela equação estendida de Horwitz (DPR calculado ≤ DPR Horwitz):
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NOTA C = concentração do analito (% m/m) dividido por 100; por exemplo, se a concentração do analito
for 99 % m/m, utilizar C = 0,99 na equação estendida de Horwitz..
Variar pelo menos uma das condições analíticas (equipamento, analista ou dia de análise) e proceder
conforme o ensaio de repetitividade 1.
Fazer o tratamento estatístico, pelos cálculos de média, estimativa do desvio-padrão, teste de Grubbs
para verificação de valores dispersos e o desvio padrão relativo, o qual deve estar em conformidade
com o valor determinado pela equação de Horwitz (DPR calculdado ≤ DPR Horwitz):
NOTA C = concentração do analito (% m/m) dividido por 100; por exemplo, se a concentração do analito
for 100 % m/m, utilizar C = 1 na equação de Horwitz.
6 Critérios de aceitação
Para o método ser considerado validado e apto a ser utilizado, deve atender aos critérios de aceitação
descritos na Tabela 1.
Concentração nominal
Recuperação tolerável
do ingrediente ativo
(%)
(% m/m)
> 10 98 – 102
1 – 10 97 – 103
<1 95 – 105
0,01-0,1 90 – 110
Recuperação/exatidão
< 0,01 80 – 120
Concentração nominal
Recuperação tolerável
das impurezas
(%)
(% m/m)
>1 90 – 110
0,1 – 1 80 – 120
< 0,1 75 – 125
7 Aplicabilidade
Os parâmetros de validação são requeridos conforme cada tipo de aplicação, conforme descrito
na Tabela 2.
Tabela 2 (continuação)
Determinação de Determinação de
Determinação de
Parâmetro ingrediente ativo ingrediente ativo
impureza
em produto técnico em formulação
Limite de detecção Não Não a Sim
Limite de
Não Não a Sim
quantificação
a Somente aplicável quando tratar-se de formulação com concentração baixa de ingrediente ativo, ou seja,
quando estiver em nível de concentração similar ao de impureza.
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8 Resultados da validação
Todas as informações referentes e pertinentes ao estudo de validação devem ser registradas em um
relatório de validação. Este documento deve apresentar ao menos os seguintes itens:
c) descrição dos parâmetros de validação (seletividade, linearidade, limites de detecção e quantifi-
cação, exatidão/recuperação e precisão);
Parâmetro Resultado
9 Cálculos
9.1 Média aritmética
onde
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X é a média aritmética;
∑ é o somatório;
n é o número de medidas.
Sr =
∑ ( xn − X)2
(n − 1)
onde
Sr é a estimativa do desvio-padrão;
∑ é o somatório;
X é a medida aritmética;
n é o número de medidas.
S é a estimativa do desvio-padrão;
X é a média aritmética.
Gn =
( Xn − X)
s
onde
X é a média aritmética;
G1 =
( X − X1)
s
onde
X é a medida aritmética;
s é a estimativa do desvio-padrão.
NOTA 1 Se Gcalculado ≤ Gc (2,5 %), o valor é aceito; e se Gcalculado ≥ Gc (2,5 %) o valor é rejeitado.
NOTA 2 Em caso de rejeição acima de 22,2 % dos dados, é necessário refazer os ensaios referentes a este
conjunto de dados.
Os valores críticos (Gc) para o teste de Grubbs ao nível de 97,5 % de confiança são apresentados
conforme a Tabela 4.
Tabela 4 (continuação)
Número de medidas GC
N 2,5 %
10 2,290
11 2,355
12 2,412
13 2,462
14 2,507
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Bibliografia
[1] EURACHEM Guide, The Fitness for Purpose of Analytical Methods – A Laboratory Guide
to Method Validation and Related Topics, Second Edition (2014).
5ª Edição 92007).
[4] SANCO/3030/99 rev.4 - 11/07/00 Technical Material and Preparations: Guidance for generating
and reporting methods of analysis in support of pre- and post-registration data requirements for
Annex II (part A, Section 4) and Annex III (part A, Section 5) of Directive 91/414.
[5] CIPAC, Guidelines on method validation to be performed in support of analytical methods for
agrochemical formulations.