CURSO SEGMENTO TIPO DE MATERIAL

Química Integrado Aula Prática

DISCIPLINA MÓDULO PROFESSOR DATA
Microbiologia 2º Rodrigo Lobo Leite

https://slideplayer.com.br/slide/337123/
https://www.youtube.com/watch?v=zrqrrcZAlD0

Contagem Padrão de Bactérias Mesófilas Heterótrofas Totais (Contagem Padrão em Placas)

1 – Significado nos alimentos

Esta contagem detecta em um alimento, o número de bactérias aeróbias ou facultativas e mesófilas
presentes tanto na sob a forma vegetativa quanto esporulada.
A contagem padrão em placas (PCA) tem sido usada como indicador da qualidade higiênica dos
alimentos, fornecendo também idéia sobre seu tempo útil de conservação. Sua presença em grande
número indica:
a) Matérias primas excessivamente contaminadas;
b) Limpeza e desinfecção de superfícies inadequadas;
c) Higiene inadequada na produção
d) Condições inadequadas de tempo/temperatura durante a produção ou a conservação dos
alimentos, ou uma combinação destas circunstâncias.

2 – Materiais requeridos para a análise

2.1 - Meios de Cultura
2.1.1 - Ágar Padrão para Contagem (PCA)

a) Composição
Triptona 5, 0 g
Extrato de Carne 2,5 g
Dextrose 1,0 g
Ágar 15,0 g
Água destilada 1000 mL

• Dissolver os componentes em água destilada

• Aquecer até completa dissolução
• O pH final deste meio deve ser 7,0 ± 0,1
• Esterilizar em autoclave a 121oC / 15 minutos
• Observação: Na forma desidratada , proceder conforme instruções do fabricante

2.2 – Pipetas esterilizadas de 1mL, 2 mL, 5 mL

2.3 – Tubos contendo 9,0 mL de água peptonada 0,1%
2.4 – Placas de Petri – 6 placas

3 - Metodologia e técnicas de análises

3.1 – Preparo das diluições
a) Homogeneizar a amostra;
b) Proceder a desinfecção da superfície da embalagem com álcool 70%;
c) Retirar assepticamente 1mL da amostra;
d) Colocar no primeiro tubos contendo 9mL de água peptonada 0,1%;
e) Realizar diluições sucessivas até 10-4 de acordo com a técnica do laboratório
 3.2 – Inoculação
a) Pipetar assepticamente alíquotas de 1mL das diluições para Placas de Petri esterilizadas,
fazendo de cada diluição placas em duplicatas;
b) Adicionar a cada placa 15 – 20 mL de PCA, previamente fundido e resfriado à temperatura de
44 a 46 oC; (Pour Plate)
c) Homogeneizar com movimentos suaves, em forma de oito (cerca de 10 vezes) e deixar a
temperatura ambiente até a completa solidificação do Agar;
d) Após a solidificação, incubar as placas em posição invertida a 35- 37oC / 48 horas

4 - Resultado
Transcorrido o tempo de incubação, considerar para contagem, somente as placas da mesma diluição que
apresentarem de 25 a 250 colônias e multiplicar a média aritmética das mesmas pelo respectivo fator de
diluição e expressar o resultado em Unidades Formadoras de Colônias/mL de amostra (ufc/mL).

5 - Regras para a Contagem

a) Todas as placas semeadas não apresentam crescimento

Expressar o resultado como: menos de 1,0 ufc/mL

Diluição UFC Média Resultado final

10-1 Placa 1- 00 --------------- ---------------
Placa 2 - 00
-2
10 Placa 1 - 00 --------------- ---------------
Placa 2 - 00
-3
10 Placa 1 - 00 --------------- ---------------
Placa 2 - 00
10 -4
Placa 1 – 00 --------------- ---------------
Placa 2 – 00

b) Nenhuma placa atingiu 25 ufc/mL

Contar as colônias nas placas com número mais próximo de 25 e expressar o resultado por
estimativa multiplicando pelo inverso do fator de diluição

Diluição UFC Média Resultado final

10-1 Placa 1- 20 19 x 101 1,9 x 102 ufc/mL
Placa 2 - 18 (2,65 x 102)
-2
10 Placa 1 - 10 --------------- ---------------
Placa 2 - 8
-3
10 Placa 1 - 3 --------------- ---------------
Placa 2 - 2
10 -4
Placa 1 – 1 --------------- ---------------
Placa 2 – 0
 c) Todas as placas apresentarem contagem com mais de 250 ufc/mL
Contar as placas da maior diluição e expressar o resultado por estimativa multiplicando pelo
inverso do fator de diluição

Diluição UFC Média Resultado final

-1
10 Placa 1- incontável --------------- ---------------
Placa 2- incontável
-2
10 Placa 1- incontável --------------- ---------------
Placa 2- incontável
-3
10 Placa 1 - 854 --------------- ---------------
Placa 2 - 839
10-4 Placa 1 - 680 677,5 x104 6,8 x 106 ufc/mL
Placa 2 - 675 (6,775 x 107)

d) Diluições diferentes entre 25 – 250 mL

Calcular a média aritmética em cada diluição, multiplicar pelo fator de diluição, proceder nova
média aritmética das diluições diferentes. Expressar o resultado com dois números significativos

Diluição UFC Média 1 Resultado Média 2 Resultado Final

10-1 Placa 1- incontável ----------- ------------- --------------- ---------------
Placa 2- incontável
10-2 Placa 1 - > 250 ----------- ------------- --------------- ---------------
Placa 2 - > 250
-3
10 Placa 1 - 195 190 x 103 190.000
Placa 2 - 185 255.000 2,6 x 105 ufc/mL
10 -4
Placa 1 - 34 32 x 104 320.000 (2,55 x 105)
Placa 2 - 30

e) Apenas uma diluição apresentar entre 25 – 250 mL

Calcular a média aritmética da diluição, multiplicar pelo fator de diluição

Diluição UFC Média Resultado Final

10-1 Placa 1- incontável --------------- ---------------
Placa 2- incontável
-2
10 Placa 1 - > 250 --------------- ---------------
Placa 2 - > 250
10-3 Placa 1 - > 250 --------------- ---------------
Placa 2 - > 250
10-4 Placa 1 - 162 161x 104 1,6 x 105 ufc/mL
Placa 2 - 160 (1,61 x 105)

f) Placas com colônias difusas (Spreaders)

Considerar somente as placas em que a área coberta não exceder a metade da superfície da placa.
A contagem deverá ser efetuada em uma parte representativa da placa, sem colônias difusas, em
que as colônias se apresentarem distribuídas homogeneamente. Multiplicar o número de colônias
por 2 e expressar o resultado por estimativa. Relatar a presença de spreaders no laudo, toda vez
que eles ocuparem mais de ¼ da área da placa.

OBSERVAÇÃO
Para cálculo das médias aritméticas devem ser arredondadas, segundo as seguintes regras:
• Quando o algarismos das unidades for igual ou maior que 5, abandona-se o mesmo e soma-se uma
unidade ao algarismo das dezenas
• Quando o algarismo da unidade for menor que 5, abandona-se o mesmo
 CONTAGEM DE MESÓFILOS

1) Diluição da amostra

2 ) Plaqueamento por pour plate

 Contagem Padrão em Placas (UFC/mL)

Leite Cru ( Propriedade Rural e transportado a granel) > 4,0x104 > 8,0x104

Leite Pasteurizado tipo C > 1,0x105 > 3,0x105

 EXERCÍCIO
Numa pesquisa de mesófilos de seis amostras de leite tipo C obtiveram as contagem
abaixo. Conclua o resultado final e escreva se a contagem está dentro dos padrões
estabelecidos pela Instrução Normativa 51 de 2002 do Ministério da Agricultura.
Padrão – > 1,0x105 > 3,0x105
a) b)

Diluição Contagem Diluição Contagem

10-1 A1 – 630 10-4 A1 – 630
A2 – 590 A2 – 590
10-2 A1 – 350 10-5 A1 – 234
A2 – 390 A2 – 199
10-3 A1 – 221 10-6 A1 – 19
A2 – 195 A2 – 17

c) d)
Diluição Contagem Diluição Contagem
10-2 A1 – 630 10-1 A1 – incontável
A2 – 590 A2 – incontável
10-3 A1 – 229 10-2 A1 – 467
A2 – 187 A2 – 564
10-4 A1 – 46 10-3 A1 – 235
A2 – 52 A2 – 210

e) f)
Diluição Contagem Diluição Contagem
10-2 A1 – 630 10-3 A1 – 630
A2 – 590 A2 – 590
10-3 A1 – 350 10-4 A1 – 350
A2 – 390 A2 – 390
10-4 A1 – 200 10-5 A1 – 200
A2 – 194 A2 – 194