XXXI CURSO DE

FISIOLOGIA E FARMACOLOGIA
PROF. WILSON TEIXEIRA BERALDO
2022
Proteômica Aplicada a Fisiologia e Farmacologia

Proteomas Globais e
Subproteomas
Aplicação da técnica na pesquisa

Lucas Gabriel Bolais Ramos

Orientador: Thiago Verano Braga
Laboratório de Hipertensão – Núcleo de Proteômica Funcional
 Introdução

Já vimos:
1
 Proteínas: os “blocos de construção”
dos sistemas biológicos
 História do estudo de proteínas
2
 Proteômica e suas diferentes
abordagens
 Exemplo de workflow de um estudo
3 proteômico

4
 Introdução

1 Introdução

2 Abordagens Bottom-up e Top-down

3 Estudo de modificações pós-traducionais (PTMs)

4 Ionizações tipo MALDI e Eletrospray

 Abordagens Bottom-up e Top-down

Análise
2 Bioinformática

Extração
MS

3 Digestão
Enzimática
Proteômica Bottom-up:
Proteínas passam por digestão
enzimática antes da análise por MS
4
 Abordagens Bottom-up e Top-down

2021

2 2021

4
2022
 Abordagens Bottom-up e Top-down

Extração MS Análise

2
Bioinformática

Proteômica Top-down:
Não há digestão enzimática dos analitos.
3 Proteínas intactas são analisadas por MS

4
 Abordagens Bottom-up e Top-down

Extração MS Análise

2
Bioinformática

Proteômica Top-down:
Não há digestão enzimática dos analitos.
3 Proteínas intactas são analisadas por MS

2021

4
 Abordagens Bottom-up e Top-down

1 Abordagem Bottom-up Abordagem Top-down

• Técnica mais bem desenvolvida • Maior cobertura da sequência
• Menor custo proteica
Vantagens

• Mais ferramentas de • Ideal para a diferenciação de

2 bioinformática disponíveis proteoformas e proteínas
semelhantes

• Perda de informações da • Maior custo

Desvantagens

sequência • Recursos de bioinformática ainda

3 • Dificuldade para diferenciação de em desenvolvimento
proteoformas • Limitação de Massa (~50 kDa)
• Consumo de tempo na etapa de
digestão

4
 Estudo de PTMs

Fosforilação Glicosilação Ubiquitinação Metilação Acetilação

1

4
 Estudo de PTMs

Fosforilação Glicosilação Ubiquitinação Metilação Acetilação

1
Proteínas intactas

2 Técnicas de
Enriquecimento Análise
por MS
Processamento
3 Bioinformático

Peptídeos após digestão

4
 Estudo de PTMs

2022

4 2020
 Tipos de ionização

MALDI
1

4
 Tipos de ionização

MALDI imaging
1

Deposição de matriz
2 Corte do tecido
Placa de MALDI

4 Reconstituição da imagem Análise por MS

 Tipos de ionização

Eletrospray
1

4
 Tipos de ionização

2017
1

Mass Spec Pen

2

4
 Tipos de ionização

2017
1

3
Coluna de UPLC

4
 XXXI CURSO DE
FISIOLOGIA E FARMACOLOGIA 2022
PROF. WILSON TEIXEIRA BERALDO

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