Microscopia - Conhecendo os métodos e técnicas

Curso Específico para Analista de Laboratório – Hemocentro DF
Aula 00 - Microscopia
Prof. Pollyana Lyra
Aula 00
Microscopia
Professor: Pollyana Lyra
www.pontodosconcursos.com.br | Prof. Pollyana Lyra 1

Prof. Pollyana Lyra
Microscopia - Aula 00
Olá, Tudo bem?? Meu nome é Pollyana Lyra e estarei acompanhando
vocês no curso de Específicas para o concurso do Hemocentro- CARGO-
ANALISTA DE LABORATÓRIO, mas antes disso, deixe-me me apresentar.
Sou Farmacêutica Bioquímica e Industrial, com experiência em Indústria
Farmacêutica nas áreas de Desenvolvimento de produtos (FARMACOTECNICO)
por 4 anos, tempo esse interrompido por uma nomeação no concurso público da
secretaria de saúde de Caldas Novas (5º lugar), onde atuei como Responsável
técnica do Laboratório de Análises Clinicas do CTA (Centro de Testagem e
aconselhamento) que faz parte do programa DST/ AIDS do Ministério da Saúde,
onde em poucos meses me tornei coordenadora do programa de distribuição de
TARV e Talidomida. Por motivos pessoais (resolvi me casar) pedi exoneração e
mudei de cidade, onde comecei a atuar na área de docência.
Ministrei aulas durante 4 anos (isso mesmo, parece que minha vida
profissional acontece em ciclos de 4 anos...risos) na Faculdade de Tecnologia
Senai Roberto Mange. Tempo esse que aprendi a gostar da área de ensino e
pesquisa e acabei me especializando em Farmacologia. Após esses 4 anos em
sala de aula tive uma filha e optei por me dedicar a ela exclusivamente e após
um ano voltar aos concursos (visando Policia Federal) e docência...
Outros resultados de concurso: 27º lugar Farmacêutica Bioquímica da
Prefeitura de Anápolis (2016), 29º lugar Fiscal Sanitário no mesmo concurso,
71º lugar em perito da Policia Civil do Distrito Federal (2016)...

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Bom, eu sei muito bem que não temos tempo a perder, então vamos
começar a entender o nosso curso!!! Tenho certeza que com nossas aulas em
PDF, bem como a bateria de exercícios vocês estarão preparados conquistar o
almejado cargo no Hemocentro do DF!
CONHECENDO O CURSO...
O nosso curso é direcionado aos profissionais de laboratório (formação em
BIOLOGIA, BIOMEDICINA E FARMÁCIA-BIOQUÍMICA). Ele será composto pelo
conteúdo específico acompanhado de exercícios comentados...Trata-se de toda
a parte específica de análises clínicas de forma facilitada, esquematizada
(através de tabelas, mapas mentais e artifícios mnemônicos) assim ele será mais
dinâmico, mais prático, mais enxuto e direcionado!
Você estará desde a primeira página treinando para a sua prova, pois,
como concurseiro, você deve saber que tão importante como saber o conteúdo
é saber como é cobrado esse conteúdo pela banca específica, não é mesmo?
Um outro motivo para investir no nosso curso é o peso dobrado das 25
questões específicas de Análises Clínicas que pode ser o fator determinante
para ocupar a almejada vaga.

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Aula Conteúdo Programático Data

00 Microscopia. 15/11/16
01 Biossegurança e boas práticas em laboratórios. 28/11/16

Garantia da qualidade.
02 Hemocultura. Microbiologia em hemoterapia. 06/12/16
03 Hematologia. Processamento, armazenamento, 09/12/16

distribuição e transporte de hemocomponentes. 1.6
Tipo de hemocomponentes e suas indicações.
RDC no 20, de 10 de abril de 2014.
04 Controle de qualidade. RDC no 34, de 11 de junho de 13/12/16

2014.
RDC no 75, de 2 de maio de 2016.
05 Hemoterapia. 1.1 Captação, registro, pré-triagem, 16/12/16

triagem clínica e coleta de doadores. 1.2 Aféreses. 1.3
Triagem laboratorial (Imunohematológica, sorológica e
NAT). 1.4 Hemostasia.
Portaria no 158, de 4 de fevereiro de 2016, do

Ministério da Saúde.
06 Coleta, processamento e criopreservação de células 20/12/16

progenitoras hematopoiéticas.
07 Biologia molecular. Imunologia do transplantes 09/01/17
08 Transfusão sanguínea. Reações transfusionais. 17/01/17
09 Imunohematologia. Imunologia. HIV. Hepatites. HTLV. 20/01/17

Sífilis.Chagas. Citomegalovírus. Toxoplasmose. Malária
10 Gerenciamento de resíduos. RDC no 306, de 7 de 02/02/17

dezembro de 2004.
11 Validação de processos e metodologia analíticas. 07/02/17

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RDC no 27, de 17 de maio de 2012.
12 Norma Regulamentadora NR32 – Segurança e Saúde 11/02/17

no Trabalho em Serviços de Saúde, aprovada pela
Portaria no 485, de 11 de novembro de 2005, do
Ministério do Trabalho e Emprego.
13 Hemovigilância. Guia para a Hemovigilância no Brasil 14/02/17

(versão 2015), da ANVISA.
14 Guia para Uso de Hemocomponentes, do Ministério da 21/02/17

Saúde (MS/SAS/DAE).
15 Protocolo Transfusional – Indicação de 28/02/17

Hemocompontentes, da Secretaria de Estado de
Saúde do Distrito Federal, com vigência a partir de
março de 2016.

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AULA 00 - MICROSCOPIA
Tópicos da Aula
1. Aspectos Gerais ................................................................................. 7
2. Métodos de microscopia..................................................................7
2..1 Em campo claro......................................................7
2.2 Microscopia em campo Escuro....................................................11
2.3 Microscopia em contraste de fase...................................12
2.4 Microscopia de Fluorescência...............13
2.5 Microscopia Eletrônica....................14
3. Métodos de Análise....................16
3.1 Exame direto................................................16
3.2 Colorações Diferenciais...................16
3.3 Colorações ácido-resistentes............17
3.4 Colorações Fluorescentes..............17
4. Questões Comentadas..................................................................18

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1. Aspectos Gerais
A microscopia é uma ferramenta da microbiologia cujos objetivos são:
Detectar e identificar (de forma preliminar ou definitiva) os microrganismos.
EM análises clínicas ela é utilizada para detectar o agente causados da
patologia e fechar diagnóstico. Esses agentes podem estar nos mais
variados locais no organismo e no caso do concurso claro que o foco está
totalmente voltado para os parasitos do sangue!
Cada microrganismo tem característica específica e exige um tipo de
método e de coloração para melhor visualização, por isso nossa aula é
basicamente conhecer esses métodos e as diferentes formas de coloração
que existem, especialmente voltadas para amostras sanguíneas. Vamos lá??
2. Métodos de microscopia
Cada método que vamos conhecer agora possui microscópios
específicos e exigem um tipo de tratamento prévio da amostra, prestem
atenção nisso!
2.1 Em campo claro
Essa é a microscopia mais simples e rotineira em laboratórios, o
equipamento consiste em uma fonte de luz, que é usada para iluminar a lâmina
onde a amostra está depositada; um condensador, que é usado para focar a luz
sobre o mesmo material e dois conjuntos de lentes (objetiva e ocular) usadas
para ampliar a imagem das estruturas da amostra, passando primeiro pela

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lente objetiva e depois pela ocular. Cada lente tem um poder de aumento e é
usada para observar um tipo de microrganismo. Olha só como é simples!
LENTES OBJETIVAS (3 tipos)
ALTO PODER  40X Imersão em óleo  100x

BAIXO PODER  10X
Usado para organismos Bactérias, leveduras e
Usado para triagem
maiores detalhes morfológicos
As lentes oculares podem aumentar ainda mais a imagem (de 10 15
vezes!!!!).
O aumento total da imagem é a multiplicação das duas lentes usadas, por
exemplo...se você focar inicialmente com a objetiva 10X e depois com a ocular
de 15x o aumento total será de 150x. Não é simples?
Microscópio Optico

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Veja mais detalhes...
As lentes oculares – têm como função ampliar a
imagem fornecida pelas objetivas.
Relembre melhor cada parte do microscópio e sua função!
Canhão ou Tubo Dá suporte ao sistema ocular.
Braço Dá suporte à platina e ao revólver.
Revólver Dá suporte às objetivas e permite a sua mudança.
Objetivas Ampliam a imagem do objeto que está a ser observado.
Platina Dá suporte à preparação a observar.
Pinças Ajudam a fixar a preparação.

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Condensador Distribui regularmente no campo da preparação a luz que
atravessa o diafragma.
Diafragma Regula a intensidade da luz captada pelo espelho ou
proveniente da lâmpada e que incide na preparação.
Parafusos Permitem movimentos de maior ou menor amplitude, de
macrométrico e aproximação ou afastamento entre a preparação e as
micrométrico objetivas (macrométrico). Permitem ainda realizar
movimentos de menor amplitude quando se pretende focar
nitidamente a imagem que se está a visualizar
(micrométrico).
Base ou pé suporte de todos os elementos do microscópio.
Sobre o poder de ampliação, no microscópio óptico

A imagem obtida ao microscópio ótico apresenta as seguintes caraterísticas:
ampliada, simétrica, invertida e virtual.
Exemplo de imagem antes e depois de microscopia óptica.

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2.2 Microscopia em campo Escuro
Nesse tipo de microscopia, as mesmas lentes que são usadas na de
campo claro também estão presentes, a diferença entre as duas técnicas
é que o condensador aqui impede que a luz ilumine diretamente o
material (como é feito na de campo claro)...por isso o nome campo
escuro!! Aqui, uma luz oblíqua passa pelo material fazendo com que ele
fique brilhante contra um fundo preto (Olha, essa técnica tem uma
desvantagem: mostra mais a forma do que estrutura interna), mas em
compensação olha a vantagem dela:
VANTAGEM
Maior resolução!
Visualiza inclusive T.
palidum e Leptospira
spp.
Microscópio em campo escuro

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2.3 Microscopia em contraste de fase
Nesse tipo de microscopia, o problema de não observar as estruturas
internas não existe, isso porque os feixes de luz passam por materiais de
diferentes densidades em velocidades distintas ( o feixe que passa no material
mais denso demora mais), isso é transformado em imagens tridimensionais do
microrganismo por meio de uma estrutura chamada anéis anulares do
condensador.
Esquema de Filtros com diferentes formas de absorção
Bom, nem preciso comentar que uma imagem tridimensional permite uma
análise muito mais detalhada do microrganismo...

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2.4 Microscopia de Fluorescência
Nessa técnica o microscópio só é útil na analise de amostras marcadas

por fluoróforos.
Absorvem luz UV e
emitem luz visível!
As lâmpadas desse microscópio também são diferentes, elas emitem luz
de comprimento de onda menor do que os tradicionais. São elas: Mercúrio de
alta pressão; halogênio, vapor de xenônio.
Outra diferença do microscópio é que precisa ter filtro que bloqueia o
calor gerado por essas lâmpadas e para selecionar o comprimento de onda
específico que excita o fluorósforo que emite a sua luz no material e é
visualizado através das lente objetivas e oculares.
Assim, os microrganismos corados ficam com grande contraste com o
fundo. Pessoal, qual você acha que é mais fácil e rápido identificar numa
lâmina? Um organismo com coloração normal ou fluorescente?? Nem vou
esperar a resposta.....Já sabemos que mesmo em lente de menor aumento o
parasito pesquisado é muito mais facilmente encontrado se tiver fluorescente.

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Microscopia de células em divisão por microscopia fluorescente
Microscopia Eletrônica
Pessoal, essa microscopia é a mais alta tecnologia em matéria de
visualização de microrganismos. Para começar, não são lentes que promovem o
aumento da imagem, mas sim espirais magnéticas, elas direcionam um feixe
de elétrons (que vem da fonte de tungstênio e atravessa a amostra) para a
tela.
Como o comprimento de onda usado é muito, mas muito curto...a
resolução e a ampliação são muito melhoradas.
Para ter um contraste, as amostras são geralmente coradas com íons metálicos.
Existem dois tipos de microscópio eletrônico e a diferença entre eles é
basicamente o papel dos elétrons na formação da imagem, vejam:

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DE VARREDURA
DE TRANSMISSÃO Elétrons não passam
Elétrons passam diretamente, eles
diretamente pela encobrem a superfície do
amostra. material em determinado
ângulo que produz
imagem tridimensional!!!
Microscópio Eletrônico de Transmissão

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3. Métodos de Análise
Como a microscopia existe essencialmente para identificar
microrganismos, nada melhor do que colorir esses agentes para melhor
evidenciá-los, daí é importante estudarmos os métodos de análise usados para
preparo de amostras nos mais diversos tipos de microscopia.
3.1 Exame direto
Essa coloração é a mais simples e os corantes não coram de forma
específica o material, apenas aumentam o contraste com o fundo e permite a
análise mais detalhada do organismo. Exemplo desses corantes: lactofenol azul
de algodão, iodo.
3.2 Colorações Diferenciais
Esse tipo de coloração já diferencia alguns microrganismos
especificamente, por exemplo a coloração de Gram diferencia bactérias Gram
positivas das Gram negativas, outro exemplo é a coloração da hematoxina
férrica com o tricromo que identifica alguns protozoários (Giardia) e o Wright-
Giemsa é usada para identificar parasitas do sangue.
3.3 Colorações ácido-resistentes
Essencialmente esse tipo de coloração avalia qual microrganismo tem a
capacidade de reter a coloração inicial mesmo após lavagem com descolorante.

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São exemplo Coloração de Ziehl-Neelsen, método de Kinyoun ou coloração
fluorescente auramina-rodamina (é o método de escolha).
3.4 Colorações Fluorescentes
A coloração fluorescente auramina-rodamina é um dos exemplos desse
tipo de coloração. Temos também corante laranja de acridina (bactérias e
fungos); corante calcofluor (cora a quitina da parede fúngica) e coloração
anticorpo marcado com molécula fluorescente (muito importante em
imunologia clínica que veremos em aula específica).
Bom pessoal, encerramos a nossa aula demonstrativa com a certeza de
ter vencido apenas uma batalha. Espero que vocês estejam motivados e cheios
de ânimo, pois concurso com um número de vagas assim não é tão comum nas
áreas laboratoriais. Não perca essa chance!!
Agora chegou a hora de exercitar! Esse tema não é um dos favoritos da IADES,
por isso vocês verão várias outras bancas na bateria de exercícios. Na medida
que os temas forem avançando, vamos conhecendo cada vez mais o que a
IADES cobra em provas! Vamos praticar?

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4. QUESTÕES COMENTADAS
1.IADES – 2014- UFBA- BIOMÉDICO. De acordo com a SBPC/ML, no sistema
a vácuo, é correto afirmar que a sequência de coleta para tubos plásticos de
coleta de sangue é
a) frascos para hemocultura; tubos com citrato; tubos para soro com
ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina com
ou sem gel separador de plasma; tubos com EDTA e tubos com fluoreto.
b) tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem
gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de plasma;
tubos com EDTA, tubos com fluoreto e frascos para hemocultura.
c) frascos para hemocultura; tubos para soro com ativador de coágulo, com
ou sem gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de
plasma; tubos com EDTA; tubos com citrato e tubos com fluoreto.
d) tubos com EDTA; tubos com fluoreto; tubos com citrato; tubos para soro
com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina,
com ou sem gel separador de plasma e frascos para hemocultura.
e) tubos com fluoreto; frascos para hemocultura; tubos com citrato; tubos
para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com
EDTA; tubos com heparina, com ou sem gel separador de plasma.
COMENTÁRIO: Não está no conteúdo dessa aula, porém se há uma questão
recorrente nas provas da IADES é essa! MEMORIZE, portanto a ordem de
coleta. Use para isso as palavras chaves: HEMOCULTURA- CITRATO- ATIVADOR

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- SEPARADOR- HEPARINA-EDTA- FLUORETO. (Eu recomendo o uso do
mnemônico HCA-SHEL). Letra a, correta.
2.IADES-2016- PC-DF Perito Criminal - Ciências Biológicas. O
aparecimento do microscópio eletrônico de transmissão (MET) revolucionou a
pesquisa científica, aprimorando drasticamente várias áreas, tanto das
ciências biológicas quanto da ciência dos materiais. Como resultado das
novas observações que ele tornou possíveis, a compreensão da organização
dos tecidos vegetais e animais foi enormemente ampliada, e muitos
conceitos a respeito da construção e função celulares foram radicalmente
alterados. Com relação à microscopia eletrônica de transmissão, assinale a
alternativa correta.
A) No MET, a imagem é formada por dois tipos de elétrons: os transmitidos,
que atravessam o espécimen em estudo, e os elasticamente espalhados,
que proporcionam o contraste obtido pelo efeito de dispersão ou
espalhamento (scattering).
B) A microscopia eletrônica de transmissão envolve um feixe de elétrons de
alta voltagem, emitido por um cátodo (usualmente um filamento de
tungstênio) e focado por eletrostática e por lentes eletromagnéticas.
C) A etapa de contrastação realizada para o preparo das amostras a serem
analisadas no MET é realizada por meio da impregnação da amostra com
metais pesados, e tem a finalidade de estabilizar proteínas e lipídios,
visto que a uranila tem afinidade com ambos.

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D) A microscopia eletrônica é capaz de produzir imagens de alta resolução e
apresenta como vantagens o baixo custo e a baixa toxicidade dos
corantes utilizados no processamento de materiais.
E) Um dos fatores que limitam a resolução do MET é conhecido como
aberração cromática, a qual compreende um efeito óptico causado pelo
aumento da refração dos raios luminosos, que ocorre quando esses
atingem uma lente ou um espelho próximo aos respectivos limites ou às
bordas, em comparação com os raios que atingem a região central da
lente ou espelho.
Comentário: A letra A erra ao afirmar que o efeito obtido pelo microscópio de
varredura é devido à dispersão, na verdade é devido à passagem de elétrons
não não ser direta, mas eles encobrem a superfície do material em determinado
ângulo que produz imagem tridimensional. A alternativa C está errada já que a
microscopia eletrônica de transmissão é feita com íons metálicos para coloração
e não estabilizar proteínas e lipídeos. Letra D erra ao dizer que a técnica é de
baixo custo. A letra E descreve um sistema de lentes diferente da técnica de
MET, já que esta utiliza lentes eletromagnéticas. Correta é a letra B.
3.UFU-MG- 2012 - UFU-MG Técnico de Laboratório - Patologia
Em relação à existência de vários tipos de microscopia de luz utilizados nos
laboratórios, assinale a alternativa que apenas contém exemplos de
microscópios, que usam fonte de luz visível ou não para gerar uma imagem.

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A) Microscopia de contraste de fase, microscopia eletrônica de varredura,
microscopia confocal.
B) Microscopia de contraste de fase, microscopia de polarização e
microscopia de fluorescência.
C) Microscopia de contraste de interferência diferencial, microscopia de
campo escuro, microscopia eletrônico de transmissão.
D) Microscopia eletrônica de transmissão, microscopia eletrônica de
varredura e microscopia de campo claro.
COMENTÁRIO: Todas as demais alternativas trazem “microscopia eletrônica”
entre as opções e sabemos que nela não se utiliza luz, mas sim um feixe de
elétrons. Gabarito, letra B.
4.FGV – 2010- FIOCRUZ- Tecnologista em Saúde - Operação e

Manutenção de Plataformas Tecnológicas. Sobre microscopia eletrônica de
transmissão, assinale a alternativa incorreta:
A) Utiliza radiação eletromagnética gerada a partir de um filamento de
tungstênio como fonte de elétrons.
B) Os elétrons gerados a partir da fonte são condensados no material a ser
observado por meio de um sistema de lentes condensadoras.
C) As lentes dos microscópios eletrônicos são feitas a partir de vidro ou
quartzo.
D) Microscópios eletrônicos requerem um elaborado sistema de vácuo para
remover moléculas de ar que possam desviar ou impedir o fluxo de
elétrons.

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E) A iluminação transmitida através do material a ser observado é focalizado
em uma imagem e aumentado por um sistema de lentes objetivas,
intermediárias e projetoras até que a imagem final é obtida.
COMENTÁRIO: Letra C, pois na microscopia eletrônica utiliza-se lentes
eletromagnéticas.
5.CESPE-2016 - POLÍCIA CIENTÍFICA – PE- Perito Criminal - Ciências
Biológicas e Biomedicina. Com relação a microscopia ótica e eletrônica,
assinale a opção correta.
A) Apesar da qualidade das lentes e das técnicas atuais, os comprimentos
de onda da radiação eletromagnética no espectro visível limitam a
resolução na microscopia ótica convencional.
B) Assim como em um microscópio eletrônico de transmissão, a lente
objetiva de um microscópio ótico se localiza tipicamente entre a mesa
para amostras e a lente ocular.
C) O cromatismo, aberração ótica caracterizada pela presença de um halo
colorido na imagem, resulta da difração da luz ao atravessar as lentes
objetivas, motivo pelo qual atualmente se evita a associação de lentes
em microscopia ótica.
D) Resolução e aumento são parâmetros equivalentes em microscopia
ótica.

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E) A focalização da imagem da amostra em um microscópio ótico
moderno pode ser feita ajustando-se o diafragma.
COMENTÁRIO: Letra A está correta! A letra B erra ao equiparar a
estrutura de um microscópio eletrônico com um óptico, pois no
eletrônico a lente é eletromagnética e não está na mesma posição da
lente do optico. A letra C afirma que se evita a associação de lentes
em microscopia óptica, porém é comum em análises clínicas combinar
as lente objetivas na triagem e oculares no confirmatório e observação
de detalhes estruturais dos microrganismos. A alternativa D igual dois
conceitos distintos: Resolução é a qualidade da imagem, já aumento é
a capacidade de ampliação da lente. Errado! Na alternativa E está
descrito que o diafragma é responsável por focar a imagem, na
verdade o diafragma controla a passagem de luz para amostra, o foco
está relacionado ao macrômetro e micrômetro.
6.FGV-2010-FIOCRUZ Tecnologista em Saúde - Biologia Celular e
Molecular Aplicada à Virologia. Para confirmar diagnóstico de dengue em
um paciente, podem ser realizados diferentes tipos de ensaios que visam à
detecção de anticorpos contra proteínas virais ou do vírus propriamente dito
na amostra do paciente. Todos os métodos abaixo são compatíveis com a
detecção do vírus em amostras de pacientes, exceto:
A) microscopia eletrônica
B) Western-blot.
C) PCR.

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D) microscopia ótica
E) ELISA-(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay)
COMENTÁRIO: A única técnica que não detecta virus é a microscopia ótica,
pois seu poder de ampliação não permite visualização tão detalhada de
estruturas tão pequenas. A eletrônica já tem essa capacidade, decido ao feixe
de elétrons que formam imagem 3D do agente infeccioso, as demais
alternativas igualmente detectam vírus, por métodos imunológicos que veremos
em aula específica. A correta é a Letra D.
7.CESPE-2010- INMETRO- Técnico - Biotecnologia. Acerca dos corantes

utilizados em microscopia óptica, assinale a opção correta.
A) Os corantes não-vitais, tais como hematoxilina, eosina, ácido ósmico,
lugol, vermelho escarlate e violeta genciana, não causam a morte celular.
B) Os corantes ortocromáticos conferem à célula coloração diferente da
observada in vitro.
C) Os corantes neutros possuem efeito tintorial apenas nas estruturas que
não apresentam acidofilia nem basofilia.
D) Os corantes vitais, tais como verde-janus B, azul de metileno, azul
brilhante de cresil e vermelho neutro, causam a morte celular.
E) Os corantes metacromáticos conferem à célula a mesma cor que
apresentam in vitro.
COMENTÁRIO: Letra A descreve corantes tóxico como hematoxilina; a letra B
erra ao dizer que a célula in vitro e in vivo tem coloração diferente quando

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submetidas a corante ortocromático. A Letra C está correta! Letra D erra ao
afirmar que corantes vitais provocam morte celular. Letra E erra ao afirmar que
é a mesma cor, já que os componentes teciduais combinam-se com o corante
para produzirem uma cor diferente da cor original.
8.FGV-2010- FIOCRUZ- Tecnologista em Saúde - Biologia Celular. Sobre
o processo de coloração de materiais para microscopia, assinale a alternativa
incorreta.
A) É utilizado para aumentar o contraste do material a ser analisado ao
microscópio.
B) Existem diferentes classes de corantes, permitindo a coloração de
diferentes estruturas celulares.
C) Além de revelarem estruturas, corantes também podem revelar onde
determinadas reações químicas ocorrem na célula.
D) Amostras para microscopia eletrônica, em geral, não requerem o uso de
corantes ou de contrastantes.
E) Coloração também pode ser feita por meio de sondas ou proteínas
fluorescentes.
COMENTÁRIO: Letra D está incorreta! A microscopia eletrônica exige íons
metálicos que possuem a função de corar a amostra. As demais estão
corretamente descritas.

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LISTA DE QUESTÕES
1.IADES – 2014- UFBA- BIOMÉDICO. De acordo com a SBPC/ML, no sistema
a vácuo, é correto afirmar que a sequência de coleta para tubos plásticos de
coleta de sangue é
A. frascos para hemocultura; tubos com citrato; tubos para soro com
ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina com
ou sem gel separador de plasma; tubos com EDTA e tubos com fluoreto.
B. tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem
gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de plasma;
tubos com EDTA, tubos com fluoreto e frascos para hemocultura.
C. frascos para hemocultura; tubos para soro com ativador de coágulo, com
ou sem gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de
plasma; tubos com EDTA; tubos com citrato e tubos com fluoreto.
D. tubos com EDTA; tubos com fluoreto; tubos com citrato; tubos para soro
com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina,
com ou sem gel separador de plasma e frascos para hemocultura.
E. tubos com fluoreto; frascos para hemocultura; tubos com citrato; tubos
para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com
EDTA; tubos com heparina, com ou sem gel separador de plasma.

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2.IADES-2016- PC-DF Perito Criminal - Ciências Biológicas. O
aparecimento do microscópio eletrônico de transmissão (MET) revolucionou a
pesquisa científica, aprimorando drasticamente várias áreas, tanto das
ciências biológicas quanto da ciência dos materiais. Como resultado das
novas observações que ele tornou possíveis, a compreensão da organização
dos tecidos vegetais e animais foi enormemente ampliada, e muitos
conceitos a respeito da construção e função celulares foram radicalmente
alterados. Com relação à microscopia eletrônica de transmissão, assinale a
alternativa correta.
A. No MET, a imagem é formada por dois tipos de elétrons: os transmitidos,
que atravessam o espécimen em estudo, e os elasticamente espalhados,
que proporcionam o contraste obtido pelo efeito de dispersão ou
espalhamento (scattering).
B. A microscopia eletrônica de transmissão envolve um feixe de elétrons de
alta voltagem, emitido por um cátodo (usualmente um filamento de
tungstênio) e focado por eletrostática e por lentes eletromagnéticas.
C. A etapa de contrastação realizada para o preparo das amostras a serem
analisadas no MET é realizada por meio da impregnação da amostra com
metais pesados, e tem a finalidade de estabilizar proteínas e lipídios,
visto que a uranila tem afinidade com ambos.
D. A microscopia eletrônica é capaz de produzir imagens de alta resolução e
apresenta como vantagens o baixo custo e a baixa toxicidade dos
corantes utilizados no processamento de materiais.

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E. Um dos fatores que limitam a resolução do MET é conhecido como
aberração cromática, a qual compreende um efeito óptico causado pelo
aumento da refração dos raios luminosos, que ocorre quando esses
atingem uma lente ou um espelho próximo aos respectivos limites ou às
bordas, em comparação com os raios que atingem a região central da
lente ou espelho.
3.UFU-MG- 2012 - UFU-MG Técnico de Laboratório - Patologia
Em relação à existência de vários tipos de microscopia de luz utilizados nos
laboratórios, assinale a alternativa que apenas contém exemplos de
microscópios, que usam fonte de luz visível ou não para gerar uma imagem.
A. Microscopia de contraste de fase, microscopia eletrônica de varredura,
microscopia confocal.
B. Microscopia de contraste de fase, microscopia de polarização e
microscopia de fluorescência.
C. Microscopia de contraste de interferência diferencial, microscopia de
campo escuro, microscopia eletrônico de transmissão.
D. Microscopia eletrônica de transmissão, microscopia eletrônica de
varredura e microscopia de campo claro.

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4.FGV – 2010- FIOCRUZ- Tecnologista em Saúde - Operação e

Manutenção de Plataformas Tecnológicas. Sobre microscopia eletrônica de
transmissão, assinale a alternativa incorreta:
A. Utiliza radiação eletromagnética gerada a partir de um filamento de
tungstênio como fonte de elétrons.
B. Os elétrons gerados a partir da fonte são condensados no material a ser
observado por meio de um sistema de lentes condensadoras.
C. As lentes dos microscópios eletrônicos são feitas a partir de vidro ou
quartzo.
D. Microscópios eletrônicos requerem um elaborado sistema de vácuo para
remover moléculas de ar que possam desviar ou impedir o fluxo de
elétrons.
E. A iluminação transmitida através do material a ser observado é focalizado
em uma imagem e aumentado por um sistema de lentes objetivas,
intermediárias e projetoras até que a imagem final é obtida.
5.CESPE-2016 - POLÍCIA CIENTÍFICA – PE- Perito Criminal - Ciências
Biológicas e Biomedicina. Com relação a microscopia ótica e eletrônica,
assinale a opção correta.
A. Apesar da qualidade das lentes e das técnicas atuais, os comprimentos
de onda da radiação eletromagnética no espectro visível limitam a
resolução na microscopia ótica convencional.

Prof. Pollyana Lyra
B. Assim como em um microscópio eletrônico de transmissão, a lente
objetiva de um microscópio ótico se localiza tipicamente entre a mesa
para amostras e a lente ocular.
C. O cromatismo, aberração ótica caracterizada pela presença de um halo
colorido na imagem, resulta da difração da luz ao atravessar as lentes
objetivas, motivo pelo qual atualmente se evita a associação de lentes
em microscopia ótica.
D. Resolução e aumento são parâmetros equivalentes em microscopia
ótica.
E. A focalização da imagem da amostra em um microscópio ótico
moderno pode ser feita ajustando-se o diafragma.
6.FGV-2010-FIOCRUZ Tecnologista em Saúde - Biologia Celular e
Molecular Aplicada à Virologia. Para confirmar diagnóstico de dengue em
um paciente, podem ser realizados diferentes tipos de ensaios que visam à
detecção de anticorpos contra proteínas virais ou do vírus propriamente dito
na amostra do paciente. Todos os métodos abaixo são compatíveis com a
detecção do vírus em amostras de pacientes, exceto:
A) microscopia eletrônica
B) Western-blot.
C) PCR.
D) microscopia ótica
E) ELISA-(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay)

Prof. Pollyana Lyra
7.CESPE-2010- INMETRO- Técnico - Biotecnologia. Acerca dos corantes

utilizados em microscopia óptica, assinale a opção correta.
A. Os corantes não-vitais, tais como hematoxilina, eosina, ácido ósmico,
lugol, vermelho escarlate e violeta genciana, não causam a morte celular.
B. Os corantes ortocromáticos conferem à célula coloração diferente da
observada in vitro.
C. Os corantes neutros possuem efeito tintorial apenas nas estruturas que
não apresentam acidofilia nem basofilia.
D. Os corantes vitais, tais como verde-janus B, azul de metileno, azul
brilhante de cresil e vermelho neutro, causam a morte celular.
E. Os corantes metacromáticos conferem à célula a mesma cor que
apresentam in vitro.
8.FGV-2010- FIOCRUZ- Tecnologista em Saúde - Biologia Celular. Sobre
o processo de coloração de materiais para microscopia, assinale a alternativa
incorreta.
A. É utilizado para aumentar o contraste do material a ser analisado ao
microscópio.
B. Existem diferentes classes de corantes, permitindo a coloração de
diferentes estruturas celulares.
C. Além de revelarem estruturas, corantes também podem revelar onde
determinadas reações químicas ocorrem na célula.
D. Amostras para microscopia eletrônica, em geral, não requerem o uso de
corantes ou de contrastantes.

Prof. Pollyana Lyra
E. Coloração também pode ser feita por meio de sondas ou proteínas
fluorescentes.
1. A
2. B
3. B
4. C
5. A
6. D
7. C
8. D
Espero vocês nas próximas aulas!!!

Professora Pollyana Lyra.

Prof. Pollyana Lyra
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
http://portalbrasil10.com.br/microscopio-optico. Acessado em 14/11/2016
https://www.ufmg.br/microscopia/index.php?option=com_content&task=view&i
d=16&Itemid=28. Acessado em 14/11/2016
http://www.slideshare.net/ruiricardobg/03-introduo-microscopia. Acessado em
14/11/2016
MURRAY, PATRICK R.; ROSENTHAL, KEN S.; PFALLER, MICHAEL

A. Microbiologia Médica. 6 ed. Ed. Elsevier, 2009

Microscopia - Conhecendo os métodos e técnicas

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Curso Específico para Analista de Laboratório – Hemocentro DF

www.pontodosconcursos.com.br | Prof. Pollyana Lyra 1

Olá, Tudo bem?? Meu nome é Pollyana Lyra e estarei acompanhando

vocês no curso de Específicas para o concurso do Hemocentro- CARGO-

ANALISTA DE LABORATÓRIO, mas antes disso, deixe-me me apresentar.

Sou Farmacêutica Bioquímica e Industrial, com experiência em Indústria

Farmacêutica nas áreas de Desenvolvimento de produtos (FARMACOTECNICO)

técnica do Laboratório de Análises Clinicas do CTA (Centro de Testagem e

aconselhamento) que faz parte do programa DST/ AIDS do Ministério da Saúde,

onde em poucos meses me tornei coordenadora do programa de distribuição de

TARV e Talidomida. Por motivos pessoais (resolvi me casar) pedi exoneração e

mudei de cidade, onde comecei a atuar na área de docência.

profissional acontece em ciclos de 4 anos...risos) na Faculdade de Tecnologia

pesquisa e acabei me especializando em Farmacologia. Após esses 4 anos em

um ano voltar aos concursos (visando Policia Federal) e docência...

Outros resultados de concurso: 27º lugar Farmacêutica Bioquímica da

Prefeitura de Anápolis (2016), 29º lugar Fiscal Sanitário no mesmo concurso,

71º lugar em perito da Policia Civil do Distrito Federal (2016)...

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PDF, bem como a bateria de exercícios vocês estarão preparados conquistar o

almejado cargo no Hemocentro do DF!

O nosso curso é direcionado aos profissionais de laboratório (formação em

BIOLOGIA, BIOMEDICINA E FARMÁCIA-BIOQUÍMICA). Ele será composto pelo

conteúdo específico acompanhado de exercícios comentados...Trata-se de toda

a parte específica de análises clínicas de forma facilitada, esquematizada

dinâmico, mais prático, mais enxuto e direcionado!

Um outro motivo para investir no nosso curso é o peso dobrado das 25

questões específicas de Análises Clínicas que pode ser o fator determinante

para ocupar a almejada vaga.

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Aula Conteúdo Programático Data

01 Biossegurança e boas práticas em laboratórios. 28/11/16

02 Hemocultura. Microbiologia em hemoterapia. 06/12/16

03 Hematologia. Processamento, armazenamento, 09/12/16

RDC no 20, de 10 de abril de 2014.

04 Controle de qualidade. RDC no 34, de 11 de junho de 13/12/16

RDC no 75, de 2 de maio de 2016.

05 Hemoterapia. 1.1 Captação, registro, pré-triagem, 16/12/16

Portaria no 158, de 4 de fevereiro de 2016, do

06 Coleta, processamento e criopreservação de células 20/12/16

07 Biologia molecular. Imunologia do transplantes 09/01/17

08 Transfusão sanguínea. Reações transfusionais. 17/01/17

09 Imunohematologia. Imunologia. HIV. Hepatites. HTLV. 20/01/17

10 Gerenciamento de resíduos. RDC no 306, de 7 de 02/02/17

11 Validação de processos e metodologia analíticas. 07/02/17

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RDC no 27, de 17 de maio de 2012.

12 Norma Regulamentadora NR32 – Segurança e Saúde 11/02/17

13 Hemovigilância. Guia para a Hemovigilância no Brasil 14/02/17

14 Guia para Uso de Hemocomponentes, do Ministério da 21/02/17

15 Protocolo Transfusional – Indicação de 28/02/17

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1. Aspectos Gerais ................................................................................. 7

2..1 Em campo claro......................................................7

2.2 Microscopia em campo Escuro....................................................11

2.3 Microscopia em contraste de fase...................................12

2.4 Microscopia de Fluorescência...............13

2.5 Microscopia Eletrônica....................14

3.1 Exame direto................................................16

3.2 Colorações Diferenciais...................16

3.3 Colorações ácido-resistentes............17

3.4 Colorações Fluorescentes..............17