Apresentação Dissertação - Jânio Anselmo

Eletroporação de células biológicas
isoladas através de micropipetas:

Estudos numéricos dos efeitos elétricos
e mecânicos na membrana celular
Jânio Anselmo
Orientadora: Daniela Ota Hisayasu Suzuki, Dra. .
Universidade Federal de Santa Catarina – UFSC

Instituto de Engenharia Biomédica – IEB
janio.anselmo@ieb.ufsc.br
25 de julho de 2023
Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Objetivos
1 Objetivos
2 Fundamentação teórica
3 Definição do modelo matemático
4 Estudo do microeletrodo EFC
5 Estudo da deformação mecânica
6 Conclusões e trabalhos futuros

Objetivos
Objetivo Geral
Contribuir com os estudos do fenômeno da eletroporação em

células isoladas utilizando microeletrodo estirado repleto de
eletrólito (EFC);
Estudar modelos matemáticos que permitam expressar o
comportamento da condutividade da membrana celular,
quando a mesma é exposta em campos elétricos não-uniformes
e deformações mecânicas em sua estrutura celular.

Objetivos
Objetivo Geral
Contribuir com os estudos do fenômeno da eletroporação em

células isoladas utilizando microeletrodo estirado repleto de
eletrólito (EFC);
Estudar modelos matemáticos que permitam expressar o
comportamento da condutividade da membrana celular,
quando a mesma é exposta em campos elétricos não-uniformes
e deformações mecânicas em sua estrutura celular.

Objetivos
Objetivos Especı́ficos
1 Adaptação de modelo matemático de [Glaser et al. 1988] e

[Ramos 2005]. Através deste, estudar numericamente as
variações elétricas e estruturais da célula;
2 Estudo das variações elétricas e geométricas do microeletrodo
EFC. Verificar a influência da reatância capacitiva na
condutividade da membrana celular e desenvolver um
algoritmo de suavização desta;
3 Estudo numérico do modelo matemático da deformação
mecânica. Investigar a impedância da fenda(750, 0 kΩ [Bae e
Butler 2006]) e as caracterı́sticas fı́sico-mecânicas da
membrana celular durante a eletroporação.

Objetivos


Objetivos


Fundamentação teórica
1 Objetivos

Eletroporação – Formação de Poros
Poro hidrofı́lico,
permitindo a passagem
de moléculas;
Ruptura da membrana,
Eletroporação
irreversı́vel.
Adaptado de [Pavlin et al. 2008]

Capilar estirado distante da membrana
Distância de alguns
micrômetros;
Potencial aplicado: 100
à 2, 0 kV;
Registrar informação
dos transientes dos
poros;
Campo elétrico
não-uniforme.
Adaptado de [Chiea 2013]

Capilar estirado tocando a membrana celular
Eletroporação somente
sob região do EFC;
Potencial aplicado na
ordem de dezenas de
volts;
Dependente da
impedância da fenda;
Posicionar o eletrodo
sem perfurar;
Necessidade de células
aderentes.

Definição do modelo matemático
1 Objetivos

Modelo matemático da condutividade da membrana celular
Adaptação do modelo matemático apresentado por [Glaser et al.

1988] e [Ramos 2005]:
Potencial Transmembrana
 2
 Vm 
 
∆σm Vpp
= Ke e (1)
∆t
Vm Crı́tico Constante de Equilı́brio
Ke obtido para Vm (σm = 0) entre 1,8 e 3,3 V;

Resultados experimentais e teóricos da suspensão de célula.

Validação do modelo matemático da condutividade da membrana celular
Campo elétrico efetivo:
1 + p/2
Ef = E0
1 + (3p/4Nπ)1/3
Erro máximo das curvas:

inferior à 15%.
Adaptado de [Zudans et al. 2007]

Materiais e métodos
Potencial Elétrico em Va :
Equação de Poisson:
∂V
Vtotal + (Ltotal − l) = Va
∂z
−∇ · (σm ∇ V ) = 0

∂V
∂z
−∇ · (σm ∇ V ) = 0

Resultados – Comparação com resultados da literatura [Zudans et al. 2007]*

Resultados – Influência da distância do EFC
−5 rcélula=10,0 µm, V=500 V

x 10
1.8
d=8,0 µm
1.6 d=4,0 µm
d=2,0 µm
d=1,0 µm
1.4 d=0,5 µm
1.2
σm, S/m
0.8
0.6
0.4
0.2
0 15 30 45 60 75 90
Ângulo, θ°

Resultados – Influência da distribuição do campo elétrico – 500 à 4000 V

Resultados – Influência do raio celular - σm
−5 dpipeta=0,5 µm, V=500 V

x 10
5
r=1,0 µm
4.5 r=5,0 µm
r=10,0 µm
4 r=20,0 µm
r=30,0 µm
3.5
3
σm, S/m
2.5
1.5
0.5
0
0 5 10 15 20 25 30
Ângulo, θ°

Resultados – Influência do meio extracelular - σm
−5 rcelula=10,0 µm, dµpipeta=0,5 µm, V=500 V

x 10
2
1.8
1.6
1.4
σo=0,01 S/m
σm, S/m
1.2 σo=0,50 S/m

σo=1,50 S/m
1
0.8
0.6
0.4
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1
σi, S/m

Estudo do microeletrodo EFC
1 Objetivos

∂V
∂z
−∇ · (σm ∇ V ) = 0

∂V
∂z
−∇ · (σm ∇ V ) = 0

Resultados – Comparação com dados experimentais [Chiea 2013]
dponta = 10,0 µm
9
5
−X, R (MΩ)
−1
0 1 2 3 4 5
10 10 10 10 10 10
Frequência, Hz

O novo prisma da eletroporação
Pulsos de nanossegundos (ns):

Eletroporação das organelas
[Entre (1) – (11)];
Estimulação de fluxo de
cálcio (Ca2+ );
1 Nucléolo, 2 Núcleo celular, 3 Ribossomos,
4 Vesı́culas, 5 Retı́culo endoplasmático rugoso Alterações no potencial de
(RER), 6 Complexo de Golgi, 7 Microtúbulos, 8
Retı́culo endoplasmático liso (REL), 9 Mitocôndrias,
membrana.
10 Vacúolo, 11 Citoplasma, 12 Lisossomas, 13
Centrı́olos, 14 Membrana plasmática.

Resultados – Potencial transmenbrana x Vin (t) de 1, 0 ms
dpipeta=4,0 µm, V=500 V
Pulsoin
Pulsoout
200
400
Amplitude, mV
Amplitude, V
200
0 0
−1 −0.5 0 0.5 1 1.5 2
Tempo, ms

Resultados – Potencial transmenbrana x Vin (t) de 10, 0 µs

100
Pulsoin
500
Pulsoout
80
400
Amplitude, mV
60
Amplitude, V
300
40
200
100 20
0 0
−10 −5 0 5 10 15 20 25
Tempo, µs

Resultados – Potencial transmenbrana x Vin (t) de 100, 0 ns
Pulsoin
500
Pulsoout
50
Amplitude, mV
Amplitude, V
0 0
−200 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800
Tempo, ns

Circuito elétrico total
C2
R1 A
Rin
Ce
Vin
+88.8 C1 R2
AC Volts Cin Re
R3
PBS (Extracelular)
Rpbs
R4
Rf
R5
Rm
C3
Cm
Vm
+88.8
Volts

Intracelular
R6
Ri

Circuito elétrico equivalente
R1
A
Rin
Vin
+88.8 R2 C1
AC Volts Req Ceq
Figura 1: Circuito elétrico equivalente

Equação final do Vinc (t)
 h i
Rin Ceq
 Vin (t) +1 : 0< t < ti

 tc
Vinc (t) = Vin (t) h i : ti < t < (tf − ti )
 −Vin (t) Rin Ceq

: (tf − ti ) < t < tf

tc
ti é o tempo de duração do impulso;

tc é o tempo desejado para Ceq atingir a plena carga;
tf é o tempo final do pulso Vin ;
Fora do intervalo mencionado, Vinc (t) = 0.

Resultados – Potencial transmenbrana com Vinc (t) de 10, 0 µs
dpipeta=4,0 µm, Vinc(t)

1000
Pulsoin
ti = 0,1 µs Pulsoout
→← 200
Amplitude, mV
Amplitude, V
100
0
ti = 0,1 µs
→←
0
−5 0 5 10 15
Tempo, µs

Resultados – Potencial transmenbrana com Vinc (t) de 100, 0 ns

Estudo da deformação mecânica
1 Objetivos

Equação de movimento:
Equação de deformação-deslocamento:
Equação constitutiva:
F = −∇ · σ
1
∇ us + (∇ us )2

ϵ=
2
σ=C :ϵ

Resultados – Comparação com dados experimentais [Chiea 2013]

Resultados – Distribuição de tensões mecânicas de Von Mises

Resultados – Tensão transmembrana da célula
rcélula=10,0 µm, V=20 V

0.5
Toque na membrana
0.4 Deformação da membrana
0.3
+Vpp1
0.2 +Vpp2
0.1
Vm, V
−0.1
−0.2 −Vpp2
−Vpp1
−0.3
−0.4
15 30 45 60 75 90
Ângulo, θ°

Resultados – Pressão exercida pelo EFC na membrana
6 rcélula=10,0 µm, V=20 V

x 10
1
Toque na membrana
0.8 Deformação da membrana
0.6
0.4
Pressão, N/m2
0.2
−0.2
−0.4
−0.6
−0.8
−1
20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
Ângulo, θ°

Resultados – Distribuição do campo elétrico e leitura da corrente elétrica

Conclusões e trabalhos futuros
1 Objetivos

Conclusões
O capı́tulo módulo I apresenta uma baliza para definições dos

parâmetros necessários na efetivação da eletroporação;
As aplicações de pulsos de curta duração em EFC’s precisam
ser revistas ou compensadas, conforme módulo II;
O módulo III demostra o forte impacto da deformação da
membrana celular na eletroporação.

Conclusões


Conclusões


Trabalhos futuros
Definição de um modelo matemático que descreva de forma

dinâmica, em função de Vm , o número de poros gerados e a
sua respectiva evolução temporal;
Aplicação e estudos numéricos de novos modelos matemáticos
para análise do comportamento fı́sico-mecânico da membrana
celular;
Experimentos de introdução de marcadores ou genes
analisando a viabilidade celular.

Trabalhos futuros

celular;

Trabalhos futuros

celular;

Produções Acadêmicas
Banca de TCC & Eventos – Participação I
[1] D. d. S. de Medeiros, E. M. L. Merlin, M. Moecke e J. Anselmo.

“Participação em banca de Ana Paula Rosa Negri: Detecção
de crises epilépticas baseada em sinais de eletroencefalograma
utilizando a transformada Wavelet”. Em: Trabalho de Conclu-
são de Curso (Graduação em Sistemas de Telecomunicações) -
Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Santa
Catarina (2014).
Revisor de artigos pela AMIA (American Medical Informatics Association);
V e VI Minicurso de Engenharia Biomédica na Prática;
SEPEX 2012.

Artigos – Participação I
[2] A. De Castro, C. F. Fronza e J. Anselmo. “Computational ap-

proach of the homeostatic turnover of memory B cells”. Em:
Embrapa Informática Agropecuária-Artigo em periódico inde-
xado (ALICE) (2014).
[3] C. F. Fronza, J. Anselmo, J. L. B. Marques, G. B. Pintarelli e A.
De Castro. “A Blower-Like Approach to Predict the Effective-
ness of Vaccines in a TB Dynamic”. Em: Embrapa Informática
Agropecuária-Artigo em periódico indexado (ALICE) (2014).
[4] C. F. Fronza, J. Anselmo, J. L. B. Marques, G. B. Pintarelli
e A. De Castro. “In Silico System For Early Diagnosis Of Di-
abetes Mellitus Complications By Using Dynamic Pupillome-
try And Heart Rate Variability”. Em: International Symposium
on Mathematical and Computational Biology, Poznan, Poland
(2014).
Artigos – Contribuições da Dissertação I
[5] J. Anselmo, L. C. Ramos, J. L. Marques, F. R. M. B. Silva

e D. O. Suzuki. “Membrane Conductance Analysis on Single-
cell Electroporation with Electrolyte-filled Capillary”. Em: IEEE
Transaction on Dielectrics and Electrial Isulation - Submitted
article (2014).
[6] J. Anselmo, D. O. Suzuki e J. L. Marques.“Estudos Numéricos
dos Influentes Parâmetros da Eletroporação Através de Micro-
capilares Estirados”. Em: XXIV Congresso Brasileiro de Enge-
nharia Biomédica - Uberlândia/MG (2014), pp. 1341–1344.
[7] D. O. Suzuki, J. Anselmo, K. D. de Oliveira, J. O. Freytag,
M. M. Rangel, J. L. Marques e A. Ramos.“Numerical Model of
Dog Mast Cell Tumor Treated by Electrochemotherapy”. Em:
Artificial Organs (2014).

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Eletroporação de células biológicas

isoladas através de micropipetas:

Universidade Federal de Santa Catarina – UFSC

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

3 Definição do modelo matemático

4 Estudo do microeletrodo EFC

5 Estudo da deformação mecânica

6 Conclusões e trabalhos futuros

Contribuir com os estudos do fenômeno da eletroporação em

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Contribuir com os estudos do fenômeno da eletroporação em

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

1 Adaptação de modelo matemático de [Glaser et al. 1988] e

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

1 Adaptação de modelo matemático de [Glaser et al. 1988] e

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

1 Adaptação de modelo matemático de [Glaser et al. 1988] e

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

3 Definição do modelo matemático

4 Estudo do microeletrodo EFC

5 Estudo da deformação mecânica

6 Conclusões e trabalhos futuros

Adaptado de [Pavlin et al. 2008]

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Adaptado de [Chiea 2013]

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

3 Definição do modelo matemático

4 Estudo do microeletrodo EFC

5 Estudo da deformação mecânica

6 Conclusões e trabalhos futuros

Adaptação do modelo matemático apresentado por [Glaser et al.

Vm Crı́tico Constante de Equilı́brio

Ke obtido para Vm (σm = 0) entre 1,8 e 3,3 V;

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Campo elétrico efetivo:

Erro máximo das curvas:

Adaptado de [Zudans et al. 2007]

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

−5 rcélula=10,0 µm, V=500 V

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

−5 dpipeta=0,5 µm, V=500 V

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

−5 rcelula=10,0 µm, dµpipeta=0,5 µm, V=500 V

1.2 σo=0,50 S/m

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

3 Definição do modelo matemático

4 Estudo do microeletrodo EFC

5 Estudo da deformação mecânica

6 Conclusões e trabalhos futuros

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

Pulsos de nanossegundos (ns):

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

dpipeta=4,0 µm, V=500 V

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC

dpipeta=4,0 µm, V=500 V

Aluno: Jânio Anselmo Dissertação de Mestrado – IEB-UFSC