Fotometria e sua aplicação em Laboratório Clínico

PRINCÍPIOS DA INSTRUMENTAÇÃO B) Sensibilidade -> características do método de perceber

• Início dos anos 1950 -> primeira fase de crescimento da
instrumentação do laboratório clínico
• Técnicas clássicas da química analítica quantitativa
• Fotômetros de chama -> análise de sódio e potássio
utilizando esses aparelhos representava o início da década
de 1950
EQUIPAMENTOS FREQUENTEMENTE DISPONÍVEIS
• Medidores de pH simples
• Equipamentos para eletroforese de proteínas
• Equipamentos para cromatografia líquida para os
aminoácidos
• Equipamentos para cromatografia gasosa para as
substancias voláteis
• Equipamentos para cromatografia em coluna de baixa
pressão utilizando troca iônica e gel permeação
• Espectrofotômetros
• Contadores automáticos celulares
pequenas variações de concentração do analito
C) Especificidade -> capacidade do método perceber a
substância que se quer analisar sem confundir com
outra
D) Precisão -> capacidade do método analítico produzir
resultados repetitivos quando uma amostra é analisada
várias vezes. Quanto mais próximos os resultados mais
precisos será
E) Exatidão -> capacidade do método analítico de produzir
resultados próximos do valor real
F) Baixo custo em relação aos outros procedimentos
analíticos
G) Segurança
ENERGIA RADIANTE
• Comprimento de onda -> medido em nm ou A° -> é a menor
distância entre 2 picos ou vales consecutivos
• Espectro eletromagnético -> região do visível

FOTOMETRIA

• CONCEITO -> fotometria é a medida da luz proveniente de

um objeto
→ Muitas determinações realizadas nos laboratórios
clínicos são baseadas na quantificação da energia •
radiante absorvida ou transmitida em condições
controladas
→ O termo fotômetro é usado frequentemente em
termos genéricos como qualquer instrumento que
quantifica a intensidade das luzes
• ESPECTROFOTÔMETRO -> quantifica a absorção da luz
monocromática produzida por uma grade monocromática
• FOTÔMETRO DE CHAMA -> quantifica a luz emitida por um
único átomo queimado em uma chama
• FOTÔMETRO DE ABSORÇÃO ATÔMICA -> quantifica a luz
absorvida pelos átomos dissociados pelo calor •

VANTAGENS DA FOTOMETRIA ENERGIA RADIANTE E PROCESSOS FOTOMÉTRICOS

A) Facilidade de execução da medida fotométrica – rapidez • As partículas quando muito pequenas não tem a capacidade
-> mais fácil de se fazer a fotometria que uma de refletir energia -> elas a absorvem completamente
titulação • O aumento da concentração (variação da concentração) leva
a uma diminuição (variação) da energia emergente
• OBS -> a quantidade de energia absorvida por uma
substância é proporcional à sua concentração

LEIS DA FOTOMETRIA

• LEI DE LAMBERT-BEER -> estabelece que a concentração de

uma substância é diretamente proporcional à quantidade de
luz absorvida ou inversamente proporcional ao logaritmo da
luz transmitida

•
• Se a concentração é zero -> A=0 e T=100%
• Se a concentração é máxima, A será máxima (absorve toda
a luz) e T será mínimo

LIMITAÇÕES DA LEI DE LAMBERT-BEER

• Será obedecida apenas se:

→ A radiação incidente for monocromática
→ A absorção do solvente for insignificante se comparada com
a absorbância do soluto
→ A concentração do soluto estiver dentro dos limites da
linearidade
→ Não ocorrer uma reação química entre as moléculas de
interesse e outras moléculas de interesse e outras
moléculas de soluto e solvente