Controlo de Qualidade

de Radiofármacos

Lurdes Gano
lgano@itn.pt

ITN/ Unidade de Ciências Químicas e Radiofarmacêuticas

Abril 2009
 Qualidade
Preparação Farmacêutica Segurança

Eficácia
Radiofármaco < > Prep. Farm. Características Particulares:
 Período validade curto
 Massas de ligando reduzidas
 Dose radiação para pessoal

- Critérios de qualidade de outros fármacos

(administração parenteral)

- Difícil preparar, testar e conhecer resultado IMPORTANTE

antes da adm. (ex: Esterilidade)

- Testes não garantem totalmente a qualidade Programa Garantia Qualidade

do radiofármaco

- Qualidade ⇒ pessoal especializado, testes e

condições experimentais validados
Vias de administração de Radiofármacos

 Administração intravenosa
(predominante)

 Administração oral

 Inalação
Classificação dos radiofármacos

Radiofármacos “ready for use”

Radionuclidos T1/2 longo
Formulações estáveis

Radiofármacos semi-preparados
Kits
Percursores
Geradores de radionuclidos

Radiofármacos preparados “in-house”

Radionuclidos T1/2 pequeno (gases radioactivos; RF PET)
Produtos instáveis ou não comercializados
Amostras biológicas doente (GV, GB, plaquetas)
 Garantia de Qualidade

Conjunto de todos os procedimentos realizados de modo seguro e eficaz

com o objectivo de garantir a qualidade final dos radiofármacos para
aplicação clínica

• Pessoal
• Equipamento
• Documentação
• Produção
• Controlo de Qualidade < > apenas parte do
programa de Garantia de Qualidade
 Radiofármaco Prep. Farm. Características Particulares

Controlo de qualidade ⇒ Testes validados e bem definidos

Good Laboratory Practice (lab. Credenciados):
• Padrões
• Equipamento calibrado por rotina
• Instalações adequadas
Rotina Clínica ⇒ Testes rápidos e discriminativos
Testes necessários mas insuficientes para garantir a qualidade

IMPORTANTE

Programa Garantia Qualidade

 Programa Garantia Qualidade
Conceito relativo a tudo o que se relaciona com a qualidade do radiofármaco
Garantia de Produção e Qualidade deve seguir:
1) GRP (Boas práticas Farmacêuticas + Protecção Radiações)
2) Documentação
3) Protocolos Individuais de Lote

Garantia de Produção e Qualidade conforme sistema

1) Bem definido;
2) Documentado;
3) Em vigor por rotina por pessoal competente;
4) Controlado periodicamente com RELATÓRIO
 Programa de Garantia Qualidade

Normas “Good Radiopharmacy Practice”

Não são específicas de um fármaco

Sistema de qualidade para um grupo de fármacos (avalia eficiência
relativamente à qualidade e quantidade)
Controlo de qualidade da produção + Preparação hospitalar
Directivas para RF só diferem devido à protecção contra radiação
Directivas Europeias: EU guidelines e Pharmaceutical Inspection
Convention guidelines, PIC ( Idênticas; Portugal aderiu a ambas)
Inspecções hospitalares
 Programa de Garantia Qualidade
Farmacopeias

 Específicas de um fármaco;
 Definem métodos analíticos, embalagem, composição,
monografia;
 Lei nos países aderentes Convenção Europeia da Farmacopeia;
 Radiofármacos têm de obedecer às monografias.
 Radiofármacos

Especificações dependem de radiofármaco para radiofármaco:

 Concentração radioactiva
(radioactividade/ unidade volume)
 Radionuclido
 Pureza radionuclídica
 Pureza radioquímica
 Impurezas químicas
 Tamanho de partículas
 Esterilidade
 Pirogenia
 Biodistribuição
 Programa de Garantia Qualidade
Documentação contendo Procedimentos Gerais
Descrição detalhada:
Métodos de preparação;
Composição qualitativa e quantitativa;
Controlo de matérias primas;
Controlo da preparação final;
Testes de Estabilidade;

Procedimento standardizado
(manual detalhado da produção, formulação, análise, armazenamento
e documentação)
Protocolos Individuais de Lote de Produção
 Programa de Garantia Qualidade

Controlo de Qualidade das Matérias Primas

 Matéria Prima – Todos os constituintes dos radiofármacos incluindo

frascos, rolhas

 Lotes identificados, analisados e documentados

 Protocolos analíticos documentados (Farmacopeia ou ensaios validados

e de qualidade comprovada)

 Descrição típica:
típica nome, método de identificação e pureza, estabilidade,
validade e características físico -químicas
 Autorização de Comercialização

Produção GMP

Ingredientes e material de embalagem (testes validados)

Validade e análise de produto final (testes validados)

Estudo do processo de preparação a nível hospitalar

De acordo com especificações da farmacopeia

 Programa de Garantia Qualidade
- RADIOFARMÁCIA -

Filosofia idêntica aos outros locais de produção (centros de

PET e indústria)
RF “ready for use”- responsável produtor
Documentação, registo, observação de eventuais danos e radioactividade

RF semi-preparados – responsável produtor + hospital

Documentação e registo
Protocolos de marcação; Controle de qualidade; instalações; câmaras de fluxo
laminar (cond. amb.)

RF “in-house”- responsável hospital

Mesmas regras dos outros produtores
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associado à Radioactividade

Testes de radioactividade
Equipamentos calibrados
Fontes de Erro:
•Geometria da fonte
•Background
•Eficiência da câmara de ionização (dependente da energia)
•Actividade da fonte
•Impurezas do radionuclido
(Testes diários – background, Auto-zero, Voltagem)
(Testes periódicos – Linearidade por decaimento e proporcional, Factor
geométrico, Exactidão - Fontes padrão)

Determinação radioactividade referida ao tempo

Exprimir em concentração radioactiva
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associado à Radioactividade

Identificação do Radionuclido
Determina:
 Dose de radiação
 Biodistribuição
 Qualidade de imagem
 Eficácia terapêutica
- Determinação da Semi-vida (mais moroso mas menos exigente em
equipamento)

λ= declive
T1/2= ln2/ λ

- Medição da energia de radiação - Espetrometria gama utilizando detector

semicondutor Ge/Li (espectro gama e de raios x de radionuclideo é único para cada
nuclideo e caracterizado pela E e nº de fotões emitidos por transformação) ou de
NaI(
NaI(Tl)
Tl)
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associado à Radioactividade

Pureza Radionuclídica – proporção de radioactividade devida ao radionuclido

relativamente à radioactividade total da fonte. Expressa-se geralmente em %.
-Espetrometria gama utilizando detector semicondutor Ge/Li

137Cs

-Truques como atenuação γ 99Mo/ 99mTc – Deve manter-se no período de validade.

99Mo keV)/ 99mTc (141 keV)
(739 keV)/ keV)
 Detectar Impurezas T1/2 longo
 Importante Processo de Produção nas impurezas radionuclídicas
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Pureza Radioquímica - fracção de radioactividade relativa ao radionuclido na forma

química desejada relativamente à radioactividade total. Expressa-se geralmente em %.
Afecta biodistribuição do radiofármaco e qualidade de imagem (background)
background)

Determinação requer SEPARAÇÃO analítica/ detecção Radioactiva (radiocromatógrafo

(radiocromatógrafo,,
contador γ, calibrador doses)

ORIGEM DAS IMPUREZAS RADIOQUíMICAS:

Produção do radionuclido
Alterações químicas na armazenagem e transporte (luz, pH, Φ)
Presença de agentes oxidantes ou redutores
Marcação deficiente
Purificação incompleta
Radiólise

Determinação por métodos analíticos de separação

Cromatografia em papel ou camada fina (TLC e ITLC)
Cromatografia em coluna (Troca iónica, exclusão molecular,
HPLC, SEP)
Eletroforese
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Determinação da Pureza Radioquímica

Impurezas Radioquímicas:
1) Radionuclido livre:

I- (Rf- 123/131I)

IO3- (Rf- 123/131I)
In3+ (Rf-111In)
Cr3+ (cromato de sódio-51Cr)
TcO4- (Rf-99mTc)
Sm3+ /Lu3+(Radiolantanideos)

2) Formas coloidais:
99mTc hidrolisado: 99mTcO ; 99mTc-Sn(OH)
2 2

3) Complexos secundários (HMPAO, ECD)

4) Espécies radioquímicas resultantes de decomposição

Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Determinação da Pureza Radioquímica

Cromatografia em papel ou camada fina (TLC e ITLC)
Separação dos constituintes da mistura por interacção com a fase estacionária e
diferente solubilidade na fase móvel.
Caracterização por Rf – razão entre a distância percorrida pela espécie
radioquímica e a frente de solvente.
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Determinação da Pureza Radioquímica

Artefactos da cromatografia em papel e ITLC

 Interacção com fase sólida (aquecimento da gota);
 Contaminação da fase estacionária;
 Contacto com as paredes húmidas da tina;
 Fase móvel pouco adequada;
 Fase móvel contaminada;
 Contaminação na manipulação (pinça ou tina);
 Aplicação da amostra incorrecta;
 Volume excessivo de fase móvel;
 Alteração da composição da fase móvel por evaporação
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Determinação da Pureza Radioquímica

Electroforese
Separação baseada na migração de espécies carregadas em solução num suporte
saturado com um electrólito quando submetidas a um campo eléctrico.
Espécies catiónicas migram para o pólo negativo (cátodo) e aniónicas para o pólo
positivo (ânodo)
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Determinação da Pureza Radioquímica

Cromatografia de Filtração por Gel

Separação de acordo com peso molecular. Cada composto possui um volume de
eluição bem definido para determinada fase estacionária e determinado eluente.
eluente.

Cromatografia por Troca iónica

Separação com base na troca entre iões da solução e de uma resina iónica
Purificar impurezas carregadas
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Determinação da Pureza Radioquímica

HPLC
Princípios da cromatografia líquida com maior resolução (dimensões das
partículas muito reduzidas ⇒ Maior área superficial) <> Separação mais
eficiente
Colunas de Fase Normal, Fase Reversa, Permeação por gel e Troca iónica
Muito utilizada no desenvolvimento de novos radiofármacos
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Determinação da Pureza Radioquímica

Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Determinação da Pureza Radioquímica

Coluna Hypersil ODS C18;

CH3CN/TFA 0.1%; 1 ml/min
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Determinação da Pureza Radioquímica

SEP
Do inglês “solid phase extraction”- boa separação,
rápido, baixo custo

Procedimento geral:

1) “Activar” 2-5 ml de etanol ou metanol

2) Aplicar 2-10 ml solvente da preparação
3) Aplicar uma gota do radiofármaco
4) Eluir sequencialmente com 2 a 3 solventes e recolher as fracções
separadamente
5) Passar ar na coluna para remover resíduos de solvente
6) Medir actividade em cada fracção e na “cartridge”
7) Calcular pureza radioquímica

Radioactividade solv. prep./ Radioactividade Total

 Tipos de Radionuclidos /Actividade Específica

Carrier-Free (Sem Arrastador): Só está presente o radioisótopo em

causa; ausência de isótopos estáveis do elemento
ex:201Tl, 111In

Non-Carrier Added/n.c.a (Sem Adição de Arrastador): encontram-se

presentes isótopos estáveis do elemento, mas que não foram
incluídos intencionalmente durante a produção do radionuclido.
ex: 99mTc, 131I

Carrier Added (Com Adição de Arrastador): encontram-se presentes

isótopos estáveis do elemento que foram incluídos intencionalmente
durante a produção do radionuclido.
ex: 186Re, 153Sm
Controlo de Qualidade de Radiofármacos Associados à Radioactividade

Controlo de Qualidade de Radiofármacos

Actividade Específica
Radioactividade do núclido por unidade de massa da forma química pretendida.
pretendida
Actividades Específicas Elevadas Radiofármacos Bioespecíficos

Radiólise
Calculada através da concentração radioactiva e da concentração da espécie
química desejada.
Referir ao tempo (pode mudar)
“Carrier free”- não se altera, a radioactividade só se deve ao composto
radioactivo.
Não “carrier free” – Diminui com o tempo pois a radioactividade está
“diluida” em espécies com a mesma forma química.
Controlo de Qualidade de Radiofármacos
Testes Físico- Químicos

Aspecto físico
(cor, turvação, partículas em suspensão)
Agregados e colóides
pH (2 – 9)
Pureza Química
Quantificação do ligando, estanho total e estanoso
Impurezas (alumínio)
Presença de percursores
Resíduos de solventes
 Isotonicidade
Controlo de Qualidade de Radiofármacos
- Tamanho de partículas –
Radiofármacos para estudos de perfusão
pulmonar

Medição do tamanho e número das partículas em hemocitómetro/microscópio óptico

200 000 – 500 000 partículas/injecção

20-80µm < 10µm/ > 100µm/ retenção arteriolar

RES
Controlo de Qualidade de Radiofármacos
- Tamanho de partículas –
Radiofármacos coloidais para visualização
RES

30nm - 3µm

RES Partículas grandes Nódulo sentinela (20-30 nm)

 Controlo de Qualidade de Radiofármacos
Testes biológicos
- Distribuição Biológica -

Teste da qualidade final do Radiofármaco

 Desenvolvimento de Novos Radiofármaco

Caracterização de determinadas preparações
 Controlo de um lote
 Relação Estrutura Química/ Biodistribuição mal conhecida
(colóides, difosfonatos)
 Estrutura conhecida do complexo – análise fisico-química
Controlo de Qualidade de Radiofármacos
Testes biológicos
- Distribuição Biológica -

Mínimo 3 animais (2 devem satisfazer especificações)

Animais c/ fenótipo normal

Animais transgénicos

SPECT; PET; Autoradiografia

Medição radioactividade nos tecidos

 Controlo de Qualidade de Radiofármacos
Testes biológicos
- Ensaio de Esterilidade -
 Preparação em condições que garantam ausência de contaminação
microbiana (trabalhar com técnicas assépticas em ambiente limpo);
Dificuldade dos ensaios (morosos, exposição a radiação, lotes
pequenos);
Garantia de esterilidade (ensaios retrospectivos do radiofármaco
ou eluído)
Técnica de inoculação directa em meio líquido ou filtração por
membrana com controlo positivo e negativo

Meio de tioglicolato (bactérias anaeróbias)

Meio de soja e caseína (fungos e bactérias aeróbias)
24 h até 7 dias/ 37 ºC
 Controlo de Qualidade de Radiofármacos
Testes biológicos
- Pirogénios -

PIROGÉNIOS = Endotoxinas bacterianas, lipopolissacáridos das

membranas celulares das bactérias Gram -
São solúveis em água Provocam Febre
Resistentes ao calor Leucopenia
Filtráveis Dores nas articulações e cabeça
Limite admissível – 5 EU/ kg/ h
Única hipótese segura – Garantir a ausência de Pirogénios durante a
preparação do radiofármaco
 Material de vidro e Equipamento possível (200º C/ h)
 Água para injectáveis tipo 2
 Controlo de Qualidade de Radiofármacos
Testes biológicos
- Pirogénios -

Técnica “in vivo” – Teste dos coelhos (método standard)

Técnica “ in vitro” – Lisado de limulus amebócito

Endotoxinas ⇒ Formação Gel
 Evita utilização de animais
 Mais sensível, fácil, barato
 Eficaz
Aprovado para testar radiofármacos
 Só detecta alguns tipos de pirogénios
 Muitos falsos positivos
 Condições experimentais, moroso
Controlo de Qualidade de Geradores de Radionuclidos
 Presença de radioactividade associada ao radionúclido-pai
Equilíbrio Secular Equilíbrio Transitório
Medição radioactividade após eluição e 10 x T1/2 Espectrometria gama

 Presença outros radionuclidos

Depende processo de produção

 Derrame de material da coluna do gerador

Derrame da coluna
⇒Impurezas radioquímicas, acumulação RES

 Produtos de Radiólise (efeito ionizante da radiação ⇒ Processos

Oxidativos; libertação radionuclido-pai, material da coluna,...)
 Impurezas Radioquímicas
 Perfil de Eluição

A
Aumento do tamanho da coluna

Maior Volume de Eluição

Diminuição da
Concentração Radioactiva
V

5 ml de NaCl 0,9% Eluição completa do 99mTcO4-

 Equilíbrio Transitório 99Mo/99mTc
(T 1/2 99Mo/ T 1/2 99mTc = 11)
99Mo
! - 87,6% 99mTc
66 h Em situação de equilíbrio
!-
TI 6,02 h
12,4%

99Tc !99mTc - !99Mot

(A99mTc)t = (A99Mo)0 e
!99mTc - !99Mo
!-
2.105 a !99mTc= 0,1155 h-1
!99Mo= 0,0105 h-1
99Ru, estável
- 0,0105t
(A99mTc)t = 1,1 x (A99Mo)0 e

Apenas 87,5 % do 99Mo decai para 99mTc

- 0,0105t
(A99mTc)t = 0,875x1,1x (A99Mo)0 e
 Eluição diária do Gerador

Actividade Máxima !99mTc

ln !
dATc 99Mo
=0 t= t = 22,8 h
dt !99mTc - !99Mo
 Actividade Específica do 99mTc

• 99Mo e 99mTc

decaem para 99Tc

• No eluido há sempre
99mTc e 99Tc

• Teor em 99Tc

• Tempo entre eluições

• Idade do eluído
 Teor em 99mTc do eluido
N99mTc Fracção molar de 99mTc
F99mTc = ; F99mTc =
N99mTc + N99Tc

0.87!99Mo(exp(-!99Mot)-exp(!99mTct))
F99mTc =
(!99Mo-!99mTc)(1-exp(-!99Mo))
 Importância da Actividade Específica

Competição do 99Tc com 99mTc Cinética das reacções

Problemas na Marcação de Alguns Kits

Diminuição do Rendimento de Marcação

Alteração do Comportamento Biológico
 Eluição do Gerador: Factores a ter em conta

 Actividade do 99Mo (fornecida pelo fabricante)

 Rendimento de eluição (geralmente entre 85-95%)

 Volume de eluído

 Regime de eluição; intervalo entre eluições:

- Actividade Máxima é atingida ~24 h após

eluição prévia

- Eluição diária garante obtenção de 99mTc com

maior actividade específica
Controlo de Qualidade de Gerador de 99mTc
Presença de Mo-99
Presença de quantidade elevada de Tc-99 (crítico em determinados kits)
Desintegração directa do Mo-99
Desintegração do Tc-99m
Tempo entre eluições

 Produtos de Radiólise
Peróxidos e oxidantes em actividades elevadas

 Presença de Alumínio e outros colóides

Derrame da coluna
⇒Impurezas radioquímicas, acumulação RES

 pH
 Impurezas Radioquímicas
Tecnécio hidrolisado 99mTcO ou colóide de 99mTc adsorvidos ao alumínio
2

MeOH : H2O/ Whatman ou ITLC/ MEK

Controlo de Qualidade de Gerador de 99mTc
 Pureza Radionuclídica ⇒ dose de Radiação

Radionuclido Limite
99Mo 0,1%

I
131 0,005%

103Ru 0,005%

89Sr 0,00006%

90Sr 0,000006%

Emissores α 0,0000007%
 Controlo de Qualidade de alguns Radiofármacos

 Colóides de Estanho e Enxofre (biodistribuição; impureza radioquímica:

99mTcO -)
4

Macroagregados de albumina (observação ao microscópio e biodistribuição;

impureza radioquímica: 99mTcO4-)

Bisfosfonatos-99mTc (mistura complexa – produto final mal caracterizado)

MAG3-99mTc e Sestamibi-99mTc (eficiência de marcação dependente do

procedimento)

HMPAO-99mTc (eficiência de marcação < 90 %)

Marcação de células sanguíneas (Programa de GARANTIA de QUALIDADE)

Iodação de Proteínas (Programa de GARANTIA de QUALIDADE)

Pureza Radioquímica de Radiofármacos-99mTc

 DTPA-99mTc
 ITLC-SG ou Whatman 3MM/ acetona → 99mTcO4- Rf = 1,0

ITLC-SG ou Whatman 3MM/ NaCl 0,9% → 99mTcO2 Rf = 0,0

 HMPAO-99mTc
 ITLC-SG/ Metiletilcetona → Complexo-99mTc; 99mTcO4- Rf = 1,0
ITLC-SG/ NaCL 0,9% → 99mTcO - Rf = 1,0
4

Whatman Nº 1/ Acetonitrilo 50% → 99mTcO2 Rf = 0,0

HPLC – coluna PRP; solv.

solv. A tampão fosfato 20 mM pH 7.4; solv.
solv. B t
Tetrahidrofurano;
Tetrahidrofurano; gradiente 0 – 25% B em 6 min.
min.

Extracção com Sep-Pak – eluido em etanol

solvente aquoso – NaCl 0,9%