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EXPERINCIA N 5
CROMATOGRAFIA EM PAPEL
1. INTRODUO
Uma das tcnicas de separao bastante utilizada a cromatografia. Esta tcnica
foi desenvolvida por Michael Tswett (botnico russo), no comeo do sculo XX,
passando atravs de uma coluna cromatogrfica preenchida com carbonato de clcio
(CaCO3), pigmentos extrados de plantas.
Cromatografia uma tcnica utilizada para analisar, identificar ou separar os
componentes de uma mistura. A cromatografia definida como a separao de dois ou
mais compostos diferentes por distribuio entre fases, uma das quais estacionria e a
outra mvel.
A mistura adsorvida em uma fase fixa, e uma fase mvel "lava" continuamente
a mistura adsorvida. Pela escolha apropriada da fase fixa e da fase mvel, alm de
outras variveis, pode-se fazer com que os componentes da mistura sejam arrastados
ordenadamente. Aqueles que interagem pouco com a fase fixa so arrastados facilmente
e aqueles com maior interao ficam mais retidos.
Os componentes da mistura adsorvem-se com as partculas de slido devido a
interao de diversas foras intermoleculares. O composto ter uma maior ou menor
adsoro, dependendo das foras de interao, que variam na seguinte ordem: formao
de sais > coordenao > ligao de hidrognio > dipolo-dipolo > Van der Waals.
Dependendo da natureza das duas fases envolvidas tem-se diversos tipos de
cromatografia:
- slido-lquido (coluna, camada fina, papel);
- lquido-lquido;
- gs-lquido.
As substncias cujas molculas so polares interagem mais intensamente com
solventes polares. As substncias apolares tm mais afinidade com solventes apolares.
Assim, variando a polaridade do solvente, ou misturas de solventes, podem-se separar
os componentes de uma amostra.
A tcnica que iremos utilizar nesta
experincia a cromatografia de papel, onde a
fase estacionria o papel, sobre o qual
Grampo colocada a amostra. O papel com a amostra
colocado em um bquer fechado, com solvente
suficiente para molhar apenas a parte inferior do
Origem papel, no tocando a amostra, conforme a figura
ao lado. O solvente sobe pelo papel separando os
Solvente componentes da mistura.

Da mesma maneira que uma toalha de papel absorve gua, o solvente (eluente
ou fase mvel) se mover para cima no papel (fase estacionria), por capilaridade. As
manchas dos componentes da mistura que so menos adsorvidos ao papel deslocam-se
mais do que os componentes mais adsorvidos ao papel.
A razo entre a distncia percorrida pelo composto e pela distncia percorrida
pela mancha constante e denotado por Rf, ou seja,
Rf

C
S

onde,

C = distncia percorrida pelo composto, da origem ao centro da mancha

S = distncia percorrida pelo solvente da origem a linha superior
(linha do solvente).
1.1- CROMATOGRAFIA EM COLUNA:
A cromatografia em coluna uma tcnica de partio entre duas fases, slida e
lquida, baseada na capacidade de adsoro e solubilidade. O slido deve ser um
material insolvel na fase lquida associada, sendo que os mais utilizados so a slica gel
(SiO2) e alumina (Al2O3), geralmente na forma de p. A mistura a ser separada
colocada na coluna com um eluente menos polar e vai-se aumentando gradativamente a
polaridade do eluente e consequentemente o seu poder de arraste de substncias mais
polares. Uma seqncia de eluentes normalmente utilizada a seguinte: ter de
petrleo, hexano, ter etlico, tetracloreto de carbono, acetato de etila, etanol, metanol,
gua e cido actico.
O fluxo de solvente deve ser contnuo. Os diferentes componentes da mistura
mover-se-o com velocidade distintas dependendo de sua afinidade relativa pelo
adsorvente (grupos polares interagem melhor com o adsorvente) e tambm pelo eluente.
Assim, a capacidade de um determinado eluente em arrastar um composto adsorvido na
coluna depende quase diretamente da polaridade do solvente com relao ao composto.
medida que os compostos da mistura so separados, bandas ou zonas mveis
comeam a ser formadas; cada banda contendo somente um composto. Em geral, os
compostos apolares passam atravs da coluna com uma velocidade maior do que os
compostos polares, porque os primeiros tm menor afinidade com a fase estacionria.
Se o adsorvente escolhido interagir fortemente com todos os compostos da mistura, ela
no se mover. Por outro lado, se for escolhido um solvente muito polar, todos os
solutos podem ser eludos sem serem separados. Por uma escolha cuidadosa das
condies, praticamente qualquer mistura pode ser separada (figura 1).

Figura 1: Cromatografia em coluna.

Outros adsorventes slidos para cromatografia de coluna em ordem crescente de

capacidade de reteno de compostos polares so: papel, amido, aucares, sulfato de
clcio, slica gel, xido de magnsio, alumina e carvo ativo. Ainda, a alumina usada
comercialmente pode ser cida, bsica ou neutra. A alumina cida til na separao de
cidos carboxlicos e aminocidos; a bsica utilizada para a separao de aminas.

2- MATERIAL
Caneta hidrocor
Bquer 100 mL e 50 mL
Coluna cromatogrfica
Slica gel

Papel filtro
1-butanol, etanol
cido actico 50%
Basto de vidro

3. PROCEDIMENTO:
3.1. Tinta de caneta hidrocor
-

Utilizando uma rgua, trace uma linha reta com um lpis a 1,5 cm da extremidade do
papel. Marque seis pontos eqidistantes com o lpis ao longo da reta, numerando-os
de 1 a 6.

Faa pequenos pontos com cada uma das canetas seguindo a ordem das cores.

Enrole o papel na forma de um cilindro e coloque grampos para manter a forma de

cilindro.
Obs: deixe um pequeno espao ( 1mm) entre as duas extremidades de forma a no
se tocarem.

Coloque esse cilindro de papel no bquer contendo a mistura de solventes na

proporo 1:1:1 de etanol/1-butanol/amnia 2 mol L-1.

Cubra o bquer com um plstico para evitar a evaporao da mistura solvente.

- Quando a linha do solvente estiver quase alcanando a extremidade superior ( 1 cm)

do papel, remova-o do bquer e marque a posio da linha do solvente com um
lpis, antes que o solvente evapore.
- Remova os grampos e deixe-o secar naturalmente.
- Depois de seco faa um circulo com um lpis ao redor de cada mancha.
3.2- CROMATOGRAFIA EM COLUNA:
3.2.1- EMPACOTAMENTO DA COLUNA: Prepare uma coluna para
cromatografia utilizando slica gel neutra como fase fixa, da seguinte maneira: agite
com um basto em um bquer, 15 a 20 g de slica gel em etanol, at obter uma pasta
fluida, homognea e sem bolhas de ar includas. Encha a tera parte da coluna
cromatogrfica com etanol e derrame, ento, a pasta fluida de slica gel, de modo que
ela sedimente aos poucos e de forma homognea. Caso haja bolhas de ar oclusas na
coluna, golpeie-a suavemente, de modo a expuls-las. Controle o nvel do solvente
abrindo ocasionalmente a torneira da coluna. Terminada a preparao, o nvel de etanol
deve estar 0,5 cm acima do topo da coluna de silica.
3.2.2- SEPARAO DOS COMPONENTES DE UMA MISTURA:
Distribua homogeneamente sobre o topo da coluna de alumina, com auxlio de uma
pipeta ou conta-gotas, 1 mL de uma soluo etanlica de alaranjado de metila e azul de
metileno. Aps a adsoro pela coluna, proceda a eluio com etanol, vertendo
cuidadosamente o solvente pelas paredes internas da coluna, tomando cuidado para no
causar distrbios ou agitao na coluna. Ao mesmo tempo, abra a torneira para escoar o
solvente.

Aps eluir todo o alararanjado de metila com etanol. Elua, com gua, o azul de
metileno retido na coluna e em seguida com uma soluo aquosa de cido actico
(50%).
Questo 1- A alumina, ou xido de alumnio, tem ao bsica e interage
fortemente com espcies cidas; por sua vez, a slica gel interage com espcies bsicas
devido a natureza cida do xido de silcio. Baseado nessas informaes, explique o
comportamento distinto dos dois corantes empregados quando se usa alumina ou slica
como fase fixa. A estrutura dos dois produtos est apresentada abaixo:
SO3H

N
CH3

CH3

CI

CH3

CH3

N N

Azul de Metileno
CH3 N
CH3

Alaranjado
de metila

4- REFERNCIAS
1. ATKINS, P.; JONES, L. Princpios de Qumica: questionando a vida
moderna e o meio ambiente - 3 edio-2006; editora Bookman;
2. EWING, G.W.; Mtodos Instrumentais de Anlise Qumica, vol. 1 e 2, Ed.
Edgard Blcher, 2a ed., So Paulo, 1985.
3. SKOOG, D.A.; HOLLER, F. J.; NIEMAN, T. A. Princpios de Anlise
Instrumental. 5a. ed. Porto Alegre: Bookman, 2002.