Anlises Qumicas

. Mdulo n. 14

Cromatografia em camada fina (TLC) Laboratrio Online

A cromatografia em camada fina
(TLC, thin-layer chromatography)
um mtodo simples, rpido e barato de
se obter uma resposta rpida quanto
composio qumica de uma dada
mistura.
As placas de TLC so folhas de vidro,
metal ou plstico, cobertas com uma fina camada de um adsorvente slido, normalmente slica ou xido
de alumnio. Uma pequena quantidade de amostra a analisar colocada junto base da placa, atravs da
utilizao de um capilar de vidro. Depois de carregada, a placa ento colocada na vertical, sobre uma
pequena poro de um eluente adequado (de forma a que a zona basal contacte com o lquido), numa
cmara saturada com o mesmo eluente.
O eluente a fase mvel sobe lentamente sobre a placa, por
ao de capilaridade. medida que o solvente se desloca ao
longo da placa, um equilbrio estabelecido para cada
componente da mistura, entre as molculas que se encontram
adsorvidas no slido e as que se encontram em soluo. Em
princpio, os componentes iro diferir na solubilidade e na
fora da sua adsoro matriz da placa, pelo que alguns
componentes iro migrar mais que outros.
Quando o eluente chega ao topo da placa, a placa removida da cmara de desenvolvimento, o solvente
evaporado e os componentes separados so visualizados. Se os compostos forem corados, a
visualizao pode ser feita a olho nu. Mas normalmente os compostos no so corados, sendo analisados
sob luz UV (a placa contm um compostos que fluorescem com a radiao UV (toda a placa encontrarse- fluorescente, excepo dos locais onde os componentes se encontram).
Quando se trata de escolher o eluente mais apropriado para a mistura em questo, deve-se testar
diversos solventes, variando-os de acordo com a sua polaridade. Os resultados dos vrios testes devem
ser observados e registados, para avaliar qual o sistema de eluio que melhor separa os componentes da
mistura.
Os resultados obtidos por TLC so, normalmente, usados para determinar-se as melhores condies para
as cromatografias em coluna. Dado ser muito mais rpido, a cromatografia em camada fina usada para
avaliar-se o melhor solvente a usar nas cromatografias em coluna. Por exemplo, para determinar-se o
sistema de eluio mais adequado para o procedimento de flash chromatography, o ideal que o
solvente (ou mistura de solventes) origine valores de R de 0,25-0,35 e que separe um composto dos seus
vizinhos por uma diferena de valores R de, pelo menos, 0,20.
1
f

O sistema de eluio deve ter em considerao e parmetros:

toxicidade, custo e inflamabilidade. Os solventes mais usados
so os hexanos (teres de petrleo) e acetato de etilo. O dietil
ter tambm pode ser usado, mas muito inflamvel e voltil.
lcoois (metanol, etanol) e acetona tambm podem ser usados.
Cloreto de metileno e/ou clorofrmio (hidrocarbonetos
halogenados) so bons solventes, mas devem ser evitados
sempre que possvel, devido sua toxicidade. Se dois solventes
forem igualmente bons eluentes e tiverem toxicidades similares, o mais voltil deve ser escolhido, uma
vez que o que pode ser evaporado com maior facilidade. Nos testes preliminares, deve-se misturar um
solvente apolar (hexanos) com um solvente polar (acetato de etilo ou acetona) em diferentes propores,
para criar sistemas mais e menos polares. De seguida, deve-se preparar a cmara de desenvolvimento.
Deve-se colocar o solvente na cmara (um compartimento fechado, como um frasco, ou um gobel com
um vidro de relgio), de forma a que a altura do lquido no seja superior a 0,5 cm. Para facilitara a
saturao da cmara, deve-se colocar uma tira de papel de filtro na vertical.
As placas devem ser preparadas consoante o nmero de amostras e consoante a situao a testar. Estas
costumam vir em folhas de 520 cm, pelo que podem ser cortadas em tamanhos diferentes. As placas
devem ser manuseadas com cuidado, para no danificar nem sujar a camada do adsorvente.
Deve-se traar, com um lpis, uma linha horizontal paralela a cerca de 0,5 cm da base da placa, sem
pressionar com muita fora. Abaixo da linha, marcar levemente o nome das amostras que se pretende
avaliar, deixando bastante espao entre as amostras, para no haver sobreposies. Devem analisar-se
at 4 amostras numa placa de 5cm de largura.
Se a soluo no se encontrar em soluo, deve-se dissolver o composto numa pequena quantidade de
solvente voltil (como hexano ou acetato de etilo), normalmente cerca de 1 mg em 1 mL de solvente.
Usando um microcapilar, recolhe-se a amostra mergulhando-o na soluo. Depois, gentilmente, tocar
com a ponta do capilar no local apropriado da placa de TLC, evitando que saia muita amostra e que o
ponto fique muito grande.
Depois de pronta a placa, esta colocada na cmara de desenvolvimento, de forma a que no contacte
com o papel de filtro e que se mantenha na vertical. Fecha-se a cmara e deixa-se a eluir at que a fase
mvel chegue at cerca de 1cm do topo da placa. Quando atingir essa altura, remove-se imediatamente a
placa da cmara, marca-se com o lpis a linha do eluente e deixa-se secar antes de se visualizar.
Se existirem algumas manchas com cor, deve-se circul-las
levemente com um lpis. Normalmente as manchas no so
coradas, pelo que tem que se recorrer iluminao por UV.
Coloca-se a placa sob a lmpada de UV e marca-se as
manchas com um lpis, tendo o cuidado de no expor em
demasia a pele radiao UV (usar sempre luvas!).
O fator de reteno, R , definido como a distncia
percorrida pelo composto dividida pela distncia percorrida
f

pelo eluente.
O valor de R de um composto constante entre experincias se as seguintes condies da cromatografia
tambm se mantiverem constantes: sistema de eluio; adsorvente; espessura da camada do adsorvente;
2
f

quantidade de amostra aplicada na placa; e temperatura. Como estas condies so difceis de se manter
constantes entre experincias, geralmente so considerados os valores de R relativos. R relativo
significa que o valor associado a um padro, ou significa que os valores de R foram comparados com
um determinado composto corrido em todas as placas, ao mesmo tempo. Quanto maior o fator de
reteno, maior a distncia que a substncia percorrera na placa. Quando se compara dois valores de
R em condies idnticas, o composto com maior fator de reteno menos polar, pois interage menos
com o adsorvente polar. Os valores de R tambm podem fornecer evidncias corroborativas na
identificao de um composto. Se duas substncias tiverem o mesmo R , provvel (mas no certo) que
sejam o mesmo composto. Se tiverem valores diferentes, tratam-se definitivamente de compostos
diferentes.
f

(http://www.fciencias.com/2015/03/12/cromatografia-em-camada-fina-tlc-laboratorioonline/)