2) Prepato do extrato
Retirou-se toda a nervura das folhas de espinafre
Cromatografia em coluna (CC): Extrao
e fracionamento de pigmentos vegetais
Introduo
A cromatografia em coluna uma tcnica para
identificao, separao e purificao de substncias
qumicas. Esta tcnica consiste em montar uma fase
estacionria, composta por um slido poroso, em uma
coluna de cromatografia e ento usar um solvente
adequado, chamado de fase mvel, para eluir os compostos
qumicos atravs desta fase estacionria, e uma tcnica
bastante aplicvel quando as susbtncias que se deseja
separar possuem solubilidade e ponto de fuso ou ebulio
semelhantes.
Figura 1. Representao de uma cromatografia em
coluna.
A tcnica baseia-se na diferena de velocidade
com que as substncias qumicas se movem pela fase
estacionria quando arrastadas pelo solvente. Isto acontece
porqu o grau de polarizao ou de polarizabilidade de uma
substncia determina tanto seu grau de interao com o
solvente utilizado, ou seja, se ele ser arrastado pelo
solvente a medida que este desce pela coluna ou no e com
que intensidade ser arrastado, quanto seu grau de interao
com a fase estacionria, que possui inmeros stios polares
disponveis para interao eletrosttica reversvel com a
substncia sendo arrastada.
Neste experimento foi utilizada a tcnica de
cromatografia em coluna com o objetivo separar dois
pigmentos naturais presentes nas folhas de espinafre.
Materiais e Mtodos
Materiais e Reagentes:
Coluna com torneira, papel absorvente, pipeta conta-
gotas, erlenmeyer de 125 mL, proveta de 25 mL, bqueres
de 50 e 250 mL, almofariz e pistilo, suporte, garras e
mufas, esptula, tela de amianto, trip, bico de gs, chapa
de aquecimento, funil de haste longa, basto de vidro com
borracha.
Folhas de espinafre, gua destilada, slica Gel 60, hexano,
acetona.
Mtodos:
1) Empacotamento da coluna
Fixou-se a coluna de vidro verticalmente em um
suporte. Fechou-se a torneira e introduziu-se um
chumao de algodo at a conexo do tubo com a
torneira e em seguida adicionou 10mL de hexano.
Adicionou-se, com o auxlio de um funil, rapidamente,
uma suspenso contendo cerca de 5g de slica gel e
hexano na coluna. Abriu-se a torneira e deixou o
lquido escoar, recolhendo-o e reutilizando para
acertar o enchimento da coluna, at que fique 5 cm
acima do topo da fase estacionria.
e pesou 10 g . Ferveu-se as folhas com 100 mL de
gua destilada, por 2 minutos contados aps a fervura,
num bquer de 250 mL. Desprezou-se a gua e
resfriou-se rapidamente as folhas com gua gelada.
Enxugou-se as folhas. Triturou-se com o auxlio do
almofariz e pistilo contendo 15 mL de uma mistura de
acetona/hexano (1:1) at obter uma soluo verde.
Transferiu-se para um bquer pequeno e adicionou 1
ponta de esptula de slica para incorporar ao extrato.
Evaporou-se o solvente, em uma chapa aquecedora,
agitando sempre com o basto para no projetar.
3) Eluio da coluna cromatogrfica
Com a torneira ainda fechada, colocou-se o
extrato no topo da coluna, com o auxlio do funil.
Abriu-se a torneira e deixou escoar o solvente
(Hexano) at atingir o topo da coluna. Fechou-se e
lavou-se as paredes da coluna com o auxlio de uma
pipeta conta-gotas. Abriu-se a coluna novamente,
recolheu-se o liquido, e repetiu-se o processo at que o
solvente esteja lmpido. Iniciou-se a eluio
adicionando hexano at completar a coluna. Abriu-se a
torneira e recolheu-se a primeira frao, at o
aparecimento da primeira banda prximo torneira.
Em outro frasco, recolheu-se a banda amarela,
recolheu-se o solvente at atingir o topo do recheio e
trocou-se o solvente. Adicionou-se acetona e recolheu-
se, em outro frasco, a terceira frao. Repetiu-se o
processo at o aparecimento da segunda banda.
Recolheu-se a quarta frao e finalizou-se a coluna.
Figura 2: Ilustrao de
separao de substncias
em uma coluna
cromatogrfica.
Resultados e Discusso
A coluna cromatogrfica realizada a partir do extrato do
espinafre, possibilitou a separao de duas substncias,
uma verde e uma amarela. A ordem de isolamento das
substncias na coluna, est diretamente ligada polaridade
de cada uma delas.
A slica gel polar, sendo assim a substncia mais polar
ir intergir mais com as partculas da slica e ser mais
difcil a sua retirada, j a substncia menos polar, ser
isolada mais facilmente, sendo a primeira a ser isolada.
Sendo assim, observou-se a sada da substncia amarela e
posteriormente da substncia verde.
De acordo com os conhecimentos e com a literatura,
sabemos que as duas principais substncias do espinafre
so o caroteno (Figura 3) e a clorifila (Figura 4), sendo eles
amarelo e verde, respectivamente.
 Figura 3: Estrutura do -caroteno

I: R = CH3
II: R = CHO

Fugura 4: Estruturas da clorofila a (I) e clorofila b (II)

Atravs da estrutura das substncias podemos confirmar a

polaridade das mesmas. O caroteno um hidrocarboneto,
composto muito pouco polar; j a clorofila contm diversos
tomos de oxignio capazer de fazer pontes de hidrognio,
tornando o composto mais polar que o caroteno. Sendo
assim, comprovamos que o composto amarelo, primeiro a
ser retirado o caroteno e o verde, a clorofila.
necessrio que se inicie a coluna com o solvente menos
polar, no caso hexano, para que o composto menos polar
seja arrastado primeiro e seja separao dos demais
compostos. Caso seja usado o solvente mais polar, acetona,
ao recolher-se as fraes, os compostos apolares seriam
arrastados juntos com os compostos polares, e a separao
no ocorreria.
Supondo que tenham-se trs compostos a serem
separados, um lcool, um hidrocarboneto e uma cetona, o
hidrocarboneto, por ser o menos polar seria o primeiro a ser
retirado da coluna, posteriormente a cetona e por ltimo o
lcool, composto mais polar. Para a retirada dos trs
compostos algumas sequncias de eluentes poderiam ser
utilizados, como hexano, diclorometano e acetato de etila,
respectivamente.

Concluso
Conclui-se, atravs da separao dos dois pigmentos
presentes nas folhas de espinafre, que a tcnica de
cromatografia em coluna para separao de substncias em
uma mistura bastante eficiente.
Alm disso, observou-se que necessrio a escolha
correta dos eluentes da coluna cromatogrfica para que a
separao das substncias seja feita corretamente.
Sendo assim, pde-se separar a mistura das substncias
do extrato da folha do espinafre e comprovar que os
pigmentos amarelo e verde extrados, eram o caroteno e a
clorofila, respectivamente. Dados que so comprovados
pela literatura.
Referncias Bibliogrficas
Apostila de prtica Qumica Orgnica
Experimental DQ/ICEX-UFMG, 2014