Multiplicação Viral

LabVir – ICBS - UFRGS

Multiplicação dos vírus
“Evento central de existência e perpetuação dos vírus na
natureza”

- Produzir progênie viável –

Consequências

 “Nenhuma” (maioria dos vírus)

 Doença (Hepatites virais)

 Morte do hospedeiro (Ebola)

Conceitos básicos
• Infecção [infere: inserir, penetrar]
- Em virologia: processo replicativo do agente como um todo,
incluindo penetração e as etapas subsequentes da replicação.

- Infecção produtiva: todas as etapas completas resultando na

progênie viral.
- Infecção abortiva: após a penetração , o ciclo replicativo for
interrompido em alguma etapa.

- Susceptibilidade: capacidade das células de serem infectadas

naturalmente pelo vírus.
- Permissividade: condições intracelulares para a ocorrência da
multiplicação viral.
• Espécies animais [também cultivos celulares] apresentam uma
ampla variação de susceptibilidade a diferentes vírus.

Hospedeiro

Conjunto de espécies que podem ser infectadas naturalmente por um

determinado vírus.

• Tropismo: predileção do vírus por determinadas células,

tecidos ou órgãos do hospedeiro para multiplicar.
 Etapas da Replicação
1- ADSORÇÃO
2- PENETRAÇÃO
3 - DESNUDAMENTO
4 – TRANSCRIÇÃO DOS GENES VIRAIS
5 – TRADUÇÃO DOS mRNA E PRODUÇÃO DAS PROTEÍNAS VIRAIS
6 – REPLICAÇÃO DO GENOMA
7 – MONTAGEM / MATURAÇÃO
8 – 9 - LIBERAÇÃO
ADSORÇÃ O
• Ligação específica das partículas víricas na superfície das
células hospedeiras.

VAPs
Proteínas da superfície dos vírions Receptores celulares
ADSORÇÃ O

• Receptores celulares proteínas [glicoproteínas] ou

carboidratos [presentes em glicoproteínas]

• Receptores específicos
• Rinovírus
• Vírus da febre aftosa
• Receptores alternativos [vantagens evolutivas]
• Herpesvírus
• Togavírus
 ADSORÇÃ O
• Receptores são determinantes na patogenia das infecções
• Interações químicas:
• Eletrostática
• Pontes de hidrogênio

-
+- +
+-
+
- -
+

8
ADSORÇÃ O
• Em alguns casos a interação vírus e receptores não são
suficientes para permitir o início da infecção.
• Co-receptores
• Interação vírus com proteínas adicionais da membrana celular

HIV

Receptor CD4
+
Co-receptor: receptor de citocina
CCR-5, CXCR-4
ADSORÇÃ O
PENETRAÇÃ O
• Transposição da membrana plasmática.
• Fusão na superfície celular:
• Retrovírus, herpesvírus [fusão do envelope na membrana celular]

• Penetração após endocitose:

• Penetração de vários vírus envelopados [flavivírus, ortomixovírus]
• Alguns sem envelope [Adenovírus, reovírus]
DESNUDAMENTO
• Refere-se a uma série de eventos que ocorrem após a penetração.
• Resultando na exposição parcial ou completa do genoma viral

Vírus
RNA
Vírus
DNA
DESNUDAMENTO
• Após o desnudamento, exposição às enzimas e fatores de
replicação:

• Vírus DNA e RNA de cadeia negativa:

• TRANSCRIÇÃO

• RNA de cadeia positiva:

• TRADUÇÃO
Movimentação intracelular
• Transporte até o local onde ocorrerão a expressão genica e a
replicação.
• Forma passiva, no interior de vesículas endocíticas
• Interação com componentes do citoesqueleto
• Ou proteínas transportadoras

• Penetração nuclear
• Vírions pequenos, podem ser transportados intactos [parvovírus
18 – 24 nm]
• Vírions maiores, precisam ser previamente desintegrados ou
deformados
 Expressão gênica
• O genoma viral codifica diferentes proteínas que desempenham três
funções básicas:

• Assegurar a replicação do genoma;

• Subverter funções celulares em seu benefício;

• Empacotar os genomas recém replicados em novas partículas víricas.

Replicação do genoma
• Dependendo do tipo e organização genômica, os vírus podem
utilizar diferentes estratégias de expressão e replicação.

• Baltimore [1971]: classificação dos vírus em 6 grupos

• Tipo de genoma;
• Local e estratégia de replicação.
ds= double stranded (dupla fita)
ss=single stranded (fita simples)
Maturação e egresso
• Formação das unidades estruturais do capsídeo pela interação
entre as respectivas proteínas;
• Incorporação do genoma ao capsídeo pré-formado ou em
formação;
• Liberação da progênie viral da célula infectada

• Morfogênese: montagem das partículas víricas.

• A capacidade infectiva = maturação
Maturação
• Maturação intracelular

Liberados por lise

celular
Maturação
• Maturação por brotamento em membranas celulares
 Liberação da célula
Brotamento (com ou
Liberação por lise da sem morte celular)
célula (com ou sem efeito
citopático)
 Resumo:

Adsorção – Penetração -
Desnudamento

Transcrição
TraduçãoFunções do
REPLICAÇÃO hospedeiro (+ou-)

CICLO DE
MULTIPLICAÇÃO Montagem
VIRAL (Maturação)

Liberação

23 MULTIPLICAÇÃO
 CULTURA DE CÉLULAS
 Cultura de células é o processo pelo qual células são mantidas
vivas e em multiplicação fora de seu tecido original, em condições
controladas.
Cultivos celulares

- cultivos primários (células diplóides)

- linhas celulares
(diplóide, 40 passagens )

- células de linhagem
(número de passagens indefinido)
 CULTIVO DE CÉLULAS
Cultivo Primário
- Preparadas diretamente das células obtidas de
um tecido de um organismo
- Sensível a vírus
- Resiste poucas passagens ( máximo 20)
 CULTURA DE CÉLULAS
Células de linhagem
 Capacidade ilimitada de crescimento em cultura
– Derivadas de células tumorais
– Sofreram transformação espontânea ou
induzida

Cultivo primário Algumas células Seguem Tornam-se

senescente sobrevivem multiplicando-se “imortais”
 CULTIVO DE VÍRUS
IN VITRO
- Garrafas de Vidro
- Garrafas de Plástico

- Garrafas fechadas ou abertas (CO2)

-Garrafas estacionárias ou rolantes

-Tubos de vidro ou plástico

-Tubos com lamínulas (tubos de Leighton)

- Placas de microtécnica com 6, 12, 24, 96 orifícios

Tubos de cultivos celulares em equipamento rotativo

Microplacas de cultivos celulares

EFEITO CITOPÁTICO (ECP):
É o dano que o vírus causa à célula !

- infelizmente, nem todos os vírus

causam danos às células!

- a maioria não causa dano nenhum!

BVDV Rotavírus

FCV RSV
EFEITO CITOPÁTICO (ECP): Herpes
(coloração: violeta de genciana)
EFEITO CITOPÁTICO (ECP): Herpes
(coloração: carbazol)
Microscopia
eletrônica