A quality by design approach for optimization of Lecithin/Span® 80

based
nanoemulsions loaded with hydrophobic drugs
DANIEL A. REAL; STEFAN HOFFMANNC; DARÍO LEONARDI; FRANCISCO M. GOYCOOLEA; CLAUDIO J. SALOMON
Publicado em: Journal of Molecular Liquids ed. 321 (2021)
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DO QUE TRATA O ARTIGO?

Estabelece uma abordagem interessante para o desenvolvimento de novas formulações,

adotando a estratégia Quality by Design

Através do QbD, determina e propõe quais são os principais fatores que influenciam na
performance de sistemas nanoemulsionados.

Desenvolve e caracteriza sistemas utilizando Span® 80, Lecitina de óleo de soja e

Mygliol® 812 pela técnica de Emulsificação espontânea.

Utiliza como princípios ativos Benznidazol, Praziquantel, Pirimetamina,

Niclosamida e Triclabendazol.
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 INTRODUÇÃO

 O grande objetivo da indústria farmacêutica é projetar e desenvolver

sistemas que melhor entreguem os ativos em seus sítios-alvo.

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 INTRODUÇÃO
PRINCIPAIS ESTRATÉGIAS PARA ATINGIR ESSE
OBJETIVO

 O uso de sistemas nanoemulsionados é amplamente utilizado em

moléculas usadas no tratamento do câncer, doenças neurodegenerativas
ou doenças negligenciadas.

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 INTRODUÇÃO
FATORES QUE INFLUENCIAM NO PROCESSO

 Esses sistemas podem depender tanto da composição quanto das

condições experimentais.

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 INTRODUÇÃO

Alta Energia

Métodos de
emulsificação
Baixa Energia

Ponto de
Emulsificaçã
Inversão da
o espontânea
Emulsão
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 INTRODUÇÃO
HIPÓTESE DOS AUTORES

 Apesar desses sistemas constantemente melhorarem as propriedades

físico-químicas dos fármacos, existe uma carência de análises focadas na
metodologia e nos fatores que influenciam a formação das emulsões.

8
 INTRODUÇÃO
HIPÓTESE DOS AUTORES

 É necessário o aumento desse tipo de estudo, objetivando melhorar a

estabilidade e eficiência de associação, buscando um menor índice de
polidispersão.

9
 INTRODUÇÃO
HIPÓTESE DOS AUTORES

 Apesar de serem simples, a mesma metodologia pode resultar em

diferentes sistemas, por isso, uma abordagem QbD é uma ótima
ferramenta.

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 INTRODUÇÃO
HIPÓTESE DOS AUTORES

 E essa é a principal inovação do presente estudo, oferecer uma otimização

da análise de múltiplas variáveis utilizando o método Plackett-Burman

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 INTRODUÇÃO
Plackett-Burman Design

A B C D E F

1 +1 -1 -1 +1 -1 -1
2 -1 -1 +1 -1 -1 +1
3 +1 -1 -1 -1 +1 -1
4 +1 -1 +1 -1 -1 -1
5 -1 +1 -1 +1 -1 +1
6 +1 +1 -1 +1 -1 -1
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METODOLOGIA
 METODOLOGIA
FORMAÇÃO DAS NANOEMULSÕES

 As nanoemulsões foram preparadas utilizando como base o modelo descrito por

Calvo e colaboradores (1997), variando a quantidade de excipientes e alguns
parâmetros experimentais.

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 METODOLOGIA
EMULSIFICAÇÃO ESPONTÂNEA

Fase Interna

Solvente Orgânico

Fase Externa

Evaporação do solvente

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 METODOLOGIA
AMOSTRAS PARA TRIAGEM
 Na primeira rodada de experimentos, foram feitas 12 amostras utilizando Triclabendazol –
TCBZ (LogP = 5.9) e Benznidazol – BZN (LogP = 0.91) como fármacos.

• Triclabendazol Velocidade de • 0 RPM

Princípio Ativo • Benznidazol • 500 RPM
Agitação
• 125 μL • Óleo-Água
Mygliol 812® • 250 μL Tipo de Emulsão • Água-Óleo
• 40mg Tempo antes da • 1 min
Lecitina • 60mg evaporação • 30 min
• 1% • 10 mL
Span 80 ® • 0% Volume de água • 20 mL
Solvente • Etanol Volume pós- • 7 mL
Orgânico • Acetona evaporação • 10mL 16
 INTRODUÇÃO
PARÂMETROS DE ANÁLISE

Tamanho de partícula Eficiência de Associação

Derived Count Rate (DCR) Estabilidade de prateleira

PdI Estabilidade em PBS

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 METODOLOGIA
ANÁLISES DE APRIMORAMENTO
 Na segunda rodada de experimentos, foram feitas 30 amostras.

• Benznidazol • 0 mg
• Praziquantel • 4 mg
Princípio
Ativo
• Pirimetamina Lecitina • 42 mg
• Niclosamida • 80 mg
• Triclabendazol • 118mg

• 0 μL • 0%
Myglio • 12.50 μL • 1%
• 131.25 μL Span 80® •
l 812® • 250 μL •
2%
3%
• 368.75 μL
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 METODOLOGIA
ANÁLISES DE APRIMORAMENTO
 Durante a etapa de triagem, foi observado que alguns fatores não possuem influência
significativa sobre o processo de formação, por isso foram fixados.

Velocidade de • 0 RPM
Agitação
Volume de água • 20 mL
Tipo de • Óleo-Água
Emulsão Volume pós- • 10mL
evaporação
Tempo antes da • 1 min
evaporação

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 INTRODUÇÃO
PARÂMETROS DE ANÁLISE

Tamanho de partícula Derived Count Rate (DCR)

PdI Estabilidade de prateleira

Potencial Zeta Eficiência de Associação

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 METODOLOGIA
EFICIÊNCIA DE ASSOCIAÇÃO

 As formulações foram centrifugadas, formando uma camada cremosa acima da fase

aquosa, enquanto os outros componentes se depositaram no fundo formando um
pellet.

21
 METODOLOGIA
EFICIÊNCIA DE ASSOCIAÇÃO

 Ambas as frações foram então analisadas por HPLC-UV* utilizando como soluções-
padrão dos fármacos e a eficiência de associação foi calculada utilizando a equação a
seguir:

𝐹𝑟𝑎 çã 𝑜 𝑑𝑒 𝑓 á 𝑟𝑚𝑎𝑐𝑜 𝑛𝑜 𝑠𝑜𝑏𝑟𝑒𝑛𝑎𝑑𝑎𝑛𝑡𝑒(𝑁𝐸)

𝐸𝑓𝑖𝑐𝑖 ê 𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑎𝑠𝑠𝑜𝑐𝑖𝑎 çã 𝑜 ( % ) =
𝐹𝑟𝑎 çã 𝑜 𝑑𝑒 𝑓 á 𝑟𝑚𝑎𝑐𝑜 𝑡𝑒 ó 𝑟𝑖𝑐𝑎 (𝑃𝑒𝑙𝑙𝑒𝑡 + 𝐹𝑖𝑙𝑡𝑟𝑎𝑑𝑜)

* Coluna C18 150mm x 2.1 mm 2.6 µm

Fluxo 0.2 mL/min
Temp 40°C
Detector UV/Vis 22
 METODOLOGIA
ESTABILIDADE EM PBS

𝑇𝑎𝑚𝑎𝑛h𝑜 𝑒𝑚 24 h
𝑃𝐵𝑆 𝑠𝑡𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑡𝑦=
𝑇𝑎𝑚𝑎𝑛h𝑜 0 h

Tampão Fosfato
pH 7.4
37ºC
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 METODOLOGIA
ESTABILIDADE DE PRATELEIRA

𝑇𝑎𝑚𝑎𝑛h𝑜 𝑎𝑝 ó 𝑠 30 𝑑𝑖𝑎𝑠
𝑆𝑇 30=
𝑇𝑎𝑚𝑎𝑛h𝑜 0 𝑑

30 dias
25°C

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RESULTADOS E DISCUSSÃO
FASE DE TRIAGEM RESULTADOS E DISCUSSÃO

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 RESULTADOS E DISCUSSÃO
FASE DE TRIAGEM
Tamanho de • Mygliol® 812
 Dos resultados obtidos na fase de partícula • Lecitina
triagem, destacam-se:

• Mygliol® 812
• Solvente utilizado
Índice de • Span® 80
Polidispersão • Tempo antes da evaporação
• Tipo de emulsão

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 RESULTADOS E DISCUSSÃO
FASE DE TRIAGEM • Mygliol® 812
DCR • Solvente utilizado
• Tipo de Emulsão
Tamanho de • Mygliol® 812
partícula • Lecitina
Eficiência de • LogP
associação

• Mygliol® 812 Estabilidade em

• Solvente utilizado • Span® 80 e LogP
PBS
Índice de • Span® 80
Polidispersão • Tempo antes da evaporação
• Tipo de emulsão • Volume de fase externa
Estabilidade de
prateleira • Volume final

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 RESULTADOS E DISCUSSÃO
FASE DE APRIMORAMENTO

 Utilizando o modelo matemático RSM, os autores foram capazes de determinar a

melhor relação entre a melhor eficiência de associação e DCR, com o mínimo
tamanho de gotícula, PdI e potencial zeta.

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 RESULTADOS E DISCUSSÃO
FASE DE APRIMORAMENTO

 Quando mais de um fator precisa ser levado em consideração, devemos usar a função
matemática “desejabilidade”.
 Para cada parâmetro é designado um número de 1 a 5 baseado no quão aquele fator é
importante. À partir de então é feito um gráfico que nos diz quais regiões nos
fornecem as melhores condições.

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RESULTADOS E DISCUSSÃO
FASE DE
APRIMORAMENTO

31
 RESULTADOS E DISCUSSÃO
DETERMINAÇÃO DO MELHOR CENÁRIO

 Com estes dados, podemos supor quais são melhores formulações possíveis.

Praziquantel Pirimetamina Triclabendazol

•Mygliol® 812: 350 µL •Mygliol® 812: 350 µL •Mygliol® 812: 340 µL
•Lecitina: 120mg •Lecitina: 120mg •Lecitina: 95mg
•Span® 80: 0,09mg •Span® 80: 0,43mg •Span® 80: 0,9mg 32
RESULTADOS E DISCUSSÃO
CONFIRMAÇÃO
EXPERIMENTAL

33
CONCLUSÕES
CONCLUSÕES

 Vários fármacos hidrofóbicos foram carreadas com sucesso em nanoemulsões

estáveis através de uma análise dos diferentes fatores que influenciam a formação das
formulações.
 Mygliol® 812, Lecitina de Soja e Span® 80 produziram nanoemulsões estáveis, om
tamanho de partícula inferior a 160 nm e eficiência de associação entre 55% e 97%.

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CONCLUSÕES

 A concentração de Span® 80 influenciou na estabilidade de prateleira.

 A ordem de mistura influenciou nos valores de PdI.
 Nanoemulsões baseadas em Mygliol ® 812, lecitina de soja e Span ® 80 apresentam
uma promissora abordagem para o tratamento de doenças parasitológicas
negligenciadas.

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A quality by design approach for optimization of Lecithin/Span® 80
based
nanoemulsions loaded with hydrophobic drugs
DANIEL A. REAL; STEFAN HOFFMANNC; DARÍO LEONARDI; FRANCISCO M. GOYCOOLEA; CLAUDIO J. SALOMON
Publicado em: Journal of Molecular Liquids ed. 321 (2021)