Expressão de proteínas

recombinantes em bactérias e
Bibliotecas de DNA e cDNA
Disciplina: Biotecnologia e Bioinformática
Prof. Enide Luciana Belmont Montefusco
 O que são proteínas recombinantes?

São proteínas produzidas artificialmente a partir de genes

clonados, ou seja, advêm da técnica do DNA recombinante.
 Aplicações

A produção de proteínas recombinantes permite se obter

benefícios em áreas como: saúde, biologia, bioquímica,
microbiologia, genética, biotecnologia, agricultura, etc.
 Para que servem?
Terapia gênica
Possibilidade de introdução de um gene em um organismo e
consequentemente correção de doenças genética.
Melhoramento anima e vegetal
Plantas resistentes à pragas;
Animais de maiores dimensões, mais férteis.
Criação de modelo de animais
Uso no estudo da estrutura, função e regulação de um gene, além de
facilitar o entendimento da fisiopatologia da doença.
 Principais modelos celulares utilizados na
produção de proteínas recombinantes

O critério para eleger o sistema de expressão depende do

tipo de proteína, de seus requisitos para ser ativa e
também do rendimento que desejamos.
 Expressão heteróloga em Bactéria – Escherichia coli

Modelo mais utilizado, pois proporciona a forma mais rápida e barata para a
produção de proteínas recombinantes.

A expressão da proteína,
realizada naturalmente pela
célula em cultivo, estará
presente em grandes
quantidades dentro ou fora da
célula.
Expressão heteróloga em Bactéria – E. coli
Expressão heteróloga em Leveduras – Saccharomyces cerevisiae, Pichia
pastoris
 As proteínas recombinantes podem ser utilizadas
como vacinas.

Podemos purificar uma proteína presente

O envelope viral é a camada mais externa em um envelope viral, por
exemplo,
de diversose tipos
injetá-la em umEla
de vírus. animal.
protege o
material genético durante o seu ciclo
Essa
vital,proteína
enquantoserá
está reconhecida pelo sistema imune inato como uma
transitando entre
proteína exógena, e promoverá a produção de anticorpos específicos para
células hospedeiras.
combatê-la.

Assim, o indivíduo exposto a essa proteína estará sensibilizado e, caso

entre em contato com o vírus, já possuirá anticorpos de memória para
combatê-lo.
 As proteínas recombinantes para uso terapêutico

Funções:
a)Substituir uma proteína ausente ou com defeitos. Exemplo:
insulina.

b)Aumentar a quantidade de uma proteína que já está presente.

Exemplo: eritropoetina para estimular a produção de glóbulos
vermelhos para o tratamento de anemias.
 As proteínas recombinantes para uso
terapêutico

Funções:
c) Inibir um agente infeccioso, como bactérias e vírus. Exemplo:
interferon alfa para o tratamento de hepatites B e C.

d) Carregar para outras moléculas (a maioria ainda está em

desenvolvimento). Exemplo: terapias para o câncer
As proteínas recombinantes para uso
terapêutico
 As proteínas recombinantes para uso
terapêutico
Testes imunológicos necessitam de anticorpos capazes de reconhecer certas proteínas.
Os anticorpos para esses ensaios podem ser obtidos por meio da sensibilização de
animais, com uma proteína recombinante, e da recuperação dos anticorpos produzidos
por eles.
 As proteínas recombinantes para uso
terapêutico
Proteínas purificadas podem ser utilizadas em testes in vitro, a fim de verificar sua
função e sua interação com outras proteínas e moléculas. Um exemplo interessante é,
quando um novo medicamento está sendo desenvolvido, determinar se uma proteína
interage com essa nova molécula, dando um indicativo do seu mecanismo de ação.
As proteínas recombinantes para uso
terapêutico
 As proteínas recombinantes para uso
terapêutico
Tratamento da doença  administração de uma dose de glucocerebrosidase

Governo brasileiro subsidia o tratamento desses pacientes  medicamento importado; R$ 140

milhes por ano; R$ 200 mil por paciente (700 pacientes no Brasil).

Pesquisadores brasileiros  alternativa para diminuição desses custos.

Vetor viral contendo o gene que codifica a glucocerebrosidase humana.

Cabra como mamífero transgênico para produzir a proteína.

DNA dos ovócitos da cabra é removido; As células são transferidas com o vírus contendo da região
codificante e o embrião é implantado em outra cabra não transgênica.
 Biblioteca de DNA

Conjunto de plasmídeos clonados é conhecido como

uma biblioteca de DNA.

Se todo o genoma cromossômico do organismo for

digerido e inserido em plasmídeos, a coleção de
plasmídeos resultantes será uma biblioteca genômica.
Aplicabilidade das bibliotecas genômicas:

 Compreender mecanismos evolutivos que promoveram mutações

genéticas e aprimoraram determinadas funções ao longo da evolução
das espécies, em uma troca de conhecimento com a área de genética
de populações;

 Buscar o entendimento da reação do organismo a determinado tipo

de dieta ou medicamento e vice-versa (campos de estudos como
farmacogenômica/ farmacogenética e nutrigenômica/ nutrigenética);
Aplicabilidade das bibliotecas genômicas:

Entender melhor a estrutura do DNA e as funções que cada

segmento possui na estrutura do genoma, bem como seus
produtos;

Realizar screenings para descoberta de mutações

responsáveis por doenças hereditárias e buscar alvos para a
terapia gênica.
Conceitos relacionados coma
biblioteca de cDNA
Contém somente as sequências
que foram
transcritas em RNA
 Indicação de leitura
1- BATISTA, B.G. et al. Biologia molecular e biotecnologia. Porto Alegre: SAGAH,
2018. Disponível em:
https://integrada.minhabiblioteca.com.br/#/books/9788595024465/cfi/1!/4/4@0.00:50.

2- BRUNO, A.N. Biotecnologia I: princípios e métodos. Porto Alegre: Artmed, 2014.

Disponível em:
https://integrada.minhabiblioteca.com.br/#/books/9788582711019/cfi/0!/4/2@100:0.0

3- RESENDE, R.R. Biotecnologia aplicada à agroindústria: fundamentos e aplicações.

São Paulo: Blucher, 2016. 4. Disponível em:
https://integrada.minhabiblioteca.com.br/#/books/9788521211150/cfi/8!/4/2@100:0.00.