Adila Trubat

Quantos micróbios cabem na ponta

de um alfinete ????

1m
Metabolismo microbiano

Fotoheterotróficos: usam luz como fonte de energia e

compostos orgânicos (álcool, carboidratos, ácidos
orgânicos, etc.) como fonte de carbono. São as
bactérias verdes não sulfurosas
(exemplo: Chloroflexus) e as bactérias púrpuras não
sulfurosas (exemplo: Rhodopseudomonas ).
Metabolismo microbiano
Os microrganismos que obtêm energia através da
oxidação de compostos orgânicos ou inorgânicos
podem ser classificados em:
Quimioautotróficos: usam os compostos químicos
(gás sulfídrico (H2S), enxofre elementar (S), amônia
(NH3), gás hidrogênio (H2), nitrato (NO3-), nitrito
(NO2-) e ferro (Fe2+) como fonte de energia e usam o
CO2 como fonte de carbono.
Quimioheterotróficos: são organismos que usam
compostos orgânicos como fonte de energia e de
carbono. Este grupo inclui a maioria das bactérias,
fungos e protozoários.
Crescimento microbiano
O crescimento celular é definido como o aumento
coordenado de todos os constituintes celulares. Este
aumento pode estar associado ao aumento do
tamanho de uma célula ou do número de células, em
consequência da multiplicação celular, ou a ambos.
Crescimento microbiano
O crescimento microbiano é normalmente associado
ao crescimento de uma população de células de um
dado microrganismo, ou seja, com o aumento do
número de células da população.Grande parte dos
microrganismos multiplica-se por fissão binária ou
por gemulação, em resultado do que uma célula dará
origem a duas ao fim de um certo tempo, tempo de
geração ou de duplicação.
 Parede celular
Peptidoglicano
Pseudo –peptidoglicano
ácido murâmico Celulose
Polissacáridos
Quitina
Proteínas Glicoproteínas
Eubactéria Archaea
Eukaria

26-09-2012 T2-3 MJC 8

Principais patógenos causadores
de infecções hospitalares
Classificação de bactérias de importância médica:
1 Células de parede rígida e espessa
2 Células com parede fina e flexível
3 Células desprovidas de parede
Principais patógenos causadores
de infecções hospitalares
A classificação baseia-se em vários critérios, como a
natureza da parede celular, características tintoriais,
capacidade de crescer na presença ou ausência de
oxigênio e a capacidade de formar esporos.
O critério atualmente utilizado consiste nas sequencia s
de bases do DNA genômico. Várias bactérias foram
reclassificadas com base nessa informação
Antimicrobianos
Preservação de microrganismos
Utilizar em pesquisa e/ou produção pode resultar em
contaminação, perda de viabilidade e mutação (perda das
características fisiológicas
É necessária a preservação das características determinantes
do microrganismo a longo prazo, que favorece a diminuição do
crescimento e das atividades metabólicas ou mesmo o
crescimento em meio mínimo de resíduos metabólicos, pois
estes podem comprometer a viabilidade da cultura.
- curto prazo :repique contínuo
- médio prazo: preservação em óleo mineral, preservação em
água, congelamento a -20°C, secagem em sílica, solo e papel
de filtro
- longo-termo: liofilização, congelamento a -80°C,
criopreservação em nitrogênio líquido.
Preservação de microrganismos
Repique contínuo
- diminuição do metabolismo (meios mínimos como Agar simples
e baixa temperatura);
- temperatura de estocagem: temperatura ambiente de 2-3 meses;
geladeira (4 a 7 ºC) de 4-6 meses
- freqüência entre as transferências: determinação empírica
- minimizar o n° de repiques → evitar a seleção de mutantes
- examinar a pureza em cada transferência
- conservar em duplicata
Vantagens: baixo custo, não requer equipamentos especializados,
o manuseio é simples.
Desvantagens: riscos de contaminação e possível perda da
linhagem, perda de características morfológicas, fisiológicas ou
patogenicidade, seleção de células atípicas (variantes ou
mutantes), supervisão especializada, mão-de-obra, espaço
relativamente grande para a armazenamento.
 Preservação de microrganismos
Preservação em óleo mineral
Vantagens: menor custo de equipamento, evita contaminação
por ácaros
Desvantagens: necessidade de mais transferências até que a
cultura revigore, requer espaço para armazenamento.
Preservação em água (Castellani)
Vantagens: boa taxa de viabilidade, evita contaminação por
ácaros
Desvantagens: limitado a organismos que aderem ao ágar
(Castellani), dificuldade da retirada dos cubos na reativação,
crescimento durante a estocagem, requer espaço p/
armazenamento, riscos de contaminação.
Preservação de microrganismos
Liofilização
Vantagens: vedação total da amostra, longa viabilidade,
estabilidade elevada em muitas espécies, produção em larga
escala, não requer armazenamento especial (somente ao
abrigo da luz), fácil distribuição e transporte.
Desvantagens: muitas espécies não sobrevivem ao processo,
viabilidade ocasionalmente insatisfatória, mão-de-obra
especializada, requer equipamentos sofisticados.

A liofilização trabalha congelando, depois é encaminhada para

a câmara de vácuo, e aumento gradativo da temperatura,
reduzindo-se deste modo a pressão circunvizinha, o que
permite à água congelada no material passar diretamente da
fase sólida ao gás
Preservação de microrganismos
Congelamento e criopreservação em nitrogênio
líquido
Vantagens: condições estáveis por longos períodos,
vedação completa, evitando contaminação, utilização
para esporulados e não esporulados.

Desvantagens: viabilidade ocasionalmente

insatisfatória, requer equipamento sofisticado,
suprimento contínuo de N2.
Boa infra-estrutura – caso de acidentes de
vazamento.
Preservação de microrganismos
Crioprotetores
Preservação de microrganismos
Crioprotetores
Métodos de eliminação
Envolve a destruição de microrganismos
patogênicos associados a objetos inanimados,
geralmente por meio físico ou químico. Todos os
desinfetantes são efetivos contra as formas
vegetativas dos microrganismos, mas não
necessariamente contra seus esporos.

Uso de agentes químicos

Métodos e assepsia
Análise microbiológica de produtos
Alimentos – Parâmetros:
Contagem de Bactérias Mesófilas
Coliformes Fecais (NMP)
Contagem de Staphylococcus coagulase positiva
Contagem de Bacillus cereus
Pesquisa de Salmonella sp
Contagem de Clostridium sulfito redutor
RDC Nº 12
http://portal.anvisa.gov.br/wps/wcm/connect/a47bab8047
458b909541d53fbc4c6735/RDC_12_2001.pdf?MOD=AJPERE
S
Análise microbiológica de produtos
Água - Contagem de
Bactérias Heterotróficas
Coliformes Totais
Escherichia coli

Portaria nº 2914 de 12/12/2011 Ministério da Saúde.

http://bvsms.saude.gov.br/bvs/saudelegis/gm/2011/prt2914_12_12_2011.ht
ml
Monitoramento da água
Alterações bruscas ou acima do usual na contagem de
bactérias heterotróficas devem ser investigadas para
identificação de irregularidade e providências devem
ser adotadas para o restabelecimento da integridade
do sistema de distribuição (reservatório e rede),
recomendando-se que não se ultrapasse o limite de
500 UFC/mL.
Monitoramento da água
Quando for identificada média geométrica anual
maior ou igual a 1.000 Escherichia coli/100mL deve-se
realizar monitoramento de cistos de Giardia spp. e
oocistos de Cryptosporidium spp. no(s) ponto(s) de
captação de água.
Monitoramento da água
Quando a média aritmética da concentração de
oocistos de Cryptosporidium spp. for maior ou igual a
3,0 oocistos/L no(s) pontos(s) de captação de água,
recomenda-se a obtenção de efluente em filtração
rápida com valor de turbidez menor ou igual a 0,3 uT
em 95% (noventa e cinco por cento) das amostras
mensais ou uso de processo de desinfecção que
comprovadamente alcance a mesma eficiência de
remoção de oocistos de Cryptosporidium spp.
Análise microbiológica de produtos
Cosméticos - Contagem de
microorganismos mesófilos totais aeróbios
Pesquisa de Coliformes Totais
Pesquisa de Coliformes Fecais
Pesquisa de Pseudomonas aeruginosa
Pesquisa de Staphylococus aureus
Resolução 481/99 -
http://portal.anvisa.gov.br/wps/wcm/connect/82f733004aee4c53b7ceb
fa337abae9d/Resolu%C3%A7%C3%A3o+RDC+n%C2%BA+481+de+27+
de+setembro+de+1999.pdf?MOD=AJPERES
Biologia molecular aplicadas à
microbiologia