Produção de

microrganismos para
aplicação biotecnológica
Prof. Dr. Guilherme Antônio Lopes de Oliveira
Produção de microrganismos
• Considerando a natureza prolífera dos
microrganismos – há cerca de 100 milhões por cada
grama de solo fértil.
 Produção de microrganismos

• Os microrganismos influenciam em todas as

atividade humanas;
• Um forte potencial dos microrganismos envolve
habilidades para conseguir quase todas as
conversões de substratos orgânicos aquo-solúveis
(como hidrocarbonetos e esteroides) através de
complexas sequencias de reações enzimáticas.
 Produção de microrganismos
• Ao estudar o desenvolvimento histórico da
exploração do potencial microbiano é necessário
dividir o tempo em:
- Período de ignorância (~ até 1800);
- Período de descobrimentos (1800 – 1900);
- Período de desenvolvimento industrial (1900 até
hoje);
• Na produção industrial de cada microrganismo é
necessário considerar desde os princípios
taxonômicos até a genética microbiana (rotas
biossintéticas, metabolismo celular básico).
Microrganismos transgênicos
O parágrafo único do art. 18 da Lei 9.279/96 (Lei de
Propriedade Industrial) define o que são os microrganismos
transgênicos: organismos, exceto o todo ou parte de
plantas ou de animais, que expressem, mediante
intervenção humana direta em sua composição
genética, uma característica não alcançável pela
espécie em condições naturais.

De acordo com o art. 18, inciso III, da Lei 9.279/96, são

patenteáveis os microrganismos transgênicos que atendam
aos requisitos de patenteabilidade previstos no art. 8º do
mesmo diploma legal, quais sejam, novidade, atividade
inventiva e aplicação industrial, e que não sejam mera
descoberta.
Microrganismos transgênicos

Art. 18. Não são patenteáveis:

III - o todo ou parte dos seres vivos, exceto os
microrganismos transgênicos que atendam aos três
requisitos de patenteabilidade - novidade, atividade
inventiva e aplicação industrial - previstos no art. 8º e que
não sejam mera descoberta.
Parágrafo único. Para os fins desta Lei, microrganismos
transgênicos são organismos, exceto o todo ou parte
de plantas ou de animais, que expressem, mediante
intervenção humana direta em sua composição
genética, uma característica normalmente não
alcançável pela espécie em condições naturais.
 Patamares da biotecnologia
• Produção microbiana de alimentos: conhecida há
milhões de anos, vem sofrendo mudanças inovadoras a
cada ano; Nesse patamar encontra se a produção de
vinho, cerveja, queijo, laticínios e produtos orientais;
• São processos simples que usam a microbiota normal.

• O aperfeiçoamento das
técnicas veio nas últimas
décadas.
 Patamares da biotecnologia
• O segundo patamar considera a produção de ácidos
orgânicos, solventes e biomassa, sob condições não-
estéreis;
• Ocorre desde o experimento de Pasteur (final do séc
XIX com a obtenção de metabólitos primários.
 Patamares da biotecnologia
• O terceiro patamar: envolve os processos
desenvolvidos sob condições de esterilidade.
Praticamente o início foi em 1940 com a
necessidade de produção de grande quantidade de
penicilina.
• Com a esterilização tornou-se possível o
crescimento unicamente do microrganismo
desejado, em quantidade máximas, obtendo apenas
o produto final visado;
 Patamares da biotecnologia
• No quarto patamar surgem as novas e modernas
tecnologias:
- Uso de enzimas, células imobilizadas;
- Aplicação de técnicas de biologia molecular;
• Qualquer que seja o período histórico vivido pelos
patamares da biotecnologia, o principal personagem
é o microrganismo;
Princípios do crescimento bacteriano
• O crescimento de microrganismos pode ser avaliado
pelo aumento da massa celular ou pelo número de
células. E é o resultado de uma série de eventos
altamente coordenados e enzimaticamente
catalizados;
• O que é necessário ter para controlar essas
características dos microrganismos?
Princípios do crescimento bacteriano
• Depende do transporte dos nutrientes necessários,
fonte de carbono, nitrogênio, vitaminas e sais
minerais e de parâmetros ambientais como
temperatura e pH.
Princípios do crescimento bacteriano
• O tempo de duplicação de um microrganismo,
aumenta com o aumento do tamanho e a
complexidade da célula:
- Bactérias: 0,25 a 1 hora;
- Fungos: 2 a 6,9 horas;
Produção de microrganismos e
substratos usados
• Ao se projetar uma produção de microrganismos
deve-se observar alguns aspectos que dizem respeito
ao microrganismo em si, aos substratos
nutricionalmente importantes para o
desenvolvimento desses microrganismos e aos
processos que serão utilizados na produção e na
recuperação.
• Considerar também as variáveis do processo para
otimização e ampliação de escala e a metodologia
de acompanhamento das fases de crescimento
 Microrganismos e as coleções de
cultura
• O início do processo de produção de
microrganismos se dá pela seleção do
microrganismo produtor, que pode ser obtido
através do isolamento ou da aquisição junto a
coleções de culturas;
• Os microrganismos de coleções vem com manuais
sobre a origem, condições de manutenção, de
estoque e de cultivo, nutrientes específicos ou
limitantes, pH, temperatura, etc.
 Microrganismos e as coleções de
cultura
• Existem empresas em que o produtos são as
coleções de microrganismos.
• A maioria estão no exterior;
• No Brasil, a Base de Dados Tropical da Fundação
Tropical André Tosello – FTAT, colocou a sua
coleção a disposição do mercado.
Coleções de cultura e Taxonomia são conjuntos de organismos
vivos, suas células ou partes replicáveis (e.g. genomas,
plasmideos, vírus, cDNAs), organizados de modo a fornecer
informações associadas de cada um deles. Estes organismos
são amplamente utilizados como material de referência para
ensaios industriais, identificação, produção de compostos,
combustíveis e alimentos, e representam importantes
ferramentas para a geração de conhecimento,
desenvolvimento científico e tecnológico e conservação da
biodiversidade. Portanto, as coleções de culturas têm um papel
fundamental na sua manutenção sem alterações, assegurando
reprodutibilidade e sustentabilidade. Estas coleções podem ser
classificadas como coleções de pesquisa, de referência e/ou de
serviço.
O principal objetivo das coleções de serviço é o fornecimento de
produtos e serviços com padrão de qualidade elevado e, para
tanto, técnicas e procedimentos apropriados que estejam de
acordo com a legislação, regulamentos e políticas nacionais
devem estar em operação. Entre os tópicos tratados nesta área
estão listadas: Gestão da qualidade, Gestão da informação,
Conformidade com a legislação pertinente, Preservação,
Caracterização taxonômica e identificação de isolados,
Organização e disseminação de informações de cunho científico e
tecnológico, Banco de germoplasma microbiano.
Têm como principal função a aquisição, preservação,
identificação, catalogação e distribuição de micro-
organismos autenticados para dar suporte à pesquisa
científica, estudos epidemiológicos, bem como ao
desenvolvimento e produção de bioprodutos para
diagnóstico, vacina e medicamentos, atuando também
como provedores de serviços especializados.
• Outras formas de obtenção de microrganismos,
incluem processos de isolamento e identificação
microbiana.
• Muitos pesquisadores optam por estudos de
isolamento junto aos substratos (ar, solo, águas,
resíduos) descobrindo-se assim melhores e até
novas linhagens de microrganismos.
Custos X Eficiência
• Processos economicamente viáveis:
- Isolamento de linhagens em curtos tempos de
fermentação;
- Elevada velocidade específica de crescimento;
- Não produzam pigmentos indesejáveis;
- Pouca exigências de manutenção (aeração,
espumação decrescente, etc.)
- Sejam capazes de metabolizar substratos de baixo
custo.
 O foco é:
selecionar o
microrganismo
apropriado para um
específico produto.
Revoluções
- Genes podem ser transferidos de uma espécie para
outra;
- Programas de produção de alimentos em
microrganismos;
- Confecção de proteínas específicas em grande
escala;
- ...
- Tudo isso modifica o perfil dos produtos obtidos
para diferentes finalidades e que estão nas
prateleiras.
 Processo clássico para a obtenção
de microrganismos

Se inicia no tubo de cultura-estoque, o microrganismo é transferido

por via asséptica aos tubos ou placas com meio de cultura adequado
às exigências nutricionais do microrganismo, depois do crescimento
ou reprodução vão se processando inoculações ou semeaduras
sucessivas, em volumes crescentes até a escala desejada.
Meios de cultura
• Os meios de cultura são projetados para atender a
demanda nutricional do microrganismo produtor,
aos objetivos do processo e à escala da operação.
• A seleção do meio depende do custo,
disponibilidade e propriedades de manejo dos
componentes do mesmo;
• Componentes básicos: carbono, nitrogênio, sais
minerais e fatores de crescimento.
Fontes de carbono
• Podem ser carboidratos:
- glicose (puro ou amido hidrolisado);
- Lactose (puro ou soro de leite);
- Amido (cevada, trigo, aveia, etc.);
- Sacarose (açúcar refinado, melaço de cana, açúcar
demerara, etc.).
Fontes de nitrogênio
• Cevada;
• Melaço de beterraba;
• Água de maceração de milho;
• Farinha de aveia;
• Soro de leite, etc.

• Sais minerais são adicionados como fonte

suplementares de nitrogênio, fósforo, enxofre ou
cálcio.
A importância dos reatores bioquímicos
para a produção de biomassa
• Fermentação é o processo no qual ocorrem
mudanças bioquímicas num substrato orgânico,
através da reação de catalisadores (enzimas),
obtidos de microrganismo in vivo e in vitro.
Biotecnologia e a produção de
microrganismos
• A biotecnologia é diretamente orientada para a
aplicação industrial de organismos unicelulares (ou
partes deles) para a criação de produtos ou a
conversão de materiais.
• Multiplicação massal - levedura de panificação.
Produção de leveduras
• O mais antigo processo de produção de biomassa é
a produção de levedura de panificação;
• Embora o conhecimento da existência da levedura
seja de 100 a 150 anos atrás, o então anônimo e
misterioso material desempenhou importante papel
na história da humanidade;
- O homem aprendeu a fermentar bebidas e levedar
massas.
Produção de alimentos a partir de
bactérias
• Destacam-se as produtoras de uma série de
produtos, especialmente as de “cultura iniciadoras”;
• As industrias de laticínios e embutidos são as que
mais utilizam culturas iniciadoras;
• As bactérias usadas na produção de queijos
preenchem uma série de requisitos: produzem ácido
lático, secretam metabólitos associados a aroma e
sabor, modificam a textura, etc.
Microrganismos visando outros
produtos
Muitos microrganismos podem ser utilizados com
vista à obtenção de outros produtos em todas as áreas
de influencia da biotecnologia nos setores primário,
secundário ou terciário;
A maioria dessas aplicações está na indústria, na
agricultura, na saúde, energia e meio ambiente.

Solução para o problema da fome?

A bactéria Escherichia coli é um dos microrganismos
capazes de fabricar o aroma de baunilha
o cheiro fedido – mas muito apreciado – do queijo
gorgonzola é produzido por um fungo
Setor de pesquisa X Setor aplicador
Ainda existe um “gargalo” entre os dois setores:
poucos são os incentivos de promoção e
transferências de tecnologias e existem barreiras
legais, econômicas, politicas e sociais que separam
Universidade / Empresa.