BIOPROCESSAMENTO

PRODUÇÃO DE MICRORGANISMOS

 Discente:
 Belinha Joaquim Simão Muchanga

Docente: Dra. Gisela Bettencourt

 1. Introdução
Considerando-se a natureza prolífica dos microrganismos --- há cerca de 100
milhões em cada grama de solo fértil seria deveras surpreendente se estes
microrganismos não exercessem uma significante influência nas actividades
humanas, a despeito da ausência de conhecimento de sua existência
REHM(2.4) apresenta como sendo quatro os patamares da Biotecnologia:
• A produção microbiana de alimentos (praticados por milhares de anos);
• A produção biotecnológica de ácidos orgânicos, solventes e biomassa, sob
condições não-estéreis (desde as descobertas de Pasteur e outros cientistas);
• Os processos desenvolvidos sob condições de esterilidade (descoberta por fleming em
1940);
• As tecnologias novas e modernas (as de uso de enzimas e de células imobilizadas).
2
 Objectivo
Portanto, o objetivo deste trabalho é falar especificamente das PRODUÇÃO DE
MICRORGANISMOS bem como os seus princípios de crescimento, estudo de caso
de modo a trazer um maior conhecimento e entendimento sobre o assunto.

3
 2. Princípios do crescimento microbiano
O crescimento de microrganismos pode ser avaliado pelo aumento da massa celular
ou pelo número de células, e é o resultado de uma série de eventos altamente
coordenados e enzimaticamente catalisados.
é dependente do transporte dos necessários nutrientes, fontes de carbono,
nitrogênio, vitaminas e sais minerais, (que se transferem à célula) e de parâmetros
ambientais, (como temperatura e pH).
A quantidade de biomassa obtida em um bioreactor pode ser determinada
gravimetricamente, através de peso seco, peso húmido, ADN, proteína, ou pela
contagem das células.
• É importante ter em mente os conceitos de tempo de duplicação (o período
necessário para que a massa celular se duplique) e de tempo de geração (se
relaciona com a duplicação do número de células).

4
 2. Princípios do crescimento microbiano

Cont…
Em condições de crescimento balanceado ou na fase exponencial:
• os dois tempos se igualam - quando o crescimento é controlado apenas pelas
actividades celulares intrínsecas;
• O tempo de duplicação de um microrganismo, aumenta com o aumento do
tamanho e a complexidade da célula
para bactérias entre 0,25h e uma 1h,
para leveduras entre 1,15h e 2h,
para fungos de 2h a 6,9h
para células de plantas de 20h a 40h

5
 3. Produção de microrganismos e substratos usados
Os primeiros processos fermentativos levavam em conta a pureza das fontes de
carbono e nitrogênio, bem como de vitaminas e sais minerais necessários ao
crescimento microbiano, para tal, eram utilizados apenas reagentes/compostos para análise.

A partir da observação de que se apresenta uma gama de substratos e subprodutos,

resíduos ou águas residuárias (que despejados provocavam problemas ambientais), alguns
pesquisadores passaram a utilizá-los, com vista ao seu aproveitamento, com
conseqüente benefício ao meio ambiente.

6
 3.1. Produção de microrganismos e substratos usados

Ao se projectar uma produção de microrganismos, processo de produção massal, os

aspectos observados dizem respeito ao microrganismo em si, aos substratos
nutricionalmente importantes para o desenvolvimento desses microrganismos e aos
processos que serão utilizados na produção e na recuperação.

Isso também leva em conta seguntes parâmetros e variáveis:

• do processo para optimização e ampliação de escala,

• das análises (ou seja, as metodologias) de acompanhamento das fases de crescimento,

• de produção de metabólicos, primários ou secundários,

7
• do processo da separação e a formulação.
 3.1. Produção de microrganismos e substratos usados

Cont…
3.1.1. Do microrganismo e coleções de cultura

O início do processo de produção massal, se dá pela selecção do microrganismo

produtor, (o qual pode ser obtido através de isolamento ou da aquisição junto a Colecções de
Cultura).

Muitos pesquisadores optam estudos de isolamento junto aos substratos (ar, solo,
águas, resíduos) que lhes estão afetos, descobrindo-se assim, novas e até mesmo,
melhores e mais adaptadas linhagens.

Para um processo economicamente viável, é desejável isolar linhagens que

demandem curtos tempos de fermentação, (ou seja, tenham elevada velocidade específica
de crescimento), não produzam pigmentos indesejáveis, tenham exigência de aeração
reduzida, exibam espumação decrescente durante o processo de fermentação, (que 8
sejam capazes de metabolizar substratos de baixo custo).
 3.1. Produção de microrganismos e substratos usados

Cont…
3.1.1. Do microrganismo e coleções de cultura

Genes sao transferidos de um para outro organismo, microrganismos e células de

plantas podem ser programadas para a superprodução de produtos naturais escassos
anticorpos visando uma porção diminuta de uma proteína.
O processo clássico para a obtenção de microrganismos se inicia do tubo de
cultura-estoque, que pode estar em meio sólido (tubo inclinado com ágar nutritivo), meio
líquido, e em pó (junto a inertes ou na forma liofilizada).

A cultura-estoque é aquela cujas características microbianas são conservadas

através de técnicas, ao longo do tempo.
• Da cultura-estoque, em meio sólido, o microrganismo se transfere por via asséptica, usando-se
uma alça de platina flambada e resfriada,
• ao meio sólido ou líquido, cuja composição é adequada às exigências nutricionais do microrga
nismo.
Após o crescimento ou reprodução do microrganismo vão se processando
inoculações ou semeaduras sucessivas, em volumes crescentes até a escala desejada 9
 3.1. Produção de microrganismos e substratos usados

Cont…
3.1.1. Do microrganismo e coleções de cultura

• A resposta do microrganismo ao ambiente é por vezes interactiva: enquanto

cresce e se reproduz, ou quando se adapta ao ambiente o microrganismo modifica
o próprio ambiente, como uma consequência de suas actividades de crescimento
e, em alguns casos, para melhorar suas vantagens competitivas contra outros
microrganismos.

10
#080105290505N#

11
 3.1. Produção de microrganismos e substratos usados

Cont…
3.1.2-Meios de cultivo

Os meios de cultivo são projetados para atender à demanda nutricional do

microrganismo produtor, aos objetivos do processo e à escala da operação.

A seleção desses meios depende do custo disponibilidade e propriedades de

manejo dos componentes dos mesmos.
Os componentes básicos importantes, são fontes de carbono de nitrogênio (a partir de misturas
complexas de produtos ou subprodutos naturais de baixo custo para buscar resíduos e águas
residuárias com boa composição e em disponibilidade), sais minerais e, fatores de crescimento.

12
 3.1. Produção de microrganismos e substratos usados

Cont…
3.1.2. Meios de cultivo

As fontes de carbono, especialmente carboidratos, podem ser:

 Glicose (pura, amido hidrolisado),
 Lactose (pura, soro de leite ou de queijo, em pó),
 Amido ou fécula (cevada, centeio, trigo, aveia, farinhas e farelos diversos, soja, amendoim,
algodão, batata, batata-doce, mandioca, sorgo)
 E sacarose (melaço de cana, de beterraba, açúcar demerara, açúcar refinado).

As fontes nitrogenadas, cujo teor médio se apresenta, podem ser:

 Cevada (1,5 a 2,0%),
 Melaço de beterraba (1,5 a 20%),
 Água de maceração de milho (4,5%),
 Farinha de aveia e de centeio (1,5 a 2,0%),
 Farelo de soja (8,0%),
13
 Soro de leite (pó) (4,5%).
 3.1. Produção de microrganismos e substratos usados

Cont…
3.1.2. Meios de cultivo

Os Sais minerais são adicionados, especialmente como fontes suplementares de

nitrogênio, fósforo, enxofre ou cálcio.

Os fatores de crescimento necessários, na sua maioria pertencem ao grupo das

vitaminas B ou compostos afins, Certos aminoácidos ou ácidos graxos.

O adequado balanço de C/N pode ser fundamental, especialmente, se o pH não for

controlado.

14
 3.1. Produção de microrganismos e substratos usados

Cont…
3.1.3-Dos reactores bioquímicos

PRENOSIL et al.(25), em revisão de reactores bioquímicos, listam considerações

cinéticas para a escolha de um reactor, descontínuo ou contínuo.

O reactor de modelo contínuo analisa o de simples tanque (um estágio), o tubular e

o multiestágios.

O reactor de modelo descontínuo e o tubular proporcionam a necessária

flexibilidade para descrever todos os tipos de reactores (o de leito fixo ou de recheio, o de
leito fluidizado e o sistema de membrana de ultrafiltração).

15
 3.2. Estudo de casos de produção de microrganismos

Segundo DELLWEG, a Biotecnologia é directamente orientada para a aplicação

industrial de organismos unicelulares (ou partes deles), para a criação de produtos
ou a conversão de materiais. O mais directo produto é o próprio microrganismo,
obtido através de multiplicação massal.

A produção de biomassa de microrganismos unicelulares ("SCP-single cell

protein"), tem uma grande tradição, e um exemplo é a levedura de panificação.
O termo SCP é comum, mas inadequado, desde que SCP no máximo contém 70% de proteína. A
substituição de um substrato por outro mais vantajoso, por disponibilidade e/ou custo, leva
geralmente à troca ou adaptação do microrganismo.
16
 9.4- Estudo de casos de produção de microrganismos

Cont…
Nesse caso o microrganismo mais eficiente é uma bactéria, cuja produção atinge de 60
a 80%, enquanto que leveduras metilotróficas produzem de 35 a 50%.

• A Biotecnologia se favoreceu em muito dos avanços na produção de SCP,

especialmente pelos reactores desenvolvidos e pelos processos de separação. No
entanto, a produção de SCP não foi um sucesso. Como razões, apontam-se principalmente as
económicas, políticas e psicológicas.

• Outros microrganismos protéicos que devem ser citados, são os fungos

comestíveis, que apresentam corpos de frutificação, os cogumelos. Estes se
produzem sobre uma grande variedade de substratos de baixo custo, raspas, serragem, lascas ou
troncos de madeiras, galhos ou troncos em decomposição, palhas diversas, etc. 17
 3.2.1. - Produção de microrganismos a partir de leveduras

OURA(29), apresenta a evolução da produção de levedura de panificação que,

historicamente sabe-se ser, o mais antigo processo de produção de biomassas.

O homem aprendeu a usá-lo para fermentar bebidas e para levedar a massa. Embora
o conhecimento da existência da levedura seja de 100 a 150 anos atrás.

O rendimento em levedura/biomassa passa a ser de 75kg por 100kg de grãos, sem

produção de álcool. Isso se tornou possível pela observação de que, apesar da aeração
conveniente, o excesso de açúcar causava a formação de álcool pelo efeito denominado "crabtree",
o qual podia ser evitado pela contínua e cuidadosa adição de açúcar durante o processo,
mantendo-se em um limite conveniente a concentração da fonte de carbono.
18
 3.2. Estudo de casos de produção de microrganismos

Cont…
3.2.1. Produção de microrganismos a partir de leveduras

A levedura de panificação, Saccharomyces cerevisiae, é um microrganismo

facultativo, capaz de crescer com e sem aerobiose.
Crescendo em presença de oxigénio, exige biotina, e a presença de inositol e ácido pantotenico
varia conforme a linhagem.

O crescimento sem estes elementos na anaerobiose ocorre por algumas gerações e depois cessa.

O comportamento da levedura em processo aeróbio é complicado, observando-se

um grande número de efeitos controlando o metabolismo da levedura, frente ao
oxigénio. São relatados os efeitos:
Pasteur, Pasteur reverso, efeito glicose ou repressão catabólica e o efeito Pasteur-negativo.
19
 3.2. Estudo de casos de produção de microrganismos

Cont…
3.2.1. Produção de microrganismos a partir de leveduras

OURA (29) apresenta as exigências que a levedura de panificação deve atender:

• A levedura-semente, deve crescer bem em melaço sob condições aeróbias e dar bom rendimento
na forma de levedura comprimida.

• Rendimentos de 56,7 g (massa seca) por 100g de glicose devem ser obtidas em condições de
laboratório.

• A levedura obtida deve apresentar cor clara e aroma fresco.

• As células devem ser de tamanho uniforme, não devem formar agregados ou grumos e devem ser
de fácil filtragem.

• Deve ser activa e apresentar bom poder de crescimento da massa, além de boa estabilidade.
20
 3.2.2. Produção de microrganismos a partir de bactérias

Segundo ROBINSON(37), dentre as bactérias destacam-se as produtoras de uma

série de produtos, especialmente as que servem de ponto de partida para outros
produtos, as culturas "starter" ou iniciadoras.
As indústrias de laticínios e as de embutidos são as maiores usuárias dessas culturas iniciadoras,
para a produção de queijos, iogurtes e bebidas fermentadas.

As bactérias mais empregadas na indústria de queijos em linhagens mesófilas são:

 Streptococcus lactis;

 S. cremoris;

 S. lactis ssp diacetylactis;

21
 Leuconostoc cremoris..
 3.2. Estudo de casos de produção de microrganismos

Cont…
3.2.2. Produção de microrganismos a partir de bactérias

As bactérias usadas na produção de queijos preenchem uma série de requisitos:

Produzem ácido lático; secretam metabólitos associados a aroma e sabor; modificar o substrato de
tal forma que as alterações bioquímicas ocorram. Para obter um queijo duro, atuam melhor as
linhagens mesófilas.

Dentre as termofilas têm-se:

 S. thermophilus,

 Lactobacillus bulgaricus,

 L. lactis, L. helveticus.

22
 3.2. Estudo de casos de produção de microrganismos

Cont…
3.2.2. Produção de microrganismos a partir de bactérias

Diversos produtos a partir de diferentes espécies de L. acidophilus encontram-se

disponíveis nas prateleiras dos supermercados e drogarias, sendo usados
especialmente para a recomposição da microbiota intestinal.
• Os "starters" são obtidos a partir de processo fermentativo com microrganismo escolhido,
mantendo o processo até o final da fase exponencial ou início da fase estacionária.

• Na forma líquida, o "starter" para a produção de queijo pode ser reproduzido umas cinquenta
vezes. Para a produção de iogurte, esse mais susceptível e cerca de dez vezes pode ser viável a
reprodução. Características indesejáveis podem ocorrer no processo com sucessivas reproduções.

• Na obtenção de "starter" na forma seca, especialmente o processo de liofilização das culturas vem
sendo empregado, embora existam alguns trabalhos sendo desenvolvidos com a secagem por 23
atomização.
 3.2. Estudo de casos de produção de microrganismos

Cont…
3.2.2. Produção de microrganismos a partir de bactérias

• Nesta, a manutenção da viabilidade microbiana é muito baixa, ainda, para ser

competitiva com a forma liofilizada, que, de início é a mais cara forma de preservação do
microrganismo.

• Neste processo desenvolve-se a bactéria em um meio de cultura estéril composto de

leite fortificado, até um nível elevado de sólidos totais, com ou sem adição de agentes
crioprotetores;

• Ao atingir o final da fase exponencial de crescimento ou o início da estacionária,

paralisa-se o processo fermentativo;

• Congela-se rapidamente a cultura, entre -20 e 30°C, seguida por secagem a vácuo a
24
temperaturas inferiores a -30°C. O material final é um pó, com no máximo 3% de umidade residual.
 3.2. Estudo de casos de produção de microrganismos

Cont…
3.2.2. Produção de microrganismos a partir de bactérias

• Os "starters" congelados são obtidos de culturas microbianas, que atingiram um teor

de sólidos de 14 a 16% ou contêm um agente protector, tal como sacarose ou lactose.
Nesse caso é possível o congelamento da cultura e sua manutenção nessa forma, que é mais
económica que a forma liofilizada.

• A temperaturas de -20 a -40°C, essas culturas podem permanecer viáveis por dois a
três meses. Para maior vida de prateleira reduz-se a temperatura a-196°C com nitrogénio líquido .

25
 3.2.3. Exemplos de produção com fungos.

• A cultura massal de algas teve seu início em 1919, com a introdução de Chlorela sp,
verificando-se que certas algas podiam duplicar-se com muita velocidade e que sua
matéria seca podia conter até 50% de proteína crua.
• Atualmente, há um grande interesse mundial com relação à produção de algas, especialmente as algas verdes
Chlorella sp e Scenedesmus acutus e a verde azulada Spirulina.

26
 3.3- Microrganismos visando outros produtos
• Patentes de processos microbianos usando Bacillus thuringiensis e diversos
substratos foram depositadas no Instituto Nacional de Propriedade Industrial, porém,
apesar do tempo decorrido, transferência de Tecnologia, ainda não foi possível .

• Plantas modificadas pela inserção de genes de Bacillus thuringiensis estão sendo

desenvolvidas, nas quais o microrganismo inserido promove controle biológico de pragas,
especialmente de Lepidoptera.

• Microrganismos úteis vem sendo desenvolvidos por grupos multidisciplinares de

pesquisadores, a plena utilização desse formidável potencial microbiano existente no
Brasil, em função de clima, solo, amplitude territorial, substratos disponíveis e tecnologia 27
desenvolvida.
 4. Conclusao

Após o termino da pesquisa, eu pude perceber que a produção de

microrganismos proporciona um papel preponderante na sociedade e na área da
biotecnologia, visto que eles podem ser utilizados com vista à obtenção de
outros produtos em todas as áreas de influência da biotecnologia, sejam elas do
sector primário, secundário ou terciário. A maioria dessas aplicações está
também na indústria, agricultura, saúde, energia e meio ambiente. A tecnologia
das fermentações evoluiu a passos largos, mas ainda observa-se muitos
obstáculos a serem ultrapassados, para a máxima utilização da Biotecnologia
como fonte ou como ferramenta na obtenção de microrganismos úteis à
28
humanidade, especialmente na solução do problema da fome.
OBRIGADA