• Remodelação espaço-temporal da composição e arquitetura da matriz
extracelular cortical ovariana humana durante cultura in vitro.
• Objetivo: Explorar as mudanças na composição da MEC e nas características
2 arquitetônicas em cada região do córtex ovariano, juntamente com a dinâmica Materiais e métodos Meio de dissecção [meio Leibovitz] • Biópsias corticais ovarianas frescas Suplementado -Piruvato de sódio (2 mM) • N= 6 mulheres idade 28-38 anos -Glutamina (2 mM) • Submetidas a cesariana eletiva. - Albumina sérica humana (HSA) (3 mg /ml) - Penicilina G (75 μg/ml) • Fragmentação 4x1x1 mm - Estreptomicina (50 μg/ml)
300 μl de meio de McCoy's 5a com bicarbonato suplementado:
• HEPES (20 mM; Invitrogen Ltd) • Cultivados por até 6 dias a 37°C em ar • glutamina (3 mM; Invitrogen Ltd), umidificado com 5% de CO2, sendo • HSA (0,1%) metade do meio removido e substituído • Penicilina G (0,1 mg/ml ) a cada dois dias • Estreptomicina (0,1 mg/ml) • Após 0, 2, 4 ou 6 dias de cultura, os • Transferrina (2,5 μg/ml) fragmentos ovarianos foram fixados em • Selênio (4 ng/ml) formalina tamponada normal a 10% • Insulina humana (10 ng/ml) para avaliação histológica e imuno- • 1 ng/ml de FSH humano recombinante histológica. • Acido ascórbico (50 μg/ml). ml) 3 Materiais e métodos