GENTICA E BIOLOGIA MOLECULAR PARA O ENSINO MDIO E FUNDAMENTAL Curso de Extenso na rea de Biologia para professores do Ensino Mdio

e Fundamental
Autoras: Cristina Maia Equipe de Biologia/Extenso Consrcio CEDERJ Denise Lannes Professora Adjunta/Instituto de Bioqumica Mdica/UFRJ Consultora: Silvia Regina Turcinelli Centro de Biologia Molecular e Engenharia Gentica (CBMEG)/UNICAMP

Ao cursista
Se para ns, que aparentemente, temos uma certa intimidade com estes termos e seus significados, tudo parece um tanto complexo, imagine para os nossos estudantes que alm de serem obrigados a compreend-los ainda passam pelo fogo cruzado que estabelecer relaes entre os mesmos. Ao mesmo tempo em que conceitos bsicos ainda causam uma certa confuso, muitas informaes novas chegam at ns por meio da mdia e acabamos tendo que dar explicaes, algumas vezes muito mais profundas do que espervamos, quando os alunos, instigados pela forma como as notcias so veiculadas, vm nos questionar... Portanto, pensamos ser esta uma boa hora para trazer os conceitos bsicos para serem discutidos e utilizados em sala de aula como fundamentos, tentando entender a enorme quantidade de informao nova produzida em to curto espao de tempo. A Biologia Molecular no nada alm do que o estudo em nvel molecular das questes relacionadas hereditariedade e evoluo dos organismos vivos. A podemos incluir toda a Gentica, inclusive o conhecimento relacionado ao DNA e seus mecanismos de ao. Questes envolvendo engenharia gentica, clones, transgnicos, vacinas de DNA, vrus de RNA, bibliotecas genmicas, clonagem, clulas tronco, terapia gnica, Projetos Genoma (caf, cana-de-acar, eucalipto, Xilella fastidiosa) e Projeto Genoma Humano/Projeto Genoma d o Cncer utilizam como base tanto os conhecimentos de Biologia Molecular quanto os da Gentica clssica. Certamente, nestas poucas pginas, no esgotaremos o assunto, mesmo porque esse no o nosso objetivo. Nossa inteno fornecer a voc, caro professor, espao para ler e, principalmente, discutir sobre este assunto to novo e j com tanta histria para contar! Seja bem-vindo e divirta-se com a gente!

HISTRIA DA CINCIA DA GENTICA BIOLOGIA MOLECULAR No ltimo sculo temos assistido uma corrida cientfica, particularmente na rea de Biologia Molecular. Hoje, vemos a todo o momento, principalmente na mdia, notas envolvendo temas tais como terapia gnica e transgnicos entre outros. Muitos vem a Engenharia Gentica como um novo campo, mas de fato as tcnicas utilizadas hoje so resultado da unio de vrios conhecimentos produzidos pelas mais diferentes reas do saber e muita pesquisa a qual vem sendo realizada ao longo de mais de 125 anos. A linha do tempo aqui apresentada mostra descobertas chaves que culminaram no Projeto Genoma Humano, um esforo internacional, o qual visava a decifrar a seqncia de trs bilhes de pares de bases de subunidades de DNA que se encontram nos cromossomos humanos. 1865 - Herana Mendeliana Gregor Mendel publicou os resultados dos seus trabalhos realizados com ervilhas do tipo Pisum sativum. Aps vrias geraes de cruzamentos Mendel foi capaz de postular suas regras gerais de herana gentica. Ele props que havia discretas unidades de hereditariedade (que hoje chamamos de genes) que eram transmitidas de gerao para gerao, mesmo que algumas caractersticas no fossem expressas em todas as geraes, elas voltavam a aparecer. O trabalho de Mendel passou a ter grande reconhecimento no meio cientfico apenas a partir do incio do sculo XX. Atualmente, sabe-se que as teorias de Mendel so apenas parcialmente vlidas. No entanto, unicamente dele o mrito de ter provocado o primeiro grande salto na histria da cincia quanto formulao das teorias sobre os mecanismos que regem a transmisso de caractersticas hereditrias.

1869 - Isolado o DNA

Miescher isolou o DNA pela primeira vez. A descoberta do DNA ocorreu em 1869 e foi feita pelo bioqumico alemo Johann Friedrich Miescher. Ele queria determinar os componentes qumicos do ncleo celular e utilizava glbulos brancos provenientes do pus em sua pesquisa. A escolha desta clula deveu-se disponibilidade e tamanho do ncleo. Analisando os ncleos, Miescher descobriu a presena de um composto de natureza cida que era desconhecido at o momento. Era rico em fsforo e em nitrognio, desprovido de enxofre e resistente ao da pepsina (enzima proteoltica). Esse composto, que aparentemente era constitudo de molculas grandes, foi denominado, por Miescher, nuclena.

1880 a 1890 Das Bases Nitrogenadas ao cido Nuclico Em 1880, um outro pesquisador alemo, Albrecht Kossel, demonstrou que a nuclena continha bases nitrogenadas em sua estrutura, explicando o fato da nuclena ser rica em nitrognio. Nove anos depois, Richard Altmann, que era aluno de Miescher, obteve a nuclena com alto grau de pureza, comprovando sua natureza cida e dando-lhe, ento, o nome de cido nuclico. 1882 Cromossomos Quem so? O alemo Walter Flemming descobriu corpos com formato de basto dentro do ncleo das clulas, que denominou "cromossomos". 1890 A sutil diferena que faz toda a diferena: Uracila ou Timina? Em 1890, foi descoberto em levedura (fermento biolgico) um outro tipo de cido nuclico, que possua uracila ao invs de timina e ribose ao invs da desoxirribose. Dessa maneira, foram caracterizados dois tipos de cidos nuclicos, de acordo com o glicdio que possuam: cido ribonuclico (RNA) cido desoxirribonuclico (DNA) 1902 Partculas da hereditariedade

O norte-americano Walter Sutton e o alemo Theodor Boveri deram incio teoria cromossmica da hereditariedade (as "partculas" da hereditariedade estariam localizadas nos cromossomos). 1909 Gentipo e Fentipo: Afinal quem quem? O dinamarqus Wilhelm Johannsen introduziu o termo "gene" para descrever a unidade mendeliana da hereditariedade. Ele tambm utilizou os termos "gentipo" e "fentipo" para diferenciar as caractersticas genticas de um indivduo de sua aparncia externa. 1912 Dos cidos Nuclicos aos Nucleotdeos Em 1912, Phoebus Levine e Walter Jacobs concluram que o componente bsico dos cidos nuclicos era uma estrutura composta por uma unidade que se constitua numa base nitrogenada ligada a uma pentose, e esta por sua vez, ligada a um fosfato. Esta unidade foi denominada de nucleotdeo. Um cido nuclico seria ento uma molcula composta por vrios nucleotdeos unidos entre si, ou seja, um polinucleotdeo. 1915 Genes dispostos linearmente nos cromossomos O norte-americano Thomas Hunt Morgan e seus alunos Alfred Sturtevant, Hermann Joseph Muller e Calvin Bridges publicam o livro "O Mecanismo da Hereditariedade Mendeliana", no qual relatam experimentos com drosfilas, as moscas -das-frutas, e mostram que os genes esto linearmente dispostos nos cromossomos. 1927 - Danos genticos podem ser hereditrios? Hermann J. Muller provou que os raios-X podiam causar mutaes que passavam de uma gerao para outra. Submetendo drosfilas a raios-X, observou que a freqncia das mutaes aumentava cerda de cem vezes em relao populao no exposta. 1928 Transformao Que bicho esse? E afinal, transformar o qu? Em qu? Para qu? Durante muito tempo, as protenas foram consideradas como as mais provveis detentoras da hereditariedade, mas um experimento realizado em 1928 daria incio derrocada desta hiptese. Este experimento envolvia a inoculao de bactrias causadoras de pneumonia em camundongos e seu propsito era, simplesmente, descobrir meios de se controlar a doena em humanos. Foi Frederick Griffith que realizou uma srie de experimentos que forneceram evidncias que a informao gentica est contida em uma molcula especfica e no nas protenas. Griffith estava tentando encontrar uma vacina contra Streptococcus pneumoniae, uma bactria que causa pneumonia em mamferos. Ele sabia que: existiam duas cepas distinguveis de pneumococcus: uma que produzia colnias lisas (S - do ingls smooth) e outra que produzia colnias rugosas (R - do ingls rough). Clulas da cepa lisa so encapsuladas com uma capa de polissacardeos, enquanto que as clulas da cepa rugosa no possuem esta cpsula. Estes dois fentipos alternativos (S e R) so geneticamente herdados. Ele realizou quatro conjuntos de experimentos: Experimento 1: Griffith injetou clulas vivas da cepa S de Streptococcus pneumoniae em camundongos. Resultado: Os camundongos morreram de pneumonia. Concluso: A cepa encapsulada patognica. Experimento 2: camundongos foram injetados com clulas vivas da cepa R de S. pneumoniae. Resultado: Os camundongos permaneceram saudveis. Concluso: as cepas de bactria que no possuam a cpsula de polissacardeos no eram patognicas. Experimento 3: camundongos foram injetados com clulas da cepa S de pneumococos mortas por calor. Resultado: os camundongos permaneceram saudveis. Concluso: a cpsula de polissacardeo no causa pneumonia por que ela ainda est presente nas bactrias mortas pelo calor que neste estado so no patognicas. Experimento 4: clulas da cepa S mortas pelo calor foram misturadas com clulas vivas da cepa R e injetadas em camundongos. Resultado: os camundongos desenvolveram pneumonia e morreram. Amostras de sangue dos camundongos mortos continham clulas de pneumococos do tipo S vivas. Concluso: clulas de pneumococos do tipo R adquiririam das clulas do tipo S a habilidade de sintetizar a cpsula de polissacardeo. Griffith cultivou clulas do tipo S isoladas dos camundongos mortos. Porque as bactrias produziram clulas filhas encapsuladas, ele concluiu que o novo trato adquirido era hereditrio. Esse fenmeno agora chamado de transformao (assimilao de um material gentico externo por uma clula). 1931 DNA e RNA: cidos Nuclicos recebem seu RG definitivo! O russo Phoebus Aaron Levene, trabalhando nos EUA, estuda a estrutura qumica dos cidos n uclicos e identifica seus componentes bsicos. Os termos "cido desoxirribonuclico" e "cido ribonuclico" (RNA) se tornam de uso comum. 1941 - "One gene One enzyme" Ser mesmo?

Os trabalhos decisivos sobre a funo do gene foram apresentados por Beadle e Tatum que propuseram a teoria "um gene uma enzima". As idias principais do trabalho realizado por esses autores foram: a. Todos os processos bioqumicos dos organismos esto sob controle gentico. b. Os processos bioqumicos ocorrem numa seqncia de reaes individuais. c. Cada reao simples controlada por um gene simples. d. Cada gene atua por intermdio do controle e produo de uma enzima especfica. Na atualidade esta teoria apresenta as seguintes falhas: a. Um gene pode especificar a sntese de uma cadeia polipeptdica que no apresenta nenhuma funo enzimtica (Ex.: Hemoglobina). b. Uma enzima pode ser constituda por mais de uma cadeia polipeptdica (Ex.: RNA polimerase constituda por vrias cadeias e, conseqentemente, est sob o controle de vrios genes. c. Um gene pode controlar a atividade de uma enzima especificada por outro gene (Ex.: stio operadores, repressores, etc.). 1943 Mutaes = Eventos Randmicos: Estaria ento nascendo aqui a nossa Biologia Molecular? Para saber mais sobre eventos randmicos, pesquise em: http://contanatura.weblog.com.pt/arquivo/2004/11/biblioteca_mini_3.html http://atlas.sct.embrapa.br/pdf/cct/v15/cc15n302.pdf A Biologia Molecular nasceu em novembro de 1943 com a publicao de um artigo num nmero da revista Genetics (publicado em 1944), assinado por Salvadore Luria e Max Delbrck com o ttulo: Mutations of bacteria from virus sensitivity to virus resistance (Genetics.1943. vol:28, page:491). Este artigo demonstra que a resistncia (hereditria) de uma bactria particular (Escherichia coli tipo B) a um vrus especfico (alpha, hoje em dia chamado T1) uma propriedade adquirida pela bactria antes de entrar em contato com o vrus. Dito de outra forma: o fentipo hereditrio no resulta da adaptao da bactria pscontato com o vrus, mas sim de uma mutao gentica prvia. Essa demonstrao revelou-se fundamental na histria da Biologia. a prova formal que a teoria da evoluo das espcies proposta por Darwin correta na essncia, enquanto que Lamarck, e a hereditariedade dos caracteres adquiridos, ficaram definitivamente enterradas. 1944 DNA: Enfim ... A famosa molcula da hereditariedade! Qualquer estudante com um mnimo de informao em biologia sabe que as caractersticas genticas da grande maioria dos seres vivos so transmitidas de gerao a gerao pelo cido desoxirribonuclico (DNA). No entanto, a primeira demonstrao do papel central desempenhado por essa molcula na hereditariedade ocorreu h apenas seis dcadas, e no foi aceita de imediato. Depois da experincia realizada em 1928 pelo microbilogo ingls Frederick Griffith mostrando que bactrias capazes de causar uma doena podiam, mesmo depois de mortas, passar essa capacidade para bactrias vivas que a tinham perdido, comeou a corrida para entender como isto poderia ocorrer. Esse enigma s seria decifrado em 1944, quando um trabalho de trs mdicos norte-americanos Oswald T. Avery, Colin M. MacLeod e Maclyn McCarty demonstrou que a molcula que continha as informaes transmitidas de gerao a gerao era o cido desoxirribonuclico (DNA). Assim, Oswald T. Avery, Colin M. MacLeod e Maclyn McCarty identificaram que o DNA a molcula da hereditariedade. 1946 Conjugao bacteriana: Sexo das bactrias Mas at as bactrias? Lederberg and Tatum demonstraram a troca de material gentico entre bactrias. O processo foi chamado de conjugao bacteriana e consiste em transferncia de genes de uma bactria doadora para uma receptora. Na conjugao bacteriana duas bactrias unem-se temporariamente por meio de uma ponte citoplasmtica. Em uma das clulas, denominada "doadora", ocorre a duplicao de parte do cromossomo. Essa parte duplicada separa-se e, por intermdio da ponte citoplasmtica, passa para outra clula, denominada "receptora", unindo-se ao cromossomo dessa clula receptora. Esta ficar, ento, com constituio gentica diferente daquela das duas clulas iniciais. Essa bactria "recombinante" pode apresentar diviso binria, dando origem a outras clulas iguais a ela.

Amabis e Martho 1950 Transposons: O DNA pula de um lugar a outro a Natureza se adaptando e ainda trazendo benefcios ante as adversidades... Transposons so seqncias de DNA mveis que podem se autoreplicar em um determinado genoma. Um transposon pode ser inserido em outros genomas, vindo a conferir ao hospedeiro uma vantagem seletiva, como, por exemplo, a resistncia a antibiticos . Barbara McKlintock descreveu estes elementos genticos que trocavam de posio no genoma do milho e que podiam tambm causar mutaes. Aos 80 anos, ela foi laureada com o prmio Nobel de 1983 pela descoberta dos elementos genticos mveis. 1952 Hereditariedade - Hershey & Chase Aps os experimentos de Frederick Griffith, em 1928, era necessria uma demonstrao convincente de que o DNA e no as protenas era, realmente, o material responsvel pela hereditariedade. Esta confirmao veio por meio do uso de um vrus bacterifago (T2). Supunha-se que a infeco do fago (vrus) na bactria se daria na introduo de informaes que permitiriam sua posterior reproduo. O fago tem uma estrutura extremamente simples, resumindo-se ao envelope viral protico preenchido com o seu DNA. Utilizou-se um tipo de marcao radioativa para a cabea protica do fago, e outra para o DNA. O prximo procedimento foi infectar clulas de Escherichia coli com culturas de fagos diferentes. Depois do tempo necessrio para a infeco, as clulas bacterianas eram recuperadas e centrifugadas a fim de que pudessem ser liberadas dos fantasmas (estrutura protica da cabea do fago vazia). A radioatividade era ento medida. Nas culturas de fagos marcados com material para identificar o DNA, a radioatividade aparecia ou dentro da clula ou na prole de fagos, fornecendo evidncias de que o DNA penetrava nas clulas. Por outro lado, a radiao oriunda do material que marcou a capa protica estava sempre presente nos fantasmas dos fagos, mostrando que a protena do fago no penetrava na clula de E. coli. Com este experimento, demonstrava-se que a informao hereditria era transmitida pelo DNA, e no pela protena. 1952 Transduo: O vrus a estrela da vez... Ainda em 1952, Lederberg and Zinder descreveram a transduo, transferncia de informaes genticas por vrus. Transduo um dos mecanismos de transferncia gnica, no qual DNA bacteriano transferido de uma linhagem para outra por meio de um vrus bacterifago. O DNA incorporado pelo fago (vrus) em uma bactria doadora na qual ele est se replicando e aps a infeco de uma nova linhagem este DNA liberado dentro desta nova bactria receptora.

Amabis e Martho

1953 O modelo da dupla hlice para o DNA... Um marco histrico!

Crick and Wilkins, junto com Watson, propuseram o modelo da dupla hlice do DNA. Watson e Crick identificaram a estrutura em dupla hlice do DNA aps analisar uma imagem da molcula por difrao de raios X

realizada por Rosalind Franklin. Crick, Wilkins, e Watson receberam o prmio Nobel de Medicina e Fisiologia em 1962.

1954 O Cromossomo circular!? Jacob e Wollman realizaram experincias que esclareceram o mecanismo de conjugao bacteriana e apresentaram evidncias da natureza circular do cromossomo de Escherichia coli analisando os resultados destas experincias. 1958 Replicao do DNA Com relao ao mecanismo da replicao do DNA, os trabalhos de Meselson e Sthal confirmam a hiptese de Watson e Crick que cada dupla hlice filha teria um filamento parental e outro recm-sintetizado, ou seja, a replicao do DNA feita de modo semiconservativo. Final da dcada de 1950 DNA polimerase: Uma ferramenta imprescindvel at hoje! No final da dcada de 1950, Arthur Kornberg identificou e purificou a enzima DNA polimerase. Verificou-se que a replicao do DNA era auxiliada por inmeros tipos de enzimas e fatores, mais tarde revelados, tais como: DNA topoisomerases, helicases, protenas de proteo contra degradao do DNA quando na forma monofilamentar (SSB), ligases, primases etc. (KORNBERG, 1980). 1961 RNA e a sntese de protenas. O sul-africano Sydney Brenner, o francs Franois Jacob e Matthew Meselson descobrem que um tipo de RNA (o RNA mensageiro, ou mRNA) leva a informao gentica "inscrita" na dupla hlice para a maquinaria celular que produz protenas. Francis Crick e Jacques Monod tiveram tambm participao nessa descoberta. O norte-americano Marshall Nirenberg anuncia a comprovao experimental de que uma seqncia de bases especficas, uma seqncia de aminocidos revela o contedo da primeira "palavra" do chamado cdigo gentico (trs bases uracila correspondem ao aminocido fenilalanina). 1962 A Recombinao entre os Genes... At onde eles vo? Uma idia mais compatvel com a estrutura do DNA, recm-proposta por Watson e Crick, veio com Benzer, por meio do estudo de mutantes do fago T4. Segundo ele, os genes seriam compostos de pequenas unidades, os recons, em que a recombinao poderia ocorrer entre eles, mas no dentro deles. A idia anterior era de que o gene seria a menor unidade de recombinao. Benzer criou ainda os termos muton (menor unidade de mutao) e cstron (menor unidade de funo). 1966 O Cdigo Gentico: As Palavras esto a ... O desafio agora : Como decifr-las? Grupos de pesquisa liderados por Marshall Nirenberg e pelo indiano Har Gobind Khorana decifram, com outros pesquisadores dos EUA, da Inglaterra e da Frana, a srie completa de "palavras" do cdigo gentico. 1968 Enzimas de restrio: Sem elas seria impossvel tentar compreender uma molcula to complexa e imensa como o DNA de uma s vez... Daniel Nathans e Hamilton Smith, dos EUA, e Werner Arber, da Sua, descrevem as nucleases de restrio, enzimas que reconhecem e cortam seqncias curtas especficas de DNA em pontos determinados. 1970 - Transcriptase Reversa: O vrus novamente a estrela da vez! Temin and Baltimore identificaram a transcriptase reversa em RNA de vrus. A transcriptase reversa uma enzima que utiliza a fita nica de RNA como modelo para a produo de uma fita de DNA, que seria complementar quele RNA. Esta descoberta demonstrou a possibilidade de novas informaes sobre DNA e RNA. Temin, Baltimore, e Dulbecco receberam o Prmio Nobel de Medicina e Fisiologia em 1975. 1972 Splicing: Um verdadeiro Manual de Instrues que facilita a nossa vida sabido que o DNA contm as informaes necessrias para o funcionamento dos organismos. Esse manual de instrues, porm, precisa ser interpretado pelas clulas, por meio de um mecanismo que envolve diversas e complexas etapas. Um papel fundamental nesse mecanismo cabe a um processo denominado splicing, sem o qual as instrues no poderiam ser lidas. O splicing no s organiza tais instrues, eliminando partes que

no interessam, mas ainda permite selecion-las, de modo que o mesmo gene fornea diferentes instrues para as clulas. At a pouco tempo atrs, pensava-se que os genes celulares eram compostos por arranjos contnuos de nucleotdeos. Somente em 1977 descobriu-se a existncia de genes interrompidos. Assim, quando se olhava o DNA, percebia-se que o gene possua mais nucleotdeos do que aqueles encontrados no mRNA (necessrios para a produo de protenas). Hoje, sabe-se que os transcritos primrios de RNA contm a cpia de toda seqncia presente no DNA e que algumas partes dessa seqncia so recortadas dessa molcula de forma a produzir o RNA funcional. As seqncias que so retiradas do transcrito primrio foram chamadas de ntrons e aquelas que permaneceram como parte do RNA funcional, exons. O splicing consiste na retirada dos ntrons de um RNA precursor, de forma a produzir um mRNA maduro funcional. Este processo foi descrito pela primeira vez por Mertz e Davis em 1972. 1972 DNA Recombinante: Aqui comea o verdadeiro fascnio dos cientistas! O norte-americano Paul Berg obteve as primeiras molculas de DNA recombinante, unindo DNA de diferentes espcies e inserindo esse DNA hbrido em uma clula hospedeira. Junto com Gilbert e Sanger, Berg recebeu o Nobel de Qumica em 1980. 1975 Southern Blotting: O DNA comea a ser visto pelo avesso. Southern descreveu um novo instrumento analtico envolvendo a transferncia de fragmentos de DNA por capilaridade por gel de agarose para membrana resultando em rplica exata do fragmento d e DNA isolado. Detecta polimorfismo de DNA ou mutao. 1976 Insulina Humana: A Biologia Molecular comea a incomodar e ao mesmo tempo trazer benefcios sociedade... Criada a primeira companhia de engenharia gentica, a Genentech. Produz a primeira protena humana em uma bactria geneticamente modificada e, em 1982, comercializa a primeira droga recombinante, insulina humana. 1977 ntrons: Quem so eles e o que eles fazem? Os britnicos Chow and Roberts e o norte-americano Phil Sharp descrevem, independentemente, que genes de organismos eucariticos (e no procariticos) so interrompidos por regies chamadas ntrons, que no especificam aminocidos para a formao de protenas. Roberts e Sharp ganharam o Nobel em Medicina e Fisiologia de 1993. 1977 Seqenciamento de DNA: As Palavras comeam a ser colocadas em ordem! Gilbert and Sanger desenvolveram mtodos independentes para determinar um nucleotdeo na seqncia de DNA. Sanger e seus companheiros utilizaram o mtodo desenvolvido por eles para determinar a seqncia completa de nucleotdeos de um vrus bacterifago. Este foi o primeiro genoma a ser seqenciado. Junto com Berg, Gilbert and Sanger receberam o Prmio Nobel em Qumica de 1980. 1980 Incio da comercializao: Poltica x Cincia x Sociedade David Botstein, Ronald Davis, Mark Skolnick e Ray White, dos EUA desenvolveram uma tcnica baseada no uso de enzimas de restrio para fragmentar o DNA. A tcnica foi importante para o Projeto Genoma Humano. A Suprema Corte dos EUA decide que formas de vida alteradas podem ser patenteadas. Kits de Biologia molecular comearam a ser produzidos por indstrias de biotecnologia. 1985 DNA fingerprint: O RG do DNA agora com impresso digital! O britnico Alec Jeffreys publica artigo em que descreve tcnica de identificao que ficou conhecida como "impresso digital" por DNA ("DNA fingerprint"), que permitiu a elucidao mais precisa de vrios crimes. 1985 PCR: De um simples (muito simples) fragmento a bilhes de cpias! Publicado artigo do norte-americano Kary Mullis que descreve o mtodo PCR (reao em cadeia de polimerase, em ingls), que possibilita a obteno rpida de bilhes de cpias de um segmento especfico de DNA. Mullis ganhou o Nobel em Qumica em 1993. 1985 Terapia Gnica: A primeira luz no fim do tnel para as mais diferentes e cruis enfermidades que arrasam seus portadores e suas famlias... Os NIH dos EUA aprovaram diretrizes gerais para a realizao de experimentos com terapia gentica em seres humanos. 1988 Patente: Uma novidade para os cientistas? Nos EUA, Philip Leder e Timothy Stewart obtiveram primeira patente para um animal geneticamente modificado, um camundongo altamente suscetvel ao cncer de mama. 1989 Instituto Nacional para Pesquisa do Genoma Humano Criao nos EUA do Instituto Nacional para Pesquisa do Genoma Humano (NHGRI), chefiado por James Watson, para determinar toda a seqncia do DNA que compe os cromossomos humanos. 1990 Projeto Genoma Humano: Um salto impensvel para Watson e Crick!

Incio formal do Projeto, um esforo para "find all the genes on every chromosome in the body and to determine their biochemical nature" descrever todos os genes encontrados no cromosomos do corpo humano e determinar sua natureza bioqumica. 1990 Utilizando a Terapia Gnica: Vislumbra-se um primeiro fio de esperana! Pela primeira vez utilizada, com sucesso, a terapia gentica, em uma menina de quatro anos com um tipo de deficincia no sistema imunolgico chamado ADA. 1995 Haemophilus influenza seqenciada Craig Venter, Smith, Fraser e companheiros publicam, pela primeira vez o genoma completo de um organismo no viral, a bactria Haemophilus influenza. 1996 Dolly: Para muitos cientistas... Um segundo marco histrico! Nascimento da ovelha Dolly, primeiro mamfero clonado a partir de uma clula de um animal adulto pelo Instituto Roslin (Esccia) e pela empresa PPL Therapeutics. S em fevereiro do ano seguinte o feito foi divulgado. Dolly morreria de envelhecimento precoce em fevereiro de 2003. 1996 Mapeamento gentico comp leto do camundongo. 1998 Caenorhabditis elegans: O primeiro multicelular e seu genoma! O britnico John Sulston e o norte-americano Robert Waterstone seqnciaram o genoma do verme C. elegans, primeiro organismo multicelular a ter o seu DNA transcrito. 1999 Primeiro cromossomo humano seqenciado Pesquisadores do Projeto Genoma Humano publicaram o seqenciamento completo do DNA encontrado no cromossomo 22. 2000 Genoma Humano! - Mas ainda apenas um rascunho .... Pesquisadores do consrcio pblico Projeto Genoma Humano e da empresa privada norte-americana Celera anunciam o rascunho do genoma humano, que seria publicado em fevereiro de 2001. 2000 Genoma da Xilella fastidiosa: O amarelinho dos ctricos e os cientistas brasileiros pela primeira vez na capa da Revista Nature! No Brasil, pesquisadores paulistas anunciam o seqenciamento do genoma da bactria Xylella fastidiosa, a causadora da doena do amarelinho em ctricos. O artigo foi destacado na capa da revista "Nature".

Atividade Extra
Hipcrates j dizia... Por mais surpreendente que possa parecer, um dos grandes obstculos para se compreender a natureza a incapacidade de se formular a pergunta apropriada. Os filsofos e pesquisadores gregos na antiguidade j sabiam que o questionamento a ser feito era a chave para desvendar os muitos mistrios que percorriam suas mentes j naquela poca. Muitas questes precisavam de respostas. Uma delas era a questo da hereditariedade. Qual a natureza da hereditariedade? Era a grande questo a ser respondida. Desde Hipcrates (~410 a.C.), na Grcia antiga, esta questo vem povoando a imaginao de muitos estudiosos. Hipcrates, considerado o Pai da Medicina, poderia tambm ser aceito como um dos Pais da Gentica. Por volta do ano 410 a.C., ele props a p angnese como uma hiptese para explicar a hereditariedade. A pangnese admitia que a hereditariedade baseava-se na produo de partculas por todas as partes do corpo e na transmisso dessas partculas para a descendncia no momento da concepo. Darwin iria adotar essa mesma hiptese muitos sculos depois, tendo a pangnese permanecido como a nica teoria geral de hereditariedade at o final do sculo XIX. Hipcrates props tambm o conceito de hereditariedade de caracteres adquiridos. Por sua vez, um pouco mais tarde, Aristteles (~350 a.C.), embora admitisse que a hiptese de Hipcrates estivesse correta em alguns pontos, criticou outros e props novas reflexes que at hoje so consideradas no estudo da hereditariedade. Aristteles admitia a existncia de uma base fsica da hereditariedade no smen produzido pelos pais. Esse ponto, to bvio nos dias de hoje, foi fundamental para todo trabalho posterior na rea. Essa idia permitiu que se deixasse de atribuir hereditariedade uma base sobrenatural ou emocional e se passasse a pens-la como resultado da transmisso de algum tipo de substncia pelos pais. Naquela poca (350 a.C.), cerca de quatro sculos antes de nossa era, sabia-se muito pouco a respeito da natureza do smen. Aristteles usou o termo smen como ns usamos gametas atualmente e no para designar a secreo dos machos que contm os espermatozides. O papel dos gametas na reproduo s foi estabelecido em meados do sculo XIX. Estes e muitos outros argumentos levaram Aristteles a rejeitar a pangnese e a perguntar: Por que no admitir diretamente que o smen... origina o sangue e a carne, ao invs de afirmar que o smen ele prprio tanto sangue quanto carne? Durante os sculos XVIII e XIX, o procedimento padro de se procurar informaes a respeito de hereditariedade era por meio de cruzamentos e retrocruzamentos (experimentos de retrocruzamento so realizados at os dias

de hoje apenas entre espcies pertencentes ao reino vegetal e espcies do reino animal consideradas cobaias (drosfilas e camundongos), por questes ticas e de co-sanginidade). Eram feitos cruzamentos entre indivduos com estados contrastantes das caractersticas e a descendncia era analisada. At hoje esse um dos procedimentos mais poderosos para se obter informaes a respeito de hereditariedade. Mas a questo promordial - Qual a natureza da hereditariedade? - continuou sem resposta durante muitos sculos. Pouco progresso foi feito no campo da hereditariedade at o final do sculo XIX. Assim, poucas coisas relevantes no campo do estudo da hereditariedade aconteceram no perodo entre Aristteles (384-322 a.C.) e Gregor Mendel (1822-1884), mas nesse perodo foram estabelecidas as bases da investigao cientfica. Os experimentos mais famosos de Mendel foram realizados com ervilhas de jardim, no monastrio onde vivia. Foi a partir dessas experincias que ele estabeleceu as leis que hoje levam seu nome: Mendel realizou centenas de cruzamentos entre plantas de caractersticas diferentes, porm da mesma espcie, anotando os resultados e observando que certas caractersticas das plantas resultantes de sucessivos cruzamentos predominavam em proporo c onstante. Ele concluiu que, ao contrrio de outros organismos que se reproduzem sexualmente, as plantas das ervilhas produzem sua prole por meio da unio de gametas clulas reprodutivas, ou seja, espermatozides no homem e vulos na mulher. Embora a questo da hereditariedade seja bem mais complicada do que o cruzamento de ervilhas, Mendel descobriu um princpio gentico fundamental: a existncia de caractersticas como a cor das flores que, segundo ele, devida a um par de unidades elementares de hereditariedade, hoje conhecidas como genes. As famosas Leis de Mendel: 1. A primeira lei tambm conhecida por princpio da segregao dos caracteres, em que as clulas sexuais, femininas ou masculinas, devem conter apenas um fator para cada caracterstica trans mitida. 2. A segunda lei trata do princpio da transferncia dos caracteres, isto , cada caracterstica hereditria transmitida independentemente das demais. 3. Na terceira lei, Mendel formulou os conceitos da dominncia, em que os seres hbridos apresentam um carter dominante que encobre segundo determinadas propores o chamado carter recessivo. Mendel apresentou seu trabalho para uma sociedade de cincia natural local em 1865 em um artigo intitulado "Experiments with Plant Hybrids." Para ver o trabalho original de Mendel (em ingls) acesse: http://www.geocities.com/joab_br/mendel/gm-65.pdf Em 1900, pesquisas independentes realizadas por outros pesquisadores confirmaram os resultados de Mendel. Observando os trabalhos ao longo do tempo, notamos uma pequena mudana a cada passo do estudo da hereditariedade, incluindo e questionando as hipteses e os postulados propostos ao longo da histria do conhecimento. Proposio no evidente nem demonstrvel que se admite como princpio de um sistema dedutvel, de uma operao lgica ou de um sistema de normas prticas . (Novo Dicionrio Aurlio) Qualquer seleo de proposies pode constituir um conjunto de postulados. O termo postulado s tem significado se relacionado com um processo de investigao. http://blogexperimental.blogs.sapo.pt/arquivo/2004_05.html Os postulados no precisam ser comprovados experimentalmente. Pelo contrrio, so proposies que podem levar a construo de teorias. QUESTES 1. Identifique e descreva os paradigmas quebrados durante este perodo por Aristteles e depois por Mendel. 2. Considerando estas informaes discuta a importncia da quebra de paradigmas na Cincia. Paradigmas Como diz Popper (Karl Raimund Popper 1902/1994, filsofo da cincia, nascido na ustria e naturalizado ingls): cada problema surge da descoberta de que algo no est de acordo com nosso suposto conhecimento; ou, examinado em termos lgicos, da descoberta de uma contradio interna entre nosso suposto conhecimento e os fatos . As hipteses provisrias so, ento, submetidas a testes que ofeream as mais severas condies para a crtica. Mas os nicos testes p ossveis so aqueles que, eventualmente podem mostrar que a hiptese falsa. No existe maneira em cincia de se mostrar que uma hiptese correta ou verdadeira. Assim, as hipteses cientficas se credenciam por meio de testes de falseabilidade. Isso quer dizer que em cincia, podemos ter certeza quando estamos errados, mas nunca poderemos ter a certeza de estarmos certos. Segundo Bombassaro (Luis Carlos Bombassaro, professor de filosofia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul): Especialmente em cincia, aquele que julga ter encontrado uma resposta conclusiva d mostras no

somente de seu fracasso, mas tambm do fracasso da prpria cincia. Aquele que for incapaz de transpor os limites do pensamento dogmtico, impostos pela educao cientfica formal, e no aceitar o jogo do pensamento crtico est longe de fazer cincia, pois no poder resistir constante transformao das teorias, mudana conceitual e ao cada vez mais clere avano do conhecimento. A contribuio de Thomas Kuhn (1922/1996 - fsico e filsofo americano) No livro The Structure of Scientific Revolutions , publicado em 1962, Thomas Kuhn defendeu a idia de que o progresso em cincia se d em duas etapas que poderamos caracterizar como ajustes e mudanas drsticas, ou, para ser mais atual, por um equilbrio pontuado. Kuhn salienta que, de tempos em tempos, ocorre uma revoluo na maneira como os cientistas vem seus problemas de pesquisa e os tipos das observaes e experimentos que devem realizar. Alguma grande idia, audaz e inslita, os leva a ver os dados existentes sob uma nova perspectiva, sugerindo um novo programa de pesquisa. Estas grandes idias so, na terminologia de Kuhn, paradigmas as realizaes cientficas reconhecidas universalmente que durante um certo tempo fornecem modelos de problemas e solues para uma comunidade de cientistas . Quer saber mais sobre isso? Acesse: http://dreyfus.ib.usp.br/bio201/texto1.pdf

Atividade Extra
Eram os genes astronautas? O nome gene, no caiu do cu. uma criao humana, para dar conta de um novo tipo de pensamento. Ele foi criado pelo bilogo dinamarqus Wilhelm Johannsen, em 1909, para denominar os pares de fatores de Mendel e as gmulas, unidades da hereditariedade criadas pelo naturalista ingls Charles Darwin (1809-1882), adotadas no lugar dos determinantes criado pelo bilogo alemo August Weismann (1834-1914), que, por sua vez, substituram pangenes propostos pelo geneticista holands Hugo de Vries (1848-1935) que se inspirou em Hipcrates para cunhar o termo. Etimologicamente, o nome gene origina-se de gnos , radical do verbo grego ggnesthai , que significa nascer. Assim, gnos pode ser entendido como origem, o que gera, o que produz. Desde Mendel at os dias atuais, as definies de gene tm se modificado. Os Genes, que no incio eram Pares de Fatores mendelianos, constituam-se, desta forma, em objetos construdos, sendo sua existncia material s entendida dentro de uma teoria. Com essa nova palavra, evitava-se o preconceito e assim abria-se a possibilidade do avano do conhecimento cientfico nessa rea. Gene a palavra que abre a possibilidade para uma revoluo revoluo no sentido utilizado pelo filsofo norte-americano Thomas Kuhn (1922-1996), em que novas premissas (paradigmas ou teorias) requerem a modificao das antigas teorias e a reavaliao dos fatos conhecidos. Essa no uma mudana fcil ou simples. A ela se ope a comunidade cientfica estabelecida, pois so os integrantes dessa comunidade os criadores das teorias vigentes a serem testadas, at que apresentem fraquezas reconhecidas pelos cientistas. O conceito original continua vlido. Genes so entidades responsveis pela transmisso das caractersticas de uma gerao a outra. Estes pares de fatores comearam a ganhar materialidade com a teoria cromossomial de herana, como contas em um colar, at que a elucidao da estrutura do DNA lhes deu um corpo molecular. assim, que estes pares de fatores ganham materialidade. A perspectiva molecular parecia destinada a uma menor instabilidade . Contudo, ao contrrio de correntes filosficas que, de um modo geral, permanecem fechadas em suas verdades primeiras, as cincias esto abertas, sujeitas a novos fatos. Estes vm e denunciam que os genes apresentam um comportamento mais complexo do que se podia sonhar. A decifrao do cdigo gentico, na dcada de 1960, trouxe novas e instigantes questes: "Toda seqncia de DNA um gene? Qual o papel do DNA que no codifica protenas? Na molcula de DNA, onde comea e onde termina um gene? A existncia de inmeros processos moleculares passa a inviabilizar a aceitao passiva de definies de gene baseadas em seqncias definidas de DNA ou a partir de uma viso esttica, ou mesmo nica, para o gene. Estas vises no mais se sustentam, sendo reformuladas diante de uma nova realidade. Gene tambm j foi definido, mais recentemente, como uma seqncia de DNA que codifica (transcreve) molculas funcionais de RNA. O "incio" de um gene definido por uma regio do DNA chamada regio promotora ou simplesmente promotor, na qual h uma seqncia de bases (iniciadora) que marca o incio da transcrio. O trmino do processo definido por outra seqncia de bases - regio terminadora. H grandes seqncias de DNA localizadas entre os genes e que nunca so transcritas. Algumas delas participam da ativao e da desativao dos genes e do controle da transcrio.

Mas ser que estas definies e explicaes satisfazem todas as dvidas referentes presena de estruturas com funes ainda no definidas? Qual o papel do DNA que no codifica protenas? Toda seqncia de DNA um gene? Onde comea e onde termina um gene? Acredita-se, ento, que esta situao pode ser melhor compreendida de duas formas: 1. Com a adoo de uma lgica que permita uma viso mais ampla e aberta, que reconhea o gene como um processo, que assuma a contradio e a totalidade, a mediao recproca e o movimento; que enxergue a realidade dos fenmenos e no das coisas. Em sntese, uma lgica dialtica; 2. Percebendo que o gene volta s suas origens, ou seja, s pode ser entendido como objeto construdo racionalmente. Sua real existncia dependente dos modelos tericos que lhe do sentido. Fora destes modelos este objeto no se sustenta. Sua utilidade terica se dissipa. Todos essas termos, considerados poca, conceituais, estavam ligados de alguma forma a teorias da hereditariedade preformacionistas. A teoria do preformacionismo j no era mais coerente com o conhecimento da poca de Johannsen. O preformacionismo sugeria que as geraes de novos seres se formavam a partir de pequenos seres (microscpicos ou no) pr-formados que apenas cresceriam dando origem a seres maduros. Este conceito se manteve at o incio do sculo XIX, quando ainda era defendido por Charles Darwin. QUESTO Discuta sobre a importncia da criao do termo GENE para o avano do conhecimento cientfico na rea.

Atividade Extra
Atividade: O show no pode parar... O DNA a molcula que carrega a informao gentica. Para que isto possa ocorrer sem grandes riscos de erros, estas informaes devem ser passadas ao longo das geraes de seres e para cada clula do organismo e suas mais diferentes funes. Reflita e responda mentalmente: que processo ou quais processos permite(m) que estas informaes contidas no DNA passem de uma clula para outra, de gerao para gerao, perpetuando as espcies e ainda mantendo a maioria das caractersticas e funes intactas? Ainda que possa parecer, esta no uma pergunta muito difcil, mas envolve todo um processo que parece ter sua razo de ser, ou seja, at que algum demonstre algo diferente, pois estamos trabalhando com conceitos baseados em modelos... A formao de novas molculas de DNA deve garantir a integridade das informaes que elas carregam. Por isso cada etapa desta replicao deve ser revista. E para garantir que as informaes originais no se percam este processo semi-conservativo. A replicao onde ocorre separao das duas fitas de uma molcula parental de DNA, exposio das bases nitrogenadas e subseqente formao de duas novas molculas em dupla-hlice conhecida como semi-conservativa, pois cada nova molcula ir conter um filamento parental e outro recm sintetizado. A replicao de uma molcula de DNA tem incio nas origens de replicao (ori=seqncias especficas de nucleotdeos reconhecidas por enzimas). Bactrias possuem apenas uma ori. Os Eucariontes apresentam centenas ou milhares de oris em cada cromossomo. A replicao, mesmo que de uma seqncia de DNA (genoma) linear relativamente pequena, como o de alguns tipos de vrus, por exemplo, costuma se iniciar a partir de um ponto interno no genoma. O DNA circular das bactrias tambm se replica a partir de um nico ponto (e, necessariamente, interno). Seqncias de DNA (genomas) maiores apresentam mltiplas origens de replicao. Para cada lado da origem a replicao avana, de tal forma que duas "forquilhas" acabam se encontrando. Antes de mais nada, para que todo o processo se inicie, a dupla hlice de DNA precisa girar e desenrolar-se. Nesta etapa entram em ao as DNA-topoisomerases, enzimas capazes de fazer o DNA girar. Aps essa etapa, necessrio que ele se desenrole... Entram em ao as helicases. OBS. Para prevenir a degradao das fitas que ficam abertas e expostas, mesmo que por um pequeno intervalo de tempo, atuam as SSBs (protenas que se ligam a fitas simples de DNA). Fitas abertas, bases expostas, entram em ao as DNA polimerases. Inicia-se, ento a sntese de uma nova fita complementar para cada fita original. Uma contnua e outra descontnua, formada a partir de fragmentos de bases chamados de Fragmentos de Okazaki. A ligao de todos os fragmentos de okazaki ocorre atravs da ao da DNA ligase . OBS. Erros que por ventura vierem a ocorrer durante o processo de ligao fragmentos de okazaki so corrigidos pela DNA polimerase .

Cada vez que um trecho suficientemente longo de DNA fita simples est disponvel, inicia-se a sntese de um novo Fragmento de Okazaki, de dentro para fora da forquilha. Aps sua sntese uma enzima liga o fragmento recm sintetizado ao fragmento sintetizado anteriormente. Desta forma engenhosa a sntese das novas fitas de DNA sempre feita no sentido 5 3. Lembre-se: Cada uma das duas fitas de uma molcula de DNA utilizada individualmente como molde , e cada uma das duas fitas novas sintetizadas estar ligada ao seu molde. O incio da sntese das fitas novas se faz a partir do ponto de origem de replicao (ori), onde o DNA se abre para que a cpia das novas fitas possa comear a agir. O processo requer um fragmento curto de DNA ou RNA, com a extremidade 3OH livre, em fita simples ligado fita molde, onde a enzima comear a encaixar os nucleotdeos. Esse fragmento, chamado de primer ou iniciador, sintetizado por uma outra enzima, a primase. A conseqncia final deste mecanismo de adio de primers ou iniciadores antes da extenso das fitas novas que haver trechos de RNA entre longos segmentos de DNA na fita descontnua. E mesmo na fita contnua haver pelo menos um primer de RNA seguido de toda a fita feita com DNA. Ser esta a situao final do DNA fita dupla replicado? evidente que no. Heterohbridos RNA-DNA no so estveis. Eles tm que ser retirados do DNA maduro. Para isto entra em ao a atividade corretora da enzima DNA polimerase I (at agora vnhamos falando de uma DNA polimerase sem citar sua denominao completa, que DNA polimerase III). A DNA polimerase I reconhece defeitos ou erros diversos no DNA, inclusive a presena de RNA, mesmo que pareado ao DNA (neste caso a base nitrogenada Timina substituda pela Uracila). Atravs de uma atividade exonucleotdica 5-3, a DNA polimerase I retira o primer, ao mesmo tempo em que, empregando a hidroxila livre da extremidade 3 do Fragmento de Okazaki j sintetizado e situado na extremidade 5 do stio reparado, ressintetiza o espao deixado, desta vez com DNA. Por fim a enzima ligase completa a ligao entre os fragmentos de Okazaki. A figura a seguir mostra um modelo de replicao mais completo do que os habitualmente representados nos livros. preciso entender aqui que a forquilha no existe de fato, mas sim no contexto de uma replicao bidirecional, em que duas forquilhas, apontando em sentidos opostos, se abrem e permitem a replicao do DNA.

http://150.161.28.140/professores/ppa/biolmol/aula2_DNAestrutrep.htm
Figura: Representao da forquilha de replicao, onde esto mostradas as principais enzimas e cofatores que formam o complexo de replicao (replicossomo): DNA polimerase III (duas molculas), RNA primase e helicase. A helicase uma topoisomerase, responsvel pela abertura da forquilha . As duas DNA polimerase III mostradas trabalham de fato em conjunto, na mesma direo; para isto a fita de DNA que replicada descontinuamente forma uma ala e a DNA polimerase III nesta fita periodicamente "larga" a fita e retoma o servio num ponto mais interno. (figura extrada do livro The Cell: A molecular Approach, de J. Cooper, Sinauer Assoc. Co., disponvel on-line no Bookshelf do NCBI)

Ora, a primase no adiciona primers no incio dos cromossomos lineares. Sendo assim, de que forma se replicam as pontas dos cromossomos? Sabemos que cromossomos tm muitas origens de replicao , mas o problema da ponta persiste. Se no possvel adicionar um primer, ento as pontas dos cromossomos vo sendo encurtadas, porque no seria possvel replic-las. Isto de fato acontece: na fita descontnua, sintetizada a partir do molde de DNA fita simples parental, um primer adicionado um pouco antes do final do molde pela DNA primase , aps a sntese do fragmento de Okazaki correspondente, o primer retirado, sobrando um pequeno trecho a ser recomposto. Se isto no ocorrer, e de fato no ocorre, a fita simples de DNA ser eliminada e o DNA ficar mais curto um pouco. Ao longo de mltiplas replicaes a tendncia seria desaparecer o cromossomo! Os eucariotos, que tm cromossomos lineares, possuem uma enzima, chamada telomerase, que adiciona uma seqncia de bases definida, repetindo muitas vezes esta operao, cada vez que detecta um encurtamento significativo da extremidade de um cromossomo . Neste processo a integridade do cromossomo garantida. Por isso tambm as extremidades de todos os cromossomos de uma mesma espcie eucariota so iguais e formadas pelos telmeros.

Figura: Replicao telomrica: a figura identifica as reaes envolvidas na formao de seqncias ricas em G (base Guanina), que formam as extremidades dos cromossomos (telmeros). A fita incompleta sempre descontnua , recm sintetizada e iniciada num primer de RNA, j retirado na figura. Como indicado, a telomerase um complexo RNAprotena que tm um molde de RNA para a sntese de uma seqncia de DNA rica em G . Estas repeties tm a seqncia GGGTGG em Tetrahymena (um protozorio ciliado), GGGTTA em humanos e G1-3A em Saccharomyces . A telomerase apenas alonga a fita contnua, pela adio de um nmero variado de telmeros. A fita descontnua ento parcialmente completada pela DNA polimerase, que tem a primase como uma de suas subunidades (figura baseada no livro Molecular Biology of the Cell , Alberts e cols., Garland Publ, tambm disponvel no Bookshelf do NCBI).

Sobre as TOPOISOMERASES: (to convert = to isomerize) Grupo de enzimas capazes de alterar topologicamente uma verso de DNA em outra. As topoisomerases alteram o nmero de linkages do DNA, ou seja, o nmero de vezes que as cadeias ou fitas do DNA se espiralizam uma sobre a outra. (Lembre-se o modelo do DNA dupla hlice retorcido sobre si mesmo vrias vrias vezes, caso contrrio no caberia dentro de uma clula qualquer). Existem dois tipos de topoisomerases: Topoisomerase I e Topoisomerase II. Vale lembrar aqui que em alguns procariontes (caso especfico das bactrias. Melhor exemplo j estudado at hoje: E. coli) a molcula de DNA superespiralizada (DNA supercoil). Nesse caso, para que as fitas se separem para o incio do processo de replicao temos mais um problema, a superespirilizao da molcula. a que entra a Topoisomerase II Procaritica, tambm chamada de DNA GIRASE . A GIRASE utiliza energia do ATP para desespiralizar o DNA, ou seja gir-lo ao contrrio, para a esquerda, ou mais corretamente chamando, transformar o DNA supercoil em DNA supercoil negativo. Em eucariontes a Topoisomerase II no capaz de fazer isso sozinha, precisando de outras protenas agindo conjuntamente. Lembre-se que em eucariontes tudo sempre mais complicado. Essa ao da topoisomerase II (girase) contrabalanada pela topoisomerase I. Se a topoisomerase II responsvel por girar o DNA ao contrrio, a topoisomerase I responsvel pelo relaxamento dessa toro negativa do DNA, caso contrrio, ele se retorceria sobre si mesmo indefinidamente e a molcula ficaria eternamente virada ao contrrio, ou seja, para a esquerda (supercoil negativo). Por esse motivo a topoisomerase I no necessita da energia do ATP. Ela entra em ao sempre que necessrio para frear a topoisomerase II. H um equilbrio entre as duas topoisomerases (I e II). Como elas esto diretamente envolvidas no incio da replicao e por conseqncia na transcrio pode ocorrer um desequilbrio. Como as bactrias se reproduzem com muita freqncia (ciclo de vida curto) podem ocorrer mutaes no gene TopA que quem expressa a protena topoisomerase I, restabelecendo, atravs de mutantes, novamente os nveis desejveis entre as duas topoisomerases.

Esse processo ainda no muito bem conhecido pela cincia, mas a bactria, muito diferentemente e superior a ns mesmos, o faz sem maiores problemas. Para que este processo tenha incio as pontes de hidrognio devero se separar e, para que isto ocorra, uma srie de fatores devem ser levados em considerao. Alm da estrutura da prpria molcula e de fatores externos como pH, temperatura e umidade, existem as enzimas que atuam na replicao da molcula de DNA. As pontes ou ligaes de hidrognio que ligam as duas fitas do DNA so ligaes covalentes fracas, ou seja, desnaturam-se facilmente, isso significa que se separam e religam-se novamente com muita facilidade. Tal fato justifica a complementaridade das fitas, ou seja, na replicao apenas uma das fitas utilizada (fita molde), a outra permanece intacta. Caso ocorram erros durante o processo, uma das fitas ficar resguardada, da a grande vantagem de serem duas fitas. As ligaes, ento, desnaturam e no se quebram, alm disso, o processo tem que ser muito rpido (DNA no pode ficar muito tempo com as fitas abertas) e freqente (ligar e religar sem quebrar). Essa desnaturao pode ocorrer com aumento de temperatura ou concentrao de sal. Dessa forma tudo se encaixa: concentrao de temperatura e/ou sal x interaes hidrofbicas x polaridade oposta x gua. Qualquer desequilbrio de um desses fatores o sinal de que est na hora das fitas se abrirem para nova produo de fitas complementares. Alm disso, primeiro: ligaes de covalentes de hidrognio so doadoras naturais de hidrognio (H+) e segundo: todos os nucleotdeos possuem uma extremidade hidroxila (OH-). OBS. Regies do DNA ricas em Adenina e Timina desnaturam -se mais facilmente. (duas ligaes de hidrognio).

Conseqncias : Antiparalelismo: As pontes de hidrognio s podem ser formadas adequadamente se as fitas forem antiparalelas, ou seja, complementares, mas no idnticas. Os esqueletos acar/fosfato das duas fitas so antiparalelos, o que significa polaridade qumica oposta. A estrutura em hlice, ento, ser estabilizada graas a vrios fatores, entre eles: ligaes covalentes que formam cada fita; interaes hidrofbicas entre as bases; ligaes de hidrognio entre as bases; Foras de Van der Walls devido ao empilhamento das bases; Interao de ctions com esqueleto acar fosfato. Foras de Van der Walls = Fora de atrao no especfica entre dois tomos com capacidade de fecharem-se sobre si mesmos (atrao fatal). No levando-se em conta a carga (positiva/negativa) dos mesmos, mas sim a proximidade entre as molculas. Reunindo estas informaes, RESPONDA: Por que imprescindvel garantir que as informaes originais no se percam durante o processo de replicao? Quer saber mais? Acesse: Textos bastante didticos sobre sntese e processamento de RNA: http://www.icb.ufmg.br/~lbcd/prodabi3/grupos/grupo1/index.htm

Atividade Extra
Cromossomos... Quem somos?

Os cromossomos de procariotos e eucariotos so bem diferenciados. Inclusive na sua organizao dentro da clula. A organizao da clula eucaritica favorece a diviso celular. Neste perodo deve ocorrer a mitose em clulas somticas (com algumas excees). Os procariotos so monoplides, enquanto muitos dos animais e vegetais superiores so diplides, tendo dois conjuntos de genes, um de cada progenitor. H tambm vrias plantas poliplides, carregando vrias cpias do genoma. A informao gentica da maioria dos procariotos armazenada em um nico cromossomo. Eucariotos possuem cromossomos so organizados de maneira particular. Na composio qumica da cromatina constam protenas, DNA e RNA (este ltimo em menor quantidade). As protenas so de duas classes: (1) protenas bsicas, chamadas histonas; e (2) protenas cidas, chamadas de protenas cromossmicas nohistnicas. As histonas desempenham um importante papel na estruturao do cromossomo. Tanto que sua proporo no ncleo de 1:1 (peso/peso) em relao ao prprio DNA. Cada cromossomo uma molcula de DNA. Ou seja, cada perna (cromtide) do cromossomo formada por uma fita dupla de DNA e protenas. A estrutura da cromatina dos eucariotos composta de subunidades repetidas chamadas nucleossomos. Estes consistem de um segmento de DNA de 146 pares de nucleotdeos de comprimento, enrolado em torno da superfcie um tanto cilndrica do octmero de histonas, produzindo uma estrutura aproximadamente elipside. Pelo menos cinco nveis de condensao so necessrios para empacotar o DNA no cromossomo de eucariotos em uma estrutura metafsica de poucos micros de comprimento, como indicado na figura abaixo:

http://www.biociencia.org/genetica/citogenetica.htm 1. empacotamento do DNA como uma espiral em nucleossomos de aproximadamente de 10nm de dimetro. Este passo envolve um octmero de histonas ( b). 2. estrutura de solenide, um segundo nvel de espiralamento, produzindo uma fibra de 30nm (c). 3. "loops" de solenides, ligados a um esqueleto central protico. Esta estrutura tem aproximadamente 300nm de dimetro (d). 4. "loops" do esqueleto protico, formando uma estrutura gigante, super enrolada, com 700nm (e ). 5. Por fim, na sua mxima condensao, a cromtide cromossmica conta com cerca de 1400nm de dimetro (f). O estudo dos cromossomos, sua estrutura e sua herana denomina-se citogentica. A cincia da citogentica humana moderna data de 1956, quando Tjio e Levan criaram tcnicas eficazes para anlise dos cromossomos e estabeleceram que o nmero normal de cromossomos, na espcie humana, de 46. Cada cromossomo mittico apresenta uma regio estrangulada denominada centrmero ou constrio primria que um ponto de referncia citolgico bsico dividindo os cromossomos em dois braos: p (de petti) para o brao curto e q para o longo. Os braos so indicados pelo nmero do cromossomo seguido de p ou q; por exemplo, 11p o brao curto do cromossomo 11. Alm da constrio primria descrita como centrmero, certos cromossomos apresentam estreitamentos que aparecem sempre no mesmo lugar: So as constries secundrias. De acordo com a posio do centrmero, distinguem-se alguns tipos gerais de cromossomos:

http://www.virtual.epm.br/cursos/genetica/htm/base.htm Diferenas na diviso celular entre procariotos e eucariotos Procariotos Eucariotos O tempo de replicao relativamente curto Uma "bolha" de replicao (bidirecional) O tempo de replicao mais longo devido a complexidade dos cromossom os eucariticos que esto envoltos nas histonas. Vrias "bolhas" de replicao (bidirecional)

Existem trs tipos de DNA polimerases: I, II e III (Enzimas responsveis por organizar a duplicao Existem quatro tipos de DNA polimerases: a, b, g e d. de DNA.). Nas clulas procariticas, o cromossomo formado por uma nica molcula de um cido nuclico, denominado cido desoxirribonuclico, o DNA. Nestas clulas, os cromossomos encontram-se imersos no prprio citoplasma formando uma estrutura denominada nuclide. As clulas procariticas no apresentam organelas membranosas, como ocorre com as eucariticas. As bactrias apresentam um cromossomo circular, que constitudo por uma nica molcula de DNA bicatenrio (dupla hlice, altamente resistente degradao), tendo sido tambm chamado de corpo cromatnico. possvel, s vezes, evidenciar mais de um cromossomo numa bactria em fase de crescimento, uma vez que a sua diviso precede a diviso celular. O cromossomo bacteriano contm todas as informaes necessrias sobrevivncia da clula e capaz de auto-replicao.

Figura: DNA bacteriano (cromossomo e plasmdeo) PLASMDEOS Existem ainda no citoplasma de muitas bactrias, molculas menores de DNA, tambm circulares, cujos genes no codificam caractersticas essenciais, porm muitas vezes conferem vantagens seletivas bactria que as possui. Estes elementos extracromossmicos, denominados plasmdeos so autnomos, isto , so capazes de autoduplicao independente da replicao do cromossomo e podem existir em nmero varivel no citoplasma bacteriano. Em clulas eucariticas, observamos a presena de membranas internas que organizam o material nuclear em seu interior. Para iniciar a diviso celular a clula eucaritica passa por uma fase de preparao chamada de Intrfase. O tempo de durao desta fase varia de clula para clula. composta pela sucesso de trs fases: G1, S e G 2. O tempo de durao da fase G1 o principal fator para determinar o tempo da intrfase. G1 = Intervalo de tempo entre o final da mitose e o incio da fase S "G de gap = intervalo" um intervalo de tempo entre o final da mitose e o incio da fase S.

A durao deste intervalo varia de acordo com o tipo celular: Clulas embrionrias = G1 praticamente inexistente Clulas diferenciadas = G 1 varivel As clulas quiescentes, isto , clulas que no esto se dividindo, esto num estado especial de G 1 que chamamos de G0. Fase G 0 "G de gap = intervalo" Nesta fase as clulas so menores porque suas molculas de protenas e RNA so degradadas, mas no so rapidamente ressintetizadas, as atividades enzimticas e o transporte transmembrana tambm esto mais lentos. Clulas em cultura necessitam de fatores de crescimento para que possam proliferar, estes fatores se encontram no soro. Estas clulas em cultura tambm podem estar na fase G0 de duas maneiras; Quando as clulas so cultivadas em baixa concentrao de soro no meio de cultura Quando atingem a densidade de saturao Existem trs pontos crticos que servem como marcadores desta fase G 1, que so denominados de pontos crticos de Competncia (C), Entrada (V) e Progresso (R). So pontos que a clula precisa ultrapassar para entrar na fase S (sntese de DNA) 1. No ponto C ocorre: Mudana na estrutura da cromatina Aumento no transporte de nutrientes atravs da membrana Produo de novos mRna Na presena do fator de crescimento PDGF (platelet derived growth factor) a clula passa o ponto crtico C e segue at o ponto V. 2. No ponto V ocorre: Sntese de macromolculas Alta atividade enzimtica Alto nmero de polissomas Na presena do fator de crescimento EGF (epidermal growth factor) a clula passa o ponto crtico V e segue at o ponto R. 3. No ponto R ocorre: Sntese de protenas e enzimas necessrias para sntese do DNA Sntese de protenas regulatrias Na presena do fator de crescimento IGF-1 (insulin-like growth factor ) a clula passa o ponto crtico R, que o ltimo ponto de restrio de G1, e segue para a fase S (Sntese de DNA). S = Fase de Sntese de DNA Nesta fase ocorre a replicao do DNA. O tempo de durao de, em mdia, 8 horas. O ncleo induzido a entrar na fase S por sinais citoplasmticos, ou seja, o citoplasma induz o ncleo a replicar o seu DNA. Aps a fase S, a clula passa por um segundo intervalo de tempo que considerado a terceira fase da intrfase, que chamamos de fase G2. G2 = Intervalo de tempo entre o final da fase S e o incio da mitose "G de gap = intervalo" o segundo intervalo de tempo da intrfase. Um ncleo que completa a fase S e entra na fase G2 condensa seus cromossomos e segue para a mitose. um perodo de preparao para produo de fatores cruciais que disparam a mitose. Mitose Mitose o processo pelo qual as clulas eucariticas dividem seus cromossomos entre duas clulas filhas. Este processo dura, em geral, 90 a 120 minutos e dividido em quatro etapas: Resumo das fases da mitose

Molecular Biology of the Cell Alberts, B.; Bray,D.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K.; Watson, J.

Na prfase: Os cromossomos, que foram duplicados durante a fase S da intrfase, se condensam. O nmero de cromossomos varia de espcie para espcie, mas em humanos o nmero de cromossomos diplides 46. Os microtbulos citoplasmticos so desarranjados e a clula se prepara para a reorganizao destes microtbulos formando o fuso mittico.

O cromossomo mittico consiste em duas cromtides que esto conectadas por uma regio denominada de centrmero. Na superfcie deste centrmero existem dois cinetocoros, um deles est associado cromtide. O outro cinetocoro est associado ao fuso mittico e por meio dele que resulta a movimentao cromossomal. Desorganizao do envelope nuclear. A clula segue para a metfase Durante a metfase: Alguns dos microtbulos que formam os aparatos do fuso se prendem aos cinetocoros formando o fuso mittico. Os cromossomos iniciam uma srie de movimentos que resultam num alinhamento de todos os cromossomos na regio equatorial do fuso. uma fase onde a clula se prepara para a anfase. Na anfase:

 o momento onde as cromtides iniciam a migrao para cada plo da clula, em direo aos centrolos, provocando a separao das cromtides irms. Acredita-se que a fora que movimenta as cromtides tem origem por intermdio da polimerizao de protenas dos microtbulos (actina, miosina e tubulina). Trmino da anfase e incio da telfase. Durante a telfase: Separao completa das cromtides irms para cada plo da clula. Reconstituio do envelope nuclear ao redor dos cromossomos. Descondensao dos cromossomos. Dissoluo do aparato mittico. Formao de uma constrio ao nvel da zona equatorial da clula-me, que vai progredindo e termina por dividir o citoplasma e suas organelas em duas partes iguais. Neste ponto a clula termina a fase de diviso celular (Mitose) e entra na fase de replicao do DNA (Intrfase) iniciando um novo ciclo. Na interfase, por microscopia, no visualizamos modificaes tanto no citoplasma quanto no ncleo. As clulas, porm esto em franca atividade, sintetizando os componentes que iro constituir as clulas filhas. QUESTO Qual a vantagem de ter o DNA organizado em cromossomos? Quer saber mais? V para: http://www.educacional.com.br/catalogo/catalogo_lista.asp?id=168&pg=1

Atividade Verde
Atividade: Mutatis mutante Um ponto que geralmente no mencionado nos modelos de replicao, e que tem uma importncia relativa na compreenso de certas limitaes das tcnicas de gentica molecular, a atividade revisora da DNA polimerase III bacteriana (e das DNA pol em geral, sejam elas eucariotas ou procariotas). Na natureza existem formas alternativas das quatro bases nitrogenadas que formam o DNA, chamadas formas tautomricas (formas isomricas de compostos orgnicos). A freqncia com que estas bases ocorrem baixa, porm muitas ordens de grandeza acima da freqncia de erros admissveis no DNA (lembre-se que a adio de uma base errada na seqncia de um gene u ma mutao, que pode ter conseqncias importantes para o portador do gene mutante). Cada vez que uma dessas bases tautomricas empregada, provoca um erro de pareamento. Se ela no for retirada antes da prxima replicao, uma mutao ser introduzida no DNA. Por isso, as DNA polimerases (I, II e III, em Escherichia coli e muitos outros procariotos, a e b em eucariotos) tm a capacidade de rever, imediatamente aps a adio, se o pareamento da base adicionada com a base da fita molde foi correto. Qualquer erro de pareamento refletido pela alterao na estrutura da dupla hlice. Esta alterao deve fluir por um canal inico da prpria DNA polimerase. Se a hlice estiver alterada a DNA polimerase pra, volta na direo 3-5 despolimerizando a cadeia recm sintetizada e, aps algumas dezenas ou at centenas de bases, recomea o trabalho. Pode parecer um processo pouco econmico, mas lembre-se que a integridade da informao gentica est em jogo e, portanto, a preservao das caractersticas e funes de todas as clulas de uma mesma espcie. Outra enzima comum e essencial no processo a DNA ligase (polinucleotdeo ligase) que liga os nucleotdeos aps a correo feita pela DNA polimerase I. As mutaes so enganos mais do que possveis, so provveis, uma vez que, durante a replicao ocorre a reposio de mais de 1000 bases por minuto na fita nova que est sendo formada. As mutaes podem ocorrer naturalmente e incluem todas mudanas imaginveis na seqncia de DNA. As mutaes que apresentam apenas um efeito muito sutil no produto gnico final, como as mutaes para sensibilidade temperatura, so, freqentemente, uma simples trocas de uma base por outra . Entretanto, algumas mutaes naturais destroem completamente a funo de um gene. Essas mudanas mais drsticas incluem no somente mudanas de bases, inseres ou delees de uma base, mas tambm, extensas inseres e delees e mesmo rearranjos grosseiros na estrutura cromossmica. Tais mudanas podem ser causadas, por exemplo, pela insero de um transposon, o qual tipicamente transfere, ou seja, muda de lugar algumas centenas de pares de bases de um mesmo DNA ou ainda, insere algumas centenas de pares de bases de um DNA estranho numa seqncia codificadora de um gene, ou por aes aberrantes do processo de recombinao celular.

Mutaes cromossmicas Alteraes estruturais: P Delees: neste processo, ocorre perda de fragmentos do cromossomo , que podem constituir um ou muitos genes. Podem se originar por simples quebra ou eliminao cromossmicas . Vrias delees nos seres humanos so conhecidas, e talvez a mais estudada seja a que determina a Sndrome do Cri du chat ou Sndrome do miado de gato. Esta sndrome ocasionada por uma deleo no brao curto de um dos cromossomos n o 5. P Duplicaes: ocorrem quando um segmento cromossmico aparece mais de duas vezes em uma clula diplide normal . O segmento pode estar ligado a um cromossomo ou como um fragmento separado. Por intermdio da segregao destes cromossomos nos gametas, as duplicaes podem ser transmitidas s geraes subseqentes. P Inverses: acontecem quando partes dos cromossomos tornam-se destacadas (quebra cromossmica), giram 180o e so reinseridas de modo que os genes ficam em ordem inversa. Algumas inverses resultam do embaraamento dos filamentos durante a prfase meitica. As inverses podem incluir o centrmero (inverses pericntricas) ou no incluir o centrmero (inverses paracntricas). P Translocaes: ocorrem quando parte de um cromossomo torna-se separada e se liga a uma parte de um cromossomo no homlogo. As translocaes podem ser de dois tipos: SIMPLES quando o fragmento quebrado de um cromossomo se insere em outro no homlogo ou RECPROCA os segmentos cromossmicos so trocados entre dois cromossomos no homlogos. Em humanos, as TRANSLOCAES SIMPLES (mais comuns) ocorrem entre os cromossomos 14 e 21 (variao da Sndrome de Down). Outras translocaes foram observadas. Na maioria dos casos existem numerosas anomalias fenotpicas, e geralmente ocorre um aborto espontneo, ou morte poucos meses aps o nascimento. Um exemplo pode ser a leucemia mielgena crnica, na qual ocorre uma translocao entre os cromossomos 22 e 9. P Transposies: refere-se troca de segmentos cromossmicos de um local do cromossomo para outro . Geralmente no h grandes alteraes, pois o contedo genmico no alterado, porm o pareamento pode ser difcil durante a diviso celular. P Fuso e fisso cntricas: nestes casos, o nmero cromossmico pode aumentar ou diminuir sem que ocorra variao na quantidade de DNA. Isso ocorre devido quebra do cromossomo na altura do centrmero , dando origem a dois cromossomos acrocntricos ( fisso ), ou ao processo inverso (fuso). Estes processos so mais comumente observados em espcies prximas ao homem, como os primatas, que tm seu nmero cromossmico variado pela ocorrncia de mais cromossomos acrocntricos, ou mais metacntricos. Na espcie humana geralmente no se observa a existncia de sndromes ou patologias ocasionadas por este tipo de alterao estrutural/numrica, porm casos de portadores de anomalias, que no desenvolvem o fentipo por no ter alterao no contedo genmico, so observados. Ex: portador de fuso entre dois de seus cromossomos acrocntricos. Alteraes numricas: P Euploidia: refere-se ao contedo genmico total do indivduo, ou seja, todos os seus cromossomos so duplicados (DIPLOIDIA condio normal) ou todos so triplicados (triploidia) e assim por diante. Em humanos, um indivduo haplide (com conjunto cromossmico sem homlogos) no vivel e em alguns poucos casos observam -se as demais poliploidias. Seres humanos completamente triplides so muitos raros e os poucos casos conhecidos so os abortos espontneos ou natimortos. Alguns vivem por poucas horas. Em todos os casos h malformaes mltiplas e grosseiras. Avalia-se que aproximadamente 15% de todos os fetos espontaneamente abortados so triplides e tetraplides. A poliploidia em humanos, seja completa ou em mosaicismo, leva a profundas anomalias e morte. P Aneuploidia: a situao em que o nmero de cromossomos no um mltiplo exato do nmero haplide caracterstico da espcie. Mutaes Gnicas Durante a replicao (dita semiconservativa) do material gentico, a enzima a DNA polimerase liga os nucleotdeos s novas fitas de DNA. Durante esse processo, podem ocorrer erros adicionando nucleotdeos diferentes aos do DNA molde, o que provocar mutaes. Todos os seres vivos sofrem um certo nmero de mutaes, como resultado de funes celulares normais ou interaes aleatrias com o ambiente. Tais mutaes so denominadas espontneas. A incidncia do nmero de mutaes poder elevar-se atravs da ao de determinados compostos, agentes mutagnicos e por conseqncia, as modificaes por eles causadas, denominadas mutaes induzidas. Tipos de Mutao Gnica:

Mutao pontual ou extensa. P As mutaes pontuais podem ser: substituies de bases, inseres de bases ou delees de bases. P As mutaes (ou modificaes) extensas incluem delees, duplicaes, inseres e rearranjos. Possveis causas para mutaes : P Tautomerismo de base: so pareamentos errneos, por falha no reparo da DNA polimerase, no arranjo do DNA. Ao invs de haver o pareamento adenina-timina e guanina-citosina, pode ocorrer adeninacitosina e timina-guanina. P Radiao ionizante: na maioria dos estudos, a freqncia de mutaes de ponto diretamente proporcional dose de irradiao (raios X, raios gama e raios csmicos). P Radiao ultravioleta: so absorvidos pelas purinas e pirimidinas, formando hidratos de pirimidinas e dmeros de pirimidinas (dimerizao da timina onde duas timinas prximas, de uma mesma fita de DNA, ligam-se, prejudicando o ajuste da dupla fita). P Acridinas: estes compostos se intercalam entre a dupla fita , causando a insero ou deleo de um ou mais pares de bases. H alterao no mdulo de leitura do DNA. P Alquilas : h transferncia de grupos metil ou etil para os stios reativos das bases e dos fosfatos da cadeia de DNA. Mas lembre-se que a Teoria Sinttica da Evoluo ou Neodarwinismo est fundamentada em dois mecanismos: a mutao e a recombinao gnica. O mecanismo de recombinao gnica ocorre em organismos que se reproduzem sexuadamente . O mecanismo de recombinao gnica mais importante em bactrias a conjugao bacteriana. Na conjugao bacteriana duas bactrias unem-se temporariamente atravs de uma ponte citoplasmtica. Em uma das clulas, denominada "doadora" ou "macho", ocorre a duplicao de parte do cromossomo . Essa parte duplicada separa-se e, atravs da ponte citoplasmtica, passa para outra clula, denominada "receptora" ou fmea, unindo-se ao cromossomo dessa clula receptora. Esta clula ficar, ento, com constituio gentica diferente daquela das duas clulas iniciais. Essa bactria "recombinante" pode apresentar diviso binria, dando origem a outras clulas iguais a ela. Processo semelhante pode ser tambm observado em fungos e outros organismos sexuados como resultado da segregao ao acaso de cromossomos, durante a formao de gametas, ou da segregao mittica. o resultado da troca recproca de DNA entre cromtides homlogas, durante a prfase da meiose I. Para saber mais sobre meiose acesse o endereo: http://www.virtual.epm.br/cursos/genetica/htm/meiose.htm Agora procure imaginar se em meio a tantos acontecimentos concomitantes no houvesse ningum responsvel pela reviso dos passos e etapas ?? Que mar de mutaes poderiam ser todos os seres do universo ?? QUESTES 1. Esta atividade revisora um mecanismo extremamente sofisticado que no ocorre no RNA. Discuta este diferencial na atuao da polimerase de DNA e na polimerase de RNA. 2. Relacione as mutaes e a evoluo da espcie. Quer saber mais? Acesse: Aula sobre Mutaes e Reparo de DNA http://www.rge.fmrp.usp.br/cursos/med1/mutacao_reparo.pdf Ademilson Espencer E. Soares Tipos de mutaes e como ocorrem http://www.virtual.epm.br/cursos/genetica/htm/mutacao.htm Site da Escola Paulista de Medicina (EPM) Universidade Federal de So Paulo (UNIFESP) Gentica e evoluo de populaes http://www.microbiologia.ufrj.br/Gen%E9tica%20e%20evolu%E7%E3o%20de%20popula%E7%F5es.pdf Fernando Portela Cmara IMPPG - UFRJ Alteraes cromossmicas e mutaes gnicas http://www.biociencia.org/genetica/alterhumana.htm Karine Kavalco, 1999 Os tipos de mutaes nucleotdicas http://www.biociencia.org/evolucao/evolucaomol.htm Eliane Evanovich

Exame simples de lquidos do corpo pode ajudar a detectar o cncer http://boasaude.uol.com.br/lib/showdoc.cfm?libdocid=2953&fromcomm=1&commrr=src FONTE: Science 2000; 287:2017-2019. Publicado em Bibliomed Sade em 04/04/2000

Atividade Azul (Genes)

So os genes astronautas?!? Ser que o nome gene" vai para o espao? H muita discusso, mas esta viagem definitiva parece que ainda vai demorar a acontecer. Durante muito tempo, as protenas foram consideradas como as mais provveis detentoras da hereditariedade, mas um experimento realizado em 1928 daria incio derrocada desta hiptese. Este experimento envolvia a inoculao de bactrias causadoras de pneumonia em camundongos e seu propsito era, a princpio, descobrir meios de se controlar a doena em humanos. Griffith o realizador do experimento acabou observando que havia algum fator que agiria no lugar das protenas. Em 1940, Beadle e Tatum postularam que um gene seria o responsvel pela produo de uma enzima. J se sabia que a sntese de protenas nas clulas ocorria nos ribossomos; contudo, o processo pelo qual isto se dava ainda era desconhecido. O gene das leis de Mendel existe, sem dvida, mas um tipo raro de gene, sempre que presente se expressa fenotipicamente da mesma maneira. Os genes mais freqentes so aqueles de penetrncia incompleta e expressividade varivel. O que parece duvidoso aceitar uma representao de gene que o identifique como uma seqncia de DNA que, contnua e unicamente, codifique uma protena particular. Vrios produtos gnicos podem ser gerados a partir de um nico gene mediante processos de cortes e reunio de formas alternativas de um mesmo transcrito primrio. Desta forma vrios genes so possveis em diferentes estgios de expresso gnica. Essa sobreposio pode ocorrer quando um gene faz parte do outro, gerando protenas, em parte, iguais. Assim, a mesma seqncia compartilhada entre duas protenas no-homlogas, ou seja, traduzida em mais de uma regio de leitura. possvel ainda que, tendo mais de uma fase de leitura potencial, a mesma seqncia gere diferentes protenas pela sobreposio destas diferentes fases. Por fim, no processamento alternativo ou diferencial (splicing), ocorrem padres alternativos de expresso gnica por meio de trocas na via de conexo entre exons. Assim, um simples gene pode gerar uma variedade de produtos a partir de um nico mRNA. Newton 1 (1987) afirma que o gene seria uma seqncia de DNA responsvel pela sntese (transcrio e traduo) no apenas codificao (do DNA - o conjunto de molculas que est presente no interior das clulas e que contm a codificao das caractersticas de cada organismo) de uma ou mais cadeias polipeptdicas, desde que no se atribuam a essa seqncia conotaes rgidas estritas de complementao. Acentua que genes ditos interrompidos devem englobar, alm de exons, os seus ntrons . Coloca, ainda, que, como os genes sobrepostos produzem mais que uma cadeia polipeptdica, deve-se fazer a inverso no sentido uma cadeia polipeptdica um gene.
1. NEWTON, S.M.C. O que o gene. COSTA, S.O.P. (ed.). In: Gentica molecular e de microorganismos . So Paulo: Manole, 1987.

Dentro de uma lgica formal aristotlica estes dois aspectos do mesmo fenmeno (o gene em si e os seus mecanismos de expresso) podem e devem ser mantidos separados. Permanecem dentro desta lgica aquelas definies que mantm o gene imobilizado na forma de seqncias de DNA. A manuteno disso acarreta, contudo, que os problemas aqui expostos no se resolvem. Todos estes processos dificultam uma definio de gene somente como seqncias definidas dentro do DNA ou baseada em grupos de complementao. Assim, logo aps uma fase em que o gene parecia ganhar materialidade a partir dos trabalhos de Watson & Crick , ele parece agora voltar a uma fase similar quela do seu nascimento nos trabalhos de Mendel , ou seja, parece estar sofrendo um processo de desmaterializao, no sentido de estar sendo cada vez mais relativizado diante destes maliciosos processos moleculares. O gene, ento, s pode ser corretamente entendido como uma construo terica e no mais como um objeto palpvel. A hierarquia das coisas mais complexa do que a hierarquia dos homens (Gaston Bachelard, A Filosofia do No: 1984). Cadeias polipeptdicas Uma ligao peptdica a unio do grupo amino (-NH2) de um amino cido com o grupo carboxila (-COOH) de outro amino cido, por intermdio da formao de uma amida.

quark.qmc.ufsc.br/qmcweb/ artigos/proteinas.html Exons Os transcritos primrios de RNA contm a cpia de toda seqncia presente no DNA e que algumas partes dessa seqncia so recortadas dessa molcula de forma a produzir o RNA funcional. As seqncias que so retiradas do transcrito primrio foram chamadas de ntrons e aquelas que permaneceram como parte do RNA funcional, exons. ntrons Os transcritos primrios de RNA contm a cpia de toda seqncia presente no DNA e que algumas partes dessa seqncia so recortadas dessa molcula de forma a produzir o RNA funcional. As seqncias que so retiradas do transcrito primrio foram chamadas de ntrons e aquelas que permaneceram como parte do RNA funcional, exons.

Figura 1: Estrutura de um gene de eucarioto.

http://www.inf.unisinos.br/~mombach/ConceitosBasicosBM.pdf Splicing - At a pouco tempo atrs, pensava-se que os genes celulares eram compostos por arranjos contnuos de nucleotdeos. Somente em 1977 descobriu-se a existncia de genes interrompidos . Assim, quando se olhava o DNA, percebia-se que o gene possua mais nucleotdeos do que aqueles encontrados no mRNA (necessrios para a produo de protenas). Hoje, sabe-se que os transcritos primrios de RNA contm a cpia de toda seqncia presente no DNA e que algumas partes dessa seqncia so recortadas dessa molcula de forma a produzir o RNA funcional. Num segmento do DNA, correspondente a um gene que codifica uma determinada protena, so encontradas regies codificadoras (exons) alternando-se com regies no-codificadoras (ntrons). O transcrito resultante no funcional e s poder ser traduzido se for devidamente montado, descartando-se os ntrons e unindo-se os exons em seqncia ordenada. Este tipo de modificao do transcrito primrio denominado "splicing" (cortar e colar; montagem) e ocorre dentro do ncleo. O transcrito processado e pronto para migrar para o citoplasma, recebe o nome de RNA mensageiro. O splicing, um dos fenmenos biolgicos mais conservados ao longo da evoluo, est presente em praticamente todos os seres vivos com ncleo organizado (eucariontes). um mecanismo altamente complexo e estruturado, que envolve a ligao, ao RNA, de uma srie de componentes celulares. Em uma explicao simplificada, pode-se dividir o splicing em duas etapas: a retirada dos ntrons e a ligao dos exons. Ainda se sabe pouco sobre a verdadeira funo dos ntrons, mas j se conhece bastante sobre como essas seqncias so retiradas da molcula de RNA. Uma das etapas-chave no processo o reconhecimento preciso das junes entre os ntrons e os exons (os stios de splicing 5 e 3). Isso possvel porque, perto dessas junes, existem seqncias altamente conservadas (seqncias consenso) que servem como stios de unio para componentes celulares responsveis pelo processo de splicing.

Figura: No processo de splicing, fatores especficos (representados por tesouras) reconhecem os stios de corte do DNA, eliminando os ntrons (partes sem informao gnica em laranja) e colando os exons (partes com informao gnica em roxo) adjacentes, formando a fita de RNA mensageiro.

Sntese Toda a informao para o funcionamento do ser se encontra no nosso cdigo gentico que est contido numa molcula longa formada por duas cadeias complementares e antiparalelas, o cido dexorribonuclico (DNA). Ele composto por quatro tipos diferentes de bases aminadas, adenina (A), timina (T), citosina (C) e guanina (G) e cada gene formado por uma determinada seqncia destas bases. Para que a informao contida no DNA seja transferida para as diversas funes celulares, essa molcula precisa primeiro ser copiada, em um processo denominado transcrio, que gera uma molcula-irm, o cido ribonuclico (RNA) (figura 1). O RNA contm a mesma informao gentica presente no DNA, mas difere deste por ter uma s cadeia e por apresentar, no lugar da base timina (T), a uridina ou uracila (U). No entanto, o RNA s se torna funcional depois que os ntrons so retirados, em um processo conhecido como splicing - O splicing, um dos fenmenos biolgicos mais conservados ao longo da evoluo, est presente em praticamente todos os seres vivos com ncleo organizado (eucariontes). um mecanismo altamente complexo e estruturado, que envolve a ligao, ao RNA, de uma srie de componentes celulares. Em uma explicao simplificada, pode-se dividir o splicing em duas etapas: a retirada dos ntrons e a ligao dos exons. Retirados os segmentos extras, os exons so ligados uns aos outros e o RNA, agora chamado de RNA mensageiro (mRNA), torna-se funcional, ou seja, pode ser traduzido por organelas celulares denominadas ribossomos. No processo de traduo, a ordem dos exons no mRNA serve como modelo para a montagem, nos ribossomos, das molculas essenciais para nossa existncia: as protenas. Por muitos anos o processamento do RNA foi visto apenas como um mecanismo inventado pela clula para se livrar dos ntrons, unir os exons e produzir assim um RNA mensageiro funcional, capaz de ser traduzido em uma protena. medida que mais e mais genes foram seqenciados e analisados, percebeu-se que um nmero substancial deles originava mais de um tipo de mRNA. Mesmo produzidos a partir do mesmo gene, esses mRNAs podem conter diferenas na seqncia de bases que ser traduzida pelos ribossomos, possibilitando a montagem de protenas distintas, com funes tambm distintas e algumas vezes at antagnicas. Como um mesmo gene pode originar diferentes mRNAs? A resposta est em um processo denominado splicing alternativo. Como em um jogo de palavras, onde cada exon seria uma letra, o processo permite realizar variadas combinaes de exons para formar diferentes palavras (figura abaixo). Isso possvel porque cada exon contm a informao necessria para produzir uma parte da protena. Alm das combinaes de exons, o corte dos exons em diferentes stios tambm pode gerar diferenas nos mRNAs.

O splicing alternativo gera distintos RNA mensageiros a partir de um mesmo gene. A informao contida na palavra NAMORAR (que representa um gene) permite gerar outras palavras com diferentes sentidos,

dependendo da escolha das letras (ou dos exons, no caso dos genes): NORA (escolha em azul), AMOR (em preto), MAR (em vermelho) e ORAR (em verde). A participao do cido ribonuclico (RNA) na sntese das protenas foi primeiramente sugerida pelo francs Jean Louis Brachet (1909) e pelo sueco Torbjrn Oskar Caspersson (1910), na dcada de 1930. Eles observaram que clulas muito ativas na sntese de protenas tm muito RNA no citoplasma. Em 1958, Crick lanou a idia de que as protenas seriam produzidas a partir de um molde de RNA, que era copiado do DNA. Crick sugeriu tambm a existncia de molculas adaptadoras, que ordenariam os aminocidos sobre o molde de RNA.

Pelo fato dos promotores (seqncias regulatrias dos genes) possurem seqncias de nucleotdeos comuns (conservadas), esta enzima as reconhece e liga-se a elas, dando incio sntese da molcula de mRNA (transcrio), o que explica como a enzima RNA polimerase consegue reconhec er o lugar onde se ligar. A molcula de RNA produzida pode ser um mRNA (RNA mensageiro), um rRNA (RNA ribosomal) ou um tRNA (RNA transportador). Uma molcula de RNA mensageiro contm a informao para produzir cadeias polipeptdicas que podero originar protenas. Leia tambm: http://www.inf.unisinos.br/~mombach/ConceitosBasicosBM.pdf

Tabela 1: Cdons com aminocidos correspondentes ou especificando trmino da sntese. http://www.inf.unisinos.br/~mombach/ConceitosBasicosBM.pdf

A traduo acontece quando o tRNA forma as trincas com as informaes trazidas da molcula de DNA pelo mRNA. o processo de sntese de protenas (construo da cadeia polipeptdica). Para isso necessrio que estruturas celulares chamadas ribossomos decodifiquem a mensagem contida na molcula de mRNA para uma cadeia de aminocidos. A decodificao est baseada em trincas de nucleotdeos, chamadas cdons, que so usados para especificar o aminocido. A correspondncia entre uma trinca de nucleotdeos e um aminocido chamada de cdigo gentico (tabela 1). Combinando os quatro nucleotdeos em trios obtm -se 64 combinaes. Embora esse nmero seja superior aos 20 aminocidos conhecidos, mais do que um cdon pode representar um mesmo aminocido. Dentre os cdons possveis, trs no especificam aminocidos, referem-se a sinais de terminao da sntese de uma cadeia de aminocidos. Esses cdons so chamados de cdons de parada (stop codons). O cdigo gentico estabelece tambm um cdon de incio (start codon), pelo qual comea o processo de traduo do mRNA. Na maioria das protenas o cdon de incio especifica o aminocido metionina, que tambm est presente no interior das cadeias.

Figura: Processo de Traduo (sntese de protenas)

Experimento de Griffith: Griffith (1928) utilizou duas linhagens de bactrias, sendo que uma delas tinha suas clulas envolvidas por uma cpsula de polissacardeo, gerando colnias de aspecto liso. A outra linhagem no possua tal envoltrio celular e gerava colnias de aspecto rugoso. A primeira linhagem, quando inoculada em camundongos, manifestava a doena, enquanto a segunda, no. Posteriormente, Griffith inoculou os seus camundongos com a linhagem virulenta (de aspecto rugoso), morta por meio de fervura , e observou que estas no causavam mais a doena.

Em uma terceira inoculao, os camundongos receberam uma mistura de clulas lisas mortas pelo calor e clulas rugosas vivas. Griffith observou, ento, o desenvolvimento da pneumonia. Ao se extrair clulas ainda vivas destes camundongos, foi constatado que estas clulas apresentavam o fentipo liso virulento. Portanto, deveria haver algum agente, presente nas clulas mortas, capaz de transmitir sua informao de virulncia para as clulas vivas, o que Griffith chamou de princpio transformador. A substncia indutora de transformao viria a ser purificada e sua natureza qumica seria reconhecida como sendo a do cido desoxirribonuclico (DNA) . Este experimento no foi totalmente aceito poca, pois se questionou a possvel contaminao protica dos isolados de DNA. Tais questionamentos tinham origem, principalmente, no favoritismo da hiptese que apresentava as protenas como portadoras do material hereditrio. QUESTO As vrias definies propostas para o termo GENE vm perdendo o significado ao longo do tempo. Compare a proposta de conceituao e funo de gene de Beadle e Tatum, em 1940, com as propostas mais recentes sobre o assunto. Quer saber mais? Acesse: Onde est o lugar do conceito de gene? No endereo: http://www.ilea.ufrgs.br/episteme/portal/pdf/numero19/episteme19_artigo_solha_silva.pdf Passeio pelos conceitos bsicos de Biologia Molecular (em ingls) No endereo: http://gslc.genetics.utah.edu/units/basics/tour/

Atividade Roxa (Protenas)

Comer protena da carne do porco faz voc... virar porco? Parece uma pergunta fora de propsito, mas quem produz o conhecimento tambm tem suas dvidas. Se as protenas tambm so constitutivas do nosso organismo, como podemos utiliz-las se as ingerimos j prontas? E se no utilizamos, de onde vm as nossas protenas, elemento to importante no funcionamento de todo organismo vivo? Em qualquer clula, a qualquer momento, somente alguns segmentos de DNA esto produzindo protenas. Algumas clulas produzem protenas de um gene, enquanto em outras clulas a sntese est ocorrendo em outro pedao do DNA. Portanto, lembre-se: uma clula sangnea e uma clula nervosa, por exemplo, sintetizam muitas das suas protenas de partes diferentes do DNA, e esse o motivo de dois tipos celulares no se parecerem ou ainda de terem funes completamente diferentes. Pense em todas as pessoas que voc conhece e v todo dia. Sua famlia, seus amigos, pessoas que moram ou trabalham com voc. Ou mesmo pessoas que trabalham na mdia (rdio, TV). Ento pense em todas as pessoas que moram nas vilas e cidades do Brasil. E tambm tente imaginar as pessoas que moram em outros pases em todo o mundo. Existem mais de 5 bilhes de crianas, homens e mulheres que dividem o planeta com voc. Se fssemos colocados em uma fita, ela iria da Terra Lua e de volta a Terra seis vezes. E o fato mais surpreendente que nenhuma destas 5 bilhes de pessoas parece, pensa ou age exatamente como voc. VOC COMPLETAMENTE NICO!! E a razo pela qual voc diferente de todas as outras pessoas porque a sua mistura de genes levemente diferente dos outros. Muitos genes fazem as mesmas protenas em todos os seres humanos. Na verdade 99,5% do seu DNA est exatamente na mesma ordem do DNA de todas as outras pessoas. Mas algumas partes do plano do seu DNA variam. Os genes para a cor dos seus olhos serem azuis, castanhos ou verdes. Os genes para a cor dos seus cabelos podem ter receitas para louro, castanho, preto ou ruivo. Ns todos somos diferentes uns dos outros devido s protenas que as nossas clulas produzem. Voc possui mais de 200 tipos de clulas diferentes em seu corpo!!! Alm de serem constituintes fundamentais da estrutura celular, grande nmero de protenas atua como enzimas, catalisando a maioria das reaes qumicas vitais. por meio das protenas, portanto, que os genes controlam praticamente todas as caractersticas fenotpicas dos seres vivos. Aprendemos ao longo de nossa vida acadmica que as clulas so responsveis pela produo das protenas (sntese) que utilizamos. Todas as protenas so feitas de substncias qumicas chamadas aminocidos. As milhares de protenas diferentes no seu corpo so feitas de 20 aminocidos diferentes unidos em todas as combinaes possveis. Os aminocidos so as unidades estruturais bsicas das protenas. Um alfa-aminocido constitudo de um grupamento amina, uma carboxila, um tomo de hidrognio e um radical R diferenciado, ligados a um tomo de carbono, que chamado de carbono alfa por ser o adjacente ao grupamento carboxila (cido). Eles diferem uns

dos outros por intermdio de suas cadeias laterais ou grupos R, os quais variam em estrutura, tamanho e carga eltrica, e influenciam a solubilidade do aminocido em gua. Neste caso o grupo R representado por CH3.

Figura: estrutura de um aminocido

http://www.icb.ufmg.br/~lbcd/grupo1/pag2.html QUESTO Agora voc pode responder tranqilamente aos seus alunos porque comer carne de porco, portanto ingerir protenas de porco, no faz voc virar um porco! Explique aqui por que isto no acontece. Quer saber mais? Acesse: Atividade prtica interessante envolvendo sntese de protenas na sala de aula http://www.moderna.com.br/biologia/temasbio/TB07.pdf Texto dos professores Amabis e Martho publicado pela editora Moderna: Do Gene Protena http://www.moderna.com.br/biologia/temasbio/TB06.pdf Conceitos mais especificamente sobre protenas http://www.icb.ufmg.br/~lbcd/grupo1/grupo1.html Textos bastante didticos sobre sntese e processamento de RNA http://www.icb.ufmg.br/~lbcd/prodabi3/grupos/grupo1/index.htm

Atividade Rosa (DNA)

A estrela da vez Durante a evoluo da clula formou-se uma molcula, que hoje sabemos ser o cido desoxirribonuclico (DNA ou ADN): molcula longa, formada pela juno de um grande nmero de nucleotdeos, e que contm a informao gentica codificada. A molcula de DNA constituda por dois polmeros (cadeias ou fitas) de nucleotdeos. Cada nucleotdeo contm: 1 a 3 grupos fosfato (PO4-) ligado ao carbono 5' do acar 1 acar de cinco carbonos (ou pentose) conhecido como 2'-desoxirribose 1 base nitrogenada ligada ao carbono 1' do acar. As bases podem ser: Bases de anel duplo: Adenina e Guanina = Purinas. Bases de anel nico: Timina (Uracila no RNA) e Citosina = Pirimidinas. Os nucleotdeos esto ligados por ligaes fosfodister entre o grupo fosfato 5' de um nucleotdeo e o grupo hidroxila 3' de outro. O nucleotdeo de uma das extremidades tem fosfato livre 5' e o nucleotdeo da outra apresenta um hidroxila 3' livre. Direcionamento 5' ? 3'.

http://www.virtual.epm.br/cursos/biomol/estrut/html/lignucl.htm Complementaridade entre as bases: As cadeias que constituem a molcula de DNA so complementares, isto , o emparelhamento se d segundo determinado padro, ou seja, a adenina sempre pareia com a timina e a citosina com a guanina. Entre adenina e timina, formam-se sempre duas pontes de hidrognio e entre citosina e guanina trs pontes de hidrognio. Adenina estabelece duas ligaes de hidrognio com Timina; Citosina estabelece trs ligaes de hidrognio com Guanina. Relao molar A/T = 1,0 e C/G = 1,0.

http://www.corpohumano.hpg.ig.com.br/generalidades/quimica/quimica_11.html No DNA as bases nitrogenadas esto no centro da molcula e os esqueletos acar-fosfato esto externos.

http://www.educacaopublica.rj.gov.br/cursos/index.php#biologia O DNA a molcula que transmite a informao gentica e tem a capacidade de se autoduplicar. Uma cpia do DNA passada para a clula-filha durante a diviso celular. Cada molcula de DNA contm vrios genes dispostos linearmente ao longo da molcula. Cada gene (ou seja l o que for), quando em atividade, transcrito em molculas de outros cidos nuclicos denominados ribonuclicos, que comandaro a sntese de protenas . Depois de identificadas a estrutura em dupla hlice e a constituio do DNA, uma srie de questes surgiram. As primeiras delas relacionadas com a surpreendente estrutura da molcula. QUESTES 1. Identifique ao menos trs vantagens nesta estrutura em dupla hlice. 2. importante que as ligaes que unem as duas fitas do DNA sejam do tipo ponte de hidrognio? Por qu?

Relembrando Nos endereos a seguir voc encontrar informaes e conceitos bsicos sobre Gentica e Biologia Molecular.

Bases da gentica e biologia molecular Em ingls, mas muito simples e super legal! http://gslc.genetics.utah.edu Tpicos do site O DNA vai escola 1. Estudando gentica - abordam diferentes conceitos de gentica, com o objetivo de relembrar aquilo que voc j sabe. http://www.odnavaiaescola.com/topicos.htm 2. ndice geral do site - O DNA vai Escola tem como objetivo auxiliar na compreenso do pblico em relao biomedicina, proporcionando materiais de consulta e informao por meio de oficinas, conferncias, encontros, e atividades educacionais e capacitando os indivduos quanto ao seu senso crtico. http://www.odnavaiaescola.com Conceitos bsicos em Biologia Molecular Informaes bsicas sobre: DNA, RNA, Genoma, Gene e Cromossomo, duplicao de DNA e sntese de protenas colocadas de forma simples e correta. http://www.inf.unisinos.br/~mombach/ConceitosBasicosBM.pdf Portal de apoio s disciplinas de graduao em Gentica Molecular (C. Biolgicas) e Gentica (Medicina) da UFPE, disciplina de Gentica Molecular do Curso de Ps -Graduao em Gentica da UFPE e s disciplinas de Biologia Molecular e Gentica Molecular do Curso de Doutorado do CCB/ UFPE. Inclui animaes sobre diversos temas da rea. Exige o QuickTime. http://www.biolmol.cjb.net Temas de Biologia Desenvolvidos pelos professores Amabis e Martho Professores da rea de Gentica da USP e autores de livros didticos de Biologia de Ensino Mdio e Fundamental. 1. Prtica de sntese de protenas 2. Teoria de sntese de protenas 3. Identificao de pessoas pelo DNA Sobre estrutura e tipos de cromossomos de procariotos e eucariotos um site pequeno, simples e com informaes interessantes que faro voc relembrar este assunto. http://www.biociencia.org/genetica/citogenetica.htm

Bibliografia comentada
1. O sculo do gene Autor: Evelyn Fox Keller Belo Horizonte, Crislida/Sociedade Brasileira de Gentica (2a. ed.), 208 pp. Evelyn Keller tem a habilidade perturbadora de fazer pensar de novo, do princpio, sobre coisas que voc pensava j ter entendido. Com essa afirmao, o geneticista norte-americano Richard Lewontin, da Universidade de Harvard e um dos melhores especialistas em gentica de populaes, resume a importncia do livro escrito por Keller, uma professora de histria e filosofia do Instituto de Tecnologia de Massachusetts (MIT) e tambm uma cientista. No Brasil, o livro foi muito bem traduzido e prefaciado por Nelson Vaz. O livro comea com a origem da palavra gene, uma histria pouco conhecida, mas muito importante pelas lies de filosofia da cincia nela contidas. A obra de Keller um magnfico livro de histria da biologia do sculo XX em apenas quatro captulos. A contribuio mais importante a viso crtica, lastreada em fatos concretos, do determinismo gentico. A idia de que as caractersticas dos seres vivos so determinadas por unidades hereditrias chamadas genes (determinismo gentico), demolida elegantemente, assim como o conceito de programa gentico. http://cienciahoje.uol.com.br/controlPanel/materia/view/359 2. O citoplasma e o ncleo no desenvolvimento da hereditariedade Autor: Rogrio Parentoni, do Departamento de Ecologia, da Universidade Federal de Minas Gerais. O contedo deste livro vem resumido em trs tpicos: (1) O gene-partcula no existe; (2) O cromossomo funciona como um todo; (3) O citoplasma desempenha papel mais importante do que o ncleo nos fenmenos hereditrios. Essas afirmaes, defendidas hoje por Lewontine Keller, entre outros, foram propostas em 1941 por Salvador de Toledo Piza Jnior, professor de zoologia e anatomia comparada da Universidade de So Paulo. Na poca, suas idias foram consideradas extravagantes. Hoje, elas abrem novos caminhos. http://cienciahoje.uol.com.br/controlPanel/materia/view/359 3. O monge no jardim O gnio esquecido e redescoberto de Gregor Mendel, o pai da gentica. Autor: Robin Marantz Henig (traduo: Ronaldo Srgio de Biasi) Rio de Janeiro, Ed. Rocco. 2001. "Um cientista do sculo XX aprisionado no sculo XIX". assim que a jornalista cientfica americana Robin Marantz Henig define em seu livro O monge no jardim o cientista Gregor Mendel, hoje aclamado como pai da gentica. As experincias com ervilhas de Mendel mostraram como caractersticas de uma gerao so transmitidas s seguintes e fundamentaram a formulao de leis gerais da hereditariedade. Seu trabalho, porm, no teve reconhecimento imediato e s teve impacto 35 anos mais tarde, quando o cientista j havia morrido. Livro conta como monge formulou leis da hereditariedade a partir do estudo de ervilhas. 4. O DNA Autor: Marcelo Leite Coleo Folha Explica So Paulo, Publifolha, 2003, 104 p. O autor apresenta descobertas recentes que mudaram a viso dos geneticistas sobre o papel do DNA e mostra como a engenharia gentica seria incapaz de ditar comportamentos aos seres humanos. 5. Thompson & Thompson / Gentica Mdica AUTOR: NUSSBAUM, ROBERT L. - MCINNES, RODERICK R. - WILLARD, HUNTINGTON F. Guanabara Koogan editora, 6 edio. 2002. Princpios clssicos da gentica humana com a moderna gentica molecular, demonstrando as aplicaes clnicas desse conhecimento no diagnstico e tratamento de uma ampla gama de distrbios genticos. Novas informaes sobre: - defeitos do desenvolvimento; - gentica das doenas complexas; - gentica do cncer; - as bases moleculares e bioqumicas da gentica; - o Projeto do Genoma Humano; 6. Fundamentos de Biologia Molecular Autor: Malacinski, George M. Guanabara Koogan editora, 4a EDIO. 2005.

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Alm dos assuntos bsicos da rea de Gentica e Biologia Molecular, o livro traz ainda questes como: A Genmica e a Protemica, Transposons, Plasmdeos e Bacterifagos, DNA Recombinante e Engenharia Gentica: Moldagem Molecular dos Genes, A expanso da Biologia Molecular, um adendo para sua reviso de Biologia Molecular e rev fundamentos qumicos importantes para compreender a Biologia Molecular. Bases da Biologia Celular e Molecular Autores: De Robertis, Eduardo M.F. - Hib, Jos Guanabara Koogan editora, 3a EDIO. 2001. Conceitos bsicos. Os temas so apresentados de maneira concisa e didtica, numerados, o que permite agilizar sua busca e facilita a sua integrao. Foram simplificados com a introduo de diagramas simples e de fcil interpretao. Gentica Autores: Eldson J. Gardner & D. Peter Snustad Editora Guanabara Livro de gentica geral, tradicional e clssica que possui apenas alguns captulos de gentica e biologia molecular: D uma boa olhada nos captulos de molecular, so introdutrios do assunto e completamente bsicos, bsicos mesmo!!! Biotecnologia Simplificada Autores: Aluzio Borm, Fabrcio R. Santos. Suprema Grfica e Editora, 1a edio. 2001. 250p. Aborda as mais importantes aplicaes da biotecnologia, necessitando, por parte do leitor, apenas conhecimento elementar de gentica. Este livro foi escrito de forma a permitir que tanto leigos quanto conhecedores da gentica entendam a biotecnologia, de forma desmistificada. O DNA Recombinante Autores: James D. Watson, Michael Gilman, Jan Witkowski e Mark Zoller Tradutores: equipe de professores de vrias instituies, sob a coordenao do professor Elio Hideo Bab (UFOP). Traduo da segunda edio. Editora da UFO P, 2a edio. 1998. 624 p. 1. Parte: Desenvolvimento da Tecnologia do DNA Recombinante 2. Parte: Anlise dos Genes Clonados 3. Parte: Novas Estratgias para se Estudar as Funes dos Genes 4. Parte: Anlise de Importantes Processos Biolgicos Utilizando a Metodologia do DNA Recombinante 5. Parte: Aplicao do DNA Recombinante na Biotecnologia 6. Parte: O Impacto do DNA Recombinante na Gentica Humana http://www.ufop.br/ulthora/dna/livrodna.htm