BIOLOGIA

8ª Edição

CAMPBELL • REECE
U R R Y • C A I N • WA S S E R M A N
MINORSKY • JACKSON
 Obra originalmente publicada sob o título
Biology, 8th Edition
ISBN 9780805368444
Authorized translation from the English language edition, entitled BIOLOGY, 8th Edition, by NEIL A. CAMPBELL and JANE B. REECE,
published by Pearson Education, Inc., publishing as Benjamin Cummings, Copyright © 2008. All rights reserved. No part of
this book may be reproduced or transmitted in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying,
recording or by any information storage retrieval system, without permission from Pearson Education, Inc.
Portuguese language edition published by Artmed Editora, Copyright © 2010.
Tradução autorizada a partir do original em língua inglesa da obra intitulada BIOLOGY, 8ª EDIÇÃO, de autoria de NEIL A. CAMPBELL
e JANE B. REECE, publicado por Pearson Education, Inc., sob o selo de Benjamin Cummings, Copyright © 2008. Todos os direitos
reservados. Este livro não poderá ser reproduzido nem em parte nem na íntegra, nem ter partes ou sua íntegra armazenada
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A edição em língua portuguesa desta obra é publicada por Artmed Editora, Copyright © 2010.

Capa: Mário Röhnelt

Preparação de originais: Henrique de Oliveira Guerra
Leitura final: Magda Regina Chaves
Editora Sênior – Biociências: Letícia Bispo de Lima
Editora Júnior – Biociências: Carla Casaril Paludo
Editoração eletrônica: Techbooks

C187b Campbell, Neil.

Biologia [recurso eletrônico] / Neil Campbell, Jane Reece;
tradução Daniel Lorenzini ... [et al.]. – 8. ed. – Dados
eletrônicos. – Porto Alegre : Artmed, 2010.

Editado também como livro impresso em 2010.

ISBN 978-85-363-2351-0

1. Biologia. I. Reece, Jane. II. Título.

CDU 573

Catalogação na publicação: Renata de Souza Borges CRB-10/1922

Reservados todos os direitos de publicação, em língua portuguesa, à

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SÃO PAULO
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PRINTED IN BRAZIL
A Base
Molecular da
Hereditariedade
CONCEITOS-CHAVE
16.1
16.2
16.3
16
O DNA é o material genético
Diversas proteínas atuam juntas na replicação e no
reparo do DNA
Um cromossomo consiste em uma molécula de DNA
empacotada com proteínas
VISÃO GERAL
As instruções operacionais da vida
Em abril de 1953, James Watson e Francis Crick agitaram a co-
munidade científica com um elegante modelo de dupla-hélice
para a estrutura do ácido desoxirribonucleico, ou DNA. A Figura
16.1 mostra Watson (esquerda) e Crick admirando seu modelo de
DNA, construído com folha-de-flandres e arame. Ao longo dos
últimos 50 anos, este modelo deixou de ser uma nova proposta
para se tornar o ícone da biologia moderna. O DNA – a subs-
tância da hereditariedade – é a molécula mais célebre da nossa
era. Os fatores de hereditariedade de Mendel e os genes de Mor-
gan nos cromossomos são, na verdade, compostos por DNA. Em
termos químicos, nosso conteúdo genético se encontra no DNA
dos 46 cromossomos que herdamos de nossos progenitores, e na
mitocôndria herdada de nossas mães.
De todas as moléculas da natureza, os ácidos nucleicos são ini-
gualáveis na habilidade de controlar a própria replicação a partir
de monômeros. De fato, a semelhança da prole com os pais ba-
seia-se na replicação precisa do DNA e na sua transmissão de uma
geração para a próxima. A informação hereditária é codificada na
linguagem química do DNA e reproduzida em todas as células do
corpo. É essa programação contida no DNA que controla o de-
senvolvimento de nossas características bioquímicas, anatômicas,
fisiológicas e, até certo ponto, comportamentais. Neste capítulo,
vamos aprender como os biólogos deduziram que o DNA é o ma-
terial genético e como a sua estrutura foi descoberta por Watson e
Crick. Vamos abordar também como o DNA é replicado – a base
molecular da hereditariedade – e como as células reparam o seu
DNA. Por fim, vamos examinar de que modo uma molécula de
DNA é empacotada junto com proteínas nos cromossomos.
 Figura 16.1 Como a estrutura do DNA foi determinada?
16.1 O DNA é o material genético
Atualmente, mesmo as crianças no começo da vida escolar já ou-
viram falar em DNA, e os cientistas o manipulam rotineiramente
em laboratórios, com frequencia para alterar características he-
reditárias das células em seus experimentos. No início do século
XX, no entanto, a identificação das moléculas da hereditariedade
surgia como o principal desafio dos biólogos.
A procura pelo material genético: Pesquisa
Científica
Tão logo o grupo de T. H. Morgan demonstrou que os genes es-
tão localizados ao longo dos cromossomos (conforme descrito no
Capítulo 15), os dois componentes químicos dos cromossomos –
DNA e proteínas – se tornaram candidatos ao papel de material
genético. Até 1940, as opiniões pesavam a favor das proteínas, es-
pecialmente depois que os bioquímicos as identificaram como uma
classe de macromoléculas com grande heterogeneidade e especifi-
cidade de função, características essenciais para o material gené-
tico. Além disso, pouco se sabia acerca dos ácidos nucleicos, cujas
propriedades f ísicas e químicas pareciam muito uniformes para
serem responsáveis pela multitude de características hereditárias
observadas em cada organismo. Essa visão foi alterada gradativa-
mente à medida que experimentos com leveduras revelaram resul-
tados inesperados. Assim como nos trabalhos de Mendel e Mor-
gan, o fator essencial para a identificação do material genético foi
a escolha apropriada do organismo experimental. O papel do DNA
na hereditariedade foi estabelecido inicialmente por meio de estu-
dos com bactérias e vírus que as infectam, organismos bem mais
simples que ervilhas, moscas-das-frutas ou humanos. Nesta seção,
seguiremos o curso da busca pelo material genético com algum de-
talhe, na forma de um estudo de caso de pesquisa científica.
Evidências de que o DNA pode transformar bactérias
A busca para descobrir o papel genético do DNA intensificou-se em
1928. Na tentativa de desenvolver uma vacina contra a pneumonia,
o médico britânico Frederick Griffith estudou Streptococcus pneu-
306 C a mpbel l & Col s .

moniae, a bactéria que causa pneumonia em mamíferos. Griffith
possuía duas cepas (variedades) da bactéria, uma patogênica (que
causa a doença) e uma não patogênica (inofensiva). Ele se surpre-
endeu ao perceber que ao matar as bactérias patogênicas com calor
e misturá-las com algumas bactérias vivas da cepa não patogênica,
algumas células vivas se tornavam patogênicas (Figura 16.2). Além
disso, a nova característica de patogenicidade recém-adquirida era
herdada por todos os descendentes das bactérias transformadas.
Claramente, algum componente químico das células patogênicas
 Figura 16.2 Pesquisa
Uma característica genética pode ser transferida
entre diferentes cepas de bactérias?
EXPERIMENTO Frederick Griffith estudou duas cepas da bactéria
Streptococcus pneumoniae. Bactérias da cepa S (do inglês smooth, “suave”)
podem causar pneumonia em camundongos; são patogênicas pois pos-
suem uma cápsula que as protegem do sistema imune do animal. As bacté-
rias da cepa R (do inglês rough, “rugosa”) não possuem essa cápsula e não
são patogênicas. Para testar a característica patogenicidade, Griffith injetou
as duas cepas de bactérias em camundongos, conforme abaixo:
Mistura de
Células S mortas células S mortas
Células S vivas Células R vivas com calor com calor e
(controle) (controle) (controle) células R vivas
mortas era responsável por essa alteração hereditária, embora a
identidade dessa substância não fosse conhecida. Griffith chamou
esse fenômeno de transformação, atualmente definido como uma
alteração no genótipo e no fenótipo causada pela assimilação pela
célula de DNA externo. (Esse uso da palavra transformação não
deve ser confundido com a conversão de célula animal normal em
célula cancerosa, discutida no Capítulo 12.)
O trabalho de Griffith foi a centelha para uma pesquisa de
14 anos realizada pelo bacteriologista americano Oswald Avery,
em busca da identidade da substância transformadora. Avery se
concentrou em três candidatos principais: DNA, RNA (o outro
ácido nucleico) e proteínas. Avery rompeu as bactérias patogê-
nicas mortas por calor e extraiu os componentes celulares. Em
amostras separadas, utilizou tratamentos específicos para ina-
tivar cada um dos três tipos de moléculas. Então testou cada
amostra tratada quanto à habilidade de transformar bactérias
vivas não patogênicas. Apenas quando o DNA foi mantido ativo,
as células não patogênicas foram transformadas. Em 1944, Avery
e seus colaboradores, Maclyn McCarty e Colin MacLeod, anun-
ciaram que o agente transformador era o DNA. A descoberta foi
recebida com interesse, mas também com considerável ceticis-
mo, em parte pela convicção de que as proteínas eram melhores
candidatas ao papel de material genético. Muitos biólogos não
estavam convencidos de que os genes das bactérias seriam seme-
lhantes em composição e em função aos genes dos organismos
mais complexos. Mas a principal razão para a dúvida persistir era
o pouco conhecimento sobre o DNA.

Evidências de que o DNA viral pode programar as células

Evidências adicionais de que o DNA é o material genético foram
obtidas através de experimentos com vírus que infectam bacté-
rias (Figura 16.3). Esses vírus são chamados de bacteriófagos
RESULTADOS
(“comedores de bactérias”) ou apenas fagos. Vírus são bem mais
simples que células. O vírus é nada mais que um pouco de DNA
(ou, em alguns casos, RNA) encapsulado por um envoltório pro-
Camundongo Camundongo Camundongo Camundongo
morto saudável saudável morto
Cabeça
do fago

Nas amostras de
sangue, foram
encontradas células Segmento
S vivas capazes de da cauda
se reproduzir, gerando
mais células S. Fibras da
cauda
CONCLUSÃO Griffith concluiu que as bactérias R vivas foram trans- DNA
formadas em bactérias patogênicas S por uma substância hereditária des-
100 nm

conhecida; oriunda das células S; que permitiu às células R a formação de

cápsulas.
Célula
FONTE F. Griffith, The significance of pneumococcal types, Journal bacteriana
of Hygiene 27: 113-159 (1928).

E SE...? De que modo este experimento elimina a possibilidade de as  Figura 16.3 Vírus infectando célula bacteriana. T2 e outros fa-
células R terem simplesmente utilizado as cápsulas das células S mortas gos relacionados se ligam à célula hospedeira e injetam material genético
para se tornarem patogênicas? através da membrana plasmática, enquanto cabeça e partes caudais se
mantêm na superfície externa da bactéria (MET colorido).
 B i o l o gi a 307

tetor composto com frequência simplesmente por proteínas. Para
se reproduzir, o vírus precisa infectar uma célula e tomar conta
da maquinaria metabólica dessa célula.
Os fagos tiveram ampla utilização como ferramentas pelos
pesquisadores na área da genética molecular. Em 1952, Alfred
Hershey e Martha Chase realizaram experimentos mostrando
que o DNA é o material genético do fago conhecido como T2,
um dos muitos fagos que infectam as células de Escherichia coli
(E. coli), bactéria que normalmente vive no intestino dos mamífe-
ros. Naquela época, os biólogos já sabiam que o T2, assim como
muitos outros fagos, é composto quase inteiramente por DNA
e proteínas. Também sabiam que o fago T2 podia transformar
rapidamente uma célula de E. coli numa máquina de produção de
fagos T2, liberando muitas cópias quando a célula era rompida.
De alguma forma, o T2 conseguia programar a célula hospedeira
para produzir vírus. Mas qual dos componentes virais – proteína
ou DNA – era o responsável?
Hershey e Chase responderam a essa questão por meio de
um experimento que mostrou que só um dos dois componentes
do fago T2 entra realmente nas células de E. coli durante a in-
fecção (Figura 16.4). No experimento, eles utilizaram isótopos
radioativos de enxofre para marcar as proteínas em uma série, e
isótopos radioativos de fósforo para marcar o DNA na segunda
série. Como as proteínas contêm enxofre e o DNA não contém,
os átomos de enxofre radioativo foram incorporados apenas pe-
las proteínas dos fagos. De modo similar, os átomos de fósforo ra-
dioativo marcaram apenas o DNA, e não as proteínas, pois prati-
camente todos os átomos de fósforo estão no DNA dos fagos. No

 Figura 16.4 Pesquisa

O material genético do fago T2 é proteína ou DNA?
EXPERIMENTO Alfred Hershey e Martha Chase utilizaram enxofre e fósforo radioativos para rastrear os destinos das proteínas e do DNA, respectivamente,
dos fagos T2 que infectam células bacterianas. Eles queriam saber qual dessas moléculas adentrava e reprogramava as células para a produção de mais fagos.

1 Fagos marcados 2 A mistura é agitada em um 3 A mistura é centrifugada 4 A radioatividade

radioativamente são misturados liquidificador para soltar as para que as bactérias é medida no
com bactérias. Os fagos partes do fago ligadas à parte formem um pellet no sedimento e
infectam as células bacterianas. externa das células bacterianas. fundo do tubo de ensaio; no líquido.
os fagos livres e partes
Envoltório
Proteína dos fagos, mais leves,
Fago proteico vazio Radioatividade
radioativa permanecem em
(proteínas do
suspensão no líquido.
fago) no líquido
Célula bacteriana

Série 1: Os fagos são DNA

cultivados com enxofre
radioativo (35S) DNA do
incorporado nas proteínas fago
do fago (rosa).
Centrífuga

DNA Sedimento (células

radioativo bacterianas e
seu conteúdo)

Série 2: Os fagos são

cultivados com fósforo
radioativo (32P), que é
incorporado ao DNA do
fago (azul). Centrífuga
Radioatividade
Sedimento (DNA do fago)
no sedimento

RESULTADOS Quando as proteínas foram marcadas (Série 1), a radioatividade se mantém fora das células; mas quando o DNA é marcado (Série 2), a
radioatividade foi observada no interior das células. As células bacterianas com DNA radioativo dos fagos liberam novos fagos com certa quantidade de fósfo-
ro radioativo.
CONCLUSÃO O DNA dos fagos entra nas células bacterianas, mas as proteínas dos fagos, não. Hershey e Chase concluíram que as moléculas de DNA e
não as proteínas atuam como material genético do fago T2.
FONTE A.D. Hershey e M. Chase, Independent functions of viral protein and nucleic acid in growth of bacteriophage, Journal of General Physiology, 36:39-56 (1952).

E SE...? Se as proteínas fossem as portadoras da informação genética, os resultados seriam diferentes?

308 C a mpbel l & Col s .

experimento, amostras separadas de células não radioativas de E. Esqueleto Bases

coli foram infectadas com fagos T2 com proteínas marcadas ou açúcar-fosfato nitrogenadas
DNA marcado. Os pesquisadores então testaram as duas amos- Extremidade 5'
O– CH3
tras logo após a infecção para verificar qual das duas moléculas
5'
– proteína ou DNA – havia penetrado nas células bacterianas e, O P O CH2 H O
O
portanto, era capaz de reprogramá-las. O –
4'
1'
N N
H H
Hershey e Chase observaram que o DNA dos fagos entrou H
H 2'
H
3' O
nas células hospedeiras, e as proteínas dos fagos não entraram. H Timina (T)
Além disso, quando essas bactérias foram colocadas de volta em
meio de cultura, a infecção seguiu seu curso, e as células de E. coli
O
liberaram fagos com alguma quantidade de fósforo radioativo, H H
O P O CH2 N
demonstrando que o DNA no interior das células desempenha O N
um papel ativo no processo de infecção. O– N H
H H
Hershey e Chase concluíram que o DNA injetado pelo fago H H N
N
deveria ser a molécula portadora da informação genética, res- H
H
ponsável por fazer as células produzirem novas proteínas e DNA Adenina (A)
virais. O experimento de Hershey e Chase foi um marco, pois for-
O H H
neceu evidências poderosas de que os ácidos nucleicos (e não as
O P O CH2 N
proteínas) são o material hereditário, ao menos para os vírus. O
H H
O– N N
H H
Evidências adicionais de que o DNA é o material genético H H
O
Evidências adicionais de que o DNA é o material genético foram H Citosina (C)
obtidas no laboratório do bioquímico Erwin Chargaff. Já se sabia
que o DNA é um polímero de nucleotídeos, cada um formado
O
por três componentes: uma base nitrogenada, um açúcar pentose 5'
H
O P O CH2 N
chamado de desoxirribose e um grupo fosfato (Figura 16.5). A O O
O– 1'
base pode ser adenina (A), timina (T), guanina (G) ou citosina 4' H H N
H H Nucleotídeos
(C). Chargaff analisou a composição das bases do DNA de diver- Fosfato 3' 2' N
N H do DNA
sos organismos distintos. Em 1950, ele relatou que a composi- OH H

ção das bases do DNA varia de um organismo para o outro. Por
exemplo: 30,3% dos nucleotídeos do DNA humano apresentam a
base A, ao passo que o DNA da bactéria E. coli apresenta apenas
26% de A. Essa prova da diversidade molecular entre as espécies,
que se presumia ausente no DNA, tornou o DNA o candidato
mais plausível ao papel de material genético.
Chargaff também chamou a atenção para a regularidade pe-
culiar da proporção dos nucleotídeos numa mesma espécie. No
DNA de cada espécie estudada, o número de adeninas e timinas
era aproximadamente o mesmo; e o número de guaninas e citosi-
nas era aproximadamente o mesmo. No DNA dos humanos, por
exemplo, as quatro bases estão presentes nas seguintes porcenta-
gens: A ⫽ 30,0% e T ⫽ 30,3%; G ⫽ 19,5% e C ⫽ 19,9%. A equiva-
lência observada em qualquer espécie entre o número de bases A
e T e entre o número de bases G e C se tornou conhecida como a
regra de Chargaff. A fundamentação para essa regra permaneceu
inexplicada até a descoberta da dupla-hélice.
Construindo um modelo estrutural para o DNA:
Pesquisa Científica
Assim que a maior parte dos biólogos se convenceu de que o
DNA era o material genético, o desafio passou a ser determinar
de que modo sua estrutura cumpria o seu papel na transmissão
das informações hereditárias. No início dos anos 1950, o arranjo
Açúcar (desoxirribose) N
H
Extremidade 3’ H
Guanina (G)
 Figura 16.5 A estrutura da cadeia de DNA. Cada monômero de
nucleotídeo é composto por uma base nitrogenada (T, A, C ou G), pelo
açúcar desoxirribose (azul) e por um grupo fosfato (amarelo). O fosfato de
um nucleotídeo está ligado ao açúcar do próximo, formando um “esquele-
to” com alternância de grupos fosfato e de açúcares, de onde se projetam
as bases. A cadeia polinucleotídica tem orientação da extremidade 5’ (com
grupo fosfato) para a extremidade 3’(com grupo –OH). 5’ e 3’ são aos nú-
meros designados aos átomos de carbono do anel do açúcar.
das ligações covalentes nos polímeros de ácidos nucleicos estava
bem estabelecido (ver Figura 16.5), e os pesquisadores se concen-
traram no descobrimento da estrutura tridimensional do DNA.
Entre os cientistas trabalhando na resolução desse problema es-
tavam Linus Pauling, no Instituto de Tecnologia da Califórnia,
e Maurice Wilkins e Rosalind Franklin, no King’s College de
Londres. Os primeiros a oferecer a resposta correta, no entanto,
foram dois cientistas relativamente desconhecidos na época – o
americano James Watson e o inglês Francis Crick.
Essa breve, mas célebre, parceria que resolveu o quebra-ca-
beça da estrutura do DNA teve início logo após a ida de Watson
para a Universidade de Cambridge, onde Crick estudava a estru-
tura de proteínas por meio de uma técnica chamada de cristalo-
grafia por difração de raios X (ver Figura 5.25). Enquanto visitava
 B i o l o gi a 309

o laboratório de Maurice Wilkins, Watson viu as imagens de di-

fração de raios X do DNA, produzidas pela colega de laboratório
de Wilkins, Rosalind Franklin (Figura 16.6a). As imagens geradas
por cristalografia de raios X não são as imagens reais das molé-
culas. Os pontos e as sombras na Figura 16.6b foram gerados
por raios X difratados (defletidos) enquanto passavam através de
fibras alinhadas de DNA purificado. Os cristalógrafos utilizam
equações matemáticas para traduzir esses padrões de pontos em
informações sobre a estrutura tridimensional das moléculas, e
Watson estava familiarizado com os tipos de padrões gerados por
moléculas helicoidais. O estudo cuidadoso das fotos de Franklin
da difração de raios X do DNA não apenas lhe mostrou que o
DNA possuía estrutural helicoidal, mas também permitiu de- (a) Rosalind Franklin. (b) Fotografia de Franklin da difração
de raios X do DNA.
terminar a largura aproximada da hélice e o espaçamento entre
as bases nitrogenadas no interior da hélice. A largura da hélice  Figura 16.6 Rosalind Franklin e a sua difração de raios X. Franklin,
sugeria que ela era composta por duas cadeias, ao contrário do uma cristalógrafa consumada, conduziu os experimentos cruciais que resul-
taram na fotografia que permitiu a Watson e Crick a dedução da estrutura
modelo de três cadeias proposto por Linus Pauling pouco tempo em dupla-hélice do DNA. Franklin faleceu de câncer em 1958, com apenas
antes. A presença de duas cadeias é responsável pelo termo hoje 38 anos de idade. Seu colega Maurice Wilkins recebeu o prêmio Nobel em
comum dupla-hélice (Figura 16.7). 1962, junto com Watson e Crick.
Watson e Crick começaram a construir seu modelo de du-
pla-hélice levando em consideração as medidas de raios X e o que pois colocava as bases nitrogenadas, relativamente hidrofóbicas,
já se sabia sobre a química do DNA. Tendo lido o artigo anual não no interior da molécula, longe da solução aquosa do meio. Wat-
publicado que resumia o trabalho de Franklin, eles sabiam que ela son construiu um modelo com as bases nitrogenadas voltadas para
concluíra que a cadeia principal açúcar-fosfato estava localiza- o interior da dupla-hélice. Nesse modelo, os dois esqueletos açú-
da na parte externa da hélice. Esse arranjo era bastante atraente, car-fosfato são antiparalelos – ou seja, as subunidades apresentam

G C Extremidade 5'
O
T OH
A P Ponte de hidrogênio
-O Extremidade 3'
O
T A OH
H2C O
T A
1 nm
O O CH2
O
G C P O
-O O-
3,4 nm O
C G O
P
H2C O O
A T G C
O O CH2
C G O
P O
-O O-
O P
H2C O
O O
C G
T A O
O
O CH2
T A P O
-O O-
O P
A T H2C O
O O
A T
A T O CH2
OH
O
Extremidade 3' O-
P
HO
G C O
0,34 nm
A T Extremidade 5'

(a) Principais características da estrutura do DNA. (b) Estrutura química parcial. (c) Modelo de preenchimento espacial.

 Figura 16.7 A dupla-hélice. (a) As “fitas” neste diagrama representam o esqueleto açúcar-fosfato das duas cadeias de DNA. A hélice é dextrógira,
enrolando-se para a direita. As duas cadeias são unidas por pontes de hidrogênio (linhas pontilhadas) entre as bases nitrogenadas, que se pareiam no interior
da dupla-hélice. (b) Para maior clareza, as duas cadeias de DNA são mostradas desenroladas nesta estrutura química parcial. Fortes ligações covalentes ligam
as unidades de cada cadeia, enquanto pontes de hidrogênio fracas ligam uma cadeia à outra. Note que as cadeias são antiparalelas, ou seja, tem orientações
opostas. (c) O empacotamento dos pares de bases fica claro no modelo computadorizado. As forças de van der Waals entre os pares de bases adjacentes de-
sempenham importante papel na manutenção da unidade molecular (ver Capítulo 2).
310 C a mpbel l & Col s .

direções opostas (ver Figura 16.7). Você pode imaginar esse arranjo H
como uma escada de cordas com degraus rígidos. As cordas nas
N H O CH3
laterais são equivalentes aos esqueletos açúcar-fosfato, e os degraus N
representam os pares de bases nitrogenadas. Agora imagine que
uma das extremidades da escada permanece fixa enquanto a outra N
é torcida, formando uma espiral. Os dados de difração de raios X de N H N

Franklin indicavam que a hélice fazia um giro completo a cada 3,4 Açúcar N N
nm ao longo do seu comprimento. Com as bases dispostas a 0,34
O Açúcar
nm umas das outras, existem dez camadas de pares de bases, ou
degraus na escada, a cada giro completo da hélice. Adenina (A) Timina (T)
As bases nitrogenadas da dupla-hélice estão pareadas em com-
binações específicas: adenina (A) com timina (T), e guanina (G) H
com citosina (C). Foi principalmente por tentativa e erro que Wat-
N O H N
son e Crick chegaram a essa característica fundamental do DNA.
Inicialmente, Watson imaginou que as bases formassem pares por
semelhança – por exemplo, A com A e C com C. Mas esse modelo N
N H N
não se encaixava nos dados obtidos pela difração de raios X, que
sugeriam que a hélice possuía diâmetro uniforme. Por que essa ca- Açúcar N N
racterística é inconsistente com o pareamento de bases por seme-
N H O Açúcar
lhança? Adenina e guanina são purinas, bases nitrogenadas com
dois anéis orgânicos. Em contraste, citosina e timina pertencem à H
família de bases nitrogenadas conhecidas como pirimidinas, que Guanina (G) Citosina (C)
possuem apenas um anel. Assim, as purinas (A e G) têm aproxima-
damente o dobro da largura das pirimidinas (C e T). Um par puri-  Figura 16.8 Pareamento de bases no DNA. Os pares de bases ni-
trogenadas em uma cadeia de DNA são unidos por pontes de hidrogênio,
na-purina é muito largo, e uma par pirimidina-pirimidina é muito representadas pelas linhas pontilhadas em cor-de-rosa.
estreito para os 2 nm de diâmetro da dupla-hélice. O pareamento
purina-pirimidina, no entanto, resulta em um diâmetro uniforme: cleotídeos ao longo da cadeia de DNA. A sequência linear das
quatro bases pode ser variada de maneiras incalculáveis, e cada
Purina + purina = muito largo gene possui uma ordem, ou sequência de bases, sem paralelo.
Em abril de 1953, Watson e Crick surpreenderam a comuni-
dade científica com um artigo sucinto, de uma página, na revista
Pirimidina + pirimidina = muito estreito britânica Nature.* O artigo descreve o modelo molecular para a
dupla-hélice do DNA, que desde então se tornou símbolo da bio-
logia molecular. A beleza do modelo reside no fato de que a estru-
Purina + pirimidina: largura consistente tura do DNA sugere os mecanismos para a sua replicação.
com os dados de difração de raios X

Watson e Crick ponderaram que devia haver uma especificida-
de adicional no pareamento, determinado pela estrutura das bases.
Cada base possui grupos químicos laterais que podem formar pon-
tes de hidrogênio com o par apropriado: adenina pode formar duas
pontes de hidrogênio com timina e só com a timina; guanina forma
três pontes de hidrogênio com citosina e só com citosina. Em resu-
mo, A pareia com T e G pareia com C (Figura 16.8).
O modelo de Watson e Crick explica a base da regra de Char-
gaff. Sempre que uma fita da molécula de DNA apresentar uma
A, a fita complementar apresentará uma T. E uma G numa fita
estará sempre pareada com uma C na fita complementar. Assim,
no DNA de qualquer organismo, a quantidade de adenina será
igual à quantidade de timina, e a quantidade de guanina será igual
à quantidade de citosina. Apesar de a regra de pareamento de ba-
ses determinar a combinação de bases nitrogenadas que formam
os “degraus” da dupla-hélice, ela não restringe a sequência de nu-
REVISÃO DO CONCEITO
1. Uma mosca apresenta a seguinte porcentagem de nu-
cleotídeos no DNA: 27,3% de A, 27,6% de T, 22,5% de G e
22,5% de C. Como esses números demonstram a regra de
Chargaff?
2. Como o modelo de Watson e Crick explica a base da regra
de Chargaff?
3. E SE...? Se não houvesse ocorrido a transformação no
experimento de Griffith, que resultados seriam observa-
dos? Explique.
Ver as respostas sugeridas no Apêndice A.
* J.D. Watson e F.H.C. Crick, Molecular structure of nucleic acids: a structure for
deoxyribose nucleic acids, Nature 171:737-738 (1953).
 B i o l o gi a 311

16.2 Diversas proteínas atuam juntas
na replicação e no reparo do DNA
A relação entre estrutura e função pode ser observada na du-
pla-hélice. A ideia do pareamento específico das bases nitrogena-
das do DNA foi a inspiração que levou Watson e Crick à estrutura
correta da dupla-hélice. Ao mesmo tempo, eles perceberam o sig-
nificado funcional das regras de pareamento de bases. Eles finali-
zaram ser artigo com esta afirmação: “Não fugiu à nossa percep-
ção o fato de que o pareamento específico por nós postulado logo
sugere um possível mecanismo de cópia para o material genético”.
Nesta seção, vamos aprender o princípio básico da replicação do
DNA, assim como alguns detalhes importantes desse processo.
O princípio básico: pareamento de bases com
fita molde
Em um segundo artigo, Watson e Crick levantaram uma hipótese
de como o DNA é replicado:
Nosso modelo para os ácidos desoxirribonucleicos é, de fato,
um par de moldes, um complementar ao outro. Imaginamos que
antes da duplicação as pontes de hidrogênio são rompidas, e as
duas cadeias destorcidas e separadas. Cada cadeia pode então
servir de molde para a formação de uma nova cadeia comple-
mentar, de modo que no fim são obtidos dois pares de cadeias
onde antes havia apenas uma. Além disso, a sequência de pares
de bases terá sido duplicada com exatidão.*
A Figura 16.9 ilustra a ideia básica de Watson e Crick. Para
uma melhor compreensão, mostramos apenas uma pequena seção
da dupla-hélice, na forma não helicoidal. Observe que se uma das
duas fitas de DNA for omitida na Figura 16.9a, a sua sequência li-
* F.H.C. Crick e J. D. Watson. The complementary structure of deoxyribonucleic
acids, Proceedings of Royal Society of London A 223:80 (1954).
near de bases pode ser determinada através da fita mostrada, com a
aplicação das leis de pareamento. As duas fitas são complementares,
cada uma armazena a informação necessária para a reconstrução da
outra. Quando a célula copia uma molécula de DNA, cada cadeia
serve de molde para o ordenamento de nucleotídeos em uma nova
fita complementar. Os nucleotídeos se alinham ao longo da fita mol-
de de acordo com as regras de pareamento e são ligados para formar
novas fitas. Onde havia uma molécula de DNA fita-dupla no início
do processo, haverá duas, cada uma sendo a cópia exata da molécu-
la “parental”. O mecanismo de cópia é análogo ao uso de negativos
fotográficos para a obtenção de uma fotografia, que pode ser então
utilizada para produzir outro negativo e assim sucessivamente.
Esse modelo para a replicação do DNA permaneceu sem tes-
tes por diversos anos depois da publicação da estrutura do DNA.
Os experimentos necessários eram conceitualmente simples,
mas de dif ícil execução. O modelo de Watson e Crick previa que
quando uma molécula de DNA se replicasse, cada molécula-filha
possuiria uma fita antiga, derivada da molécula parental, e uma
fita nova, recém-sintetizada. Esse modelo semiconservativo
pode ser distinguido do modelo conservativo de replicação, onde
as duas fitas parentais, de alguma forma, permanecem juntas
após o processo (ou seja, a molécula parental é conservada). Em
um terceiro modelo, chamado de modelo dispersivo, as quatro
fitas de DNA resultantes da replicação apresentam uma mistura
de DNA antigo e novo (Figura 16.10, na próxima página). Em-
bora os mecanismos para a replicação conservativa ou dispersiva
do DNA não sejam fáceis de conceber, esses modelos permane-
ceram como possibilidades até que puderam ser testados. Após
dois anos de trabalhos preliminares, no final dos anos 1950, Mat-
thew Meselson e Franklin Stahl elaboraram um inteligente ex-
perimento capaz de distinguir os três modelos. O experimento
deles corroborou o modelo semiconservativo de replicação do
DNA, conforme proposto por Watson e Crick, e é amplamente

A T A T A T A T
C G C G C G C G
T A T A T A T A
A T A T A T A T

G C G C G C G C

(a) A molécula parental possui duas fitas
complementares de DNA. Cada base está
pareada por meio de pontes de
hidrogênio com a base complementar
específica, A com T e G com C.
(b) A primeira etapa da replicação é a
separação das duas fitas. Cada fita
parental serve agora de molde para
determinar a ordem dos nucleotídeos ao
longo da nova fita complementar.
(c) Os nucleotídeos complementares se
alinham e são ligados para formar o
esqueleto açúcar-fosfato das novas fitas.
Cada molécula-filha de DNA é composta
por uma fita parental (azul-escuro) e por
uma fita nova (azul-claro).

 Figura 16.9 O modelo para replicação do DNA: o conceito básico. Nesta ilustração simplificada, um pequeno segmento de DNA foi desenrolado
em uma estrutura que lembra uma escada. Os corrimões da escada correspondem ao esqueleto açúcar-fosfato das duas fitas de DNA; os degraus são os
pares de bases nitrogenadas. Formas simples simbolizam os quatro tipos de bases. As fitas em azul escuro correspondem à molécula de DNA parental, e as
fitas em azul-claro correspondem às cadeias de DNA recém-sintetizadas.
312 C a mpbel l & Col s .

Célula parental
(a) Modelo conservativo.
As duas fitas parentais
se associam novamente
após servirem de
moldes para a
síntese das fitas
novas, restaurando
a dupla-hélice parental.
Primeira Segunda
replicação replicação  Figura 16.11 Pesquisa
A replicação do DNA segue o modelo
conservativo, semiconservativo ou dispersivo?
EXPERIMENTO
No instituto de Tecnologia da Califórnia, Matthew
Meselson e Franklin Stahl cultivaram E. coli por diversas gerações em meio
contendo precursores de nucleotídeos marcados com isótopos pesados de
nitrogênio, 15N. Os cientistas então transferiram as bactérias para um meio
contendo apenas o isótopo mais leve, 14N. Duas amostras de DNA foram
colhidas deste frasco, uma após 20 minutos e outra após 40 minutos,
correspondendo à primeira e à segunda replicação, respectivamente. Me-
selson e Stahl conseguiram distinguir moléculas de DNA de diferentes
densidades por meio da centrifugação do DNA extraído das bactérias.

1 Bactérias são 2 As bactérias

(b) Modelo semi- cultivadas são transferidas
conservativo. em meio para um meio
As duas fitas da contendo contendo
15N 14N
molécula parental
são separadas e RESULTADOS
cada uma serve
de molde para a
3 Amostras de 4 Amostras de Menos
síntese de uma
DNA centrifu- DNA centrifu- denso
nova fita
gadas após gadas após
complementar.
20 minutos 40 minutos
Mais
(após a primeira (após a segunda
replicação) replicação) denso

CONCLUSÃO Meselson e Stahl compararam seus resultados com

(c) Modelo
dispersivo. Cada fita os resultados previstos pelos três modelos da Figura 16.10, conforme mos-
das duas moléculas trado abaixo. A primeira replicação no meio 14N gerou uma banda híbrida
filhas contém uma de DNA (15N-14N). Esse resultado eliminou o modelo conservativo. A se-
mistura de DNA gunda replicação produziu bandas de DNA leve e DNA híbrido, resultado
parental e DNA que refuta o modelo dispersivo e corrobora o modelo semiconservativo.
recém-sintetizado. Eles então concluíram que a replicação do DNA é semiconservativa.

Primeira replicação Segunda replicação

Modelo
conservativo

 Figura 16.10 Três modelos alternativos para a replicação do

DNA. Cada pequeno segmento de dupla-hélice simboliza o DNA no interior
de uma célula. Iniciando com a célula parental, seguimos o DNA por duas
gerações de células – dois ciclos de replicação do DNA. O DNA recém-sinte-
tizado está representado em azul-claro. Modelo
semiconservativo
reconhecido entre os biólogos como exemplo clássico e elegante
de planejamento experimental (Figura 16.11).
O princípio básico da replicação do DNA é conceitualmente
simples. No entanto, o processo real envolve manobras bioquími-
Modelo
cas bastante complicadas, como veremos a seguir. dispersivo

A replicação do DNA: uma visão mais de perto

A bactéria E. coli possui um único cromossomo com 4,6 milhões de
pares de nucleotídeos. Em ambiente favorável, uma célula de E. coli
pode copiar seu DNA e se dividir em duas células filhas idênticas
em menos de uma hora. Cada célula humana possui 46 moléculas
de DNA no núcleo, uma longa molécula de DNA dupla-hélice por
cromossomo. Ao todo, isto representa cerca de 6 bilhões de pares
de base, ou cerca de mil vezes mais DNA do que é observado na
FONTE M. Mendelson e F. Stahl, The replication of DNA in Escheri-
chia coli, Proceedings of National Academy of Sciences USA 44: 671-682 (1958).
Pesquisaemação Leia e analise o artigo original em Pesquisa em
Ação: Interpretando Artigos Científicos.
E SE...? Se Meselson e Stahl tivessem cultivado as células em meio
com 14N e depois passado as células para o meio com 15N antes de coletar
as amostras, quais seriam os resultados?

célula bacteriana. Se imprimirmos os símbolos de uma letra para
estas bases (A, G, C e T), no tamanho das letras que você está len-
do agora, os 6 bilhões de pares de base de informações numa célula
humana diploide preencheriam cerca de 1.200 livros de espessura
igual a este. Mesmo assim, uma célula leva apenas algumas horas
para copiar todo o seu DNA. Essa replicação de imensas quantida-
des de informação genética é realizada com poucos erros – apenas
um a cada 10 bilhões de nucleotídeos. A cópia do DNA é um pro-
cesso notável, tanto em velocidade quanto em precisão.
Mais de uma dúzia de enzimas e outras proteínas participam
na replicação do DNA. Sabe-se muito mais sobre como essa “ma-
quinaria de replicação” atua nas bactérias (como E. coli) do que
em eucariotos. Iremos descrever as etapas básicas do processo
em E. coli, exceto quando explicitado. O que os cientistas apren-
deram sobre a replicação em eucariotos sugere, no entanto, que a
maior parte dos processos é fundamentalmente similar em pro-
cariotos e eucariotos.
Origem de Fita parental (molde)
replicação Fita-filha (nova)
Forquilha de
Molécula replicação
de DNA
fita dupla Bolha de
replicação
Duas moléculas-
-filhas de DNA
0,5 μm
(a) No cromossomo circular de E. coli, e em muitas outras bactérias,
apenas uma origem de replicação está presente. As fitas parentais
se separam na origem, formando uma bolha de replicação com
duas forquilhas. A replicação acontece em ambas as direções até
que as forquilhas se encontrem no lado oposto do cromossomo,
resultando em duas moléculas-filhas. A MET mostra um
cromossomo bacteriano com a forquilha de replicação.
 Figura 16.12 Origens de replicação em E. coli e em eucariotos. As setas
vermelhas indicam o movimento das forquilhas de replicação e, portanto, a dire-
ção da replicação do DNA em cada bolha.
B i o l o gi a 313
Iniciando
A replicação da molécula de DNA inicia em pontos especiais
chamados de origens de replicação, pequenas porções de DNA
com sequências específicas de nucleotídeos. O cromossomo de
E. coli, assim como diversos outros cromossomos de bactérias,
é circular e possui uma única origem de replicação. As proteínas
que iniciam a replicação do DNA reconhecem essa sequência e
se ligam ao DNA, separando as duas fitas e originando a “bolha”
de replicação. A replicação do DNA então prossegue nas duas
direções, até que toda a molécula seja copiada (Figura 16.12a).
Em contraste com o cromossomo bacteriano, um cromossomo
eucarioto pode possuir centenas, ou mesmo alguns milhares, de
origens de replicação. Múltiplas bolhas de replicação se formam
e por fim se fundem, acelerando a cópia das longas moléculas de
DNA (Figura 16.12b). Assim como nas bactérias, a replicação
do DNA de eucariotos ocorre nas duas direções a partir de cada
ponto de origem.
Origem de replicação Molécula de DNA fita dupla
Fita parental (molde)
Fita-filha (nova)
Bolha Forquilha de replicação
Duas moléculas-filhas de DNA
0,25 μm
(b) Em cada cromossomo linear dos eucariotos, a replicação do DNA se
inicia quando bolhas de replicação se formam em diversos locais ao
longo da molécula gigante de DNA. As bolhas se expandem
conforme a replicação prossegue em ambas as direções.
Finalmente, as bolhas se fundem e a síntese das moléculas-filhas
está completa. A MET mostra três bolhas de replicação ao longo de
uma molécula de DNA de células de hamster chinês em cultura.
DESENHE Na MET em (b) adicione setas correspondentes
à terceira bolha.
314 C a mpbel l & Col s .
Em cada extremidade da bolha de replicação está a forquilha
de replicação, região em forma de Y em que as fitas de DNA
parental estão sendo desenroladas. Diversos tipos de proteínas
participam desse processo de desenrolamento (Figura 16.13). As
helicases são enzimas que desenrolam a dupla-hélice nas forqui-
lhas de replicação, separando as duas fitas parentais e tornan-
do-as disponíveis como fitas molde. Após a separação das fitas
parentais, proteínas de ligação à fita simples ligam-se às ca-
deias de DNA não pareadas, estabilizando-as. O desenrolamento
da dupla-hélice leva ao aumento na torção da cadeia no trecho à
frente da forquilha de replicação. As topoisomerases ajudam a
aliviar esse aumento na tensão pela quebra, giro e religação das
fitas de DNA.
As seções desenroladas das fitas de DNA parental ficam en-
tão disponíveis para servirem de molde para a síntese das novas
fitas de DNA complementar. No entanto, as enzimas que sinteti-
zam o DNA não podem iniciar a síntese de um polinucleotídeo:
podem apenas adicionar nucleotídeos às extremidades de uma
cadeia já existente e pareada com a fita molde. A cadeia de nu-
cleotídeos inicial produzida durante a síntese de DNA, na ver-
dade, é uma pequena porção de RNA, não de DNA. Essa cadeia
de RNA, chamada de oligonucleotídeo iniciador (do inglês,
primer), é sintetizada pela enzima primase (ver Figura 16.13). A
primase inicia uma cadeia de RNA a partir de um único nucleotí-
deo de RNA, adicionando nucleotídeos de RNA um de cada vez,
utilizando a fita de DNA parental como molde. O oligonucleotí-
deo iniciador completo, geralmente com 5 a 10 nucleotídeos de
extensão, é pareado com a fita molde. A nova cadeia de DNA é
iniciada na extremidade 3’ do oligonucleotídeo de RNA.
Sintetizando uma nova fita de DNA
Enzimas chamadas DNA-polimerases catalisam a síntese do
novo DNA pela adição de nucleotídeos a uma cadeia pré-exis-
tente. Em E. coli, existem diversas enzimas DNA-polimerases
distintas, mas duas parecem desempenhar os papéis principais
na replicação do DNA: DNA-polimerase III e DNA-polimerase I.
A situação em eucariotos é mais complicada, com pelo menos 11
A topoisomerase cliva, gira e
religa o DNA parental à frente
da forquilha de replicação,
aliviando a tensão causada
por seu desenrolamento.
 Figura 16.13 Algumas proteí-
nas envolvidas no início da repli-
cação do DNA. As mesmas proteínas 5’
atuam nas duas forquilhas de replica-
ção na bolha de replicação. Para maior 3’
clareza, apenas uma forquilha é mos-
trada.
enzimas DNA-polimerase já descritas até o momento; no entan-
to, os princípios gerais são os mesmos.
A maior parte das DNA-polimerases requer a presença de um
oligonucleotídeo iniciador e de uma fita de DNA molde, assim como
nucleotídeos de DNA complementares e alinhados à fita molde. Em
E. coli, a DNA-polimerase III (abreviada como DNA-pol III) adicio-
na um nucleotídeo de DNA ao oligonucleotídeo de RNA; em segui-
da, continua adicionando nucleotídeos de DNA complementares à
fita molde de DNA parental na extremidade crescente da nova fita
de DNA. A taxa de elongação é de cerca de 500 nucleotídeos por
segundo em bactérias e 50 por segundo em células humanas.
Cada nucleotídeo adicionado à fita crescente de DNA é oriun-
do de um nucleosídeo trifosfato, ou seja, um nucleosídeo (um
açúcar e uma base) com três grupos fosfato. Já estudamos molé-
culas assim – o ATP (adenosina trifosfato, ver Figura 8.8). A úni-
ca diferença entre o ATP do metabolismo energético e o dATP (o
nucleosídeo trifosfato que fornece o nucleotídeo adenina para o
DNA) é o açúcar; é uma desoxirribose nas unidades que compõem
o DNA e uma ribose no ATP. Assim como o ATP, os nucleosídeos
trifosfato utilizados na síntese de DNA são quimicamente reativos,
em parte devido ao grupo trifosfato, que possui um conjunto de
cargas negativas. À medida que cada monômero se junta à extre-
midade crescente da fita de DNA, dois grupos fosfato são perdidos
na forma de uma molécula de pirofosfato P – P i. A hidrólise sub-
sequente do pirofosfato em duas moléculas de fosfato inorgânico
P i é uma reação exergônica acoplada que ajuda a impulsionar a
reação de polimerização (Figura 16.14).
Elongação antiparalela
Conforme salientamos, as duas extremidades de uma fita de DNA
são diferentes. Isso confere um sentido para a fita; ela se torna
uma espécie de rua de mão única (ver Figura 16.5). Além disso, as
duas fitas de DNA em uma dupla-hélice são antiparalelas, ou seja,
têm sentidos opostos uma em relação à outra, assim como uma
rua de mão dupla (ver Figura 16.4). Claramente, as duas novas fi-
tas, formadas durante a replicação do DNA, também precisam ser
antiparalelas em relação às suas fitas molde.
Proteínas de ligação ao A primase sintetiza oligonucleotídeos
DNA fita simples estabilizam de RNA, utilizando o DNA parental
as fitas parentais separadas. como molde.
3’
5’ 3’
Oligonucleotídeo
iniciador de RNA
5’
A helicase desenrola e separa
as fitas de DNA parental.
 B i o l o gi a 315

Fita nova Fita molde

Extremidade 5‘ Extremidade 3‘ Extremidade 5‘ Extremidade 3‘

Açúcar A T A T
Base
Fosfato

C G C G

G C G C
OH
DNA-polimerase
Extremidade 3‘ A T A  Figura 16.14 A incorporação de nucleotídeos
T na fita de DNA. A DNA-polimerase catalisa a adição
P P Pi OH de um nucleosídeo trifosfato à extremidade 3’ da fita
P Extremidade 3‘
P C Pirofosfato C crescente de DNA, com a liberação de duas moléculas
OH de fosfato.
Utilize este diagrama para explicar o que quere-
? mos
Nucleosídeo 2Pi
dizer ao falarmos que cada fita de DNA pos-
trifosfato Extremidade 5‘ Extremidade 5‘ sui um sentido.

Como o arranjo antiparalelo da dupla-hélice afeta a replicação? Visão geral

Em função da sua estrutura, as enzimas DNA-polimerases só po-
Origem de replicação
dem adicionar nucleotídeos à extremidade 3’ livre de um oligonu- Fita líder Fita retardada
cleotídeo iniciador ou de uma fita crescente de DNA, e nunca à ex-
tremidade 5’ (ver Figura 16.14). Dessa forma, uma nova fita de DNA Oligonucleotídeo
iniciador
pode ser aumentada apenas no sentido 5’→ 3’. Com isto em mente,
vamos examinar a forquilha de replicação (Figura 16.15). Ao longo Fita líder
Fita retardada
de uma fita molde, a DNA-polimerase III pode sintetizar uma fita Sentido da
complementar continuamente pelo acréscimo de nucleotídeos na replicação
fita nova, no único sentido possível, 5’→3’. A DNA-pol III se liga à
1 Após o oligonucleotídeo iniciador
fita molde na forquilha de replicação e adiciona nucleotídeos à nova Origem de
de RNA ter sido feito, a DNA-pol III
fita complementar continuamente, conforme a forquilha progride. inicia a síntese da fita líder. replicação
A fita de DNA feita por esse mecanismo é chamada de fita líder ou
contínua*. Apenas um oligonucleotídeo iniciador é necessário para
a síntese da fita líder pela DNA-pol III (ver Figura 16.15). 3’

Para alongar a outra fita de DNA no sentido obrigatório 5’→ 5’

Oligonucleotídeo
3’, a DNA-pol III precisa atuar sobre a outra fita molde no senti- 5’ iniciador de RNA
do contrário ao da forquilha de replicação. A fita de DNA alongada “Grampo deslizante”
3’
nessa direção é chamada de fita retardada ou descontínua*. Ao 5’ DNA-pol III
contrário da fita líder, continuamente alongada, a fita retardada é DNA parental
sintetizada de forma descontínua, numa série de fragmentos. Es-
ses fragmentos da fita retardada são chamados de fragmentos de 3’
5’
Okazaki, em homenagem ao cientista japonês que os descobriu. Os
fragmentos têm entre 1.000 e 2.000 nucleotídeos de extensão em E.
coli e 100 a 200 nucleotídeos de extensão em eucariotos.
5’
A Figura 16.16 ilustra as etapas de síntese da fita retarda- 2 A fita líder é alongada
da. Enquanto apenas um oligonucleotídeo iniciador é necessário 3’ continuamente no sentido
para a síntese da fita líder, cada fragmento de Okazaki na fita re- 5’→ 3’; à medida que a
5’ forquilha progride.
tardada deve ser iniciado separadamente. Outra DNA-polimera-
se, a DNA-polimerase I (DNA-pol I), substitui os nucleotídeos
 Figura 16.15 Síntese da fita líder durante a replicação do
DNA. Este diagrama se concentra na forquilha de replicação mostrada à
* A síntese da fita líder e a síntese da fita retardada ocorrem concomitantemente e esquerda no quadro Visão geral. A DNA-polimerase III (DNA-pol III), com
na mesma velocidade. A fita retardada foi nomeada desta forma, pois a sua síntese o formato de mão côncava, está intimamente associada a uma proteína
é ligeiramente atrasada em relação à síntese da fita líder; cada novo fragmento da chamada de “grampo deslizante”, que circunda a dupla-hélice recém-sin-
fita retardada não pode ser iniciado até que uma porção extensa o suficiente da tetizada como um anel. O grampo deslizante se move juntamente com a
fita molde tenha sido exposta na forquilha de replicação. DNA-pol III ao longo da fita molde.
316 C a mpbel l & Col s .

de RNA dos oligonucleotídeos iniciadores por seus equivalentes

Visão geral
em DNA, adicionando-os um a um à extremidade 31 do frag-
Origem de replicação
Fita líder Fita retardada mento de Okazaki adjacente (fragmento 2 na Figura 16.16). A
DNA-pol I não pode unir o nucleotídeo final desse fragmento de
Fita retardada DNA de reposição com o primeiro nucleotídeo de DNA do frag-
2
1
mento de Okazaki cujo oligonucleotídeo iniciador foi substituído
Fita líder (fragmento 1 na Figura 16.16). Outra enzima, a DNA-ligase, re-
Sentido da aliza essa tarefa, unindo os esqueletos açúcar-fosfato de todos os
replicação fragmentos de Okazaki em uma fita contínua de DNA.
As Figuras 16.17 e a Tabela 16.1, na próxima página, resumem
1 A primase une os a replicação do DNA. Estude-as com cuidado antes de prosseguir.
nucleotídeos de RNA em um
3′ oligonucleotídeo iniciador. 5′
O complexo de replicação do DNA
5′ 3′ É tradicional – e conveniente – representar as moléculas de
Fita
molde 2 A DNA-pol III DNA-polimerase como locomotivas que se deslocam ao longo dos
adiciona nucleotídeos
de DNA ao oligonucle- “trilhos” formados pela molécula de DNA, mas esse modelo não é
otídeo iniciador, correto em dois pontos importantes. Em primeiro lugar, as várias
formando o fragmento proteínas que participam da replicação do DNA na verdade for-
de Okazaki 1.
mam um grande complexo, a “maquinaria de replicação do DNA”.
3′ Oligonucleotídeo
iniciador de RNA 3′
5′ Diversas interações proteína-proteína aumentam a eficiência desse
1 complexo. Por exemplo, através de interações com outras proteínas
5′
na forquilha de replicação, a primase aparentemente atua como me-
3 Após alcançar o canismo de freio molecular, retardando o progresso da forquilha de
próximo oligonucleotídeo replicação e coordenando a velocidade de replicação das fitas líder e
iniciador de RNA à direita,
a DNA-pol III se destaca 3′
retardada. Em segundo lugar, o complexo de replicação do DNA não
Fragmento
da cadeia de DNA.
de Okazaki 5′ se desloca ao longo do DNA; o DNA se move através do complexo
3′ durante o processo de replicação. Em células eucarióticas, múltiplas
1
cópias do complexo podem estar ancoradas na matriz nuclear, um
5′
arcabouço de fibras que se projeta do interior do núcleo. Estudos re-
centes sustentam um modelo em que duas moléculas de DNA-po-
4 Após o fragmento 2 ser
iniciado, a DNA-pol III adiciona limerase, uma em cada fita molde, “absorvem” o DNA parental e
5′
3′ nucleotídeos de DNA até atingir liberam as moléculas-filhas de DNA recém-sintetizado. Evidências
o fragmento 1 e se destaca da adicionais sugerem que a fita retardada é curvada em direção à parte
cadeia de DNA.
3′
posterior do complexo. Assim, quando a DNA-polimerase comple-
2 1 5′ ta a síntese de um fragmento de Okazaki e se dissocia da cadeia de
DNA, ela não precisa se deslocar grandes distâncias para chegar ao
oligonucleotídeo iniciador do próximo fragmento, adjacente à for-
5 A DNA-pol I substitui o RNA quilha de replicação. Essa curvatura da fita retardada permite que
5′ por DNA, adicionando nucleo-
3′ tídeos à extremidade 3’ mais fragmentos de Okazaki sejam sintetizados em menos tempo.
do fragmento 2.
3′ Verificação e reparo do DNA
5′
2 1 Não podemos atribuir a exatidão da replicação do DNA somente
à especificidade do pareamento de bases. Embora os erros em
uma molécula completa de DNA sejam de apenas um em 10
6 A DNA-ligase forma 7 A fita retardada
as ligações entre o DNA
bilhões de nucleotídeos, erros iniciais de pareamento entre um
agora está completa
5′ mais novo e o DNA nesta região. novo nucleotídeo e os nucleotídeos presentes na fita molde são
3′ do fragmento 1. 100.000 vezes mais comuns – uma taxa de erro de um em 100.000
3′ nucleotídeos. Durante a replicação do DNA, a DNA-polimerase
1 5′ compara cada nucleotídeo com seu molde no momento em que
2
é adicionado à cadeia nascente. Ao encontrar um pareamento
incorreto de nucleotídeos, a polimerase remove o nucleotídeo e
então recomeça a síntese. (Essa atividade é similar ao processo
Sentido da replicação
de correção de uma palavra em um programa de edição de texto
 Figura 16.16 A síntese da fita retardada. utilizando a tecla “del” e então digitando a letra correta.)
 B i o l o gi a 317

Visão geral
Origem de replicação
3 A fita líder é sintetizada Fita líder Fita retardada
continuamente no sentido
2 Moléculas de 5’ → 3′, pela DNA- pol III.
proteína de ligação à
fita simples estabilizam o
DNA molde desenrolado.
Fita líder
Fita retardada
Sentido da
1 A helicase replicação
desenrola a
dupla-hélice
parental.
Fita líder

5′ DNA-pol III
3′
3′ Oligonucleotídeo
iniciador Primase

DNA parental 5′
3′
DNA-pol III Fita retardada
5′
DNA-pol I DNA-ligase
4 3′
5′
3
2 1 3′
4 A primase começa a
sintetizar o oligonucleotídeo 5′
iniciador de RNA para o
quinto fragmento de Okazaki.

5 A DNA-pol III está completando a síntese
do quarto fragmento de Okazaki. Quando ela
alcança o oligonucleotídeo iniciador de RNA
do terceiro fragmento, ela se dissocia da
cadeia e se desloca até a forquilha de
replicação, onde então adiciona nucleotídeos
de DNA à extremidade 3' do oligonucleotídeo
iniciador do quinto fragmento.
6 A DNA-pol I remove o oligonucleotídeo 7 A DNA-ligase une
iniciador da extremidade 5' do segundo a extremidade 3' do
fragmento, substituindo-o por nucleotídeos de segundo fragmento à
DNA que ela adiciona um a um à extremidade 3' extremidade 5' do
do terceiro fragmento. A substituição do ultimo primeiro fragmento.
nucleotídeo de RNA por DNA deixa o esqueleto
açúcar-fosfato com a extremidade 3' livre.

 Figura 16.17 Um resumo da replicação de DNA em bactérias. O Tabela 16.1 Proteínas de replicação do DNA
diagrama detalhado mostra uma forquilha de replicação. Porém, conforme bacteriano e suas funções
indicado no quadro Visão geral (canto superior direito), a replicação em geral
ocorre simultaneamente nas duas forquilhas, uma em cada extremidade da Proteína Função
bolha de replicação. Observando cada fita filha em sua totalidade no quadro Helicase Desenrola a dupla-hélice parental na forquilha de
Visão geral, é possível perceber que metade é sintetizada continuamente, replicação.
constituindo a fita líder, e a outra metade (no lado oposto da origem de repli-
Proteína de ligação Liga e estabiliza cadeias de DNA fita simples, até
cação) é sintetizada em fragmentos, constituindo a fita retardada.
à fita simples que estas possam ser utilizadas como fitas molde.
Os nucleotídeos malpareados podem, algumas vezes, escapar Topoisomerase Alivia a tensão na região anterior à forquilha de
do mecanismo de verificação da DNA-polimerase. No reparo de replicação, através da quebra, da torção e da reli-
gação das fitas de DNA.
malpareamento, enzimas removem e substituem nucleotídeos
Primase Sintetiza de um oligonucleotídeo iniciador de RNA
pareados erroneamente, resultantes de erros da replicação. Pes-
na extremidade 5’ da fita líder e em cada frag-
quisadores ressaltaram a importância dessas enzimas quando mento de Okazaki da fita retardada.
descobriram que um defeito hereditário em uma delas está as- DNA-pol III Utilizando o DNA parental como molde, sintetiza
sociado a uma forma de câncer de cólon. Aparentemente, esse uma nova fita de DNA através da ligação cova-
defeito permite que erros causadores de câncer se acumulem no lente de nucleotídeos na extremidade 3’ de uma
DNA em taxas maiores que o normal. cadeia de DNA preexistente ou de um oligonu-
cleotídeo iniciador de RNA.
Pareamentos incorretos ou nucleotídeos alterados podem
surgir também após a replicação. De fato, a manutenção da infor- DNA-pol I Remove os nucleotídeos de RNA do oligonucleotí-
deo iniciador, a partir da sua extremidade 5’, e os
mação genética codificada pelo DNA requer reparos frequentes substitui por nucleotídeos de DNA.
contra os diversos tipos de danos que podem ocorrem no DNA.
DNA-ligase Liga a extremidade 3’ do DNA que substitui o oli-
As moléculas de DNA são expostas continuamente a agentes quí- gonucleotídeo iniciador ao restante da fita líder e
micos e f ísicos potencialmente danosos, como iremos discutir no liga os fragmentos de Okazaki da fita retardada.
318 C a mpbel l & Col s .
Capítulo 17. Reagentes químicos (do ambiente e de ocorrência
natural nas células), emissões radioativas, raios X, luz ultravioleta
e algumas moléculas presentes na fumaça dos cigarros podem
alterar os nucleotídeos de modo a afetar a informação genética
por eles codificada. Além disso, as bases sofrem, frequentemen-
te, alterações químicas espontâneas sob as condições normais
da célula. No entanto, essas alterações no DNA são geralmente
corrigidas antes de se tornarem mutações perpetuadas através de
sucessivas replicações. Cada célula monitora e repara continua-
mente o seu material genético. Como o reparo do DNA danifi-
cado é muito importante para a sobrevivência de um organismo,
não é de causar surpresa que diversas enzimas de reparo distintas
estejam envolvidas no processo. Quase 100 são conhecidas em E.
coli, e cerca de 130 já foram identificadas em humanos.
A maioria dos sistemas para reparo de nucleotídeos pareados
incorretamente, seja devido a danos no DNA ou a erros de repli-
cação, utiliza um mecanismo que se vale da estrutura dos pares
de base do DNA. Frequentemente, um segmento de fita de DNA
contendo algum dano é removido por excisão por uma enzima
que cliva o DNA – uma nuclease – e essa lacuna resultante é
então preenchida com nucleotídeos, utilizando a fita não danifi-
cada como molde. As enzimas envolvidas no preenchimento das
lacunas são a DNA-polimerase e a DNA-ligase. Esse sistema de
reparo do DNA é chamado de reparo por excisão de nucleotí-
deos (Figura 16.18).
Uma função importante das enzimas de reparo de DNA nas
nossas células da pele é o reparo dos danos genéticos causados
pela radiação ultravioleta do sol. Um tipo de dano, mostrado na
Figura 16.18, é a ligação covalente de bases de timina adjacentes
à cadeia de DNA. Esses dímeros de timina afetam a estrutura do
DNA e a sua replicação. A importância de reparar esse tipo de
dano é salientada na doença xeroderma pigmentosum. Essa con-
dição, na maioria dos casos, é causada por um defeito hereditário
na enzima de reparo por excisão de nucleotídeos. Pessoas com
esse distúrbio são hipersensíveis à luz do sol; as mutações que
sofrem na pele em decorrência da luz ultravioleta não são corri-
gidas e podem causar câncer de pele.
Replicando as extremidades das moléculas
de DNA
Apesar das capacidades impressionantes das enzimas DNA-po-
limerase, existe uma pequena porção de DNA das células que a
DNA-polimerase não consegue replicar ou reparar. Para cadeias
lineares de DNA, como o DNA nos cromossomos de eucariotos, o
fato de uma DNA-polimerase ser capaz de adicionar nucleotídeos
apenas à extremidade 3’ de um polinucleotídeo preexistente in-
duz a um problema visível. A maquinaria de replicação usual não
fornece meios para completar a extremidade 5’ das fitas filhas de
DNA. Mesmo que um fragmento de Okazaki seja iniciado com um
oligonucleotídeo iniciador de RNA ligado à extremidade da fita
molde, tão logo esse oligonucleotídeo tenha sido removido, ele não
poderá ser substituído por DNA, pois não há uma extremidade
3’ disponível para a adição de nucleotídeos (Figura 16.19). Como
1 Um dímero de timina
torce a molécula de DNA.
2 A enzima nuclease
cliva a fita do DNA
danificado em dois
pontos, e a seção
danificada é removida.
Nuclease
3 A síntese de reparo,
DNA- catalisada por uma DNA-
-polimerase -polimerase, preenche os
nucleotídeos que
ficaram faltando.
DNA-
-ligase 4 A DNA ligase une as
terminações livres do DNA
novo ao DNA antigo,
tornando a fita completa.
 Figura 16.18 Reparo por excisão de nucleotídeos de um DNA
danificado. Um conjunto de enzimas detecta e repara os danos sofridos
pelo DNA. Esta figura mostra uma cadeia de DNA contendo um dímero
de timina, um tipo de dano causado frequentemente pela radiação ultra-
violeta. Uma enzima nuclease cliva a região de DNA danificada, e uma
DNA-polimerase (DNA-pol I, nas bactérias) a substitui por nucleotídeos
complementares à fita não danificada. A DNA-ligase completa o processo,
unindo as terminações livres do esqueleto açúcar-fosfato.
resultado, ciclos repetidos de replicação geram moléculas de DNA
cada vez mais curtas e com extremidades desiguais.
O encurtamento do DNA não ocorre na maioria dos proca-
riotos, pois o seu DNA é circular e, portanto, não possui extremi-
dades. O que protege os genes dos eucariotos de serem erodidos
durante ciclos sucessivos de replicação do DNA? As moléculas de
DNA cromossômico dos eucariotos possuem sequências especiais
de nucleotídeos, chamadas de telômeros, nas suas extremidades
(Figura 16.20). Os telômeros não contêm genes; o seu DNA é com-
posto, tipicamente, por repetições de uma sequência curta de nu-
cleotídeos. Em cada telômero humano, por exemplo, a sequência
de seis nucleotídeos, TTAGGG, é repetida entre 100 e 1.000 vezes.
O DNA dos telômeros protege os genes do organismo. Além disso,
proteínas específicas, associadas ao DNA dos telômeros, previnem
a ativação, pelas extremidades desiguais, dos sistemas celulares de
monitoramento contra danos no DNA. (As extremidades desi-
guais de uma molécula de DNA, que frequentemente resultam em
quebras na dupla-hélice, podem disparar vias de sinalização que
levam à parada do ciclo celular ou à morte celular.)
 B i o l o gi a 319

5′
Extremidades Fita líder
das fitas de Fita retardada
DNA parental 3′

Último fragmento Fragmento anterior

Fita retardada Oligonucleotídeo iniciador de RNA

5′
3′
Fita parental 1 μm
Remoção dos
O oligonucleotídeo oligonucleotídeos
iniciador é removido, iniciadores e substituição  Figura 16.20 Telômeros. Os eucariotos apresentam sequências re-
mas não pode ser por DNA onde existir petitivas e não codificantes, chamadas de telômeros, nas extremidades do
substituído por DNA, uma extremidade 3' livre. seu DNA. Os telômeros foram marcados em laranja nestes cromossomos
pois não há
extremidade 3' livre de camundongos (MO).
para a DNA-polimerase. 5′
3′ produzidos. No entanto, isso não acontece: uma enzima chama-
da telomerase catalisa o alongamento dos telômeros nas células
Segundo ciclo
germinativas eucarióticas, restaurando seu tamanho original e
de replicação
compensando a perda que ocorre durante a replicação do DNA.
5′ A telomerase é inativa na maior parte das células somáticas hu-
Nova fita líder 3′ manas, mas a sua atividade nas células germinativas resulta em
zigotos com telômeros de comprimento máximo.
Nova fita retardada 5′
O encurtamento normal dos telômeros pode proteger os or-
3′ ganismos contra o câncer por limitar o número de divisões que
Mais ciclos uma célula somática pode realizar. As células de grandes tumores
de replicação possuem telômeros anormalmente curtos, como seria de se espe-
rar em células que sofreram diversas divisões celulares. Um maior
Encurtamento
progressivo das encurtamento levaria à autodestruição das células dos tumores.
moléculas-filhas Curiosamente, cientistas observaram atividade da telomerase nas
células somáticas de tumor, sugerindo que a sua habilidade em
 Figura 16.19 Encurtamento das extremidades de moléculas li-
neares de DNA. Aqui acompanhamos a extremidade de uma fita de mo- estabilizar a extensão dos telômeros pode permitir a persistência
lécula de DNA por dois ciclos de replicação. Após a primeira replicação, a das células cancerosas. Muitas células cancerosas parecem capa-
nova fita retardada é mais curta que a fita molde. Após a segunda replica- zes de divisões ilimitadas, assim como as cepas imortais de cul-
ção, as fitas líder e retardada se tornaram mais curtas que a cadeia de DNA
turas de células (ver Capítulo 12). Se a telomerase for de fato um
parental original. Apesar de não aparecerem aqui, as outras extremidades
destas moléculas de DNA também se tornam mais curtas. fator importante em diversos tumores, ela pode ser um alvo útil
no diagnóstico do câncer e na quimioterapia.
Os telômeros não previnem o encurtamento das moléculas Até aqui neste capítulo, aprendemos sobre a estrutura e a re-
de DNA pelos múltiplos ciclos de replicação; eles apenas poster- plicação da molécula de DNA. Na próxima seção, vamos exami-
gam a erosão dos genes próximos às extremidades das moléculas nar como o DNA é empacotado nos cromossomos, as estruturas
de DNA. Conforme mostrado na Figura 16.19, o telômeros se tor- portadoras da informação genética.
nam mais curtos a cada ciclo de replicação. Como seria esperado,
o DNA dos telômeros tende a ser mais curto em células somáti- REVISÃO DO CONCEITO
cas em divisão de indivíduos mais velhos e em culturas de células 1. Que papel o pareamento de bases complementares de-
onde já ocorreram diversos ciclos de divisão. Foi proposto que sempenha na replicação do DNA?
o encurtamento dos telômeros está de alguma forma conectado 2. Identifique as duas principais funções da DNA-pol III na
com o processo de envelhecimento de alguns tecidos e mesmo do replicação do DNA.
organismo com um todo. 3. E SE...? Se a DNA-pol I de uma célula não fosse fun-
O que acontece com as células cujo genoma precisa perma- cional, como isso afetaria a síntese da fita líder? No quadro
necer inalterado de um organismo para a sua prole, através de Visão geral da Figura 16.17, indique onde a DNA-pol I
diversas gerações? Se os cromossomos das células germinativas funcionaria normalmente na fita líder.
(que dão origem aos gametas) se tornassem mais curtos a cada
Ver as respostas sugeridas no Apêndice A.
ciclo celular, genes essenciais acabariam faltando nos gametas
320 C a mpbel l & Col s .

16.3 Um cromossomo consiste é bastante diferente de um cromossomo eucariótico, composto

em uma molécula de DNA
empacotada com proteínas
O principal componente do genoma da maioria das bactérias é
uma molécula de DNA fita-dupla circular, que se encontra as-
sociada a uma pequena quantidade de proteínas. Apesar de nos
referirmos a essa estrutura como o cromossomo bacteriano, ela
por uma molécula de DNA linear associada a uma grande quanti-
dade de proteínas. Em E. coli, o DNA cromossômico é composto
por cerca de 4,6 milhões de pares de nucleotídeos, representando
cerca de 4.400 genes. Isto é 100 vezes mais DNA do normalmente
observado em vírus típicos, mas apenas um centésimo da quan-
tidade de DNA observada em células somáticas eucarióticas.
Mesmo assim, é uma grande quantidade de DNA que precisa ser
armazenada em local bastante pequeno.

 Figura 16.21

Investigando o empacotamento da cromatina nos cromossomos

eucarióticos
Esta série de diagramas e micrografias eletrônicas de transmissão demonstra o modelo atual dos ní-
veis de empacotamento progressivo do DNA. A ilustração inicia com uma única molécula de DNA e
continua até um cromossomo em metáfase, grande o suficiente para ser visto em microscópio óptico.

Nucleossomo
(10 nm de diâmetro)

Dupla-hélice
de DNA (2 nm
de diâmetro)

H1
Cauda das histonas

Histonas

1 DNA, a dupla-hélice 2 Histonas 3 Nucleossomos, ou “colar de

Mostramos aqui o modelo de fitas do DNA.
Cada fita representa uma das cadeias principais
açúcar-fosfato. Como você deve se lembrar da
Figura 16.7, os grupos fosfato ao longo da ca-
deia principal contribuem para a carga negativa
ao longo da face externa de cada fita. A MET
mostra moléculas de DNA nu; a dupla-hélice
por si só tem 2 nm de diâmetro.
Proteínas chamadas histonas são responsá-
veis pelo primeiro nível de empacotamento do
DNA em cromatina. Apesar de cada histona ser
pequena – com cerca de 100 aminoácidos –, a
massa total de histonas na cromatina é quase
igual à massa de DNA. Mais de 20% dos amino-
ácidos das histonas apresentam carga positiva
(lisina ou arginina) e se ligam fortemente ao
DNA com carga negativa.
Quatro tipos de histonas são mais comuns
na cromatina: H2A, H2B, H3 e H4. As histonas
são bastante similares entre os eucariotos; por
exemplo, todos os aminoácidos, exceto dois, na
histona H4 de bovinos são idênticos aos amino-
ácidos da histona H4 de ervilhas. A conservação
aparente dos genes das histonas durante a evo-
lução provavelmente é um reflexo do seu papel
central na organização do DNA nas células.
Os quatro tipos principais de histonas são
fundamentais para o próximo nível de empaco-
tamento do DNA. (Um quinto tipo de histona,
chamado H1, está envolvido em um nível pos-
terior de empacotamento.)
contas” (fibra de 10 nm)
Em micrografias eletrônicas, a cromatina des-
dobrada apresenta diâmetro de 10 nm (a fibra
de 10 nm). Esta cromatina lembra a aparência
de um colar de contas (ver a MET). Cada “con-
ta” é um nucleossomo, a unidade básica do em-
pacotamento do DNA; a porção de DNA entre
as contas é chamada de DNA espaçador.
Um nucleossomo consiste em DNA enrola-
do duas vezes ao redor de um núcleo de proteí-
nas composto por duas moléculas de cada um
dos quatro tipos de histonas. A porção amino
ou N-terminal de cada histona (a cauda da his-
tona) se projeta do nucleossomo.
No ciclo celular, as histonas deixam o DNA
apenas brevemente durante a sua replicação.
Geralmente, elas também o fazem durante a
expressão gênica, outro processo que requer o
acesso ao DNA pela maquinaria molecular da
célula. No Capítulo 18 serão discutidas algumas
descobertas recentes sobre o papel das caudas
das histonas e dos nucleossomos na regulação
da expressão gênica.
 B i o l o gi a 321

Se espichado, o DNA de uma célula de E. coli teria cerca de 1
mm de comprimento, 500 vezes maior do que a célula. No inte-
rior da bactéria, entretanto, devido à ação de algumas proteínas,
o cromossomo enrola-se e “superenrrola-se”, empacotando-se
densamente de forma a ocupar apenas parte do volume da célula.
Diferente do núcleo de uma célula eucariótica, essa região densa
onde o DNA está localizado na bactéria, chamada de nucleoide,
não é delimitada por membrana (ver Figura 6.6).
Cada cromossomo eucariótico contém uma única dupla-héli-
ce de DNA linear com em média 1,5 × 108 pares de nucleotídeos.
Essa é uma enorme quantidade de DNA em relação à extensão
do cromossomo condensado. Se fosse completamente espichada,
uma molécula de DNA alcançaria 4 cm de comprimento, milha-
res de vezes o diâmetro do núcleo da célula – e isto sem conside-
rar os demais 45 cromossomos humanos!
No interior da célula, o DNA eucariótico combina-se de modo
preciso com uma grande quantidade de proteínas. De maneira con-

Cromátide
(700 nm)

Fibra de 30 nm

Alças Suporte

Fibra de 300 nm

Cromossomo
replicado
(1.400 nm)

4 Fibras de 30 nm 5 Domínios em alça (fibra de 6 Cromossomo metafásico

O próximo nível de empacotamento ocorre por
meio de interações entre as caudas das histonas
de um nucleossomo e o DNA espaçador e os nu-
cleossomos adjacentes. Uma quinta histona, H1,
está envolvida com esse nível de empacotamen-
to. Devido a essas interações, a fibra de 10 nm
se enrola, ou enovela, formando uma fibra de
cromatina com 30 nm de espessura, a fibra de
30 nm. Apesar de a fibra de 30 nm ser preva-
lescente no núcleo em interfase, o arranjo dos
nucleossomos neste nível de empacotamento da
cromatina ainda é uma questão em aberto.
300 nm)
A fibra de 30 nm, por sua vez, forma alças cha-
madas de domínio em alça, ligadas ao cerne
(suporte) do cromossomo, uma estrutura com-
posta por proteínas, formando uma fibra de
300 nm. O cerne do cromossomo é rico em um
tipo de topoisomerase. Moléculas H1 também
parecem estar presentes.
No cromossomo mitótico, os domínios em alça
se enrolaram e enovelaram de maneira ainda
não totalmente compreendida, compactando
ainda mais toda a cromatina, gerando o cro-
mossomo metafásico característico, mostrado
na micrografia acima. A espessura de uma cro-
mátide é de 700 nm. Genes específicos sem-
pre estão localizados nos mesmos lugares nos
cromossomos metafásicos, indicando que as
etapas de empacotamento são altamente espe-
cíficas e precisas.
322 C a mpbel l & Col s .
junta, esse complexo de DNA e proteínas, chamado de cromatina,
cabe no núcleo através de um elaborado sistema com diversos níveis
de empacotamento do DNA. Nosso conhecimento atual sobre os
sucessivos níveis de empacotamento do DNA é resumido na Figura
16.21. Estude essa figura com atenção antes de prosseguir a leitura.
A cromatina sofre mudanças admiráveis no seu grau de empa-
cotamento durante o curso do ciclo celular (ver Figura 12.6). Em
células em interfase, fixadas para microscopia óptica, a cromatina
geralmente aparece como massa difusa no núcleo, o que sugere uma
cromatina estendida. À medida que a célula se prepara para a mito-
se, a sua cromatina se enrola e enovela (se condensa), formando um
número característico de pequenos e finos cromossomos metafási-
cos, distinguíveis uns dos outros no microscópio óptico.
Em geral, a cromatina em interfase é menos condensada que a
cromatina nos cromossomos mitóticos, mas apresenta diversos ní-
veis de empacotamento também vistos na mitose. Parte da croma-
tina que compõe um cromossomo parece estar presente em forma
de uma fibra de 10 nm, mas boa parte da cromatina é compactada
numa fibra de 30 nm, que em algumas regiões continua o empaco-
tamento em domínios em alça. Embora os cromossomos na interfa-
se não apresentem uma estruturação óbvia, seus domínios em alça
parecem estar ligados à lâmina nuclear, na face interna do envelope
nuclear. Talvez também estejam ligados a fibras da matriz nuclear.
Essas ligações podem ajudar a organizar regiões da cromatina com
genes ativos. A cromatina ocupa áreas restritas e específicas em
cada gene dentro do núcleo em interfase, e as fibras de cromatina de
cromossomos diferentes não se misturam.
Mesmo durante a interfase, os centrômeros e telômeros dos
cromossomos, assim como outras regiões cromossômicas em algu-
mas células, estão presentes em um estado altamente condensado,
a exemplo do que se observa nos cromossomos em metáfase. Essa
cromatina na interfase, visível como aglomerados irregulares ao mi-
croscópio óptico, é chamada de heterocromatina, para distingui-la
da eucromatina (a “cromatina verdadeira”), menos compactada e
mais dispersa. Em função da sua compactação, o DNA presente na
heterocromatina é inacessível à maquinaria da célula responsável
pela expressão (utilização) da informação genética codificada pelo
DNA. Em contraste, o empacotamento mais leve da eucromatina
torna o DNA acessível a essa maquinaria, e os genes presentes na
eucromatina podem ser expressos.
O cromossomo é uma estrutura dinâmica que pode ser con-
densada, relaxada, modificada e remodelada de acordo com a ne-
cessidade dos vários processos celulares, incluindo mitose, meiose
e expressão gênica. As vias que controlam essas transformações
atualmente são alvo de intensas pesquisas. Tornou-se claro que
as histonas não são apenas estruturas inertes ao redor das quais o
DNA se encontra enrolado. Elas podem sofrer modificações quími-
cas que resultam em alterações na organização da cromatina. Terry
Orr-Weaver, a cientista entrevistada no início desta unidade, tem
interesse, há bastante tempo, nos mecanismos moleculares da di-
nâmica dos cromossomos durante a mitose e a meiose. Utilizando a
abordagem genética em Drosophila, ela e seus colaboradores mos-
traram que a fosforilação de um aminoácido específico na cauda das
 Figura 16.22 Pesquisa
Qual o papel da fosforilação das histonas no
comportamento dos cromossomos durante a
meiose?
EXPERIMENTO Terry Orr-Weaver e colaboradores, no Massachusetts
Institute of Technology induziram mutações aleatórias em moscas-das-fru-
tas e procuraram mutações que causassem esterilidade, sob a hipótese de
que essas mutações poderiam estar localizadas em genes que codificam
proteínas que desempenham papéis importantes durante a meiose. Eles
encontraram uma mutação no gene nhk-1 que causa esterilidade em fê-
meas de Drosophila. Eles sabiam que o produto desse gene, a histona-cina-
se-1 nucleossomal, ou NHK-1 (do inglês nucleosomal histone kinase-1), é
uma enzima que fosforila um aminoácido específico da cauda da histona
H2A. Então formularam a hipótese de que a esterilidade era causada por
meiose malsucedida em função do comportamento anormal dos cromos-
somos quando essa enzima não funciona normalmente.
Para testar essa hipótese, eles observaram o comportamento dos cro-
mossomos durante a meiose nas células dos ovários de moscas normais e
de moscas mutantes. Em um experimento, eles utilizaram um marcador
fluorescente vermelho para visualizar a localização do DNA e um marcador
fluorescente verde para visualizar a localização da proteína condensina,
que normalmente se liga aos cromossomos no final da prófase I e os ajuda
a se condensar.
RESULTADOS No final da prófase I das células de ovário das moscas
normais, a condensina e o DNA estavam localizados em uma pequena re-
gião do núcleo (abaixo, à esquerda; a cor amarela resulta do encontro no
mesmo local dos marcadores vermelho e verde). No entanto, nas moscas
mutantes, a condensina estava espalhada aleatoriamente no núcleo, en-
quanto o DNA estava restrito à periferia do núcleo (abaixo, à direita; a co-
loração vermelha do DNA é bastante sutil). Este resultado sugere que a
condensina não se ligou aos cromossomos nas células das moscas mutan-
tes, e que, consequentemente, os cromossomos não se condensaram.
Condensina e Delimitação Condensina DNA (vermelho,
DNA (amarelo) do núcleo (verde) na periferia)
Núcleo das células normais Núcleo das células mutantes
CONCLUSÃO Como este e outros processos durante a meiose não
são completamente bem-sucedidos quando a histona cinase NHK-1 não
funciona apropriadamente, os pesquisadores concluíram que a fosforila-
ção específica da histona H2A é necessária para o comportamento normal
dos cromossomos durante a meiose.
FONTE I. Ivanovska, T. Khandan, T. Ito e T. L. Orr-Weaver, A histone
code in meiosis: the histone kinase NHK-1, is required for proper chromosomal archi-
tecture in Drosophila oocytes, Genes and Debelopment 19:2571-2582 (2005).
E SE...? Suponha que um pesquisador tenha descoberto uma mosca
mutante em que a cauda da histona H2A não apresente o aminoácido
específico, geralmente fosforilado pela histona cinase NHK-1. Como essa
mutação irá afetar o comportamento dos cromossomos durante a meiose
nas células de ovário?
 B i o l o gi a 323

histonas tem um papel crucial no comportamento dos cromosso- REVISÃO DO CONCEITO

mos durante a prófase I da meiose (Figura 16.22). Fosforilação e
outras modificações químicas das histonas também possuem múlti-
plos efeitos na atividade gênica, como vamos ver no Capítulo 18.
Neste capítulo, aprendemos como as moléculas de DNA estão
organizadas nos cromossomos e como a replicação do DNA fornece
cópias dos genes que os pais passam para a prole. No entanto, não
é suficiente que genes sejam copiados e transmitidos; a informação
que eles carregam precisa ser utilizada pela célula. Em outras pa-
lavras, os genes precisam ser “expressados”. No próximo capítulo,
vamos examinar como a célula traduz a informação genética codi-
ficada pelo DNA.
1. Descreva a estrutura de um nucleossomo – a unidade bá-
sica do empacotamento do DNA nas células eucarióticas.
2. Quais são as duas propriedades que distinguem a hetero-
cromatina da eucromatina?
3. E SE...? Apesar de as proteínas responsáveis pelo em-
pacotamento do cromossomo de E. coli não serem histo-
nas, quais propriedades você espera que elas comparti-
lhem com as histonas, uma vez que elas também possuem
a habilidade de se ligarem ao DNA?
Ver as respostas sugeridas no Apêndice A.

RESUMO DOS CONCEITOS-CHAVE

Revisão do Capítulo 16
 Verificação e reparo do DNA As enzimas DNA-polimerases revi-
sam o DNA novo, substituindo os nucleotídeos incorretos. No
16.1 O DNA é o material genético (p. 305 – 310) reparo de maus pareamentos, enzimas corrigem os erros que
ainda persistirem. O reparo por excisão de nucleotídeos é um
 A procura pelo material genético: Pesquisa Científica Experimen- processo não específico, no qual enzimas clivam e substituem
tos com bactérias e fagos forneceram as primeiras evidências porções danificadas de DNA.
contundentes de que o material genético é o DNA.
 Replicando as extremidades das moléculas de DNA As extremi-
 Construindo um modelo estrutural para o DNA: Pesquisa Científi- dades do DNA dos cromossomos dos eucariotos se tornam
ca Watson e Crick deduziram que o DNA é uma dupla-hélice. mais curtas a cada ciclo de replicação. A presença de telômeros,
Duas cadeias açúcar-fosfato antiparalelas se enrolam na face ex- sequências repetitivas nas extremidades das moléculas de DNA
terna da molécula; as bases nitrogenadas se projetam para o seu lineares, posterga a erosão dos genes. A telomerase catalisa o
interior, onde estão pareadas por meio de pontes de hidrogênio alongamento dos telômeros nas células germinativas.
em pares específicos, A com T, G com C.
G
A
C
T
16.3 Um cromossomo consiste em uma molécula de DNA
T A empacotada com proteínas (p. 320 – 323)
Bases nitrogenadas
G C  O cromossomo bacteriano é geralmente uma molécula de DNA
Esqueleto açúcar-fosfato C G circular com algumas proteínas associadas. A cromatina eucarió-
A T
C G
tica que compõem o cromossomo é formada principalmente por
Ponte de hidrogênio
DNA e proteínas histonas. As histonas se ligam umas às outras e ao
T A DNA para formar o nucleossomo, a unidade básica do empacota-
mento do DNA. As caudas das histonas se projetam de cada nucle-
ossomo. Níveis adicionais de empacotamento levam a uma forma
16.2 Diversas proteínas atuam juntas na replicação e no mais condensada da cromatina, observada nos cromossomos me-
reparo do DNA (p. 311 – 319) tafásicos. Nas células em interfase, a maior parte da cromatina está
 O princípio básico: pareamento de bases com fita molde O experi- menos compactada (eucromatina), mas algumas regiões permane-
mento de Meselson-Stahl mostrou que a replicação é semicon- cem altamente condensadas (heterocromatina). Modificações nas
servativa: a molécula parental se desenrola, e cada fita serve de histonas podem influenciar o estado de condensação da cromatina.
molde para a síntese de uma nova fita de acordo com as regras
de pareamento de bases.
 A replicação do DNA: uma visão mais de perto TESTE SEU CONHECIMENTO

DNA-pol III sintetiza a fita 3’ 1. No seu trabalho com bactérias causadoras da pneumonia e com
líder continuamente 5’ camundongos, Griffith descobriu que
DNA a. o envelope proteico das células patogênicas era capaz de
parental DNA-pol III inicia a síntese na transformar as células não patogênicas.
extremidade 3’ do oligonucleotídeo
5’ iniciador e continua no sentido 5’ → 3’ b. as células patogênicas mortas por calor causavam pneumonia.
3’ A fita retardada é sintetizada
5’ c. alguma substância das células patogênicas era transferida
em pequenos fragmentos de
Okazaki, conectados mais para as células não patogênicas, tornando-as patogênicas.
tarde pela DNA-ligase d. o envelope de polissacarídeo da bactéria causa pneumonia.
A primase sintetiza um
pequeno oligonucleotídeo 3’ e. os bacteriófagos injetam DNA nas bactérias.
iniciador de RNA 5’