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Tpicos
1. DNA 2. PCR
Alvos Denatura !o Primers Anelamento
Ciclos Re"uerimentos
DNA
DNA # um $ci%o nucl#ico composto %e %uas ca%eias antiparalelas complementares. &s nucleot'%eos s!o compostos %e um (rupo )os)ato* uma pentose e uma +ase nitro(ena%a
DNA
, Ac-car %o DNA
.ci%o Deso/irri+onucleico
, A -car %o RNA
.ci%o Ri+onucleico
DNA
& DNA tem "uatro +ases nitro(ena%as. , Duas s!o chama%as purinas
A%enina ( A )* 0uanina ( 0 )
DNA
1ssas "uatro +ases s!o li(a%as em um pa%r!o repetitivo por pontes %e hi%ro(2nio entre as +ases nitro(ena%as A li(a !o %e %uas ca%eias complementares # chama%a %e 345R4D46A78&.
DNA
9ma purina sempre se li(a a uma pirimi%ina para manter a estrutura %o DNA. A%enina ( A ) se li(a a timina ( T )* atrav#s %e %uas pontes %e hi%ro(2nio. 0uanina ( 0 ) se li(a a citosina ( C )* atrav#s %e tr2s pontes %e hi%ro(2nio.
DNA
1/amplo %e pa%r!o %e li(a !o. , Pa%r!o prim$rio CC0AAT000AT0C 00CTTACCCTAC0 , Pa%r!o complementar
DNA :olecule
A%enina Timina 0uanina Citosina
PCR
PCR (Rea !o em Ca%eia %a Polimerase) # uma t#cnica "ue ampli)ica uma se"u2ncia espec')ica %e DNA* como o+;etivo %e torn$< la a+un%ante e %ispon'vel para %iversas t#cnicas %e +iolo(ia molecular.
PCR Tar(ets
& n-mero %e +ases nos alvos po%e variar. TTAA00CTC0A . . . . AATT00TTAA & . . . . Representa o meio %a se"u2ncia %e DNA* e n!o h$ pro+lemas em n!o conhec2< la para po%er ampli)ic$<la.
PCR Primers
&s primers s!o se"u2ncias %e 1@ a BC nucleot'%eos* )ita -nica* "ue s!o usa%as para )lan"uearem as e/tremi%a%es %a re(i!o a ser ampli)ica%a. :arcam o in'cio e o )im %a seu"2ncia<alvo.
PCR Primers
9m primer para ca%a e/tremi%a%e %a sua se"u2ncia alvo %eve ser %esenha%o* para "ue as )itas se;am copia%as simultaneamente em am+as as %ire >es.
PCR Primers
TTAAC00CCTTAA . . . TTTAAACC00TT AATT0CC00AATT . . . . . . . . . .D e E. . . . . . . . . . AAATTT00CCAA TTAAC00CCTTAA . . . TTTAAACC00TT
PCR Primers
&= primers s!o coloca%os em e/cesso na rea !o %e PCR* para "ue eles se li(uem ao DNA alvo* ao inv#s %as %uas )itas se li(arem %e novo uma a outra.
PCR Ciclos
PCR Ciclos
PCR Ciclos
PCR Ciclos
PCR Cycles
PCR Ciclos
, Desnatura !oJ ?KA< ?@AC , AnelamentoJ @@A< L@AC , 1/tens!oJ M2A , N-mero %e ciclosJ 2@<KC
PCR Ciclos
PCR Ciclos
PCR Ciclos
N-mero %e cpias %a Re(i!o alvo %e DNA A N 2n n N n-mero %e ciclos
PCR Re"uerimentos
, Cloreto %e :a(n#sioJ .@<2.@m: , Tamp!oJ p3 O.B<O.O , %NTPsJ 2C<2CCP: , PrimersJ C.1<C.@P: , DNA PolimeraseJ 1<2.@ units , DNA AlvoJ 1 P(
Centrifugar, extrair e descartar o plasma, com o cuidado de No remover a faixa de clulas brancas.
A coluna ser, colocada em um novo tubo, aonde ser, !avada mais duas ve#es com tampo, para retirar +uais+uer )olculas +ue no este2am ligadas fortemente a coluna.
5i+lio(ra)ia
, Al+erts* 5roGn*Rohnson* QeGis* Ra))* Ro+erts* Salter. 9se o) PCR in Torensic =cience. 1??O. &nline. 4nternet. 1O Ran. 2CC1. Availa+le httpJUUGGG.accesse/cellence.or(UA5U00U )orensciVPCR.htm.l , 5roGn* Rohn C. Shat The 3ecH 4s PCRW 1??@. &nline. 4nternet. 1O Ran. 2CC1. Availa+le httpJUU)alcon.cc.uHans.e%uUX;+roGnUpcr.html , Photo(raphsJ Courtesy o) 9:C clinical la+ an% Tom Si((ers.
5i+lio(ra)ia
, Ronal% 3. 3olton* Ph.D.J
:olecular Dia(nostics in the Clinical Qa+oratory :olecular 5iolo(y in the Clinical Qa+oratory :olecular Patholo(yJ 5asic :etho%olo(ies an% Clinical Applications 1/pan%in( applications o) PCR* +y Peter 0Gynne an% 0uy Pa(e