Instrumentao e ajustes do

equipamento de Ressonncia
Magntica Magntica
Nuclear
Marilena Meira
RMN
Espectroscopia de absoro.
Campo magntico.
Radiao eletromagntica:
Radiofreqncia. Radiofreqncia.
Caractersticas estruturais da
amostra.
Determinados ncleos.
Por que determinados ncleos?
B
0
Absoro de RF por um
ncleo
Nem todos os ncleos absorvem RF.

12
C,
16
O,
32
S, no do espectros de RMN.

13
C,
1
H,
15
N,
19
F absorvem RF.
13
C,
1
H,
15
N,
19
F absorvem RF.
O que faz um ncleo absorver radiao de
RF?
Condio para absoro de RF
por um ncleo
Um ncleo absorve radiao de RF se
tem nmero de spin diferente de 0.
O que nmero de spin? O que nmero de spin?
p
Nmero de spin: nmero quntico do
momento angular
I (I + 1). h
2
= momento angular P
P =
p
Dipolo magntico ao
longo do eixo.
= . P
= momento magntico
O nmero de spin pode assumir os valores:
0, 1/2, 1, 3/2, 2, 5/2, 3, 7/2, 4, 9/2, 5, 11/2, 6.
Nmero de spin
Ncleos que possuem spin = 0 no giram em
torno do eixo. No do espectro RMN.
Ncleos com spin = : distribuio de carga
esfrica e uniforme. esfrica e uniforme.
Ncleos com spin igual ou maior que 1:
distribuio de carga no esfrica:
Ncleos quadrupolares
Nveis de energia em um campo
magntico
Nmero de spin: nmero de orientaes em
um campo magntico (2I + 1).
Para spin = :
Quando o campo magntico
est desligado ( B
0
= 0 )
B
+1/2
Campo magntico ligado:


B
0
Momentos magnticos
orientados
aleatoriamente.
Momentos magnticos orientados
sob a ao de Bo.
-1/2

Pequeno excesso de populao no nvel com
menor energia (mais estvel)
Diferena de populao entre os
nveis para um ncleo de spin =
E
Equao fundamental da RMN
E = .h.B
0
2
E diretamente
proporcional a B
0
2
E = .h.B
0
2

L
Freqncia de
Precesso ou
freqncia de Larmor
B
0
Movimento de precesso
Momento magntico total
Magnetizao resultante para um conjunto de ncleos.
M0 na direo Z (direo do campo B0)
Como um ncleo excitado ao nvel de maior energia?
Aplicao de RF
Aplicao de RF: B1 perpendicular ao campo B0.
Ressonncia:
1
=
L
O pulso de RF exerce um torque sobre M na direo do plano
xy.
Induo de Transio
Transio entre os nveis de energia:
Aplicao de RF adequada
Ou seja se
1
=
L
Ressonncia
1 L
Ressonncia
RF
Condio de Ressonncia
Para um ncleo de
spin isolado:
= = . B
E = h.
E = .h.B
0
2

1
=
L
= . B
0
2
2
h. = .h.B
0
2
= .B
0
2
Radiofreqncia
Introduo da RF:
Ondas contnuas
Pulsos de radiofreqncia. Pulsos de radiofreqncia.
2 tipos de espectrmetros de RMN
Espectrmetros de RMN
Espectrmetro de onda contnua CW
Espectrmetro pulsado.
Espectrmetro de onda
contnua
Ims permanentes ou eletroms.
Lenta varredura da faixa de freqncia.
Registro da energia absorvida em funo da
freqncia.
Baixa sensibilidade, demora da anlise.
RMN
1
H
Amostras concentradas.
Espectrmetro pulsado
Supercondutor.
Pulso curto e potente de RF.
Excitao simultnea de todos os ncleos.
Retorno ao estado de equilbrio: liberam RF.
Um detector coleta a energia emitida e
produz o FID (Decaimento livre de induo)
O que o FID?
FID (Free Induction Decay)
Soma da radiao de todos os ncleos
durante o tempo de emisso.
Escala de intensidade x tempo. Escala de intensidade x tempo.
Transformada de Fourier este sinal
convertido para intensidade x freqncia.
FID (Free Induction Decay)
Aps um pulso de
90 a magnetizao
rodada para o
plano xy. plano xy.
Aps desligado o
pulso de RF:
magnetizao decai
exponencialmente
(FID)
Deteco do sinal
A irradiao dos spins com
RF:
Aumenta a populao de
spins anti-paralelos.
Magnetizao componente
transversal e esta medida
por bobinas transversais.
Deteco do sinal
O retorno dos spins ao equilbrio.
Na defasagem dos spins ocorre um decaimento do
sinal que corresponde ao FID.
Resumo da tcnica pulsada
1. Alinhamento dos spins no campo magntico:
com ou contra o campo. Nvel de menor energia:
ligeiro excesso de populao.
2. Por aplicao de um pulso forte de RF todos os 2. Por aplicao de um pulso forte de RF todos os
ncleos se excitam simultaneamente.
3. Quando os ncleos retornam ao equilbrio
emitem radiao de RF que pode ser detectada
(FID)
4. Transformada de Fourrier: FID no espectro
convencional.
HISTRICO
1946: F. Bloch e E. Purcell observaram o
fenmeno RMN pela primeira vez (Prmio
Nobel de Fsica de 1952).
Dcada de 50: Importncia em anlises Dcada de 50: Importncia em anlises
qumicas.
Sinal de RMN refletia o ambiente qumico.
Restrita ao
1
H.
Baixa sensibilidade da tcnica.
Como o problema foi superado?
HISTRICO
1966: Ernst e Andrew: Tcnica de pulsos e
transformada de Fourier (TF).
Aumento da sensibilidade da tcnica.
Espectros acumulados.
HISTRICO
1991: R. Ernst Prmio Nobel de Qumica de
desenvolvimento da RMN multidimensional.
2002: Kurt Wthrich determinao de
estruturas tridimensionais de estruturas tridimensionais de
macromolculas biolgicas em soluo por
RMN. Prmio Nobel de Qumica.
Varian 60 MHz CW (Continuous
Wave)
Os primeiros equipamentos utilizavam ims permanentes e a
energia de radiofreqncia era introduzida por ondas
contnuas (CW). Ncleo de H.
Modernos espectrmetros
Varian 900 MHz
BRUKER 1 GHz
Oxford 900 Mhz
Transformada de Fourier: Maior sensibilidade, menor nvel de
rudo, menor tempo de anlise, menor massa de amostra.
Magnetos supercondutores: maior campo, mais homogneo,
maior resoluo, maior sensibilidade.
Tcnicas multidimensionais: maior resoluo, maior facilidade
na interpretao de espectros.
reas de aplicao da RMN
A tcnica RMN vem
evoluindo e ampliando
sua aplicao em vrias sua aplicao em vrias
reas do conhecimento.
Componentes bsicos de um
espectrmetro de RMN pulsado
Magneto
Probe (Sonda)
Programador de Pulsos Programador de Pulsos
Sintetizador de RF
Transmissor de RF
Receptor de RF
Amplificador
Digitalizador
Computador
Diagrama de um
espectrmetro de RMN
Espectrmetro de RMN de 9,4 tesla, 400 MHz
Magneto
Funo: produzir campo
magntico B
0
forte,
homogneo e estvel.
Gerado pela corrente Gerado pela corrente
eltrica circulando por um
supercondutor refrigerado
temperatura de 4K por meio
de hlio lquido.
Por que buscar campos magnticos mais intensos?
Efeito do campo magntico
Maior campo.
Maior resoluo
Maior sensibilidade
Campos magnticos Mais
intensos
Melhor RESOLUO devido ao maior
afastamento dos sinais.
Maior SENSIBILIDADE, diminuindo ainda mais a Maior SENSIBILIDADE, diminuindo ainda mais a
massa usada da amostra.espectro.
Magneto
Magneto
1. Entrada de Nitrognio:
completa 1 vez/semana.
2. Entrada de hlio:
completa a cada 2-8
meses. meses.
3. Vcuo
4. Supercondutor imerso em
hlio lquido
5. Levantador de amostra e
spinner.
6. Tubo de amostra.
7. Shim
8. Cabea da sonda
Objetos afetados pelo campo
magntico
O poderoso campo
magntico afeta cartes
magnticos (cartes de
crdito, CD, disquetes),
implantes metlicos (pinos implantes metlicos (pinos
ortopdicos, marcapassos,
etc.
Manter objetos metlicos,
relgios e celulares
distantes.
No mnimo 3 m: 500MHz
No mnimo 1,8 m: 300 MHz
Quench
Perda da
supercondutividade do
magneto.
A sala deve ser
completamente completamente
evacuada ao se observar
sada dos gases
criognicos. Pode haver
asfixia.
Em condies normais
de manuteno isto no
ocorre.
Sonda ou probe
Aceita a amostra
Envia sinais de RF para
a amostra.
Detecta sinais de RF
emitidos pela amostra.
Conexo a no mnimo 3 Conexo a no mnimo 3
canais: freqncia do
2
H
lock, freqncia
1
H e
freqncia de X (
13
C,
15
N).
Gira a amostra ao
longo do eixo z
Controla temperatura.
Sonda ou probe
Amostra
Rotao
Amostra
Gabinete do espectrmetro
No mnimo 3 canais de RF.
Sintetizador: seleciona a
freqncia.
Transmissor: transmite RF para a
sonda ou probel. sonda ou probel.
Amplificador: amplifica o sinal.
Conversor ADC: Converte sinal
analgico em digital e transmite
ao computador.
Controlador do lock: regula a
freqncia/campo.
Gabinete do espectrmetro
Computador
Comanda o
equipamento,
controla a controla a
programao de
pulsos, a aquisio
de dados, capta e
processa os sinais
de RMN.
Preparao da amostra
Escolha do solvente e da
quantidade de solvente. Pouco
solvente torna difcil o lock e
shimming.
Escolha da massa de amostra: Escolha da massa de amostra:
RMN
1
H: 1 a 40 mg (maiores
concentraes, sinais alargados)
RMN
13
C e 2D: Quanto mais
melhor.
100 a 300 mg bom espectro com
nt = 128
Tubo de RMN e porta-amostra
Varian software: VNMR
Botes de comando e linha de comando
Dg:
Comandos iniciais
e [enter] ejeta a amostra
i [enter] insere a amostra
jexpx escolhe a experincia jexpx escolhe a experincia
[Main Menu]
[Setup]
[
1
H, CDCl
3
] ou [
13
C, CDCl
3
]
[Nucleus, solvent] Exemplo: [
1
H] [D
2
O]
Ajustes do equipamento:
Lock:
Funo: manter o campo magntico em
um valor constante durante o
experimento. experimento.
Monitora a freqncia do deutrio do
solvente e ajusta o campo mantendo
esta freqncia constante.
Resultado: linhas mais estreitas.
Ajustes do equipamento:
Lock:
Lock power: controla a potncia do lock
Lock gain controla a amplificao do
sinal recebido da amostra
Lock
Digite ou clique Acqi.
Abre-se a janela a seguir.
Clique em lock. Clique em lock.
Lock
Clique spin on.
Clique lock off.
Lockpower no
mximo.
Lock on
Lockpower ajustar
para 24 ou 28.
Lockgain ajustar para
mximo.
Lockgain no
mximo.
Clicar Z0 at o sinal
estourar.
Lockgain ajustar para
10 ou 20.
Ajustes do equipamento:
Shimming
Funo: corrigir diferenas do campo
magntico em diferentes pontos da amostra.
timo shimming = alta resoluo timo shimming = alta resoluo
timo ajuste do shimming: tubos de boa
qualidade, nvel de amostra adequado e sem
partculas.
Shimming deve ser feito a cada troca de
amostra e a cada troca de sonda ou probe.
Shimming
Shimming
Z1C ajuste grosso
Z2C ajuste grosso
Z1 ajuste fino
Z2 ajuste fino
[Close] nt=1 ga. [Close] nt=1 ga.
Observa um sinal. Se
no estiver bom, ajusta:
Z3
Z1
Z4
Z2
Uso do auto-shimming
Espectrmetro de alto
campo so mais difceis
de ajustar o shim.
Aps shimming manual
use o autoshimming: use o autoshimming:
Adjuste the lock phase
Shim Z1C and Z2C,
Adjuste the lock phase
e ento Z3.
Shimming
Bons ajustes de shimming
Necessita ajustar Z2
Ajustar Z1
Shimming
Obteno de espectro de RMN
1
H
Aps o lock e shimming.
Digite: nt=16 ga [enter]
Digite: aph [enter]
Para imprimir, digite: pl pscale page
Obteno de espectro de RMN
13
C
Aps selecionar ncleo, solvente e ajustar lock e
shimming:
Digite: time (60*X) [enter] onde X o nmero de
horas.
d1= 2 (para amostras com carbonos quaternrios)
ga [enter] ga [enter]
Digite; wft [enter] (para realizar transformada de
Fourier a qualquer tempo)
Para imprimir digite: pl pscale page
Obteno de espectro de DEPT
Faa um espectro de carbono com nt =16 para
ajustar o pico do solvente.
Mova o FID para outro experimento: mf (x,y)
Transforme o FID no exp y: digite jexpy [enter],
wft [enter]
Digite: dept
Digite: time (60*X) [enter]
ga [enter]
Processando espectro DEPT
Digite: ds(1) para mostrar o 1 espectro.
Digite: dssa para mostrar os dois espectros.
pl(all) pscale ppa page
Para imprimir, digite: