COLORAES USUAIS EM HEMATOLOGIA

COLORAES PANTICAS OU COLORAES SEGUNDO ROMANOWSKY

Antonio Altair M. Oliveira Domenico H.G.P. Barbieri Lcia Helena M. Bruneri Primavera Borelli

MTODOS DE COLORAO
1. PRINCPIO Romanowsky idealizou um mtodo em que uma soluo de corantes poderia corar diferentes estruturas. Misturas dos corantes eosina e azul de metileno so preparadas segundo proposio de vrios autores: Leishman, May-Grunwald, Giemsa, Wright e outros (que do os respectivos nomes ao corantes, segundo Leishman, Giemsa, etc....). Estes corantes so dissolvidos em lcool (em geral metanol). Na soluo envelhecida, o azul de metileno se oxida em gradaes diferentes, originando diversos azures de metileno. Teremos ento uma soluo alcolica de um complexo eosinato de azul e azures de metileno. 2. FASES DA COLORAO Fixao: a preparao a ser corada dever ser previamente fixada. O fixador rotineiro mais usado em hematologia o metanol, que deve ser aplicado sobre a lmina por 01 a 03 minutos. O corante, preparado em soluo alcolica, quando aplicado sobre a lmina (nesse perodo de tempo) realiza esta etapa que a de fixao. Colorao: adicionando-se gua de colorao (gua tamponada, pH=7,0 ou gua destilada, recentemente fervida) sobre o corante, ionizam-se os sais contidos na soluo. Lavagem: aps a colorao, as lminas so lavadas sob jato de gua corrente e em seguida secas ao ar. 3. NOMENCLATURA USUAL Quando uma estrutura se cora, revelando a mesma cor do corante, diz-se que uma colorao ortocromtica; quando a estrutura toma uma cor diferente daquela do corante, diz-se que uma colorao metacromtica; As estruturas celulares que tem afinidade pelo azul de metileno so chamadas basfilas, corado-se em azul; as que tem afinidade pelos azures so chamadas azurfilas, corando-se em prpura (metacromasia); as que tem afinidade pela eosina so chamadas acidfilas, corando-se em rosa e as que tem afinidade pela mistura complexa so chamadas neutrfilas, corando-se em salmo. 4. METODOS Mtodo de Leishman ou May-Grunwald-Giemsa, mod. por Rosenfeld (*) - Fixao: sobre a extenso de sangue, dessecada ao ar, colocar um nmero x de gotas (por ex. 30 gotas) do Corante de Leishman ou de Rosenfeld e aguardar alguns minutos (tempo padronizado). - Colorao: sem desprezar o corante, acrescentar um igual nmero de gotas de

gua de colorao, homogeneizar e aguardar alguns minutos (tempo padronizado). Lavar sob jato de gua corrente. Secar ao ar. Mtodo de May- Grunwald-Giemsa - Fixao: sobre a lmina, colocar um nmero de gotas do Corante de MayGrunwald e aguardar alguns minutos (tempo padronizado). - Colorao (1): acrescentar um igual nmero de gotas de gua de colorao, homogeneizar e aguardar alguns minutos (tempo padronizado). - Colorao (2): desprezar o corante anteriormente colocado sobre a lmina e, sem lav-la,acrescentar uma soluo do Corante de Giemsa, recentemente preparado (3 gotas de corante para cada 2 ml de gua de colorao). Aguardar de 20 a 30 minutos. Lavar sob jato de gua corrente. Secar ao ar. OBS: 1. A fixao poder ser realizada somente com metanol durante 1 a 3 minutos. 2. Para casos em que se necessite refinamento tcnico, aps a fixao em metanol, a lmina poder ser corada, colocando-a novamente sobre um vidro de relgio, no qual existe a mistura corante mais gua de colorao. O contacto do sangue estendido com a mistura far-se- por capilaridade. 3. gua de colorao (gua tamporada pH = 7,0) KH2PO4................................................. 1g Na2HPO4. 2H2O.................................... 3g H2O destilada q.s.p................................ 1000 ml. (*) Corante de May-Grunwald-Giemsa , mod. por Rosenfeld: Giemsa................................................... 0,97 g May-Grunwald....................................... 0,53 g Mentanol (p.a).qsp....................................... 1000ml Homogeneizar. Armazenar em frasco mbar. Filtrar antes do uso.