Cap5 ADITIVOS

CAPTULO
ADITIVOS
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Mtodos Fsico-Qumicos para Anlise de Alimentos - 4 Edio 1 Edio Digital
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V
Captulo V - Aditivos
ADITIVOS
om o desenvolvimento tecnolgico, grande e variado o nmero de substncias qumicas empregadas no decorrer de todo o processo de produo de alimentos. Dentre estas substncias, destacam-se os aditivos, que podem apresentar grandes vantagens para melhorar os alimentos do ponto de vista tecnolgico, desde que seu uso seja seguro. Para isto, necessrio verificar se obedecem s normas de identidade e pureza estabelecidas pela FAO/OMS ou pelo Food Chemicals Codex, exigidos pela legislao brasileira, sendo portanto este controle feito antes da adio ao alimento. Toda a legislao a respeito de aditivos positiva e dinmica, isto , so agrupadas em listas as substncias cujo uso permitido, os alimentos em que podem ser usadas e os limites mximos no produto final, sendo estas listas revisadas e acrescidas com novas substncias sempre que necessrio.
A partir de 1997, houve muitas alteraes na legislao de aditivos alimentares, a fim de compatibilizar a legislao nacional com o estabelecido nas resolues harmonizadas no Mercosul, a comear com a Portaria no 540 da SVS/MS de 27/10/1997, que aprova o regulamento tcnico de aditivos alimentares e os define como qualquer ingrediente adicionado intencionalmente aos alimentos, sem propsito de nutrir, com o objetivo de modificar as caractersticas fsicas, qumicas, biolgicas ou sensoriais durante a fabricao, processamento, preparao, tratamento, embalagem, acondicionamento, armazenagem, transporte ou manipulao de um alimento. Ao agregar-se, poder resultar que o prprio aditivo ou seus derivados se convertam em um componente de tal alimento. Esta definio no inclui os contaminantes ou substncias nutritivas que sejam incorporadas ao alimento para manter ou melhorar suas propriedades nutricionais. Esta Portaria tambm altera a classificao dos aditivos alimentares, aumentando de 11 para 23 classes funcionais.
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A seguir, so comentadas algumas classes de aditivos, cujas definies foram extradas da Portaria n 540/97. Acidulantes/Reguladores de acidez Substncias que aumentam a acidez ou conferem um sabor cido aos alimentos, dentre estas so de maior emprego os cidos orgnicos, tais como: o cido ctrico, tartrico, lctico, fumrico e mlico; alm do cido fosfrico, que inorgnico. Estes cidos tambm podem ser utilizados como reguladores de acidez, substncias que alteram ou controlam a acidez ou a alcalinidade dos alimentos. Antioxidantes Substncias que retardam o aparecimento de alteraes oxidativas nos alimentos. Geralmente so utilizados os galatos (propila, octila ou duodecila), cido ascrbico e seus ismeros, butil-hidroxianisol (BHA) e butil-hidroxitolueno (BHT), isoladamente ou em mistura, pois apresentam melhores resultados quando juntos (efeito sinrgico). Aromatizantes Substncias o u mistura de substncias com propriedades aromticas e/ou spidas, capazes de conferir ou reforar o aroma e/ou sabor dos alimentos. Segundo a Resoluo RDC n 2 da ANVISA, de 15 de janeiro de 2007, os aromatizantes apresentam duas classificaes: aromas naturais e sintticos. As misturas de aromas, os aromas de reao ou de transformao e os de fumaa podero ser considerados naturais ou sintticos, de acordo com a natureza de suas matrias-primas ou processos de elaborao. Eles podem ser comercializados na forma slida (ps, granulados ou tabletes), lquida (solues ou emulses) ou pastosa. No caso dos aromas em p, alm dos ensaios descritos neste captulo, determinamse os resduos mineral fixo e o insolvel em HCl (1+9), para se verificar a presena do dixido de silcio (anti-umectante). Conservadores Antigamente, os alimentos eram conservados com cidos, sal, acar e fumaa de madeira. Nos dias de hoje, grande o nmero de conservadores qumicos empregados em alimentos. Tais aditivos impedem ou retardam as alteraes dos alimentos provocadas por microorganismos ou enzimas. Entre os de maior emprego esto: dixido de enxofre, cido benzico, cido srbico, cido propinico, na forma livre, ou de sais de sdio ou potssio e nitritos e nitratos de sdio e de potssio.
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Corantes Substncias que conferem, intensificam ou restauram a cor de um alimento. Os corantes artificiais so substncias orgnicas de sntese cuja estrutura molecular difere dos corantes encontrados na natureza. So produtos cuja capacidade de conferir grande intensidade de cor e estabilidade supera a dos corantes naturais. Em 1999, foram introduzidos na legislao brasileira os seguintes corantes artificiais: azul patente, verde slido e azorrubina, que passam a fazer parte deste captulo. Apesar das dificuldades encontradas na aplicao dos corantes naturais nos alimentos, devido ao seu baixo poder tintorial, alto custo e instabilidade, atualmente seu emprego vem crescendo de forma significativa no ramo alimentcio, pela preocupao dos consumidores com o uso de substncias artificiais em alimentos. Edulcorantes Substncias diferentes dos acares que conferem sabor doce aos alimentos. Seu emprego justifica-se nos produtos destinados a consumidores que necessitam de restrio calrica em suas dietas, bem como para aqueles portadores de diabetes. Atualmente, a tcnica mais utilizada para separao, identificao e quantificao dos edulcorantes a cromatografia lquida de alta eficincia. Os edulcorantes mais empregados hoje em dia so: sacarina, ciclamato, aspartame, acesulfame-K e esteviosdio. Gomas: so polissacardios de alto peso molecular e, desde que atendam aos padres de identidade e pureza exigidos para uso em alimentos, so consideradas GRAS pelo FDA. Devido sua afinidade pela gua, desempenham papel importante na maioria dos alimentos, sendo de amplo uso na indstria, como espessantes, geleificantes, estabilizantes e emulsificantes. Espessantes Substncias que aumentam a viscosidade dos alimentos. Eles so usados para controlar a consistncia de alimentos lquidos e semilquidos. Geleificantes Substncias que conferem textura pela formao de um gel.
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Estabilizantes Substncias que tornam possvel a manuteno de uma disperso uniforme de duas ou mais substncias imiscveis em um alimento. Emulsificantes Substncias que propiciam a formao ou manuteno de uma mistura uniforme de duas ou mais fases imiscveis no alimento. Estes podem ser naturais ou sintticos. Neste captulo, so destacados alguns acidulantes, reguladores de acidez, antioxidantes, aromatizantes, conservadores, corantes naturais e artificiais, edulcorantes, espessantes, geleificantes, estabilizantes, emulsionantes; alm dos bromatos, cujo uso no permitido na legislao brasileira, da determinao de teobromina e cafena em produtos a base de cacau e dos contaminantes arsnio, fluoreto e benzo(a)pireno, um hidrocarboneto policclico aromtico (HPA), formado principalmente em processos de combusto incompleta de matrias orgnicas, que se encontra na natureza como contaminante de solo, ar, gua e alimentos. Como atualmente so permitidos, no Brasil, mais de 300 aditivos, descrita, a seguir, a anlise apenas dos aditivos, puros ou presentes em uma formulao, mais utilizados nos alimentos. Os mtodos podem sofrer algumas alteraes em funo da formulao do produto. livro. A determinao dos aditivos nos alimentos tratada nos respectivos captulos deste
058/IV Acidulantes Identificao de cido ctrico, lctico e tartrico por cromatografia em papel. Os cidos orgnicos podem ser identificados por cromatografia em papel. Na anlise dos cidos orgnicos, este mtodo permite identificar, simultaneamente, a presena dos cidos ctrico, tartrico e lctico em amostras de aditivos alimentares. Material Balana analtica, papel Whatman n 1 (20 x 20) cm, balo volumtrico de 100 mL, bquer de 100 mL, cuba cromatogrfica com tampa, frasco Erlenmeyer de 300 mL, provetas de 50 e 100 mL e seringas de 5 L.
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Reagentes Hidrxido de amnio lcool Azul de timol cido clordrico Solues-padro Pese 1 g de cido ctrico, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Repita o mesmo procedimento para os cidos tartrico e lctico. Solvente para a fase mvel com revelador Misture 35 mL de lcool, 13 mL de gua e 2 mL de hidrxido de amnio e adicione 50 mg de azul de timol. Se necessrio, prepare um volume maior mantendo as mesmas propores. Guarde em frasco de vidro com tampa. Procedimento Em um bquer de 100 mL, dissolva a amostra com pouca gua. Aplique, em pontos eqidistantes e a 2 cm da borda inferior no papel de cromatografia, 5 L da soluo-teste e 5 L de cada uma das solues-padro. Desenvolva o cromatograma, em cuba saturada com a fase mvel contendo revelador, at a frente do solvente atingir dois centmetros antes da borda superior do papel. As manchas amarelas sob o fundo azul do papel indicam a presena dos cidos. Colocando o papel em atmosfera de vapores de cido clordrico, o fundo azul do papel torna-se vermelho. Marque, imediatamente, o contorno das manchas com lpis. A identificao deve ser feita por comparao dos Rf das manchas obtidas com os das solues-padro. Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 78-79. 059/IV Acidulantes Identificao de cido ctrico Este ensaio permite a identificao do cido ctrico puro e baseia-se numa reao colorida com piridina e anidrido actico. Material Bqueres de 5 e 25 mL, pipetas graduadas de 1, 5 e 20 mL e basto de vidro.
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Reagentes Piridina Anidrido actico Procedimento Dissolva alguns mg de cido ctrico em 1 mL de gua, transfira para um bquer contendo 15 mL de piridina e agite. Acrescente 5 mL de anidrido actico e agite novamente. A soluo deve ficar avermelhada. Referncia bibliogrfica COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX.Food Chemicals Codex. 4. ed. Washington D. C.: National Academic Press, 1996. p. 753. 060/IV Acidulantes Quantificao de cido ctrico Material Balana analtica, frascos Erlenmeyer de 125 mL, proveta graduada de 50 mL e bureta de 50 mL. Reagentes Soluo aquosa de hidrxido de sdio 1 M Soluo de fenolftalena 1% m/v Pese 1 g de fenolftalena, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com lcool. Procedimento Pese, com preciso, cerca de 3 g da amostra e dissolva em 40 mL de gua. Adicione algumas gotas de soluo de fenolftalena e titule com NaOH 1 M. Clculo Cada mL de NaOH 1M equivalente a 64,04 mg de C6H8O7. Referncia bibliogrfica COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chemicals Codex. 4. ed. Washington D. C.: National Academic Press, 1996. p. 102 e 753.
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061/IV Antioxidantes Titulao de cido ascrbico e ismeros com soluo de iodo O cido ascrbico pode ser adicionado aos alimentos com a funo de antioxidante ou melhorador de farinha. Tambm empregado nos sais de cura para reduzir a possibilidade de formao de N-nitrosaminas, pela ao bloqueadora na reao de nitrosao de nitrito. Este mtodo aplicado para misturas de aditivos, desde que no contenham nitrito ou outras substncias redutoras, pois reagem com o iodo.
cido ascrbico Material
cido dehidroascrbico
Balana analtica, bquer de 100 mL, balo volumtrico de 100 mL, proveta de 25 mL, bureta de 25 mL e frasco Erlenmeyer de 250 mL. Reagentes Soluo de cido sulfrico M Soluo de iodo 0,05 M Soluo de amido a 1% m/v Procedimento Pese uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente 0,2 g de cido ascrbico e dissolva em uma soluo de 100 mL de gua, recentemente fervida e resfriada, e adicione 25 mL de cido sulfrico M. Titule a soluo imediatamente com iodo 0,05 M, adicionando amido a 1% prximo ao ponto final da titulao.
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Clculo
V = volume de I2 0,1 M gasto na titulao f = fator da soluo de I2 0,1 M P = massa da amostra em g Nota: cada mL de iodo 0,1 M equivalente a 8,806 mg de cido ascrbico ou cido eritrbico (C6H8O6), 9,905 mg de ascorbato de sdio (C6H7NaO6) e 10,81 mg de eritorbato de sdio monohidratado (C6H7NaO6.H2O). Referncia bibliogrfica COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chemicals Codex. 4. ed. Washington, D.C.: National Academy Press, 1996. p. 33,34,134,354 e 362. 062/IV Antioxidantes Determinao de cido ascrbico e ismeros pelo mtodo de Tillmans Este mtodo, aplicado para misturas de aditivos que apresentem baixa concentrao de cido ascrbico e no contenham nitrito em sua formulao, fundamenta-se na reduo de 2,6-diclorofenol indofenol por uma soluo de cido ascrbico.
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Procedimento Siga a determinao conforme mtodo 365/IV. 063/IV Antioxidantes Titulao de cido ascrbico e ismeros com soluo de iodo na presena de polisorbato 80 O polisorbato 80, componente comum nos produtos para panificao, interfere na determinao do teor de cido ascrbico pelo mtodo de iodimetria. Assim, quando ambos estiverem presentes, necessrio fazer a extrao do polisorbato antes da determinao do cido ascrbico. Pode-se tambm dos-lo diretamente por tcnica polarogrfica, sem necessidade de extrao. Material Balana analtica, balana semi-analtica, bquer de 100 mL, provetas de 25 e 50 mL, funil de separao tipo pra de 250 mL, funil e papel de filtro, bureta de 10 mL e frasco Erlenmeyer de 250 mL. Reagentes Soluo aquosa de iodo 0,05 M Cloreto de sdio Butanol Soluo aquosa de HCl 3 M saturada com NaCl Adicione NaCl slido soluo HCl 3 M at haver precipitao, ou, alternativamente, dilua 1:1 uma soluo de HCl 6 M com soluo aquosa saturada de NaCl. Procedimento Pese, com preciso, uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente 50 mg de cido ascrbico. Adicione 2 g de cloreto de sdio e dissolva a mistura em 50 mL de gua com agitao. Filtre, se necessrio. Transfira o filtrado para um funil de separao. Adicione ao funil 25 mL de HCl 3 M, saturado com NaCl, e 25 mL de butanol. Agite a mistura por 2 minutos, deixe separar as fases, e recolha a camada aquosa inferior, filtrando-a para o frasco Erlenmeyer. Titule com iodo usando amido a 1% como indicador. Cada mL de iodo 0,05 M equivale a 8,806 mg de cido ascrbico ou de cido eritrbico, 9,905 mg de ascorbato de sdio e 10,81 mg de eritorbato de sdio monohidratado.
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Clculos
V = mL de iodo 0,2 M gasto na titulao f = fator da soluo de iodo 0,2 M P = massa da amostra em g Referncia bibliogrfica DESSOUKY, Y. M.; HUSSEIN, F. T.; ISMAEL S. A. Determination of ascorbic acid in the presence of polysorbate 80 Pharmazie, v.28 (11-12), p. 791-792. 1973. 064/IV Antioxidantes Identificao de cido ascrbico por reduo da soluo de Fehling Este mtodo aplicado para a identificao de cido ascrbico, cido eritrbico, ascorbato de sdio e eritorbato de sdio em amostras puras ou em misturas de aditivos que no apresentem outras substncias redutoras. Material Balana analtica, banho-maria, tubo de ensaio, bquer de 10 mL e balo volumtrico de 50 mL. Reagente Solues tituladas A e B de Fehling (Apndice I) Procedimento Pese uma quantidade de amostra de maneira que a concentrao final de cido ascrbico esteja em torno de 2%. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Filtre se necessrio. Adicione a soluo de Fehling.
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Na presena de cido ascrbico, o tartarato cprico alcalino reduzido lentamente a 25C, porm mais rapidamente sob aquecimento. Referncias bibliogrficas COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chemicals Codex. 4. ed. Washington D. C.: National Academic Press. 1996. p. 34. FARMACOPIA BRASILEIRA, 3. ed. So Paulo: Organizao Andrei Editora S.A., 1977. p. 83. 065/IV Antioxidantes Identificao de cido ascrbico por reduo da soluo de Tillmans Material Balana analtica, balo volumtrico de 100 mL, tubo de ensaio, bquer de 10 mL e pipetas de 1 e 2 mL. Reagente Soluo de Tillmans descrita no mtodo 365/IV. Procedimento Pese uma quantidade de amostra de maneira que a concentrao final de cido ascrbico esteja em torno de 1%. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Filtre se necessrio. Pipete 2 mL desta soluo no tubo de ensaio e adicione 1 mL da soluo de Tillmans, que dever descorar-se imediatamente. Referncias bibliogrficas INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlises de Alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 394-395. ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 15th, Arlington: A.O.A.C., 1990, chapter 45, p. 1058-1059.
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066/IV Antioxidantes Identificao de cido ascrbico pela reao com bicarbonato de sdio e sulfato ferroso Material Balana analtica, bales volumtricos de 100 e 1000 mL, proveta de 100 mL, tubo de ensaio, bqueres de 10 mL e pipetas graduadas de 5 mL. Reagentes cido sulfrico Bicarbonato de sdio Sulfato ferroso Soluo aquosa de cido sulfrico a 10% v/v Procedimento Pese uma quantidade de amostra de maneira que a concentrao final de cido ascrbico esteja em torno de 1%. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Filtre se necessrio. Pipete 4 mL desta soluo em um tubo de ensaio. Adicione 0,1 g de bicarbonato de sdio e cerca de 0,02 g de sulfato ferroso. Agite e deixe repousar. A soluo dever produzir colorao violeta-escura que desaparece aps a adio de 5 mL de cido sulfrico a 10%. Referncias bibliogrficas FARMACOPIA DOS ESTADOS UNIDOS DO BRASIL. 2. ed. So Paulo: Indstria Grfica Siqueira S.A., 1959. p. 45-46. FARMACOPIA BRASILEIRA. 3. ed. So Paulo: Organizao Andrei Editora S.A., 1977. p. 82-83. 067/IV Antioxidantes Determinao de butil-hidroxianisol (BHA) A solubilidade em lcool a 72% de quase todos os antioxidantes mais comumente utilizados, favorece a anlise dos mesmos. Aps a extrao dos antioxidantes, podem ser feitas provas qualitativas envolvendo reaes para a identificao ou cromatografia em camada delgada. O butil-hidroxianisol pode ser identificado em amostras de gorduras ou aditivos formulados contendo este antioxidante aps a extrao com lcool a 72% e posterior confirmao por meio de reao colorimtrica com 2,6-dicloroquinona cloroimida (reagente de Gibbs) e brax. A reao do BHA,
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aps extrao com lcool a 72%, com 2,6-dicloroquinonacloroimida em presena de brax, forma um composto azul cuja concentrao medida porespectrofotometria 620 nm, usando curva-padro.
Material Balana analtica, balana semi-analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bqueres de (25 e 100) mL, basto de vidro, funil de separao tipo pra de 250 mL, provetas graduadas de 25, 50, 100 e 500 mL, bales volumtricos de 100, 200 e 500 mL, pipeta graduada de 2 mL e pipetas volumtricas de (1 a 12) mL. Reagentes ter de petrleo (60-100)C lcool absoluto Brax 2,6-Dicloroquinonacloroimida Padro analtico de 3-BHA ou uma mistura conhecida dos dois ismeros 3-BHA e 2-BHA Soluo de lcool a 72% v/v Adicione 360 mL de lcool em um balo volumtrico de 500 mL e complete o volume com gua. Soluo de brax a 2% m/v Pese 2 g de brax Na2B4O7.10H2O, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Soluo de 2,6-dicloroquinonacloroimida (reagente de Gibbs) Pese 0,01 g de 2,6dicloro-quinonacloroimida (C6H2ONCl3), transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com lcool absoluto. Prepare a soluo no dia do uso. Procedimento Dissolva 10 g da amostra em 50 mL de ter de petrleo e transfira quantitativamente para um funil de separao. Adicione 25 mL de lcool a 72% e agite. Separe a camada alcolica e extraia mais duas vezes com 60 mL de lcool. Rena os extratos alcolicos e complete o volume at 200 mL com lcool a 72%. Adicione a uma
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alquota de 12 mL desta soluo, 2 mL de uma soluo de 2,6-dicloroquinonacloroimida a 0,01% e 2 mL de uma soluo de brax a 2% e agite. Mea a colorao desenvolvida em espectrofotmetro a 620 nm e determine a quantidade de BHA correspondente usando a curva-padro previamente estabelecida. Curva-padro Pese, com preciso, 0,1 g de BHA e dissolva em lcool a 72%. Transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL, completando o volume. Retire 1 mL desta soluo, transfira para outro balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com o mesmo solvente. Tome alquotas de 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7 mL desta ltima soluo em bqueres de 25 mL e adicione, respectivamente, 11, 10, 9, 8, 7, 6 e 5 mL de lcool a 72%, totalizando 12 mL em todos eles. Adicione 2 mL de soluo de 2,6-dicloroquinonacloroimida a 0,01% em lcool absoluto e 2 mL de soluo de brax a 2%. Homogeneze. Mea a colorao desenvolvida em espectrofotmetro a 620 nm usando como branco uma mistura constituda de 12 mL de lcool a 72% e os dois reagentes acima mencionados. Construa a curva-padro. Referncias bibliogrficas INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlises de Alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 85. JOSEPHY, P .D.; VAN DAMME, A. Reaction of Gibbs reagent with para-substituted phenols. Anal. Chem. v. 56, p. 813-814.,1984. MAHON, J.H.; CHAPMAN, R.Q. Butylated Hydroxianisole in lard and shortening. Anal. Chem. v. 23, n.8, p. 1120-1123, 1951. 068/IV Antioxidantes Identificao de butil-hidroxianisol (BHA) Basea-se na reao do BHA com 2,6-dicloroquinonacloroimida em presena de brax, aps extrao com lcool a 72%, para formar um composto azul. Material Balana semi-analtica, bqueres de 25 e 100 mL, balo volumtrico de 100 mL, provetas graduadas de 50 e 100 mL, funil de separao tipo pra de 250 mL e pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes ter de petrleo (60-100)C lcool Brax
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2,6-Dicloroquinonacloroimida lcool a 72% v/v Soluo de brax a 2% m/v Procedimento Dissolva 20 g da amostra em 50 mL de ter de petrleo. Extraia em funil de separao com trs pores de 30 mL de lcool a 72%. Rena os extratos alcolicos em balo volumtrico de 100 mL e complete com lcool a 72%. Adicione 1 mL de soluo de brax a 2% e alguns cristais de 2,6-dicloroquinonacloroimida a 5 mL de extrato alcolico obtido no item anterior. Uma colorao azul indicar a presena de BHA. Referncia bibliogrfica JOSEPHY, P .D.; VAN DAMME, A. Reaction of Gibbs reagent with para-substituted phenols. Anal. Chem. v. 56, p. 813-814, 1984. 069/IV Antioxidantes Determinao de butil hidroxitolueno (BHT) O princpio deste mtodo baseia-se na reao do BHT, aps extrao da amostra, com o-dianisidina e nitrito de sdio e na medida espectrofotomtrica do composto vermelho-alaranjado formado. O BHT melhor extrado por destilao com arraste de vapor e o destilado utilizado na reao colorimtrica. Material Balana analtica, balana semi-analtica, espectrofotmetro UV/VIS, manta aquecedora eltrica, regulador de temperatura, suporte, garra, mufa, tubo de ltex para condensador, basto de vidro, funil de separao tipo pra de 250 mL, provetas graduadas de 50 e 100 mL, condensador tipo reto, com junta esmerilhada 24/40, bales volumtricos de 100 e 250 mL, bqueres de 50, 100 e 250 mL, pipetas graduadas de 2 e 5 mL e pipeta volumtrica de 25 mL. Reagentes Clorofrmio Nitrito de sdio o-Dianisidina (C14H16N2O2) Metanol Carvo cido clordrico 1 M Cloreto de magnsio (MgCl2.6H2O) Padro analtico de BHT
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Soluo-padro de BHT a 0,05% m/v Pese 0,05 g de BHT, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com metanol. Soluo de nitrito de sdio a 0,3% m/v Pese 0,3 g de nitrito de sdio, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Esta soluo estvel, pelo menos, por duas semanas a 4C Soluo de o-dianisidina Pese 250 mg de o-dianisidina (C14H16N2O2) e dissolva com 50 mL de metanol. Adicione 100 mg de carvo. Agite por cinco minutos e filtre. Adicione a 40 mL do filtrado, 60 mL de cido clordrico 1 M. Prepare diariamente, e guarde ao abrigo da luz. Soluo de cloreto de magnsio Pese 100 g de cloreto de magnsio e dissolva em 50 mL de gua. Procedimento Monte o aparelho para destilao por arraste de vapor. Pese exatamente 5 g da amostra e transfira para o frasco Erlenmeyer junto com 15 mL da soluo de cloreto de magnsio. Adapte as juntas conectoras e destile com arraste de vapor razo de 4 mL por minuto. Recolha de 100 a 125 mL do destilado em um balo volumtrico de 250 mL, completando o volume com metanol. A uma alquota de 25 mL, adicione 2 mL da soluo de nitrito de sdio e 5 mL da soluo de o-dianisidina Aps 10 minutos, extraia a frao colorida com 10 mL de clorofrmio. Mea espectrofotometricamente a 520 nm e determine a concentrao de BHT, utilizando uma curva de calibrao previamente construda. Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlises de Alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP 1985. p. 85-86. 070/IV Antioxidantes Identificao de butil hidroxitolueno (BHT) Material Balana semi-analtica, manta aquecedora, regulador de temperatura, suporte, garra e mufa, tubo de ltex para condensador, balo de fundo redondo com junta esmerilhada 45/50 e capacidade para 5 L, tubo de vidro de 1,4 m de comprimento e 1,2 cm de dimetro, juntas conectoras para frasco Erlenmeyer com presilha, frasco Erlenmeyer com junta esmerilhada 29/32 e capacidade 500 mL, condensador tipo reto, com junta esmerilhada 24/40, balo volumtrico de 100 mL, provetas graduadas de (50 e 100) mL, bqueres de (50, 100 e 250) mL e pipetas graduadas de (2 e 5) mL.
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Reagentes Clorofrmio Nitrito de sdio o-Dianisidina (C14H16N2O2) Metanol Carvo cido clordrico Cloreto de magnsio (MgCl2.6H2O) Padro analtico de BHT Soluo de nitrito de sdio a 0,3% m/v, conforme 069/IV Soluo de o-dianisidina, conforme 069/IV Soluo de cloreto de magnsio, conforme 069/IV Procedimento Monte o aparelho para destilao por arraste de vapor. Pese 5 g da amostra, transfira para o frasco Erlenmeyer junto com 15 mL da soluo de cloreto de magnsio. Adapte as juntas conectoras e destile com arraste de vapor razo de 4 mL por minuto. Recolha de 100 a 125 mL do destilado em um bquer de 250 mL. Concentre, em banhomaria, o destilado at 50 mL. A uma alquota de 25 mL, adicione 5 mL de soluo de o-dianisidina e 2 mL de soluo de nitrito de sdio. Na presena de BHT, dever formar uma colorao vermelho-alaranjada em at 10 minutos. Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 85-86. 071/IV Antioxidantes Identificao de galatos Este ensaio permite a identificao dos galatos em misturas de aditivos e baseia-se na extrao dos galatos (propila, octila ou duodecila) com lcool a 72% e reao com hidrxido de amnio . Material Balana semi-analtica, bqueres de 10 e 100 mL, proveta graduada de 50 mL, funil de separao de 125 mL, bales volumtricos de 100 e 500 mL e pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes ter de petrleo
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lcool Hidrxido de amnio Soluo de lcool a 72% v/v Misture 360 mL de lcool e 140 mL de gua. Procedimento Dissolva 20 g de amostra em 50 mL de ter de petrleo. Extraia em funil de separao com lcool a 72% (30 mL por trs vezes). Rena os extratos em balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com lcool a 72%. Adicione 0,5 mL de hidrxido de amnio a 5 mL do extrato alcolico. Uma colorao rsea indicar a presena de galatos. Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP 1985. p. 82. , 072/IV Aromatizantes Identificao e quantificao A identificao e a quantificao dos componentes do aroma (aldedos, steres, cetonas, etc.) so efetuadas por cromatografia em fase gasosa, usando detector de ionizao de chama (FID). Material Balana analtica, cromatgrafo a gs, coluna Carbowax 20 M ou equivalente, detector de ionizao de chama (FID), bales volumtricos de 10 mL, pipetas graduadas de 2 mL e microsseringa de 10 L. Reagentes lcool Padres analticos de aldedos, steres, cetonas, etc. Soluo-padro Com auxlio de uma pipeta, pese cerca de 100 mg dos padres diretamente em bales volumtricos de 10 mL e complete o volume com lcool. Condies cromatogrficas Temperatura do injetor: 230C, temperatura do detector: 250C, programao de aquecimento da coluna: de (70 - 210)C, 8C/min, razo de splitter 1:100. Procedimento Para aromas lquidos, pese diretamente em balo volumtrico de 10 mL, com auxlio de uma pipeta, uma quantidade da amostra de modo que a concentrao do
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analito estudado seja prxima a do padro e em torno de 1%. Complete o volume com lcool. Para aromas em p, pese uma quantidade da amostra cuja concentrao do analito estudado seja prxima a do padro. Transfira, com lcool, para um balo volumtrico de 10 mL e complete o volume. Filtre, se necessrio. Injete 1 L da amostra e dos padres no cromatgrafo e calcule a porcentagem dos analitos estudados por meio das reas obtidas nos cromatogramas. Clculo
Cp = concentrao do padro Ca = concentrao da amostra Ap = rea do padro Aa = rea da amostra Referncias bibliogrficas ARCTANDER, S. Perfum and flavor chemicals (aroma chemicals) v. 1-2. New Jersey, U.S.A.: publicado pelo autor, 1969. Flavor and Fragrance Materials. Wheaton, USA: Allured Publishing Corporation, 1993. 073/IV Aromatizantes Teor alcolico a 20C A quantificao do teor alcolico, quando presente, em aromas lquidos determinado conforme o mtodo 0217/IV. 074/IV Aromatizantes Identificao de leos essenciais Os leos essenciais, quando presentes nos aromas, podem ser identificados por cromatografia em camada delgada ou quantificados com o uso do balo volumtrico tipo Cssia. Quando puros, devem ser feitas as seguintes determinaes fsico-qumicas: ndice de refrao a 20C, densidade relativa a (20/20)C e rotao ptica a 20C. Os valores obtidos so comparados com os da literatura. Os aromas lquidos podem ser analisados diretamente ou aps a separao dos leos essenciais com soluo saturada de cloreto de sdio, enquanto que os em p devem ser previamente extrados. Para amostras em p, extraia com uma pequena quantidade de lcool ou ter.
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Material Placas de slica gel 60 G (20 x 20)cm, estufa, cmara ultravioleta, cuba cromatogrfica com tampa, frasco Erlenmeyer de 250 mL e provetas de 10 e 100 mL. Reagentes Ciclohexano Acetato de etila cido actico cido sulfrico Padres analticos de leos essenciais Fase mvel Ciclohexano-acetato de etila-cido actico (90:10:1). Revelador Soluo aquosa de cido sulfrico a 10% (v/v). Procedimento Sature a cuba de vidro com a mistura de solventes da fase mvel. Coloque, com auxlio de um capilar, a amostra e os padres em pontos diferentes da placa de slica gel, preparada para cromatografia ascendente. Deixe secar. Coloque na cuba cromatogrfica com o solvente e deixe correr at uns 2 cm da extremidade superior da placa. Retire e deixe secar ao ar. Vaporize com o revelador. Seque em estufa a 105C por alguns minutos tomando o cuidado de no deixar carbonizar a placa. Compare o cromatograma da amostra com o dos padres. Antes de revelar a placa, observe o cromatograma sob luz ultravioleta. 075/IV Aromatizantes Quantificao dos leos essenciais Material Pipeta volumtrica de 10 mLe balo volumtrico tipo Cssia (110 mL de capacidade e gargalo graduado de 10 mL, subdividido em 0,1 mL). Reagentes Cloreto de sdio Soluo saturada de cloreto de sdio Adicione cloreto de sdio em 1000 mL de gua at saturar a soluo. Procedimento Pipete 10 mL da amostra, transfira para um balo volumtrico tipo Cssia e complete o volume com soluo saturada de cloreto de sdio.
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O volume do leo essencial separado (obtido na escala graduada do gargalo do balo) corresponde ao teor em porcentagem do leo na amostra. 076/IV Aromatizantes Rotao ptica a 20C Material Polarmetro Procedimento Transfira a amostra para um tubo de 1 dm de um polarmetro. Ajuste a temperatura da amostra a 20C. Faa a determinao da rotao ptica com luz monocromtica (lmpada de sdio). Efetue no mnimo 5 leituras e calcule a mdia aritmtica. Clculo
L = leitura no polarmetro C = comprimento do tubo em dm D = densidade da amostra Referncias bibliogrficas INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP 1985. p. 419. . FENAROLI, G. Sostanze Aromatiche Naturali. Milano, Italy: Editore Ulrico Hopepli, v. 1:, 1963. 1004 p. 077/IV Aromatizantes ndice de refrao a 20C Material Refratmetro Procedimento Faa circular uma corrente de gua atravs do refratmetro de modo a manter a temperatura constante. Esta temperatura no dever diferir da referncia de + 2C.
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Antes de colocar o leo essencial no instrumento, o mesmo deve estar temperatura na qual a medida ser efetuada. Coloque 2 gotas da amostra entre os prismas. Feche os prismas, focalize e corrija o ndice de refrao obtido pela leitura da escala, conforme o clculo a seguir. Clculo
= ndice de refrao temperatura de trabalho t = temperatura de trabalho t = 20C
Referncias bibliogrficas INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP 3. ed., 1985. p. 420. . FENAROLI, G. Sostanze Aromatiche Naturali. Milano, Italy: Editore Ulrico Hopepli, v. 1, 1963. 1004 p. 078/IV Aromatizantes Densidade relativa a (20/20)C Material Termmetro, picnmetro (ou densmetro digital) e dessecador. Procedimento Tare um picnmetro, previamente seco em estufa a 100C. Encha-o com gua, a 20C e pese. Seque o picnmetro em estufa e coloque nele a amostra, a 20C e pese. Clculo
A = massa do conjunto picnmetro e amostra menos a tara do picnmetro B = massa do conjunto picnmetro e gua menos a tara do picnmetro
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Referncias bibliogrficas INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP 3. ed., 1985. p. 421. . FENAROLI, G. Sostanze Aromatiche Naturali. Milano, Italy: Editore Ulrico Hopepli, v. 1, 1963. 1004 p. 079/IV Aromatizantes Vanilina e correlatos Pesquisa em aromas contendo: vanilina, etil vanilina, maltol, etil maltol, heliotropina, cumarina, dihidrocumarina, etc. Material Papel Whatman n 1, (20x20) cm, cmara ultravioleta, cuba cromatogrfica com tampa, funil de separao de 250 mL, bqueres de 50 mL, bales volumtricos de 100 mL e microsseringa. Reagentes Isobutanol Hidrxido de amnio Padres analticos de vanilina, etil vanilina, maltol, etil maltol, heliotropina, cumarina, dihidrocumarina Soluo-padro Prepare solues a 1% de vanilina, etil vanilina, maltol, etil maltol, heliotropina, cumarina, dihidrocumarina, em lcool. Fase mvel Isobutanol (100 mL) e hidrxido de amnio a 2% (60 mL). Agite em funil de separao. Decante. A camada alcolica (superior) utilizada para correr o cromatograma. A camada aquosa (inferior) utilizada para saturar a cmara. Procedimento Coloque a camada alcolica da fase mvel na cuba cromatogrfica. Distribua a camada aquosa da fase mvel em dois bqueres pequenos e coloque-os dentro da cuba, um em cada extremidade. Para amostras em p, extraia com uma pequena quantidade de lcool ou ter e filtre. As amostras lquidas no necessitam de preparao. Aplique, com auxlio de um capilar, a amostra e os padres em pontos diferentes do papel Whatman n 1, preparado para cromatografia ascendente. Deixe secar. Coloque-o na cuba cromatogrfica contendo a fase mvel e deixe correr at 2 cm da extremidade superior do papel. Retire e deixe secar ao ar. Observe sob luz ultravioleta e marque as manchas obtidas. Compare com as dos padres.
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Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP. 3. ed., 1985. p. 427-428. 080/IV Conservadores Determinao espectrofotomtrica simultnea de nitrito e nitrato Esse mtodo aplica-se s formulaes simples de aditivos contendo nitritos, nitratos e cloreto de sdio. A razo das absorbncias de uma soluo aquosa de nitrito a 355 nm e a 302 nm 2,5. O nitrato no absorve a 355 nm mas tem uma banda caracterstica a 302 nm. A absorbncia do nitrato pode ser calculada dividindo-se a absorbncia do nitrito a 355 nm por 2,5 e subtraindo-se o quociente do total da absorbncia a 302 nm. Em cubeta de 1 cm, o limite de deteco para nitrito 0,02 mg/mL e 0,09 mg/mL para nitrato. O pH da soluo no deve estar abaixo de 5 (o nitrito forma cido nitroso, com uma absorbncia mxima a 357 nm). Material Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bqueres de 25 mL e bales volumtricos de 100 mL. Reagente Padres analticos de nitrato de sdio e nitrito de sdio Procedimento Pese 20 g da amostra, com preciso at mg. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia a 302 ou 355 nm, utilizando gua como branco e cubetas de 1 cm. Mea a absorbncia da amostra a 302 e 355 nm e calcule como descrito a seguir. Determine o teor de nitrito na amostra utilizando o valor da absorbncia a 355 nm e a curva-padro do nitrito. Para o nitrato, divida o valor desta absorbncia por 2,5 e subtraia do valor da absorbncia a 302 nm. Calcule a concentrao de nitrato na amostra utilizando o valor de absorbncia resultante desta subtrao e a curva-padro do nitrato. Curva-padro do nitrito Prepare, em uma srie de bales volumtricos de 100 mL, diferentes concentraes de nitrito (0,025 - 0,2)g/100 mL e mea a absorbncia destas solues a 355 nm.
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Curva-padro do nitrato Prepare, em uma srie de bales volumtricos de 100 mL, diferentes concentraes de nitrato (0,1 - 1)g/100 mL e mea a absorbncia destas solues a 302 nm. Clculos 1. Em nitrito:
C = concentrao de nitrito de sdio encontrada na curva-padro a 355 nm P = massa da amostra 2. Em nitrato:
C = concentrao de nitrato de sdio obtido na leitura de Ac na curva-padro P = massa da amostra Ac = absorbncia corrigida Referncias bibliogrficas LARA, W.H.; TAKAHASHI, M. Determinao espectofotomtrica de nitritos e nitratos em sais de cura. Rev. Inst. Adolfo Lutz, So Paulo, v. 52, p. 35-39, 1974. WETTERS, J.M.; UGLUM, K.L. Direct spectrophotometric simultaneous determination of nitritre and nitrate in the ultraviolet. Anal. Chem., v. 42. p. 355-340, 1970. 081/IV Conservadores Determinao de nitrato aps reduo em coluna de cdmio e de nitrito Este mtodo aplica-se amostras de aditivos que possuem na sua formulao compostos que interferem na anlise direta dos nitritos e nitratos por espectrofotometria no ultravioleta conforme 080/IV. A anlise dos nitritos e nitratos feita por espectrofotometria no visvel, aps reduo dos nitratos em coluna de cdmio, conforme os mtodos 283/IV e 284/IV.
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082/IV Conservadores Determinao de propionatos Os sais de clcio e sdio do cido propinico tm ao antimicrobiana, sendo efetivos no controle de bolores em farinhas e certos produtos de confeitaria. Os mtodos para a sua determinao envolvem primeiro a extrao, que geralmente feita por destilao por arraste a vapor, seguida da separao e identificao do cido propinico junto aos demais cidos que podem ser co-extrados. Nesta etapa, pode-se utilizar as tcnicas de cromatografia em fase gasosa, em camada delgada ou em papel. Material Banho-maria, aparelho completo para destilao por arraste a vapor, pipetas de 1, 2 e 5 mL, frasco Erlenmeyer de 200 mL, papel Whatman n 1 (20 x 20) cm, microsseringa, vaporizador, pHmetro, bqueres de 100, 200, 400 e 600 mL, provetas de 10, 50, 100 e 500 mL e cuba cromatogrfica com tampa. Reagentes cido sulfrico cido fosfotngstico Sulfato de magnsio Hidrxido de sdio Papel indicador vermelho congo Hidrxido de amnio terc-Butanol n-Butanol Indicadores vermelho de metila e azul de bromotimol Formol lcool cido propinico Soluo aquosa de cido fosfotngstico a 20% Em um frasco Erlenmeyer de 200 mL, pese 20 g de cido fosfotngstico e dilua com 80 mL de gua. Misture bem. Guarde em frasco de vidro com tampa. Soluo-padro Neutralize, com hidrxido de sdio 1 M, 1 mL de cido propinico e dilua at 100 mL. Use 4 mL desta soluo para uma destilao igual da amostra, recolhendo 200 mL do destilado, neutralizando e secando nas mesmas condies descritas. Fase mvel terc-butanol-n-butanol-hidrxido de amnio (1:1:1). Revelador Misture 200 mg de vermelho de metila, 200 mg de azul de bromoti188 - IAL
mol, 100 mL de formol e 400 mL de lcool e ajuste o pH a 5,2 com hidrxido de sdio 0,1 M. Procedimento Transfira 20 g da amostra para um frasco de destilao, com auxlio de 50 mL de gua. Adicione 10 mL de cido sulfrico 0,5 M, agite e adicione 10 mL de cido fosfotngstico a 20% e agite novamente, por rotao, o frasco e adicione 40 g de sulfato de magnsio. Agite. A mistura deve ser cida quando se usa papel vermelho-congo; caso no seja, adicione cido sulfrico (1+1). Aquea o frasco contendo a amostra antes de conectar no aparelho de destilao por arraste a vapor. Destile 200 mL em 35-40 minutos, recolha o destilado em bquer de 400 mL, contendo 2 mL de soluo de hidrxido de sdio 1 M. Evapore em banho-maria at secagem. Dissolva o resduo em 2 mL de gua. Deixe saturando na cuba de vidro o solvente: terc-butanol-n-butanol-hidrxido de amnio na proporo (1:1:1). Coloque 2 L da soluo da amostra e do padro em pontos diferentes do papel Whatman n 1, preparado para cromatografia ascendente. Deixe secar. Coloque-o na cuba cromatogrfica contendo o solvente e deixe correr at aproximadamente 2 cm da extremidade superior do papel (5 horas). Retire e deixe secar ao ar. Vaporize com o revelador. Coloque o papel em atmosfera de amonaco por alguns instantes. As manchas vermelhas correspondem aos cidos volteis. Como no so estveis, marque logo que apaream com lpis. Compare as manchas correspondentes amostra e ao padro. O mesmo Rf mostrar a presena do propionato na amostra e, se a intensidade da mancha for mais fraca que a do padro, estar abaixo de 0,2% m/m. Referncia bibliogrfica ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists 16th, Arlington: A.O.A.C., 1996. chapter 47, p. 19 (method 970.36). 083/IV Conservadores Identificao de cido srbico e sorbatos O cido srbico e seus sais de sdio, potssio e clcio tm ao mais efetiva sobre fermentos e fungos do que em bactrias e agem melhor em meio cido. Podem ser identificados em formulaes de aditivos ou em alimentos aps adequada extrao. Eles so convertidos em cido srbico aps acidulao e so extrados das amostras por destilao com arraste de vapor dgua e posteriormente identificados por cromatografia em papel ou com cido tiobarbitrico.
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Material Balana analtica, balana semi-analtica, banho-maria, espectrofotmetro UV/VIS, estufa, manta aquecedora, regulador de temperatura, suporte, garra, mufa, tubo de ltex para condensador, bqueres de 100 e 400 mL, balo de fundo redondo com junta esmerilhada 45/50 e com capacidade para 5 L, tubo de vidro de 1,40 m de comprimento e 1,2 cm de dimetro, juntas conectoras para frasco Erlenmeyer com presilha, frasco Erlenmeyer com junta esmerilhada 29/32 com capacidade para 500 mL, condensador tipo reto com junta esmerilhada 24/40, funil de separao tipo pra de 250 mL, pipeta graduada de 2 mL, provetas graduadas de 25 e 200 mL, bales volumtricos de 1000, 500 e 100 mL e tubo capilar de vidro. Reagentes Cloreto de sdio cido fosfrico Sulfato de magnsio Hidrxido de sdio ter cido sulfrico cido srbico Propanol Acetato de etila Hidrxido de amnio Soluo de cido srbico 0,001% m/v Pese 0,001 g de cido srbico (C6H8O2) e dissolva em gua suficiente para 100 mL em balo volumtrico. Soluo de hidrxido de sdio 1 M Dissolva 4 g de hidrxido de sdio com gua em um bquer de 100 mL, esfrie, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume. Soluo de cido sulfrico 0,005 M Dissolva 0,3 mL de cido sulfrico em gua, esfrie, transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume. Soluo saturada de cloreto de sdio Adicione cloreto de sdio em 1000 mL de gua at saturar a soluo. Procedimento Monte o aparelho para destilao por arraste de vapor. Pese 5 g da amostra ou mea 5 mL, se a amostra for lquida. Transfira para o frasco Erlenmeyer de 500 mL com 200 mL de soluo saturada de cloreto de sdio. Acidule com 2 mL de cido fosfrico. Adicione 7,5 g de sulfato de magnsio. Destile cerca de 350 mL, com arraste de vapor dgua para um bquer de 400 mL contendo 10 mL de hidrxido de sdio 1 M, inclinando o bquer de modo a manter a extremidade do condensador imersa na soluo alcalina. Evapore o destilado em banho-maria at reduzir o volume a 100 mL. Esfrie. Transfira para um funil de separao, acidule e extraia com 4 pores de ter. Rena os extratos e evapore
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o ter sem levar secura. Dissolva o resduo em 0,5 mL de gua. Acidule a soluo aquosa com cido sulfrico 0,005 M e aplique com capilar em papel cromatogrfico Whatman n 4 ou equivalente, paralelamente com o padro de cido srbico a 0,001%. Coloque em cuba cromatogrfica previamente saturada com o solvente propanol-acetato de etilahidrxido de amnio-gua (3:1:1:1) e deixe correr at 2 cm da extremidade superior do papel. Retire e seque a 60C. Observe o cromatograma em cmara com luz ultravioleta ( 255 nm). Compare as manchas da amostra e do padro. A identificao do cido srbico, aps a extrao por arraste de vapor, tambm pode ser realizada como descrito no mtodo colorimtrico 085/IV, utilizando o cido tiobarbitrico. Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP 3. ed., 1985. p. 103. . 084/IV Conservadores Determinao de cido srbico e sorbatos por espectrofotometria no UV O cido srbico e seus sais podem ser quantificados em alimentos ou formulaes de aditivos aps sua extrao. Este mtodo baseia-se na extrao do cido srbico ou de seus sais, convertidos em cido srbico aps acidificao, por destilao com arraste de vapor e posterior leitura espectrofotomtrica a 254 nm. Material Balana analtica, balana semi-analtica, banho-maria, espectrofotmetro UV/VIS, estufa, manta aquecedora, regulador de temperatura, suporte, garra, mufa, tubo de ltex para condensador, pHmetro, pipetador automtico de 100 a 1000 L e de 1 a 5 mL com as respectivas ponteiras, papel de filtro qualitativo, bqueres de 25, 100 e 400 mL, balo de fundo redondo com junta esmerilhada 45/50 e com capacidade para 5 L, tubo de vidro de 1,4 m de comprimento e 1,2 cm de dimetro, juntas conectoras para frasco Erlenmeyer com presilha, frasco Erlenmeyer com junta esmerilhada 29/32 e com capacidade para 500 mL, condensador tipo reto com junta esmerilhada 24/40, pipeta graduada de 2 mL e bales volumtricos de 500 e 1000 mL. Reagentes Cloreto de sdio cido fosfrico
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Sulfato de magnsio (MgSO4.7H2O) Hidrxido de sdio cido sulfrico cido srbico (C6H8O2) Soluo de cido sulfrico 0,005 M Dissolva 0,3 mL de cido sulfrico em gua, esfrie, transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume. Procedimento Proceda como no mtodo 083/IV, at: inclinando o bquer de modo a manter a extremidade do condensador imersa na soluo alcalina. Dissolva o resduo da destilao, obtido no item anterior, com gua at 500 mL, acidulando com cido sulfrico 0,005 M, a fim de obter pH 5,9. Ajuste o zero do espectrofotmetro a 254 nm, utilizando como branco gua acidulada com cido sulfrico 0,005 M at pH igual a 5,9, em cubeta de 1 cm de caminho ptico. Mea a absorbncia da amostra a 254 nm. Clculo Calcule a concentrao usando o valor = 2200, ou uma curva-padro construda com solues-padro de cido srbico (ou sorbato de potssio). Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985. p. 103. 085/IV Conservadores Determinao de cido srbico por espectrofotometria no visvel Este mtodo baseia-se na extrao do cido srbico ou de seus sais, convertidos em cido srbico, com clorofrmio na reao colorimtrica com cido tiobarbitrico e posterior leitura espectrofotomtrica a 530 nm. Material Balana analtica, banho-maria, espectrofotmetro UV/VIS, suporte, garra, mufa, parafilme, papel de filtro qualitativo, funil de separao, tipo pra, de 250 mL, bales volumtricos de 25, 50, 100, 200, 250, 500 e 1000 mL, pipetas volumtricas de 1, 2, 5, 10, 25 mL, funil para filtrao, tubo de ensaio, pipetador automtico de 100 a 200 L e de 1 a 5 mL com as respectivas ponteiras, bqueres de 25, 100 e 400 mL e provetas graduadas de 25, 50 e 200 mL.
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Reagentes Clorofrmio Sulfato de sdio anidro cido srbico cido clordrico Dicromato de potssio Bicarbonato de sdio cido sulfrico Soluo-padro Pese, com preciso, cerca de 100 mg de cido srbico, transfira para um balo volumtrico de 1000 mL completando o volume com gua . Esta soluo tem concentrao de 100 g/mL. Retire 1 mL desta soluo e leve para um balo volumtrico de 50 mL, completando o volume. Esta soluo tem concentrao de 2 g/mL. Retire 5 mL da soluo a 100 g/mL e leve para um balo volumtrico de 100 mL, completando o volume. Esta soluo tem concentrao de 5 g/mL. Soluo de cido clordrico (1:1) Dissolva 25 mL de cido clordrico em 25 mL de gua. Soluo de bicarbonato de sdio 0,5 M Dissolva 4,2 g de bicarbonato de sdio em gua, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Soluo de dicromato de potssio Pese 0,49 g de dicromato de potssio e dissolva em balo volumtrico de 1000 mL, com aproximadamente 500 mL de gua. Adicione 8 mL de cido sulfrico e complete o volume com gua. Soluo de cido tiobarbitrico a 0,5% m/v Dissolva 0,5 g de cido tiobarbitrico em gua, aquecendo em banho-maria para dissolver, esfrie, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume. Prepare na hora de usar. Procedimento Pese , com preciso, 5 g da amostra (triture no liqidificador, se necessrio), transfira para um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com gua. Filtre se necessrio, e pipete 10 mL do filtrado para um funil de separao de 250 mL e extraia, por agitao durante 1 minuto, com duas pores de 40 mL de clorofrmio (pode-se aumentar para 4 extraes de 25 mL, se necessrio). Recolha a fase clorofrmica em balo volumtrico de 100 mL ou outro de volume adequado, passando por um funil com sulfato de sdio anidro. Complete o volume com clorofrmio. Pipete 25 mL desta soluo para um funil de separao de 250 mL e extraia com 15 mL de soluo de bicarbonato de sdio 0,5 M, agitando durante 1 minuto, despreze a fase clorofrmica e transfira quantitativamente a fase aquosa para um balo volumtrico de 25 mL (pode-se aumentar para 4 extraes de 20 mL, se necessrio;
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nesse caso, receba o extratos em um balo volumtrico de 100 mL). Adicione cido clordrico 1:1 cuidadosamente at que a soluo fique cida e complete o volume com gua. Pipete 2 mL para um tubo de ensaio contendo 2 mL de soluo sulfrica de dicromato de potssio. Cubra os tubos com parafilme e coloque-os em um banho de gua fervente, por 5 minutos. Retire-os e, imediatamente, adicione 2 mL de soluo de cido tiobarbitrico, cobrindo-os novamente com parafilme. Coloque os tubos de ensaio novamente em um banho de gua fervente, durante 10 minutos. Retire os tubos e deixe esfriar. Faa um branco usando 2 mL de gua em lugar da amostra. Leia a absorbncia a 530 nm e compare com uma curvapadro obtida nas mesmas condies da anlise. Curva-padro Retire com pipetador automtico, pores de 0,5; 1; 1,5 e 2 mL da soluopadro a 2 g/mL para 4 tubos de ensaio e adicione 1,5; 1; 0,5 e 0 mL de gua, respectivamente. Estas solues contm 1, 2, 3 e 4 g de cido srbico, pela ordem. Retire, com pipetador automtico, pores de 1; 1,2; 1,4; 1,6; 1,8 e 2 mL da soluo a 5 g/mL para 6 tubos de ensaio e adicione 1; 0,8; 0,6; 0,4; 0,2 e 0 mL de gua respectivamente. Estas solues contm 5, 6, 7, 8, 9 e 10 g de cido srbico, pela ordem. Proceda a determinao como descrito acima. Construa o grfico absorbncia x g cido srbico/6 mL soluo. Nota: aps a extrao do analito, pode-se tambm fazer a quantificao por meio de leitura direta a 254 nm da soluo aquosa final, utilizando como branco uma soluo de bicarbonato de sdio. Outro modo de determinar o cido srbico seria a extrao deste por arraste de vapor (como descrito no mtodo 083/IV), recolhendo o destilado e levando este a um volume definido, se necessrio e proceda a determinao como descrito acima. Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP 3. ed., 1985. p. 103. , 086/IV Corantes artificiais Identificao por cromatografia em papel Material Balana analtica, papel Whatman n 1, cuba cromatogrfica, balo volumtrico de 100 mL e capilares de vidro. Reagentes Citrato de sdio Hidrxido de amnio
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n-Butanol lcool Solues-padro Prepare as solues aquosas de padres dos corantes a 1% m/v. Fase mvel (Solvente A) Pese 2 g de citrato de sdio, transfira para um balo volumtrico de 100 mL, adicione 20 mL de hidrxido de amnio e complete o volume com gua. Fase mvel (Solvente B) n-butanol-lcool-gua-hidrxido de amnio (50:25:25:10). Procedimento Prepare solues aquosas das amostras a 1%. Sobre uma folha de papel Whatman n 1, a 2 cm da extremidade, em pontos distantes 2 cm uns dos outros, aplique com um tubo capilar as solues das amostras e dos respectivos padres dos corantes. Desenvolva o cromatograma com o solvente A ou B. O valor de Rf e a colorao da mancha devem ser idnticos aos do padro. A visualizao da mancha tambm pode ser feita luz ultravioleta, onde tem-se melhor nitidez dos contornos e, em certos casos, de algumas manchas que no foram vistas no exame direto. Nota: os cromatogramas feitos com os solventes A e B no levam sempre ao mesmo resultado. Alguns corantes mudam inteiramente os valores de Rf de um para outro solvente e outros se mostram mais puros em solvente A que em solvente B. O cromatograma com solvente A o mais usado por ser mais rpido, apesar dos contornos das manchas no serem muito precisos. Outros solventes tambm podem ser usados como mostra a Tabela 1. Tabela 1 Rf e absorbncia mxima de alguns corantes artificiais permitidos em alimentos
Corante
Bordeaux S ou Amaranto Eritrosina Amarelo crepsculo Tartrazina Indigotina
Classe
Azo Xanteno Azo Pirazolona Indigide
A
0,62 0,21 0,73 0,91 0,52
Rf no solvente B C D E
0,27 0,52 0,72 0,41 0,27 0,29 0,61 0,46 0,28 0,25 0,14 1,00 0,28 0,12 0,14 0,19 0,58 0,45 0,17 0,20
F
0,11 0,47 0,40 0,09 0,30
Abs. Mx.(nm)
520 (em meio cido) 525 (em meio cido) 480 (em meio cido) 430 (em meio cido) 285 e 615 (em meio cido)
A = Hidrxido de amnio-gua (1: 99) B = Cloreto de sdio a 2% em lcool a 50%
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C = Isobutanol-lcool-gua (1:2:1) D = n-Butanol-gua-cido actico glacial (20:12:5) E = Isobutanol-lcool-gua (3:2:2) e 1 mL de hidrxido de amnio para 99 mL da mistura anterior F = Soluo de 80 g de fenol em 20 mL de gua Referncia bibliogrfica GAUTIER, J.A.; MALANGEAU, P. Mises au Point de Chimie Analytique Organique Pharmaceutique et Bromatologique. 13. ed., Paris: Masson & Cie., 1964. p. 70, 71, 91. 087/IV Corantes artificiais Identificao por espectrofotometria Material Balana analtica, pHmetro, espectrofotmetro UV/VIS, balo volumtrico de 100 mL , pipeta de 1 mL e balo de 2 L. Reagentes cido actico Acetato de amnio 0,02 M (pH 5,6) Pese 3,08 g de acetato de amnio e transfira para balo volumtrico de 2 L, dilua com gua, acerte o pH da soluo para 5,6 com cido actico e complete o volume com gua. Procedimento Pese 0,1 g da amostra e dilua a 100 mL com uma soluo de acetato de amnio 0,02 M (pH 5,6). Pipete 1 mL desta soluo e dilua a 100 mL com a soluo de acetato de amnio 0,02 M. Controle o pH da soluo para 5,6. Trace o espectro do corante no intervalo de 200 a 600 nm. Os mximos e mnimos de absoro so bem definidos, podendo variar de 2 a 3 nm. Compare com os espectros obtidos nas mesmas condies para os corantes-padro. Referncia bibliogrfica JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to specifications for general notices, general analytical techniques, identification tests, test solutions and other reference materials. Rome, 1991. p. 114 ( FNP5/rev.2). 088/IV Corantes artificiais Quantificao por espectrofotometria Material Balana analtica, pHmetro, espectrofotmetro UV/VIS, bales volumtricos de 100, 200
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e 1000 mL, pipetas volumtricas de 1 e 10 mL e frasco Erlenmeyer de 250 mL. Reagentes cido actico Acetato de amnio 0,02 M Acetato de amnio 0,02M (pH 5,6) Pese 3,08 g de acetato de amnio e transfira para balo volumtrico de 2 L, dilua com gua, acerte o pH da soluo para 5,6 com cido actico e complete o volume com gua. Procedimento Para os corantes amarelo-crepsculo, tartrazina, indigotina, bordeaux S, eritrosina, ponceau 4R, vermelho 40 e azorrubina, prepare solues a 0,001% em acetato de amnio 0,02 M (pH 5,6). Para os corantes azul-brilhante e azul-patente, prepare uma soluo a 0,0005% em acetato de amnio 0,02 M (pH 5,6). Para o corante verde-slido FCF, pese com preciso, de 50 a 75 mg do corante, transfira para um balo volumtrico de 1 L, dissolva e complete o volume com gua. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia no comprimento de mxima absoro do corante a ser medido, utilizando a soluo de acetato de amnio como branco e cubetas de 1 cm. Mea no comprimento de onda de absoro mxima no visvel, indicado na Tabela 2, a absorbncia das solues de corantes. Para o corante verde slido FCF, pipete 10 mL da soluo anterior para um frasco Erlenmeyer de 250 mL, contendo 90 mL de acetato de amnio 0,04 M, misture bem e faa a leitura a 625 nm. Calcule a concentrao de cada corante utilizando o valor da absortividade ). ( Clculos
A = absorbncia da soluo da amostra C = concentrao da soluo da amostra (g/100 mL) Para o verde-slido FCF:
A = absorbncia da soluo da amostra a = absortividade P = peso da amostra em g

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Tabela 2 - Caractersticas espectrofotomtricas de alguns corantes Colour Index

15985 19140 42900 73015 42051 42053 16185 45430 16255 16035 14720
Corantes
Amarelo-crepsculo Tartrazina Azul-brilhante Indigotina Azul-patente V Verde-slido FCF Bordeaux S ou amaranto Eritrosina Ponceau 4R ou N cocina Vermelho 40 Azorrubina ou carmoisina
INS *
110 102 133 132 131 143 123 127 124 129 122
no mximo do visvel
564,1 536,6 1640,0 449,3 2089 ** 436,0 1130,0 442,5 536,0 518,6
Absoro mxima no visvel (nm)

481 426 630 610 640 625 519 524 507 505 515
*Sistema Internacional de Numerao **Para o verde-slido FCF, a absortividade de 0,156 mg/L/cm. Referncias bibliogrficas COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chemicals Codex. 4. ed., Washington D. C.: National Academic Press, 1996. p. 142, 773. GAUTIER, J.A.; MALANGEAU, P. Mises au Point de Chimie Analytique Organique Pharmaceutique et Bromatologique. 13. ed., Paris: Masson & Cie., 1964. p. 70, 71, 91. 089/IV Corantes artificiais Quantificao por titulao com cloreto de titnio A porcentagem de corante puro pode muitas vezes ser determinada pela titulao com cloreto de titnio, usando-se uma soluo-tampo adequada. Na maioria dos casos, a prpria amostra serve como indicador, visto que no ponto final ocorre a descolorao da soluo. Se a amostra contiver uma mistura de dois ou trs corantes, necessria uma separao por cromatografia antes de se efetuar a titulao. Material Balana analtica, aparelho de Kipp para gerar de CO2 e H2 , agitador, balo de 2000 mL, frasco Erlenmeyer de 500 mL, provetas de 25 e 50 mL e bureta de 50 mL.
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Reagentes Soluo de tricloreto de titnio 0,1 M Misture 200 mL de soluo de tricloreto de titnio comercial a 15% com 150 mL de cido clordrico. Ferva a mistura durante 2 minutos e resfrie em gua fria. Adicione gua at completar 2000 mL. Misture bem e borbulhe CO2 ou N2 na soluo por uma hora. Antes de padronizar, mantenha a soluo sob atmosfera de hidrognio por pelo menos 16 horas usando um aparelho gerador Kipp. Padronizao da soluo de tricloreto de titnio Transfira 3 g de sulfato duplo de ferro e amnio para um frasco Erlenmeyer de 500 mL. Introduza uma corrente de gs carbnico. Adicione 50 mL de gua recentemente fervida e 25 mL de cido sulfrico 5 M. Adicione, rapidamente, com auxlio de uma bureta, 30 mL de soluo de dicromato de potssio 0,0167 M (no interrompa a corrente de CO2). Transfira a soluo de tricloreto de titnio para uma bureta e coloque rapidamente no frasco Erlenmeyer at pouco acima do ponto de viragem. Adicione rapidamente 5 mL de tiocianato de amnio a 20% e complete a titulao at que desaparea a colorao vermelha e a soluo permanea verde. Efetue uma determinao em branco com 3 g de sulfato duplo de ferro e amnio, utilizando as mesmas quantidades de gua, cido e soluo de tiocianato de amnio e passe uma corrente contnua de gs carbnico na soluo. Clculo
A = mL da soluo de dicromato de potssio 0,0167 M adicionado f = fator da soluo de dicromato de potssio 0,0167 M adicionado V = mL (corrigido) da soluo de tricloreto de titnio gasto na titulao Procedimento O aparelho para determinao do teor de corante por titulao com TiCl3 (Figura 1) consiste de um frasco de estocagem (A) do titulante TiCl3 mantido sob atmosfera de hidrognio, produzido por uma aparelho gerador de Kipp, um frasco Erlenmeyer (B), equipado com uma fonte de CO2 ou N2, para manter a atmosfera inerte, onde a reao se realizar; um agitador e uma bureta (C). Pese a quantidade da amostra de acordo com a Tabela 3. Transfira para um frasco Erlenmeyer de 500 mL, com auxlio de 150 mL de gua. Adicione 10 g de citrato de sdio ou 15 g de bitartarato de sdio (Tabela 3). Titule com a soluo-padro de cloreto de titnio sem interromper a corrente de CO2 e o aquecimento.
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Figura 1 Aparelho para determinao do teor de corante por titulao com TiCl3 Clculo
A = mL (corrigido) de soluo-padro de cloreto de titnio gasto na titulao D = peso (em g) do corante equivalente a 1 mL da soluo-padro de cloreto de titnio 0,1 M ( Tabela 3) f = fator da soluo-padro de cloreto de titnio 0,1 M P = peso da amostra
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Tabela 3 - Titulao com cloreto de titnio Corante

Amarelo-crepsculo Tartrazina Bordeaux S ou amaranto Ponceau 4R Vermelho 40 Azorrubina Azul-brilhante Indigotina Azul-patente V Verde-slido FCF
n de g do corante Massa em g da Adicionar equivalente a 1 mL amostra a ser 15 - 10 g * da soluo-padro usada na titulao de TiCl3 0,1 M
0,5 0,6 0,6 0,7 0,7 0,8 0,7 0,8 0,5 0,6 0,5 0,6 1,8 1,9 1,0 1,1 1,3 1,4 1,9 2,0 Citrato Bitartarato Citrato Citrato Bitartarato Bitartarato Bitartarato Bitartarato Bitartarato Bitartarato 0,01131 0,01356 0,01511 0,01578 0,01241 0,01256 0,03965 0,02332 0,02898 0,04045
*15 g, se for bitartarato ou 10 g, se for citrato. Referncias bibliogrficas COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chemicals Codex. 4th ed., Washington D. C.: National Academic Press, 1996. p. 142, 773-774. JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to specifications for general notices, general analytical techniques, identification tests, test solutions and other reference materials. Rome, 1991. p. 116-118. ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of analysis of the Associatio of Official Analytical Chemists. 16th, Arlington: A.O.A.C., 1996, chapter 46. p. 10, 11 (method 950.61). JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Compendium of food addittive specifications. Rome, 1992, p. 37, 71, 176, 219, 639, 783, 1051, 1141, 1463, 1483. 090/IV Corantes artificiais Determinao de eritrosina por gravimetria O procedimento gravimtrico simples permite somente a determinao da eritrosina na matria-prima do corante puro.
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Material Balana analtica, estufa, bquer de 400 mL, pipeta de 5 mL, placa filtrante. provetas de 10 e 50 mL, dessecador com slica gel ou cloreto de clcio anidro e basto de vidro. Reagentes cido ntrico (1+19) cido ntrico (1+179) Procedimento Estabilize a temperatura da estufa para 135C. Pese 0,25 g da amostra e transfira com auxlio de 100 mL de gua para um bquer de 400 mL. Adicione 5 mL de cido ntrico (1 + 19), agite com um basto de vidro, filtre em placa filtrante previamente aquecida em estufa a 135C, resfriada em dessecador e pesada. Lave o bquer e a placa com 50 mL de cido ntrico (1 + 179) e depois com 10 mL de gua, evitando que o precipitado seque. Seque, aquea em estufa a 135C, resfrie em dessecador e pese. Repita as operaes de aquecimento e resfriamento at peso constante. Clculo
N = g da substncia precipitada P = g da amostra Referncia Bibliogrfica JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Compendium of Food Additive Specifications. Rome , 1992. p. 573. 091/IV Corantes artificiais Determinao de substncias insolveis em gua Material Estufa, balana analtica, bquer de 250 mL, proveta de 200 mL, placa filtrante e dessecador com slica gel ou cloreto de clcio anidro. Procedimento Estabilize a temperatura da estufa para 135C. Pese 5 g da amostra, transfira para um bquer de 250 mL, com auxlio de 200 mL de gua quente (80-90)C. Agite para dissolver o corante e deixe esfriar a soluo temperatura ambiente. Filtre a soluo atravs
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de uma placa filtrante (porosidade 4), previamente aquecida a 135C, por 1 hora, resfriada em dessecador e pesada. Lave com gua fria at as guas de lavagem se tornarem incolores. Seque o filtro com o resduo, aquea em estufa a 135C, resfrie em dessecador e pese. Clculo
N = n de g de substncias insolveis em gua P = n de g da amostra Referncia bibliogrfica JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to specifications for general notices, general analytical techniques, identifications tests, test solutions and other reference materials. Rome, 1991. p. 132. 092/IV Corantes artificiais Determinao de substncias volteis a 135C Material Estufa, balana analtica, pesa-filtro com tampa e dessecador com slica gel ou cloreto de clcio anidro Procedimento Estabilize a temperatura da estufa para 135C. Pese 5 g da amostra em um pesa-filtro com tampa esmerilhada, previamente aquecido em estufa a 135C, por 1 hora, resfriado em dessecador at a temperatura ambiente e pesado. Aquea a 135C, por 12 horas. Resfrie em dessecador at temperatura ambiente e pese. Repita as operaes de aquecimento e resfriamento at peso constante. Clculo
N = perda de peso em g P = n g da amostra Referncia bibliogrfica JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to specifications for general notices, general analytical techniques, identifications tests,
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test solutions and other reference materials. Rome, 1991. p. 131-132. 093/IV Corantes artificiais Determinao de sulfatos Material Mufla, balana analtica, papel de filtro, frasco Erlenmeyer de 250 mL, proveta de 100 mL, balo volumtrico de 200 mL, pipeta de 100 mL, bquer de 600 mL, proveta de 300 mL, pipeta graduada de 20 mL, pipeta graduada de 2 mL e cadinho de porcelana. Reagentes Cloreto de sdio isento de sulfatos Soluo saturada de cloreto de sdio cido clordrico Soluo de cloreto de brio 0,125 M Procedimento Estabilize a temperatura da mufla para 500C. Pese 5 g da amostra e transfira para um frasco Erlenmeyer de 250 mL, com auxlio de 100 mL de gua. Aquea em banho-maria, adicione 35 g de cloreto de sdio, isento de sulfatos, tampe o frasco Erlenmeyer e agite em intervalos freqentes, durante 1 hora. Esfrie, transfira com auxlio de soluo saturada de cloreto de sdio para um balo volumtrico de 200 mL e complete o volume. Agite, deixe em repouso por algumas horas. Filtre a soluo atravs de papel de filtro seco e transfira 100 mL do filtrado, com auxlio de uma pipeta, para um bquer de 600 mL, dilua at 300 mL com gua e acidule com cido clordrico, adicionando 1 mL em excesso. Aquea a soluo at ebulio e adicione um excesso de soluo de cloreto de brio 0,125 M, gota a gota, com agitao. Deixe repousar a mistura sobre uma placa quente durante 4 horas ou deixe por uma noite temperatura ambiente. Separe por filtrao o sulfato de brio, lave com gua quente e calcine o papel de filtro com o resduo em um cadinho previamente aquecido em mufla a 500C, resfriado em um dessecador at a temperatura ambiente e pesado. Leve o cadinho com a substncia mufla a 500C, por uma hora. Resfrie em dessecador e pese. Clculo
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N = n de g de sulfato de brio S = n de g da amostra usado na precipitao Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985. p. 410. 094/IV Corantes artificiais Determinao de cloretos Material Potencimetro, eletrodo Ag+/AgCl, balana analtica, bquer de 400 mL, proveta de 200 mL, pipeta graduada de 1 mL e bureta de 25 mL. Reagentes Nitrato de prata 0,1 M cido ntrico Procedimento Pese 0,5 g da amostra. Transfira para um bquer de 400 mL, com auxlio de 200 mL de gua. Adicione 1 mL de cido ntrico. Titule com soluo de nitrato de prata 0,1 M. Clculo
V = n de mL de soluo de nitrato de prata 0,1 M gasto na titulao f = fator da soluo de nitrato de prata 0,1 M P = n de g da amostra Referncia bibliogrfica JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to specifications for general notices, general analytical techniques, identifications tests, test solutions and other reference materials. Rome, 1991. p. 129.
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095/IV Corantes artificiais Determinao de corantes subsidirios Corantes subsidirios so definidos como aqueles corantes que so os subprodutos do processo de fabricao do corante principal. Qualquer outro corante, que no o principal e seus subsidirios, so considerados adulterantes cuja presena usualmente detectada em cromatogramas usados para determinar corantes subsidirios. Os corantes subsidirios so separados do corante principal por cromatografia ascendente em papel. Material Balana analtica, papel Whatman n 1, slica gel, balo volumtrico de 100 mL, cuba cromatogrfica e microsseringas de 5 ou 10 L. Reagentes Hidrxido de amnio Citrato trissdico n-Butanol lcool 2-Butanona Acetona cido actico glacial Acetonitrila lcool isoamlico Metil etil cetona Fases mveis: 1. gua-amnia-citrato trissdico (95:5:2) 2. n-butanol-gua-lcool-hidrxido de amnio (600:264:135:6) 3. 2-butanona-acetona-gua (7:3:3) 4. 2-butanona-acetona-gua-hidrxido de amnio (700:300:300:2) 5. 2-butanona-acetona-gua-hidrxido de amnio (700:160:300:2) 6. n-butanol-cido actico glacial-gua (4:1:5). Agite por 2 minutos, deixe separar as camadas e use a camada superior como fase mvel 7. acetonitrila-lcool isoamlico-metil etil cetona-gua-hidrxido de amnio (50:50:15:10:5) Procedimento Prepare solues aquosas das amostras a 1% m/v. Dilua em gua de acordo com o limite legal permitido para cada corante. Sobre uma folha de papel Whatman n 1 ou sobre a placa de slica gel no caso do corante verde slido, aplique, com uma microsseringa, 2 L das solues de corantes a 1% e as respectivas solues diludas, conforme o limite
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legal estabelecido para corantes subsidirios. Desenvolva o cromatograma com o solvente apropriado para cada corante, conforme Tabela 4. Tabela 4 Altura ou tempo necessrio para o desenvolvimento de corantes em respectivas fases mveis Corante
Vermelho 40 Bordeaux S (Amaranto) Azul-brilhante Eritrosina Verde-slido Azul-indigotina Amarelo-tartrazina Amarelo-crepsculo Azorrubina (carmoisina) Azul-patente Ponceau 4R
Fase mvel
4 3 4 5 7 3 4 4 4 2 3
Altura ou tempo
17 cm 17 cm 20 h 17 cm CCD - slica gel at o topo da placa 17 cm 12 cm 17 cm 17 cm 17 cm 17 cm
A mancha do corante subsidirio da soluo a 1% deve ser menor do que a mancha principal da soluo diluda. Referncias bibliogrficas JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to specifications for general notices, general analytical techniques, identification tests, test solutions and other reference materials. Rome, 1991. p.122. JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to specifications for general notices, general analytical techniques, identification tests, test solutions and other reference materials . Rome , 1992. p. 37, 71, 176, 219, 641, 785, 1051, 1141, 1463, 1482. 096/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de amarelo-crepsculo e bordeaux S Este mtodo espectrofotomtrico aplicado para determinao das misturas dos corantes artificiais: amarelo-crepsculo e bordeaux S e baseia-se na aditividade das absorbncias dos corantes.
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Material Balana analtica, pHmetro, espectrofotmetro UV/VIS, balo volumtrico de 100 mL, balo volumtrico de 2000 mL e pipetas volumtricas. Reagentes cido actico Acetato de amnio 0,02 M Pese 3,08 g de acetato de amnio e transfira para balo volumtrico de 2000 mL, dilua com gua, acerte o pH da soluo para 5,6 com cido actico e complete o volume com gua. Procedimento Pese uma quantidade adequada da amostra e faa as diluies necessrias em acetato de amnio 0,02 M, de forma a obter leitura nos comprimentos de onda desejados. A soluo final dever estar em balo volumtrico de 100 mL. Para amostras contendo amarelo crepsculo e bordeaux S, faa a leitura em 481 nm e 519 nm (As leituras nestes comprimentos de onda correspondem absoro do amarelo crepsculo mais a absoro do bordeaux S). Tabela 5 Valores de de onda 481 e 519 nm Corante
Amarelo-crepsculo Amarelo-crepsculo Bordeaux S Bordeaux S
dos corantes amarelo-crepsculo e bordeaux S, nos comprimentos (nm)

481 519 481 519 533,3 325,0 291,3 438,2
Clculo Utilize o valor de obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de 481 nm e 519 nm na equao de Lambert-Beer (Tabela 5).
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Referncia bibliogrfica YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S.; BRUM, A. M. S. Determinao quantitativa de misturas de corantes artificiais. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n. 1, p. 14-19, 1996. 097/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de indigotina e bordeaux S Procedimento Para amostras contendo indigotina e bordeaux S, faa as leituras das absorbncias em 519 nm e 610 nm. (A leitura a 519 nm, corresponder absoro do corante indigotina mais a do bordeaux S e a 610 nm somente a do corante indigotina). Tabela 6 Valores de onda 519 e 610 nm Corante
Bordeaux S Bordeaux S Indigotina Indigotina
dos corantes bordeaux S e indigotina, nos comprimentos de
(nm)
519 610 519 610 438,2 -----060,0 447,4
Clculo Utilize os valores de obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de 519 nm e 610 nm na equao de Lambert Beer.
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Referncia bibliogrfica YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S.; BRUM, A .M. S. Determinao quantitativa de misturas de corantes artificiais. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n. 1, p. 14-19, 1996. 098/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de tartrazina, bordeaux S e indigotina Procedimento Para amostras contendo tartrazina, bordeaux S e indigotina, faa a leitura em 426, 519 e 610 nm. Em 426 nm, ocorre a absoro da tartrazina mais bordeaux S, em 519 nm a absoro do bordeaux mais indigotina e em 610 nm somente a absoro da indigotina. Tabela 7 Valores de dos corantes tartrazina, bordeaux S e indigotina, nos comprimentos de onda 426, 510 e 519 nm Corante
Tartrazina Tartrazina Tartrazina Bordeaux S Bordeaux S Bordeaux S Indigotina Indigotina Indigotina
(nm)
426 519 610 426 519 610 426 519 610 534,1 ------100,0 438,2 ------060,0 447,4
Clculo Utilize os valores de obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de 426, 519 e 610 nm na equao de Lambert Beer (Tabela 7).
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Referncia bibliogrfica YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S.; BRUM, A. M. S. Determinao quantitativa de misturas de corantes artificiais. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n. 1, p. 14-19, 1996. 099/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de tartrazina, indigotina e azul brilhante Procedimento Para misturas contendo tartrazina, indigotina e azul-brilhante, faa as leituras da absorbncia em 426, 610 e 630 nm. No comprimento de onda 426 nm, ocorre a absoro dos corantes tartrazina e azul-brilhante, em 610 nm a absoro da indigotina e azul-brilhante e em 630, a da indigotina e do azul-brilhante. dos corantes tartrazina, indigotina e azul brilhante, nos Tabela 8 Valores de comprimentos de onda 426, 610 e 630 nm. Corante
Tartrazina Tartrazina Tartrazina Indigotina Indigotina Indigotina Azul-brilhante Azul-brilhante Azul-brilhante
(nm)
426 610 630 426 610 630 426 610 630 534,1 -----------447,4 357,3 062,9 1016,8 1652,0
Clculo Utilize o valor de obtido para estes corantes nos comprimentos de onda de 426, 610 e 630 nm na equao de Lambert-Beer.
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Referncia bibliogrfica YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S.; BRUM, A .M. S. Determinao quantitativa de misturas de corantes artificiais. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n. 1, p. 14-19, 1996. 100/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de tartrazina e amarelo crepsculo Procedimento Para amostras contendo tatrazina e amarelo-crepsculo, faa a leitura em 426 e 481 nm, pois nestes comprimentos de onda ocorre a absoro dos dois corantes. Tabela 9 Valores de de onda 426 e 481 nm. Corante
Tartrazina Tartrazina Amarelo-crepsculo Amarelo-crepsculo
dos corantes tartrazina e amarelo-crepsculo, nos comprimentos (nm)

426 481 426 481 535 170 221 592
Clculo Utilize os valores de obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de 426 e 481 nm na equao de Lambert-Beer.
Referncia bibliogrfica TAKAHASHI, M. Y.; YABIKU, H.Y.; MARSIGLIA, D.A.P. Determinao quantitativa de corantes artificiais em alimentos. So Paulo, Rev. Inst. Adolfo Lutz, v. 48, p. 7-15, 1988.
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101/IV Teobromina e cafena Determinao por cromatografia lquida de alta eficincia Este mtodo aplicado para a determinao de teobromina e cafena em cacau, produtos de chocolate e aromas base de cacau. A tcnica utilizada a cromatografia lquida de alta eficincia, que separa e quantifica a teobromina e a cafena. Estes dois alcalides so separados em uma coluna de fase reversa (C18), eludos com a fase mvel metanol-cido actico-gua e detectados por absoro na regio do ultravioleta a 280 nm. Material Balana analtica, centrfuga, tubos de c entrfuga de 50 mL, banho-maria, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector DAD ou ultravioleta, coluna analtica de octadecilsilano, 8 mm x 10 cm, 5 m (Lichrospher 100 RP-18 ou equivalente), integrador, papel de filtro, nitrognio para evaporao do solvente, bales volumtricos de 100, 200 e 1000 mL, funil de vidro, provetas de 50 mL, bqueres de 50 e 250 mL, bastes de vidro, frascos Erlenmeyer de 250 mL, pipetas volumtricas de 5 mL, pedras de ebulio e sistema de filtrao de fase mvel (Millipore ou equivalente). Reagentes cido actico grau CLAE Metanol grau CLAE gua ultra-pura Padres analticos de teobromina e cafena ter de petrleo (40-60)C Acetato de zinco cido actico 0,1 M Ferrocianeto de potssio Soluo de Carrez I Dissolva 219 g de acetato de zinco em aproximadamente 500 mL de gua ultra-pura e 30 mL de cido actico 0,1 M. Transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua. Soluo de Carrez II Dissolva 106 g de ferrocianeto de potssio em aproximadamente 500 mL de gua ultra-pura, transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua. Fase mvel Misture 200 mL de metanol, 790 mL de gua e 10 mL de cido actico. Homogeneze, filtre atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique.
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Soluo-padro de teobromina (250 g/mL) Pese, com preciso, 50 mg de teobromina, dissolva em gua e aquea, se necessrio. Transfira a soluo para um balo volumtrico de 200 mL e complete o volume com gua. Soluo-padro de trabalho de teobromina Transfira 5 mL da soluo-padro de teobromina em um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Filtre com filtros de 0,45 m. Soluo-padro de cafena (500 g/mL) Pese com preciso, aproximadamente 100 mg de cafena, dissolva em gua. Transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 200 mL e complete o volume com gua. Soluo-padro de trabalho de cafena Transfira 5 mL da soluo-padro de cafena para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Filtre com filtros de 0,45 m. Procedimento Pese, com preciso, em um tubo de centrfuga de 50 mL, cerca de 0,5 g de amostra de cacau ou 1 g, se for aroma base de cacau, ou 3 g, se forem produtos de chocolate (biscoitos, bolos, sorvetes, bebidas lcteas, alimentos achocolatados, etc). Extraia a gordura adicionando 30 mL de ter de petrleo. Agite por 2 minutos. Centrifugue a 2000 rpm por 10 minutos e decante o solvente. Repita esta extrao com mais 30 mL de ter de petrleo. Evapore o solvente residual (pode-se usar uma corrente de nitrognio ou um banho de gua quente dentro de uma capela).Transfira quantitativamente, o resduo com auxlio de gua quente para um frasco Erlenmeyer de 250 mL contendo vrias pedras de ebulio. Adicione gua at um volume aproximado de 50 mL. Aquea 20 minutos a 100C. Transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL. Esfrie e adicione 5 mL de cada uma das solues de Carrez I e Carrez II, complete o volume com gua e homogeneze. Filtre descartando os primeiros 20 mL. Use o filtrado para a anlise cromatogrfica, filtrando-o previamente com filtros de 0,45 m. Ajuste o comprimento de onda do detector para 280 nm , o fluxo da fase mvel para 1 mL/min e a temperatura do forno a 35C. Injete 20 L das solues-padro de trabalho de teobromina e cafena no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em triplicada de cada padro para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que 2%. Injete 20 L da amostra em triplicata. Clculo Calcule o teor de teobromina e cafena na amostra analisada por meio das reas dos picos obtidos nos cromatogramas.
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Cp = concentrao do padro de teobromina Ca = concentrao da amostra Aa = rea do pico da amostra Ap = rea do pico do padro
Cp = concentrao do padro de cafena Ca = concentrao da amostra Aa = rea do pico da amostra Ap = rea do pico do padro Referncia bibliogrfica YABIKU, H. Y.; KIMURA, I. A. Determinao de teobromina e cafena em cacau e produtos de chocolate por cromatografia lquida de alta eficincia. Rev. Inst. Adolfo Lutz, 56(1), p. 59-64, 1996. 102/IV Corantes naturais Identificao de antocianinas de cascas de uva Dentre os corantes naturais, as antocianinas (ou enocianinas) so obtidas a partir dos extratos de cascas de uva. So solveis em gua e pertencem classe de compostos contendo uma estrutura bsica de 15 tomos de carbono, conhecidos coletivamente como flavonides. Apresentam-se na forma de lquido, p ou pasta de cor vermelho-prpura com odor caracterstico. Material Balana analtica, bqueres de 25 mL, proveta graduada de 50 mL, balo volumtrico de 100 mL. Reagentes Hidrxido de sdio Soluo de hidrxido de sdio Pese 4,3 g de NaOH, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua.
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Procedimento Pese 0,1 g de amostra, adicione 50 mL de gua e agite. Filtre, se necessrio e adicione soluo de hidrxido de sdio. A cor vermelha-prpura torna-se azul ou verde-escura. Nota: outra maneira para identificar antocianinas em cascas de uva o aparecimento de um mximo de absoro a 525 nm, na varredura espectrofotomtrica na regio do visvel de uma soluo preparada de acordo com o procedimento 0103/IV. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade, 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.612: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 103/IV Corantes naturais Determinao da intensidade de cor em enocianinas por espectrofotometria Material Balana analtica, pHmetro, espectrofotmetro UV/VIS, bqueres de 100 mL, provetas graduadas de 50 e 100 mL, bales volumtricos de 100 e 1000 mL. Reagentes cido ctrico Fosfato de sdio dibsico Soluo-tampo de cido ctrico/fosfato de sdio dibsico, pH 3 Misture 79,45 mL de cido ctrico 0,1 M e 20,55 mL de fosfato de sdio dibsico 0,2 M e ajuste o pH a 3 com uma ou outra soluo. A soluo 0,1 M de cido ctrico dihidratado contm 21,01 g/L de C6H8O7.2H2O. A soluo 0,2 M de fosfato de sdio dibsico contm 28,40 g/L de Na2HPO4 ou 35,6 g/L de Na2HPO4.2H2O. Procedimento Pese, com preciso, cerca de 0,1 g de amostra e adicione a soluo-tampo pH 3 at completar 100 mL. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia a 525 nm, utilizando a soluo-tampo como branco e cubetas de 1 cm. Mea a absorbncia (A) da amostra a 525 nm. Caso a absorbncia no esteja entre 0,2 e 0,7, reajuste a massa inicial.
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Clculo A = absorbncia a 525 nm P= massa da amostra em g Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.613: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 104/IV Corantes naturais Identificao de carmim de cochonilha O corante carmim de cochonilha a laca de alumnio ou clcio-alumnio obtido a partir do extrato aquoso dos corpos dessecados das fmeas de insetos Dactylopius coccus costa (Coccus cacti L). Seu principal constituinte o cido carmnico (cido 7-beta-d-gluco piranosil-3,5,6,8-tetra-hidroxi-1-metil-9,10-dioxo-antraceno-2-carboxlico), o qual pode ser comercializado na forma de soluo (corante natural cido carmnico) ou na forma de laca de alumnio ou clcio-alumnio (corante natural carmim de cochonilha). O corante carmim de cochonilha apresenta-se na forma de p frivel, de colorao vermelha ou vermelha-escura ou soluo de colorao vermelha-violcea. O carmim deve apresentar no mnimo 42% de cido carmnico, calculado em base seca. Material Chapa eltrica, bqueres de 25 mL, bales volumtricos de 100 e 1000 mL, pipeta graduada de 1 mL, funil de separao, pipeta graduada de 5 mL e proveta graduada de 500 mL. Reagentes Hidrxido de sdio ou hidrxido de potssio Cristais de ditionito de sdio - Na2S2O4 cido sulfrico cido clordrico lcool amlico ter de petrleo
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Acetato de uranila Soluo aquosa de hidrxido de sdio ou hidrxido de potssio a 10% Soluo aquosa de cido clordrico a 10% v/v Dilua 266 mL de HCl com gua em um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume. Soluo aquosa de acetato de uranila a 5% m/v Pese 5 g de acetato de uranila, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Procedimentos 1. Alcalinize levemente uma disperso aquosa da amostra pela adio de uma gota de soluo de hidrxido de sdio ou hidrxido de potssio a 10%. Forma-se uma colorao violeta. 2. A adio de pequena quantidade de cristais de ditionito de sdio s solues da amostra, em meio cido, neutro ou alcalino, no descora a soluo. 3. Leve secura, em banho-maria, uma pequena quantidade da amostra em cpsula de porcelana. Esfrie totalmente e trate o resduo seco com uma ou duas gotas de cido sulfrico concentrado. No se observa alterao da cor. 4.Transfira uma disperso aquosa da amostra para um funil de separao, cuja capacidade seja trs vezes o volume da disperso. Adicione 1/3 do volume (correspondente ao da disperso) de soluo de cido clordrico a 10% v/v e agite. Adicione lcool amlico de maneira a dobrar o volume do contedo do funil de separao e agite. Deixe separar e despreze a fase aquosa (inferior). Lave a fase amlica 2 a 4 vezes com gua para eliminar resduos de cido clordrico. Dilua a fase amlica com igual volume de ter de petrleo e agite. Adicione uma pequena quantidade de gua (cerca de 1/6 do volume total). Adicione gota a gota soluo de acetato de uranila a 5%, agitando aps cada adio. Forma-se uma colorao verdeesmeralda caracterstica, na fase inferior. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.616: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
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105/IV Corantes naturais Determinao de cido carmnico em carmim de cochonilha Material Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bqueres de 100 mL, proveta graduada de 100 mL, bales volumtricos de 200 e 500 mL e pipeta volumtrica de 10 mL. Reagentes cido clordrico 2 M Procedimento Dissolva 100 mg do corante carmim em 30 mL de cido clordrico 2 M em ebulio. Resfrie e transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 1000 mL, complete o volume com gua e homogeneze. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia a 494 nm, utilizando uma soluo de cido clordrico 2 M como branco e cubetas de 1 cm. Mea a absorbncia da amostra a 494 nm. Clculo
A = absorbncia da amostra a 494 nm 0,139 = absorbncia do c. carmnico numa soluo contendo 100 mg/1000 mL. Referncias bibliogrficas SUBCOMMITTEE ON CODEX SPECIFICATIONS ET AL. Second Supplement to the Food Chemicals Codex, 2nd ed., Washington D. C.: National Academy of Sciences, 1975. p.18-20. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.617: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
106/IV Corantes naturais Identificao de crcuma A crcuma ou aafro das ndias, o rizoma da Crcuma longa L. dessecado e pulverizado. Apresenta colorao amarelo-castanho ou amarelo-castanho-escura e tem como
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princpio ativo principal a curcumina (um corante amarelo-alaranjado) cujo teor geralmente varia de 1 a 5% nos produtos vendidos comercialmente. Material Placa de toque, pipeta graduada de 5 mL, bquer de 25 mL., banho-maria, papel de filtro, funil de vidro, tubo de ensaio, bquer de 125 mL, proveta graduada de 50 mL e basto de vidro. Reagentes cido sulfrico lcool cido brico cidos oxlico cido actico Procedimentos 1. Acidifique levemente a amostra em p, com cido sulfrico: aparece uma colorao vermelha-intensa. 2. A adio de lcool na amostra em p, extrai o corante amarelo. 3. Extraia algumas gramas da amostra com 20 mL de cido actico em um bquer de 125 mL. Agite com um basto de vidro. Filtre para um tubo de ensaio e coloque em banho fervente, por alguns minutos. Uma colorao vermelha indica a presena de crcuma. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. TAKAHASHI, M. Y.; INOMATA, E.I.; YABIKU, H. Y.; GIANNATTASIO, C.M.P . Beta-caroteno, urucum e crcuma em massas alimentcias vitaminadas com ovos. Rev. do Inst. Adolfo Lutz, 50(1/2), p. 257-260, 1990. 107/IV Corantes naturais Determinao do teor de curcumina na crcuma Material Balana analtica, chapa eltrica, espectrofotmetro UV/VIS, balo de extrao com fundo chato de 100 mL e junta esmerilhada, condensador de bolas de 30 a 40 cm com junta esmerilhada, bquer de 25 mL, bales volumtricos de 100 e 250 mL, pipeta volumtrica de
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20 mL e proveta graduada de 50 mL. Reagente lcool Procedimentos Pese, com preciso, cerca de 0,1 g de crcuma em p e passe com auxlio de lcool para um frasco de extrao. Adicione cerca de 30 mL de lcool e refluxe por duas horas e meia. Esfrie o frasco e filtre quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL. Complete o volume com lcool. Pipete 20 mL deste extrato para um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com lcool. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia a 425 nm, utilizando lcool como branco e cubetas de 1 cm. Mea a absorbncia da amostra a 425 nm. Clculo Calcule o teor de curcumina usando o valor de absortividade Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.624: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 108/IV Corantes naturais Identificao de curcumina A curcumina em p obtida por extrao dos rizomas da Crcuma longa L. com solventes e posterior purificao do extrato por cristalizao. Possui colorao de alaranjada amarela e deve conter no mnimo 90% de pureza. insolvel em gua e em ter e solvel em lcool e cido actico glacial. Material Pipetas graduadas de 10 mL, bquer de 25 mL e basto de vidro. Reagentes lcool
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= 1607.
cido sulfrico Procedimento Dissolva a amostra em lcool e observe a cor amarela e a fluorescncia esverdeada. Adicione cido sulfrico e verifique a formao de intensa colorao carmesim. Referncia bibliogrfica TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. 109/IV Corantes naturais Identificao de curcumina por cromatografia em camada delgada Material Balana analtica, placas de celulose microcristalina de 0,1 mm, cmara ultravioleta, cuba de vidro para cromatografia, provetas graduadas de 100 mL, pipeta graduada de 1 mL e bquer de 5 mL. Reagentes lcool a 95% 3-Metil-1-butanol Hidrxido de amnio Fase mvel: 3-metil-1-butanol:lcool:gua:hidrxido de amnio (4:4:2:1). Procedimento Sature a cuba de vidro com a fase mvel. Pese 0,01 g da amostra e adicione 1 mL de lcool a 95%. Aplique 5 L da soluo da amostra na placa de celulose microcristalina de 0,1 mm. Coloque a placa na cuba de vidro e deixe correr cerca de 15 cm. Examine luz do dia e sob luz ultravioleta: trs manchas amarelas aparecem entre Rf 0,2 e 0,4, luz do dia e manchas com Rf cerca de 0,6 e 0,8 aparecem sob luz ultravioleta; todas as manchas apresentam distintas fluorescncias amarelas sob luz ultravioleta.
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Referncia bibliogrfica TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. 110/IV Corantes naturais Determinao do teor de curcumina Material Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bales volumtricos de 100 e 200 mL, pipeta volumtrica de 1 mL, bquer de 10 mL. Reagente lcool Procedimento Pese, com preciso, cerca de 0,08 g da amostra, transfira para um balo volumtrico de 200 mL, com auxlio de lcool, agite para dissolver e complete o volume com o mesmo solvente. Pipete 1 mL para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com lcool. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia a 425 nm, utilizando lcool como branco e cubetas de 1 cm. Mea a absorbncia da amostra a 425 nm. Clculo Calcule o teor de matria corante total na amostra, usando o valor de absortividade Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.624: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 111/IV Corantes naturais Identificao de urucum lipossolvel Extratos de urucum so os produtos oleosos (urucum lipossolvel) ou alcalinos (urucum hidrossolvel) obtidos por remoo da camada externa das sementes da rvore de urucum (Bixa orellana L). Tambm pode-se encontrar o pigmento bruto na forma de p, de
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= 1607.
colorao vermelha-escura, obtido pela extrao mecnica das sementes. O extrato de urucum lipossolvel, de cor vermelha a castanho-avermelhada, contm diversos componentes coloridos, sendo o principal a bixina. Material Coluna de vidro de 1 cm de dimetro e 8 a 10 cm de altura, bqueres de 150 mL, provetas de 10 mL, pipetas de 5 mLe espectrofotmetro UV/VIS. Reagentes cido sulfrico Ciclohexano Clorofrmio, desidratado com carbonato de potssio anidro Alumina para coluna cromatogrfica Tricloreto de antimnio Sulfato de sdio anidro L de vidro Reativo de Carr-Price Pese 25 g de tricloreto de antimnio, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com clorofrmio. Deixe em repouso por um dia, em frasco bem fechado e em geladeira. O frasco no deve ser aberto enquanto a soluo estiver gelada. Procedimento Dissolva uma quantidade da amostra em ciclohexano de modo a se obter uma colorao semelhante de uma soluo de dicromato de potssio a 0,1%. Prepare uma coluna de 1 cm de dimetro e 8 a 10 cm de altura com emulso de alumina em ciclohexano e tampo de l de vidro na extremidade afilada da coluna de vidro. Escoe lentamente o solvente. Passe pela coluna a soluo da amostra obtida anteriormente. Lave 3 vezes com 10 mL de ciclohexano sem deixar secar a coluna. A bixina fortemente adsorvida pela alumina na parte superior da coluna e forma uma zona vermelho-alaranjada brilhante (o que a diferencia da crocetina). Uma zona de cor amarela-plida migra atravs da coluna e eliminada na lavagem com ciclohexano. Elua a coluna trs vezes com 5 mL de clorofrmio. A zona da bixina adsorvida no eluda em ciclohexano, ter de petrleo, clorofrmio, acetona, lcool e metanol (com os dois ltimos solventes, a cor passa laranja). Quando a ltima poro for eluda, adicione 1 mL do reativo de Carr-Price. A bixina adsorvida torna-se imediatamente azul-esverdeada, diferente da crocetina que ficaria vermelha. Notas O extrato de urucum lipossolvel insolvel em gua e pouco solvel em lcool. Os extratos de urucum reagem em cido sulfrico dando colorao azulada devida bixina.
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O extrato de urucum lipossolvel diluido com clorofrmio apresenta absorbncia mxima a 439, 470 e 501 nm. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.631: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 112/IV Corantes naturais Determinao do teor de bixina Material Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bquer de 25 mL, bales volumtricos de 100 mL, pipeta volumtrica de 10 mL. Reagente Clorofrmio Procedimento Pese, com preciso, a quantidade de mg da amostra que pode ser encontrada pela frmula: m = 0,153, dividida pela porcentagem de bixina esperada, transfira para um balo volumtrico de 100 mL com clorofrmio e complete o volume. Transfira 10 mL desta soluo para outro balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com clorofrmio. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia, a 470 nm, utilizando clorofrmio como branco e cubetas de 1 cm. Mea a absorbncia da amostra a 470 nm. Clculo Calcule o teor de carotenides totais expresso em bixina usando o valor de absortividade = 2826. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
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ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.632: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 113/IV Corantes naturais Identificao do urucum hidrossolvel O extrato de urucum hidrossolvel, de colorao castanho-avermelhada a castanho, contm como componente colorido principal a norbixina, produto de hidrlise da bixina, na forma de sal de sdio ou potssio. Material Coluna de vidro de 1 cm de dimetro e 8 a 10 cm de altura, bqueres de 150 mL, provetas de 10 e 100 mL, pipetas de 5 mL, funil de separao de 250 mL, balo volumtrico de 1000 mL e espectrofotmetro UV/VIS. Reagentes cido sulfrico Ciclohexano Clorofrmio, desidratado com carbonato de potssio anidro Alumina para coluna cromatogrfica Tricloreto de antimnio Sulfato de sdio anidro L de vidro cido sulfrico 1 M Reativo de Carr-Price Procedimento Transfira 2 mL ou 2 g da amostra para um funil de separao de 250 mL. Adicione cido sulfrico 1 M suficiente para se obter uma reao fortemente cida (a norbixina separada como precipitado vermelho). Adicione 50 mL de ciclohexano e agite fortemente. Aps a separao das fases, descarte a aquosa e lave a fase ciclohexnica com gua at eliminao do cido. Centrifugue a emulso que se forma, por 10 min, a 2500 rpm. Decante a soluo lmpida de norbixina e seque sobre sulfato de sdio anidro. Prepare uma coluna de 1 cm de dimetro e 8 a 10 cm de altura com emulso de alumina em ciclohexano e tampo de l de vidro na extremidade afilada da coluna de vidro. Escoe lentamente o solvente. Adicione 3 a 5 mL da soluo obtida anteriormente no topo da coluna de alumina e proceda como descrito em 0111/IV. A norbixina forma uma zona vermelho-alaranjada na superfcie da coluna e d a mesma reao com reativo de Carr-Price da bixina.
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Notas O extrato de urucum hidrossolvel pouco solvel em lcool. Os extratos de urucum reagem com cido sulfrico dando colorao azul-esverdeada devido norbixina. O extrato de urucum hidrossolvel diludo com gua apresenta absorbncia mxima a 453 e 483 nm. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.634: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 114/IV Corantes naturais Determinao do teor de norbixina Material Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bqueres de 25 mL, bales volumtricos de 100, 500 e 1000 mL e pipeta volumtrica de 1 mL. Reagentes Hidrxido de potssio Soluo aquosa de hidrxido de potssio a 0,5% Pese 5 g de hidrxido de potssio e transfira para um balo volumtrico de 1000 mL. Procedimento Pese, com preciso, cerca de 0,1 g do corante em p, transfira para um balo volumtrico de 500 mL com Hidrxido de potssio 0,5% e complete o volume. Pipete 1 mL desta soluo para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume comHidrxido de potssio 0,5%. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia a 453 nm, utilizando a soluo de Hidrxido de potssio 0,5% como branco e cubetas de 1 cm. Leia em espectrofotmetro a 453 nm. Clculo Calcule o teor de carotenides totais expresso em norbixina usando o valor de absortividade = 3473.
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Nota: para expressar o resultado em bixina, deve-se multiplicar o teor de norbixina encontrado pelo fator 1,037. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. YABIKU, H. Y.; TAKAHASHI, M. Y. Determinao de bixina em sementes de urucum: estudo colaborativo. Rev. do Inst. Adolfo Lutz, 52(1/2), p. 31-36, 1992. 115/IV Corantes naturais Identificao de corante caramelo Este mtodo se aplica misturas de aditivos e bebidas. Material Balana analtica, bquer de 100 mL, funil, papel de filtro, proveta graduada de 10 mL, proveta graduada de 50 mL com tampa de vidro esmerilhada, tubo de ensaio e pipetas graduadas de 2 e 5 mL. Reagentes xido de magnsio Acetato neutro de chumbo Mistura de lcool butlico-ter de petrleo (1:5) Resorcina a 5% em cido clordrico, preparada no dia do uso Procedimento Adicione 1 g de acetato neutro de chumbo e 0,5 g de xido de magnsio a 50 mL da amostra, evaporando antes o lcool quando for o caso. Agite bem. Filtre, recolha de 30 a 35 mL do filtrado em uma proveta com tampa de vidro esmerilhada. Adicione 10 mL da mistura lcool-ter. Agite com cuidado (abrindo vez por outra o frasco) durante 5 minutos. Deixe em repouso. Retire, com uma pipeta, 5 mL da camada etrea para um tubo de ensaio. Adicione 2 mL de soluo de resorcina, de tal modo que escorra pelas paredes do tubo at o fundo. Na presena de caramelo, na zona de contato das duas camadas forma-se um anel vermelho. Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
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Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985. p. 114. 116/IV Corante caramelo processo amnio Determinao da intensidade de cor O corante caramelo obtido pelo processo amnio composto por substncias resultantes do tratamento trmico de carboidratos, em presena de hidrxido de amnio, por tecnologia adequada. Apresenta-se na forma de lquido denso de cor marrom-escura a preta, tendo odor caracterstico de acar queimado e sabor amargo. So solveis em gua, solues diludas de lcool, cidos minerais, solues de hidrxido de sdio e insolveis em lcool absoluto, acetona, ter de petrleo e clorofrmio. A intensidade de cor definida como a absorbncia de uma soluo a 0,1% m/v, a 610 nm em cubeta de 1 cm, calculada sobre o contedo de slidos. Para o corante caramelo processo amnio, esta intensidade de cor deve estar entre 0,08 e 0,36. Material Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, centrfuga, bquer de 50 mL e bales volumtricos de 100 mL. Procedimento Pese 100 mg a amostra em bquer de 50 mL, dissolva em gua e transfira para um balo volumtrico de 100 mL. Complete o volume e homogeneze. Se a soluo ficar turva, centrifugue. A soluo no pode ser filtrada. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia, a 610 nm, utilizando gua como branco e cubetas de 1 cm. Mea a absorbncia da soluo a 610 nm. Clculo
A610 = absorbncia de soluo da amostra a 610 nm. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.660-13.661: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
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117/IV Corante caramelo processo amnio Determinao de slidos Material Estufa a vcuo, mufla, peneiras de malha n 40 e 60 mesh, bquer de 250 mL, cpsula de porcelana. Reagentes cido clordrico Areia pura de quartzo Utilize areia pura de quartzo que passe atravs de uma peneira de malha n 40 mesh e fique retida na peneira de n 60. Esta areia preparada pela digesto com cido clordrico (por exemplo, a 10%) e em seguida lavada at ficar livre de cido, seca e calcinada em mufla a 600C por 4 horas. Procedimento Misture 30 g de areia preparada com (1,5 - 2,0)g do corante caramelo e seque at peso constante a 60C sob 50 mm/Hg de presso. Registre a massa final da areia mais corante caramelo. Clculo
Pf = massa final da areia + caramelo Pa = massa da areia Pc = massa do caramelo Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.660: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
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118/IV Corante caramelo processo amnio Determinao do 4-metilimidazol (MEI) Material Estufa, cuba cromatogrfica com tampa, placas de vidro para cromatografia (20 x 20)cm, bales volumtricos de 10, 100 e 1000 mL, provetas graduadas de 100 mL, nebulizador, funil de separao de 125 mL, pipetas volumtricas de 5, 25 e 50 mL, bqueres de 10 e 25 mL, l de vidro e rotavapor. Reagentes Slica gel GF 254 Celite 545 Hidrxido de sdio Clorofrmio lcool Metanol cido sulfrico Bicarbonato de sdio ter Nitrito de sdio cido sulfanlico cido clordrico Carbonato de sdio Padro analtico de 4-metilimidazol cido sulfrico 0,025 M Solues-padro Prepare solues aquosas de 4-metilimidazol contendo 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700 e 800 mg/Kg. Hidrxido de sdio 2 M Pese 90 g de hidrxido de sdio e transfira para um frasco com rolha de borracha com auxlio de 1000 mL de gua isenta de gs carbnico. Adicione, gota a gota, soluo saturada de hidrxido de brio at no se formar mais precipitado e agite. Conserve o frasco fechado em repouso durante 12 horas. Decante e transfira o lquido claro para o frasco de polietileno. Conserve protegido contra o gs carbnico do ar. Soluo de bicarbonato de sdio a 8% m/v Pese 8 g de bicarbonato de sdio, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Soluo de nitrito de sdio a 0,5% m/v Pese 0,5 g de nitrito de sdio, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua.
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cido sulfanlico a 0,5% em cido clordrico a 2% m/v Pese 0,5 g de cido sulfanlico, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com soluo aquosa de cido clordrico a 2% v/v. Soluo de carbonato de sdio a 20% m/v Pese 20 g de carbonato de sdio, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Preparao das placas Prepare placas de vidro com uma mistura de slica gel GF 254 e duas partes de soluo aquosa de bicarbonato de sdio a 8%. Seque as placas ao ar livre e coloque-as em estufa a 120C, durante 2 horas. Deixe saturando na cuba de vidro com o solvente: ter-clorofrmio-metanol (80:20:20). Revelador Misture, imediatamente antes de usar, uma parte da soluo de nitrito de sdio a 0,5% e uma parte de soluo de cido sulfanlico a 0,5% em cido clordrico a 2%. Extrao em coluna de Celite 545 Coloque um tampo de l de vidro no fundo de uma coluna cromatogrfica de (25 x 250)mm, com torneira de teflon. Sobre a mesma, coloque uma mistura de 3 g de Celite e 2 mL de hidrxido de sdio 2 M. A coluna deve ficar firme e uniformemente compactada. Pese 10 g de corante caramelo num bquer e adicione 6 mL de soluo aquosa de carbonato de sdio a 20%, misturando bem. Adicione 10 g de Celite, homogeneizando bem. Coloque todo o contedo sobre o empacotamento da coluna. Limpe o bquer com um grama de Celite e transfira para a coluna. Coloque um tampo de l de vidro no topo da mesma. A coluna deve estar firmemente compactada, sem rachaduras. Elua a coluna com uma mistura de clorofrmio-lcool (80:20) v/v, com uma vazo de aproximadamente 5 mL/min at obter 125 mL do eludo. Se necessrio, use vcuo nesta operao. Transfira o eludo para um funil de separao de 125 mL e extraia com 25 mL de cido sulfurico 0,025 M e depois com mais 5 mL. Transfira os extratos obtidos para o frasco de um rotavapor e concentre at 5 mL aproximadamente. Controle a temperatura do banho para que no exceda 55C. A parte final da concentrao deve ser cuidadosamente controlada a fim de que no haja carbonizao. Transfira o concentrado para um balo volumtrico de 10 mL, lavando o frasco com vrias pores de 1 mL de gua e complete o volume. Na hora de aplicar sobre a placa, trate a soluo obtida com pequenas pores de carbonato de sdio slido at que no d mais efervescncia e a soluo esteja alcalina (pH 9). Procedimento Aplique, sobre a placa, 2 L das solues-padro de 4-metilimidazol contendo 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700 e 800 mg/kg. Desenvolva o cromatograma com a mistura ter-clorofrmio-metanol (80:20:20) at que o solvente tenha atingido aproximadamente 15 cm. Retire a placa, seque temperatura ambiente e borrife com o revelador. Compare a intensidade da cor da mancha amarela-alaranjada obtida com as manchas dos padres de concentrao conhecida. As manchas permanecem estveis por 30 min, clareando em seguida.
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Clculo Quando o limite de 4-metilimidazol expresso baseando-se na equivalncia de cor, a concentrao primeiramente calculada sobre o contedo de slidos Cs, usando-se a frmula:
C1 = quantidade de impureza (MEI) encontrada no produto Cs = contedo de slidos A seguir, calcule o teor de 4-metilimidazol baseado na equivalncia de cor: IC = intensidade de cor Cs = contedo de slidos O teor de 4-metilimidazol expresso em termos de um corante caramelo (processos base de amnio) cuja absorbncia igual a 0,1. Referncias sbibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES Compendium of Food Additive Specifications. Rome, 1992. p. 346, 349. 119/IV Corante caramelo processo sulfito/amnio Determinao da intensidade de cor O corante caramelo processo sulfito/amnio composto de substncias obtidas a partir do tratamento trmico de carboidratos, em presena de catalisador qumico constitudo da mistura de hidrxido de amnio e dixido de enxofre, por tecnologia adequada. Apresenta-se na forma de p ou lquido denso de cor marrom-escura a preta, tendo odor caracterstico de acar queimado e sabor amargo.Para o corante caramelo processo sulfitoamnio, esta intensidade de cor deve estar entre 0,1 e 0,6. Procedimento Siga o mesmo procedimento descrito em 116/IV.
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Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.66013.661: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 120/IV Corante caramelo processo sulfito/amnio Determinao de slidos Procedimento Siga o mesmo procedimento descrito em 117/IV. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.660: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 121/IV Corante caramelo processo sulfito/amnio Determinao do 4-metilimidazol (MEI) Procedimento Siga o mesmo procedimento descrito em 0118/IV. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITIVES. Compendium of Food Additive Specifications. Rome, 1992. p. 346, 349. 122/IV Corantes naturais Identificao de beta-caroteno Beta-caroteno idntico ao natural um carotenide obtido por sntese qumica. 0,6 g de beta-caroteno correspondem a uma unidade internacional de vitamina A. Apresentase na forma de ps (cristais vermelhos ou p cristalino) ou suspenso. Pode ser adicionado de antioxidantes permitidos. Os cristais so insolveis em gua, praticamente insolveis em lcool e metanol, mas pouco solveis em leo vegetal.
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Material Espectrofotmetro UV/VIS, aparelho medidor de ponto de fuso, bqueres de 25 mL Reagentes ter de petrleo lcool Procedimentos 1. O espectro de absoro da soluo da amostra, em ter de petrleo, apresenta picos de absoro mximo em 475, 448 e 450 nm. Em lcool, apresenta absores em 475, 449 e 427 nm. 2. O intervalo de fuso da amostra varia entre (178-184)oC, com decomposio. Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.669: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 123/IV Carotenides lipossolveis (preparaes a 30%) Determinao do teor de beta-caroteno Material Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bquer de 25 mL, bales volumtricos de 100 mL e pipeta volumtrica de 20 mL. Reagente ter de petrleo Procedimento Pese, com preciso, cerca de 50 mg da amostra, dissolva em ter de petrleo, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com o mesmo solvente. Transfira uma alquota de 20 mL para outro balo volumtrico de 100 mL e complete o volume. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia, a
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448 nm, utilizando ter de petrleo como branco e cubetas de 1 cm. Mea a absorbncia da amostra a 448 nm. Nota: Os ensaios devem ser feitos com a maior rapidez possvel, evitando exposio demasiada ao ar e luz. Utilize vidraria de baixa permeabilidade aos raios actnicos. Clculo Calcule a porcentagem de beta-caroteno usando Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.670: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 124/IV Carotenides hidromiscveis (preparaes com 10%) Determinao do teor de beta-caroteno Material Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bquer de 50 mL, funil de separao de 250 mL, pipeta volumtrica de 20 mL, bales volumtricos de 100 e 500 mL, provetas de 100 e 200 mL e frasco Erlenmeyer de 250 mL. Reagentes ter de petrleo Acetona Sulfato de sdio anidro Procedimento Pese, com preciso, cerca de 70 mg de amostra, transfira para um balo volumtrico de 500 mL com auxlio de gua, disperse totalmente e complete o volume. Transfira uma alquota de 20 mL para um funil de separao, adicione 80 mL de acetona e agite por 5 min. Adicione 60 mL de ter de petrleo, seguido de gua para auxiliar a transferncia do pigmento para a fase de ter. Aps a separao das fases, descarte a fase inferior. Lave 3 vezes com aproximadamente 150 mL de gua. Recolha em frasco Erlenmeyer contendo sulfato de sdio anidro para retirar gotas de gua. Transfira para um balo volumtrico
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= 2592.
de 100 mL e complete o volume com ter de petrleo. Ajuste o zero do espectrofotmetro em unidades de absorbncia a 448 nm, utilizando ter de petrleo como branco. Mea a absorbncia da amostra em cubeta de 1 cm, a 448 nm. Nota: os ensaios devem ser realizados com a maior rapidez possvel, evitando exposio demasiada ao ar e luz. Utilize vidraria de baixa permeabilidade aos raios actinicos. Clculo Calcule a porcentagem de beta-caroteno usando Referncias bibliogrficas TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios: padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.671: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996. 125/IV Edulcorantes Determinao de acesulfame-K por cromatografia lquida de alta eficincia Este mtodo aplicado para a determinao de acesulfame-K em adoantes. Material Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector de ultravioleta, coluna analtica Lichrospher 100 RP-18 (5m) ou equivalente, integrador, bales volumtricos de 100, 200 e 1000 mL, pipeta de 5 mL, membranas filtrantes descartveis de 0,45 m, bomba de vcuo, sistema de filtrao da fase mvel e seringa de vidro de 5 mL. Reagentes Metanol grau CLAE Hidrogenosulfato de tetrabutil amnio - C16H37NO4S gua ultra-pura Soluopadro estoque de acesulfame-K Pese, com preciso, 100 mg de acesulfame-K e transfira para balo volumtrico de 200 mL. Dissolva o acesulfame-K em gua e complete o volume. Soluo-padro de trabalho do acesulfame-K Pipete 5 mL da soluo-estoque para balo
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= 2592.
volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Filtre atravs de membranas filtrantes de 0,45 m, antes de injetar no cromatgrafo. Fase mvel: metanol-soluo aquosa de hidrognio sulfato de tetrabutilamnio 0,01M (35:65) Pese 3,3954 g de hidrognio sulfato de tetrabutil amnio e transfira para um balo volumtrico de 1000 mL. Misture 650 mL da soluo com 350 mL de metanol, homogeneze, filtre atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique. Procedimento Pese uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente 2,5 mg de acesulfame-K. Dissolva em gua e transfira para balo volumtrico de 100 mL, completando o volume com gua. Filtre atravs de membranas filtrantes de 0,45 m, antes de injetar no cromatgrafo. Ajuste o comprimento de onda do detector para 227 nm e o fluxo da fase mvel para 0,6 mL/min. Injete 5 L da soluo-padro de trabalho no cromatgrafo, ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser superior a 2%. Injete 5 L da amostra em triplicata. Clculo Calcule o teor de acesulfame-K na amostra analisada por meio das reas dos picos obtidos nos cromatogramas.
Cp = concentrao do padro em mg/mL Ca = concentrao da amostra em mg/mL Aa= rea do pico da amostra Ap =rea do pico do padro Referncia bibliogrfica H.GROPIETSCH and H.HACHENBERG, Z. Lebensm. Unters. Forsch. 171:41-43, 1980. 126/IV Edulcorantes Determinao de aspartame por cromatografia lquida de alta eficincia Este mtodo aplicado para a determinao de aspartame, em adoantes e refrigerantes.
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Material Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector ultravioleta, coluna analtica Lichrospher 100 RP-18 (5 m) ou equivalente, integrador, bales volumtricos de 100 e 200 mL, pipeta volumtrica de 10 mL, bquer de 10 mL, provetas de 50 e 100 mL, membranas filtrantes descartveis de 0,45 m, bomba de vcuo, pHmetro, sistema de filtrao da fase movel e seringa de vidro de 5 mL. Reagentes Acetonitrila grau CLAE gua ultra-pura Fosfato de potssio monobsico cido fosfrico Metanol Soluo-estoque de aspartame Pese, com preciso, aproximadamente 140 mg de aspartame, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e dissolva em metanol ou gua com auxlio do ultra-som, e complete o volume com metanol ou gua. O padro deve ser preparado mensalmente. Soluo-padro de trabalho de aspartame Pipete 10 mL da soluo-estoque e dilua com gua para um balo volumtrico de 100 mL. Prepare no dia de uso. Filtre atravs de membranas filtrantes de 0,45 m, antes injetar no cromatgrafo. Fase mvel: tampo fosfato pH 3,5-acetonitrila (9:1) Pese 3,3913 g de fosfato de potssio monobsico e transfira para balo volumtrico de 2000 mL, dilua em gua e acerte o pH para 3,5 com cido fosfrico, homogeneze e complete o volume. Misture 1800 mL desta soluo-tampo com 200 mL de acetonitrila. Homogeneze, filtre atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique. Procedimento Ajuste o comprimento de onda do detector para 214 nm e o fluxo da fase mvel para 1,5 mL/min. Refrigerantes Degaseifique em ultra-som e passe em membranas filtrantes de 0,45 m. Dilua, em gua se necessrio. Adoante lquido e em p Pese uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente 14 mg de aspartame, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Filtre em membranas filtrantes de 0,45 m. Injete 5 L da soluopadro de trabalho no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a
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operao em triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que 2%. Injete 5 L da amostra em triplicata. Clculo Calcule o teor de edulcorante na amostra analisada por meio das reas dos picos obtidas nos cromatogramas.
Cp = concentrao do padro em mg/mL Ca = concentrao da amostra em mg/mL Aa = rea do pico da amostra Ap = rea do pico do padro Nota: este mtodo tambm pode ser aplicado para a determinao de cidos benzico e srbico em bebidas, alterando o comprimento de onda para 234 nm e o fluxo para 2,0 mL/min Neste caso, pese 100 mg dos cidos benzico e srbico para o preparo da soluo-padro estoque e pipete 5 mL desta soluo para um balo volumtrico de 100 mL e dilua at o volume com gua (soluo-padro de trabalho). Referncias bibliogrficas ABREU, R.W.,; OLIVEIRA, I.R.; ZENEBON, O. Quantificao de aspartame por cromatografia lquida de alta resoluo (CLAR) em ps para o preparo de sobremesas. Rev. Inst. Adolfo Lutz, 53(1/2), p. 77-80, 1993. TYLER, T. A. Liquid Chromatographic Determination of Sodium Saccharin, Caffeine, Aspartame and Sodium Benzoate in Cola Beverages. J. Assoc. Off. Anal. Chem. 67(4), p. 745-47, 1984. 127/IV Edulcorantes Determinao de ciclamatos Faa a determinao conforme o mtodo 258/IV. 128/IV Edulcorantes Determinao de esteviosdeo por cromatografia lquida de alta eficincia Este mtodo aplicado para a determinao de esteviosdeo em adoantes.
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Material Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector de ultravioleta, coluna analtica Lichrospher 100 RP 18 (5 m) ou equivalente, integrador, ultra-som, bales volumtricos de 100 e 1000 mL, pipeta de 10 mL, membranas filtrantes descartveis de 0,45 m, bomba de vcuo, seringa de vidro de 5 mL e sistema de filtrao de fase mvel. Reagentes Metanol grau CLAE Hidrxido de sdio gua ultra-pura Soluo-padro estoque de esteviosdio Pese, com preciso, 200 mg de esteviosdeo e transfira para balo volumtrico de 100 mL. Dissolva em gua no ultra-som e complete o volume. Prepare o padro todo ms. Soluo-padro de trabalho de esteviosdeo Pipete 10 mL da soluo-estoque para balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Prepare no dia do uso. Fase mvel: metanol-soluo aquosa de hidrxido de sdio 5 mM (65:35) Pese 0,1125 g de hidrxido de sdio e transfira para balo volumtrico de 500 mL e complete o volume com gua. Misture 350 mL desta soluo com 650 mL de metanol, homogeneze, filtre atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique. Procedimento Pese uma quantidade de amostra que contenha, aproximadamente, 20 mg de esteviosdeo. Dissolva em gua, transfira para balo volumtrico de 100 mL e complete o volume. Ajuste o comprimento de onda do detector para 210 nm e o fluxo para 1,0 mL/min.Filtre em membranas filtrantes descartveis de 0,45 m. Injete 10 L da soluo-padro de trabalho no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que 2%. Injete 10 L da amostra em triplicata. Clculo Calcule o teor de esteviosdeo na amostra analisada por intermdio das reas dos picos obtidos nos cromatogramas.
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Cp = concentrao do padro em mg/mL Ca = concentrao da amostra em mg/mL Aa = rea do pico da amostra Ap = rea do pico do padro Referncia bibliogrfica ALVAREZ, M.; KUSUMOTO, I.T. Anlise quantitativa dos glicosdeos edulcorantes da Stevia rebaudiana e dos seus produtos de hidrlise atravs da cromatografia lquida de alta performance (HPLC). Arq. Biol. Tecnol. 30 (2), p. 337-348, 1987. 129/IV Edulcorantes Determinao de poliis (manitol e sorbitol) por cromatografia lquida de alta eficincia Este mtodo aplicado para a determinao de manitol e sorbitol em adoantes. Estes edulcorantes so separados em uma coluna de divinil estireno amina, eludos com gua e detectados por diferena dos ndices de refrao. Material Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector de ndice de refrao, coluna analtica Bio-Rad Aminex HPX-87C 4,0 x 250 mm ou equivalente, integrador, bquer de 10 mL, balo volumtrico de 50 mL, basto de vidro, funil de vidro, membranas filtrantes descartveis de 0,45 m, bomba de vcuo, sistema de filtrao da fase mvel e seringa de vidro de 5 mL. Reagentes gua ultra-pura Soluo-padro de trabalho de manitol ou sorbitol Inicialmente, coloque aproximadamente 300 mg de sorbitol em dessecador com slica por 24 horas. Utilize um pesa-filtro contendo cloreto de clcio anidro no interior da balana analtica por 15 minutos antes de pesar o sorbitol. Para o manitol, seque-o a 105C por 4 horas. Pese, com preciso, em um bquer de 10 mL, 0,24 g de sorbitol ou manitol. Transfira para balo volumtrico de 50 mL, dissolva em gua e complete o volume. Filtre atravs de membranas filtrantes de 0,45 m, antes de injetar no cromatgrafo. Fase mvel gua ultra-pura Procedimento Ajuste a temperatura da coluna para 65C e o fluxo da fase mvel para 0,4
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mL/min, estabilize o detector de ndice de refrao. Pese uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente 0,24 g de sorbitol ou de manitol. Dissolva em gua e transfira para balo volumtrico de 50 mL, completando o volume. Filtre atravs de membranas filtrantes de 0,45 m, antes de injetar no cromatgrafo. Injete 5 L da soluo-padro de trabalho no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que 2%. Injete 5 L da amostra em triplicata. Clculo Calcule o teor de poliol na amostra analisada por meio das reas dos picos obtidos nos cromatogramas.
Cp = concentrao do padro em mg/mL Ca = concentrao da amostra em mg/mL Aa = rea do pico da amostra Ap = rea do pico do padro Referncia bibliogrfica COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chemicals Codex. 4. ed., Washington D.C.: National Academic Press, 1996. p. 773-774. 130/IV Edulcorantes Determinao de sacarina por cromatografia lquida de alta eficincia Este mtodo aplicado para a determinao de sacarina em adoantes. Material Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector ultravioleta, coluna analtica Lichrospher 100 RP-18 (5 m) ou equivalente, integrador, pipeta volumtrica de 10 mL, bquer de 10 mL, bales volumtricos de 200, 250 e 2000mL , provetas de 50 e 100 mL, membranas filtrantes descartveis de 0,45 m, bomba de vcuo, sistema de filtrao da fase mvel e seringa de vidro de 5 mL.
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Reagentes Acetonitrila grau CLAE gua ultra-pura Fosfato de potssio monobsico cido fosfrico Soluo-padro estoque de sacarina Pese, com preciso, 100 mg de sacarina transfira para balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com gua. Soluo-padro de trabalho de sacarina Pipete 4 mL da soluo-estoque e dilua com gua para balo volumtrico de 200 mL. Filtre atravs de membranas filtrantes de 0,45 m, antes de injetar no cromatgrafo. Fase mvel: tampo fosfato pH 3,5-acetonitrila (9:1) Pese 3,3913 g de fosfato de potssio monobsico e transfira para balo volumtrico de 2000 mL, dilua em gua e acerte o pH para 3,5 com cido fosfrico, homogeneze e complete o volume. Misture 1800 mL da soluo-tampo com 200 mL de acetonitrila, homogeneze, filtre atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique. Procedimento Ajuste o comprimento de onda do detector para 214 nm e o fluxo da fase mvel para 0,4 mL/min. Pese uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente 1,6 mg de sacarina. Dissolva em gua e transfira para balo volumtrico de 200 mL. Filtre em membranas filtrantes de 0,45 m. Injete 5 L da soluo-padro de trabalho no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que 2%. Injete 5 L da amostra em triplicata. Clculo
Cp = concentrao do padro em mg/mL Ca = concentrao da amostra em mg/mL Aa = rea do pico da amostra Ap = rea do pico do padro
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Referncia bibliogrfica ABREU, R.W., OLIVEIRA, I.R.; ZENEBON, O. Quantificao de aspartame por cromatografia lquida de alta resoluo (CLAR) em ps para o preparo de sobremesas. Rev. Inst. Adolfo Lutz, 53 (1/2), p. 77-80, 1993. 131/IV Edulcorantes Determinao de sucralose por cromatografia lquida de alta eficincia Este mtodo aplicado para a determinao da sucralose pura e em adoantes. Material Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector de ndice de refrao, coluna analtica (Lichrospher 100 RP-18 ou equivalente), integrador, membranas filtrantes descartveis de 0,45 m de dimetro de poro ou equivalente, filtros descartveis de 0,45 m de dimetro de poro ou equivalente, bomba de vcuo para filtrao da fase mvel, bales volumtricos de 25 e 1000 mL, proveta de 200 mL, seringas de vidro de 5 mL, sistema de filtrao de fase mvel (Millipore ou equivalente). Reagentes Acetonitrila grau CLAE gua ultra pura Padro analtico de sucralose Fase mvel Adicione 150 mL de acetonitrila a 850 mL de gua. Homogeneze, filtre atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique. Soluo-padro Pese, com preciso, 100 mg de sucralose em um balo volumtrico de 100 mL. Dissolva e complete o volume com a fase mvel. Filtre com filtros de 0,45 m. Procedimento Pese uma quantidade da amostra que contenha aproximadamente 100 mg de sucralose. Transfira para balo volumtrico de 100 mL, dissolva e complete o volume com a fase mvel. Filtre com filtros de 0,45 m. Ajuste o fluxo da fase mvel para que o tempo de reteno da sucralose esteja em torno de 9 minutos (geralmente 1,5 mL/min). Trabalhe em temperatura ambiente. Injete 20 L do padro no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em triplicada para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que 2%. Injete 20 L da amostra em triplicata.
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Clculo Calcule o teor de edulcorante na amostra analisada por meio das reas dos picos obtidos nos cromatogramas.
Cp = concentrao do padro em mg/mL Ca = concentrao da amostra em mg/mL Aa = rea do pico da amostra Ap = rea do pico do padro Referncia bibliogrfica COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chemicals Codex. 4. ed; Washington D. C.: National Academic Press, 1996. p. 398-399. 132/IV Espessantes Extrao de gomas em alimentos As gomas podem ser identificadas em formulaes de aditivos ou em alimentos nos quais permitido seu uso, com reaes caractersticas e diferentes reagentes. Material Balana semi-analtica, centrfuga, banho-maria, provetas graduadas de 50, 100 e 200 mL, pipeta graduada de 1 mL, bqueres de 100, 250 e 500 mL, balo volumtrico de 100 mL, tubo de centrfuga e vidro de relgio. Reagentes Dioxano lcool ter cido tricloroactico Cloreto de sdio Soluo de cido tricloroactico a 50% m/v Dissolva 50 g de cido tricloroactico em gua suficiente para 100 mL. Soluo aquosa saturada de cloreto de sdio Utilize o sobrenadante.
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Procedimento Pese 50 g da amostra. Adicione 150 mL de dioxano, coloque em tubo de centrifuga e extraia usando centrifugao a 1800 rpm para separar o solvente. Extraia novamente o resduo com 30 mL de ter, agitando vigorosamente. Decante o ter. Seque o resduo em banho-maria. Adicione 50 mL de gua a 80C. Agite vigorosamente a fim de dispersar o resduo. Adicione 20 mL de cido tricloroactico a 50%. Agite. Centrifugue a 1200 rpm, durante 10 minutos. Decante a soluo atravs de papel de filtro para outro tubo de centrifugao. Adicione 100 mL de lcool e 1 mL da soluo saturada de cloreto de sdio. Deixe em repouso durante a noite. Havendo formao de precipitado, h presena de goma. Decante. Purifique o precipitado dissolvendo novamente em 30 mL de gua a 80C e reprecipite com lcool e soluo saturada de cloreto de sdio. Decante, despreze o lcool e redissolva o precipitado em gua a 80C, resfrie, e use esta soluo para as reaes de identificao. Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP 1985. p. 121. , 133/IV Espessantes Extrao de gomas em formulaes de aditivos Material Balana semi-analtica, banho-maria, provetas graduadas de 50, 100 e 200 mL, pipeta graduada de 1 mL, bquer de 500 mL e vidro de relgio. Reagentes lcool Cloreto de sdio Soluo aquosa saturada de cloreto de sdio Utilize o sobrenadante. Procedimento Pese 10 g da amostra, aumentando ou diminuindo essa quantidade se o teor de goma for menor ou maior que 1% e dissolva em 100 mL de gua a 80C em um bquer de 500 mL. Adicione, com agitao, 1 mL de soluo saturada de cloreto de sdio e 300 mL de lcool. Se houver precipitao, indica a presena de gomas. Deixe em repouso durante a noite, cobrindo o bquer com vidro de relgio. Decante. Purifique o precipitado redissolvendo em 100 mL de gua a 80C, e reprecipitando com lcool e soluo saturada de cloreto de sdio como anteriormente. Decante, despreze a fase alcolica, redissolva o precipitado em gua a 80C, resfrie, e use esta soluo para as reaes de identificao.
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134/IV Espessantes Identificao de goma guar Material Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio, pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes Soluo de brax a 4% m/v Soluo de cido tnico a 10% m/m Procedimentos 1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 0132/IV ou 0133/IV ou a 5 mL de uma soluo a 0,5 % m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de brax. A formao de um gel confirma a presena de goma guar. 2. Adicione 2 mL de soluo de cido tnico a 10% m/v e visualize a formao de um precipitado. Referncias bibliogrficas GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press, 1969. 590 p. KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, So Paulo, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003. 135/IV Espessantes Identificao de goma carragena (musgo irlands) Material Balana semi-analtica, estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio, pipetas graduadas de 1 e 5 mL, balo volumtrico de 100 mL e proveta de 100 mL. Reagentes Cloreto de brio Azul de metileno Soluo aquosa saturada de cloreto de brio Utilize o sobrenadante. Soluo aquosa de azul de metileno a 0,5% m/v.
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Procedimentos 1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 0132/IV ou 0133/IV ou a 5 mL de uma soluo a 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo saturada de cloreto de brio. H a formao de um precipitado branco gelatinoso. 2. Adicione algumas gotas de azul de metileno a 0,5%.m/v. A precipitao de fibras coloridas de prpura indica a presena de goma carragena. Referncias bibliogrficas COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS. Food Chemicals Codex. 3. ed; Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 74. GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press. 1969. 590 p. KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003. 136/IV Espessantes Identificao de goma arbica (accia) Material Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes Sub-acetato de chumbo Indicador vermelho congo Soluo aquosa de sub-acetato de chumbo Triture 14 g de monxido de chumbo com 10 mL de gua, transfira para um frasco lavando com mais 10 mL de gua. Dissolva 22 g de acetato de chumbo em 70 mL de gua e adicione esta soluo na mistura de monxido de chumbo. Agite vigorosamente por cinco minutos. Guarde esta mistura durante sete dias, agitando freqentemente. Filtre para um balo volumtrico de 100 mL, lave o filtrado com gua, esfrie e complete o volume com gua recentemente fervida. Dilua 3,25 mL desta soluo em 100 mL de gua recentemente fervida. Soluo aquosa de indicador vermelho congo a 0,5% m/v.
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Procedimentos 1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/IV ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo a 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de sub-acetato de chumbo. Forma-se um precipitado branco floculento. 2. Adicione algumas gotas de soluo de vermelho congo. Forma-se um precipitado fino azul-escuro. Referncias bibliogrficas COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 3. ed., Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 7, 561. GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press, 1969. 590 p. KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003. 137/IV Espessantes Identificao de alginato de sdio Material Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes cido sulfrico Cloreto de clcio Soluo de acido sulfrico 4 M Soluo de cloreto de clcio (CaCl2.2H2O) a 7,5% m/v Procedimentos 1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/IV ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL da soluo de cloreto de clcio. Forma-se um gel levemente branco. 2. Adicione 2 mL de soluo de cido sulfrico. Forma-se um gel.
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Referncias bibliogrficas COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 3. ed., Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 274. GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press, 1969. 590 p. KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13 ,n. 1, p. 21-24, 2003. 138/IV Espessantes Identificao de goma Konjak Material Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes Soluo de brax a 4% m/v Soluo de hidrxido de potssio a 10% m/v Procedimentos 1. Em um tubo de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/ IV ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de brax a 4% m/v. Forma-se um precipitado. 2. Adicione 2 mL de soluo de hidrxido de potssio. Forma-se um gel rgido. Referncias bibliogrficas GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press, 1969. 590 p. KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003.
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139/IV Espessantes Identificao de agar-agar Material Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio, pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes Soluo de sub-acetato de chumbo, triture 14 g de monxido de chumbo com 10 mL de gua, transfira para um frasco, lavando com mais 10 mL de gua. Dissolva 22 g de acetato de chumbo em 70 mL de gua e adicione esta soluo na mistura de xido de chumbo. Agite vigorosamente por 5 minutos. Guarde esta mistura durante 7 dias, agitando freqentemente. Filtre, para um balo volumtrico de 100 mL, lave o filtrado com gua, esfrie e complete o volume com gua recentemente fervida. Dilua 3,25 mL desta soluo em 100 mL de gua recentemente fervida. Soluo de indicador vermelho congo a 0,5% m/v. Soluo de azul de metileno a 1 % m/v Procedimentos 1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/IV ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de soluo de sub-acetato de chumbo. Forma-se um precipitado floculento com gel. 2. Adicione algumas gotas de soluo de indicador vermelho-congo. Forma-se um precipitado fino azul-escuro. 3. Adicione algumas gotas de soluo de azul de metileno a 1% m/v. Forma-se um precipitado de cor prpura. Referncias bibliogrficas COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 3. ed., Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 74, 561. GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press, 1969. 590 p. KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R.
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Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003. 140/IV Espessantes Identificao de goma jata Material Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio, pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes Soluo de brax a 4% m/v Soluo de acetato de chumbo a 20% m/v Dissolva o sal em gua, aquea at a ebulio, esfrie e utilize a soluo sobrenadante. Procedimentos 1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 0132/IV ou 0133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de soluo de brax. Forma-se um gel. 2. Adicione 2 mL de soluo de acetato de chumbo. Forma-se um precipitado floculento branco. Referncias bibliogrficas GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press, 1969. 590 p. KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003. 141/IV Espessantes Identificao de carboximetilcelulose Material Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL.
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Reagentes Soluo aquosa de sulfato cprico a 12,5% m/v Soluo aquosa de acetato de chumbo a 20% m/v Dissolva o sal em gua, aquea at a ebulio, esfrie e utilize a soluo sobrenadante. Procedimentos 1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/IV ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de sulfato cprico. Forma-se um precipitado branco-azulado. 2. Adicione 2 mL de soluo de acetato de chumbo. Forma-se um gel floculento. Referncias bibliogrficas COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 3. ed., Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 280. GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press, 1969. 590 p. KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003. 142/IV Espessantes Identificao de pectina Material Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes Soluo de cloreto de clcio a 7,5% m/v Soluo de acetato de chumbo a 20% m/v Dissolva o sal em gua, aquea at a ebulio, esfrie e utilize a soluo sobrenadante.
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Soluo saturada de cloreto de brio Utilize o sobrenadante. Soluo de sulfato cprico a 12,5% m/v Procedimentos 1. Em um tubo de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/ IV ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de acetato de chumbo. Forma-se um gel. 2. Adicione 2 mL de soluo de cloreto de clcio. Forma-se um gel. 3. Adicione 2 mL de soluo saturada de cloreto de brio. Formam-se partculas floculentas em suspenso. 4. Adicione 2 mL de soluo de sulfato cprico a 12,5% m/v. Formam-se partculas brancas em suspenso. Referncias bibliogrficas COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 3. ed., Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 280. GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press, 1969. 590 p. KIMURA, A. I.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003. 143/IV Espessantes Identificao de goma xantana Material Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL. Reagentes Soluo de sub-acetato de chumbo Triture 14 g de monxido de chumbo com 10 mL de gua, transfira para um frasco, lavando com mais 10 mL de gua. Dissolva 22 g de
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acetato de chumbo em 70 mL de gua e adicione esta soluo na mistura de xido de chumbo. Agite vigorosamente por 5 minutos. Guarde esta mistura durante 7 dias, agitando freqentemente. Filtre, para um balo volumtrico de 100 mL, lave o filtrado com gua, esfrie e complete o volume com gua recentemente fervida. Dilua 3,25 mL desta soluo em 100 mL de gua recentemente fervida. Soluo aquosa de acetato de chumbo a 20% m/v Dissolva o sal em gua, aquea at a ebulio, esfrie e utilize a soluo sobrenadante. Procedimentos 1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 0132/IV ou 0133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de acetato de chumbo. Forma-se um gel floculento. 2. Adicione 2 mL de soluo de sub-acetato de chumbo. Forma-se um gel. Referncias bibliogrficas COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 3. ed., Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 7, 561. GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press, 1969. 590 p. KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003. 144/IV Estabilizantes Determinao de fosfatos, em P2O5, por gravimetria Em amostras de aditivos contendo tripolifosfatos, hexametafosfatos, pirofosfatos, etc., pode-se fazer a determinao do teor de fsforo (em P2O5) por meio de tcnica gravimtrica ou colorimtrica (espectrofotometria na regio do visvel). Quando o teor de P2O5 for superior a 50%, recomenda-se utilizar o mtodo gravimtrico. Material Balana analtica, balana semi-analtica, chapa eltrica, bomba para filtrao a vcuo, estufa, bqueres de 250, 400 e 600 mL, funil de vidro, provetas graduadas de 50, 100 e 250 mL, vidro de relgio, bales volumtricos de 500 e 1000 mL, frasco Erlenmeyer de 500 mL, pipetas volumtricas de 5,
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20 e 25 mL, cadinho filtrante de vidro com capacidade de 30 mL e porosidade fina (n4) e kitassato de 500 mL. Reagentes cido ntrico Molibdato de sdio cido ctrico Quinolina sinttica Acetona Soluo de Quimociac Dissolva 70 g de molibdato de sdio (Na2MoO4.2H2O) em 150 mL de gua (soluo A). Dissolva 60 g de cido ctrico numa mistura de 85 mL de cido ntrico e 150 mL de gua e deixe esfriar (soluo B). Gradualmente, adicione a soluo A na soluo B, com agitao, para produzir a soluo C. Dissolva 5 mL de quinolina sinttica numa mistura de 35 mL de cido ntrico e 100 mL de gua (soluo D). Gradualmente, adicione a soluo D na soluo C, misture bem e deixe em repouso uma noite. Filtre a mistura recolhendo em um balo volumtrico de 1000 mL, adicione 280 mL de acetona no filtrado, complete o volume e homogeneze. Guarde em frasco de polietileno. Procedimento Pese, com preciso, 800 mg da amostra num bquer de 400 mL. Adicione 100 mL de gua e 25 mL de cido ntrico e tampe com um vidro de relgio. Ferva por 10 minutos numa chapa eltrica. Lave o vidro de relgio recolhendo a gua de lavagem no bquer e esfrie a soluo at a temperatura ambiente. Transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 500 mL, complete o volume com gua e homogeneze. Transfira uma alquota de 20 mL num frasco Erlenmeyer de 500 mL, adicione 100 mL de gua e aquea at a ebulio. Adicione, com agitao, 50 mL de soluo de Quimociac, cubra com vidro de relgio e ferva por 1 minuto dentro de uma capela. Esfrie at a temperatura ambiente, agitando de vez em quando, durante o resfriamento. Filtre em um cadinho de vidro de placa porosa n 4, previamente tarado a 225C, e lave o precipitado com 5 pores de 25 mL de gua. Seque na estufa a 225C por 30 minutos, esfrie e pese. Clculo Cada mg de precipitado obtido equivalente a 32,074 g de P2O5. Referncia bibliogrfica COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS. Food Chemicals Codex. 3. ed.,
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Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 370. 145/IV Estabilizantes Determinao de fosfatos, em P2O5, por espectrofotometria Material Espectrofotmetro UV/VIS, balana analtica, banho de areia, bqueres de 50 e 400 mL, tubos de ensaio, bales volumtricos de 10, 100, 250, 500 e 1000 mL, pipeta graduada de 5 mL e pipetas volumtricas de 5 e 50 mL. Reagentes Fosfato cido de potssio Molibdato de amnio Vanadato de amnio cido ntrico cido sulfrico Soluo-padro de fosfato Dissolva 0,9587 g de fosfato cido de potssio (KH2PO4), previamente seco em estufa a 105C por 1 hora, em gua e transfira para um balo volumtrico de 500 mL e complete o volume. Transfira 50 mL para um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com gua (1 mL desta soluo contm 0,2 mg de P2O5). Reagente e vanado-molibdato de amnio Dissolva, separadamente, 20 g de molibdato de amnio, (NH4)6Mo7O24.4H2O, em gua quente e 1 g de vanadato de amnio (NH4VO3) tambm em gua quente, filtrando se necessrio. Misture as solues, acidifique com 140 mL de cido ntrico e dilua para 1 litro. Procedimento Em um tubo de ensaio, pese uma quantidade de amostra cuja concentrao final de P2O5 esteja dentro dos valores da curva-padro. Adicione 4 gotas de cido sulfrico e 2 mL de cido ntrico. Faa um branco dos reagentes. Aquea em banho de areia at completa carbonizao da amostra. Faa as diluies necessrias e transfira uma alquota para um balo volumtrico de 10 mL. Adicione 2,5 mL de vanado-molibdado de amnio em cada balo, complete o volume com gua e espere 10 minutos. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia a 420 nm, utilizando um branco contendo 2,5 mL de vanado-molibdato de amnio em 10 mL de gua e cubetas de 1 cm. Determine a absorbncia a 420 nm usando o branco dos reagentes e determine a quantidade de P2O5 correspondente, utilizando a curva-padro previamente estabelecida.
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Preparao da curva-padro Coloque em uma srie de bales volumtricos de 10 mL, volumes da soluo-padro equivalente aos valores entre 0,02 e 0,4 mg de P2O5 em 10 mL. Adicione 2,5 mL de vanado-molibdato de amnio em cada balo, complete o volume com gua e espere 10 minutos. Determine a absorbncia a 420 nm usando o branco dos reagentes temperatura ambiente. Construa o grfico concentrao de fosfato em mg/10 mL x absorbncia. Referncia bibliogrfica INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP 3. ed., 1985. p 33. , 146/IV Estabilizantes Determinao de fluoretos em fosfatos por potenciometria O mtodo destina-se determinao de fluoretos em fosfatos utilizados como aditivos para alimentos, por potenciometria direta, utilizando eletrodo seletivo de on fluoreto. O mtodo baseia-se na destilao prvia do on fluoreto na amostra, para eliminar a matriz interferente, e posterior determinao deste on por potenciometria direta, com eletrodo seletivo de fluoreto. Alguns ctions como Al3+, Fe3+, Si4+ e outros polivalentes interferem na determinao de fluoretos, uma vez que formam complexos. O grau de complexao depende da constante de formao do complexo, da concentrao do agente complexante, da concentrao total do on fluoreto, do pH e da fora inica total da soluo. Os nions, de maneira geral, no interferem na resposta do eletrodo seletivo de fluoreto, com exceo do on hidroxila. Alguns nions, como CO32- ou PO43-, no interferem diretamente na leitura do eletrodo, porm aumentam a concentrao de OHdo meio, tornando assim necessria a destilao da amostra. O pH da soluo de leitura tambm um parmetro importante e deve estar entre 5,0 e 5,5, pois abaixo desse valor ocorre a formao de HF no dissociado e do on HF2 e, acima desse pH, ocorre a interferncia devido ao on OH . Por esse motivo, necessrio adicionar tanto aos padres quanto s amostras, no momento da determinao potenciomtrica de fluoretos, uma alquota adequada de uma soluo de TISAB, a fim de manter a fora inica elevada, o on fluoreto livre em soluo e o pH da soluo ajustado. Material Analisador de ons (potencimetro para uso com eletrodo seletivo), eletrodo seletivo de fluoreto combinado, agitador magntico, balana analtica, manta eltrica aquecedora, termmetro, suportes, garras, condensador de Liebig, balo de fundo redondo de 125 mL com sada lateral (para destilao), alonga para destilao, funil de separao tipo pra de 125 mL com haste alongada, bales volumtricos de 1000, 200, 100 e 50 mL, pipetas voIAL - 259
lumtricas, bqueres de polietileno. Limpeza da vidraria Para evitar contaminao da amostra e diminuir o valor do branco, o balo de destilao deve passar pelo seguinte procedimento de limpeza: lave com soluo de hidrxido de sdio a 10%, a quente e enxge com gua destilada e deionizada. Coloque no balo 15 a 20 mL de cido sulfrico (1:2) e aquea at o desprendimento de fumaa (usar a capela). Esfrie, descarte o cido, trate o balo novamente com soluo de hidrxido de sdio a 10% e enxge bem com gua. Reagentes cido sulfrico Soluo de hidrxido de sdio a 10% m/v cido 1,2-diaminociclohexano-N,N,NN-tetractico - C14H22N2O8.H2O (Titriplex IV) Soluo-padro estoque de fluoreto 100 mg/L Pese 221 mg de fluoreto de sdio anidro, transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua. Estoque esta soluo em frasco de polietileno. Soluo-padro estoque intermediria de fluoreto 10 mg/L Prepare, a partir da soluopadro estoque, diluindo com gua destilada e desmineralizada. Estoque em frasco de polietileno. Soluo de TISAB Pese 58 g de cloreto de sdio, transfira para um balo volumtrico de 1000 mL, adicione 57 mL de cido actico glacial, 4 g de titriplex IV, ajuste o pH desta soluo a 5,0-5,5 com soluo de hidrxido de sdio 5 M e complete o volume com gua. Nota: a gua utilizada para o preparo de todas as solues deve ser destilada e deionizada. Procedimento Transfira 8 g da amostra previamente homogeneizada, 10 mL de cido sulfrico concentrado, 30 mL de gua e algumas prolas de vidro para um balo de destilao conectado a um condensador de Liebig. Na boca do balo adapte uma rolha pela qual se introduz um funil de separao (com haste alongada para que o gotejamento seja lento e prximo soluo) e um termmetro, o qual deve estar mergulhado na soluo. Coloque o balo na manta de aquecimento para fazer a destilao e recolha o destilado em frasco plstico. Durante a destilao, quando a temperatura atingir 140C, adicione gua lentamente atravs do funil de separao para manter a temperatura entre 130 e 140C. Destile durante 3 horas contadas a partir do momento em que a temperatura atingiu 140C, ou at que o volume do destilado esteja prximo de 200 mL. Transfira o destilado quantitativamente para balo volumtrico de 200 mL, complete o volume com
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gua e em seguida transfira para um frasco de polietileno. Ajuste o aparelho analisador de ons e, calcule o slope do eletrodo, conforme o recomendado no manual do fabricante. Em balo volumtrico de 50 mL, pipete uma alquota adequada da amostra (de tal forma que a leitura esteja compreendida na curva-padro) e 15 mL de TISAB. Complete o volume com gua desmineralizada. Transfira para bqueres de polietileno. Faa a leitura da concentrao, mantendo as mesmas condies experimentais da curva-padro. Teste do eletrodo (clculo do slope) Calcule o slope da maneira recomendada no manual do eletrodo. O slope (tangente de curva log [ F- ] x E), corresponde variao do potencial (E) quando a concentrao do fluoreto varia 10 vezes. Curva-padro Pipete, em bales volumtricos de 50 mL, alquotas adequadas da soluo-padro estoque de fluoreto. As concentraes podem variar de acordo com a sensibilidade e a faixa linear de trabalho do equipamento. A cada balo adicione 15 mL de TISAB e complete o volume com gua deionizada. Transfira as soluespadro para bqueres de polietileno e faa a leitura da concentrao, sob agitao no turbulenta. Notas As solues-padro devem ser preparadas no momento da leitura. Lave o eletrodo com gua entre cada leitura e enxge-o com a prxima soluo a ser lida. Clculo
c = concentrao de fluoretos na soluo de leitura, em mg/L V = volume do destilado, em mL V1 = volume do balo de leitura, em mL V2 = alquota da amostra utilizada para leitura, em mL m = massa da amostra, em g Limite de quantificao do equipamento = 0,1 mg/L Limite de quantificao do mtodo = 5 mg/kg (levando em considerao a diluio da amostra) Referncias bibliogrficas ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 16th, Arlington: A.O.A.C., 1996, chapter 9. p. 11-15.
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COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 4. ed., Washington D.C.: National Academic Press, 1996. p. 758-760. 147/IV Estabilizantes Determinao de mono e diglicerdios e glicerol livre Os mono e diglicerdios so formados por uma mistura de mono, di e tristeres de glicerol com cidos graxos comestveis. Este mtodo determina somente o teor de monoster, podendo ser utilizado em produtos puros ou em formulaes. Quando estiver em mistura com gomas estas devem ser separadas por filtrao antes da etapa da extrao. O princpio do mtodo analtico para determinao de mono e diglicerdios e glicerol livre est baseado nas seguintes reaes qumicas: O \\ H2C-O-C-C17H35 | H-C-OH + | H2C-OH O \\ H2C-O-C-C17H35 H | \ H-C=O + C=O + HIO3 + 3H2O / H
H5IO6
monoestearato de glicerila (extrato orgnico) H2 C-OH | H-C-OH | H2C-OH H / 2 H5IO6 C=O \ H H \ + C=O + 2 HIO3 + 6 H2O | C=O H
glicerol (extrato aquoso) Na titulao acontecem as seguintes reaes:
H5IO6 + HIO3 + 12KI + 12CH3COOH 7I2 + 9H2O + 12CH3COOK (amostra) H5IO6 + 7KI + 7 CH3COOH 4I2 + 6 H2O + 7 CH3COOK (branco) 2Na2S2O3 + I2 Na2S4O6 + 2NaI (titulao)
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Material Balana analtica, balana semi-analtica, banho-maria, papel de filtro (se necessrio), bquer de 50 mL, basto de vidro, proveta de 50 mL, funil de separao tipo pra de 250 mL, pipetas graduadas de 5, 10 e 20 mL, pipetas volumtricas de 25 ou 50 mL, frasco Erlenmeyer de 250 mL com tampa, bureta de 25 ou 50 mL e funil de vidro, se necessrio. Reagentes Tiossulfato de sdio Acetato de etila Sulfato de sdio cido actico glacial cido peridico H5IO6 Iodeto de potssio Amido Soluo de Na2S2O3 0,4 M Soluo de amido 0,5% m/v Soluo de sulfato de sdio a 10% m/v Dissolva 100 g de Na2SO4 em gua suficiente para 1000 mL. Soluo de cido actico e peridico Dissolva 11 g de cido peridico em 200 mL de gua e complete o volume para 1000 mL com cido actico. Soluo de iodeto de potssio a 25% m/v Dissolva 25 g de KI em gua suficiente para 100 mL. Procedimento -- Pese, com preciso, em um bquer de 50 mL, certa quantidade de amostra calculada de acordo com a seguinte frmula: massa de amostra = 30/% de monoster esperado na amostra. Dissolva a amostra com pequenos volumes de acetato de etila, triturando-a aps cada adio com basto de vidro. Transfira cada um dos volumes do sobrenadante para um funil de separao, filtrando se necessrio, at a dissoluo total dos monoglicerdios em 50 mL do solvente. Extraia com trs pores de 15 mL de Na2SO4 a 10% agitando vigorosamente aps cada adio e colete o extrato aquoso, da camada inferior do funil de separao, em um frasco Erlenmeyer de 250 mL com tampa. Receba o extrato em acetato de etila da camada superior, em outro frasco Erlenmeyer. Lave o funil de separao
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com duas pores de 5 mL de cido actico, recebendo-as no frasco Erlenmeyer com o extrato em acetato de etila. Prepare uma prova em branco com 50 mL de acetato de etila e 10 mL de cido actico em um terceiro frasco Erlenmeyer. Adicione 50 mL de soluo de cido actico-peridico nos trs frascos Erlenmeyer, tampe-os, agite-os bem e coloque-os em banho-maria por 45 minutos no escuro, em temperatura no superior a 50C. Aps este tempo, retire os respectivos frascos do banho-maria, adicione 10 mL de soluo de KI a 25% em cada um e titule-os com soluo de Na2S2O3 0,4 M, usando amido como indicador. Nota: no caso de se usar 25 mL de soluo de cido actico-peridico e titular com bureta de 25 mL, utilize metade da massa calculada acima. Clculo
Nota: utilize os fatores 2,68 e 2,99, para expressar o resultado, respectivamente, em -monoacetato de glicerila e -monoestearato de sorbitana
Nota: utilize os fatores 1,52 e 1,21, para expressar o resultado, respectivamente, em propilenoglicol livre e sorbitol livre B= mL de Na2S2O3 0,4 M, gastos na prova em branco. A= mL de Na2S2O3 0,4 M, gastos na titulao da amostra f = fator da soluo de Na2S2O3 0,4 M P= massa da amostra Referncia bibliogrfica CRAM, D.J.; HAMMOND, G.S. Organic Chemistry, Mc Graw-Hill Book Company Inc. 1964. p. 546-547. 148/IV Realador de sabor Identificao de glutamato de sdio Material Pipeta de 1 mL, proveta de 50 mL, bquer de 100 mL, banho-maria, balana analtica e balo volumtrico de 100 mL.
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Reagentes Ninidrina (tricetohidrindeno hidratado) Dissolva 200 mg de tricetohidrindeno hidratado (C9H4O3 H2O) em gua at 100 mL. Prepare a soluo no dia do uso. Acetato de sdio Procedimento A 1 mL da soluo aquosa da amostra diluda em 1:30 (em glutamato de sdio), adicione 1 mL de ninidrina e 100 mg de acetato de sdio e aquea em banho-maria por 10 min. Uma intensa cor violeta azulada formada. Referncia bibliogrfica COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chemicals Codex. 4. ed., Washington D.C.: National Academic Press, 1996. p. 260. 149/IV Identificao de bromatos pelo mtodo direto O bromato identificado direta ou indiretamente em preparados para produtos de panificao, melhoradores de farinha ou outras formulaes de aditivos para panificao. Material Balana semi-analtica, agitador magntico, barra magntica, rotavapor, placas para cromatografia em camada delgada de slica gel 60G, papel de filtro qualitativo, bqueres de 100, 250 e 1000 mL, basto de vidro, funil de vidro, provetas de 25, 50 e 200 mL, tubo capilar de vidro para cromatografia, cuba de vidro para cromatografia e pulverizador. Reagentes Butanol Propanol lcool Orto-tolidina Sulfato de zinco cido clordrico Hidrxido de sdio Bromato de potssio Soluo de bromato de potssio a 1% m/v.
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Soluo de orto-tolidina a 0,02% em lcool Soluo de cido clordrico em lcool na proporo 25:65 Soluo de sulfato de zinco 20 g/L. Soluo de hidrxido de sdio 0,4 M Antiespumante: por exemplo, dimetil silicone Procedimento - Para amostras slidas ou em pastas, siga o procedimento: transfira 200 mL da soluo de sulfato de zinco 20 g/L para um bquer de 1000 mL. Agite em agitador magntico com velocidade constante. Adicione aproximadamente 50 g da amostra, mantendo a agitao. Adicione 50 mL da soluo de hidrxido de sdio 0,4 M. Continue agitando por mais 15 minutos. Filtre em papel de filtro qualitativo. Concentre o filtrado em rotavapor com temperatura no superior a 70C. Adicione, se necessrio, uma gota de antiespumante ao filtrado. Reduza at um volume inferior a 50 mL. Aplique o concentrado, paralelamente ao padro, em placa de camada delgada de slica gel 60 G, numa cuba previamente saturada com a fase mvel butanol-propanol-gua na proporo de 1:3:1. Revele o cromatograma seqencialmente com a soluo de o-tolidina a 0,02% e cido clordrico em lcool na proporo de 25:65. Na presena de bromato aparecer uma mancha amarela em Rf 0,64, aproximadamente. Para amostras lquidas, aplique diretamente na placa de camada delgada e proceda como descrito acima. Referncia bibliogrfica YABIKU, H.Y.; KIMURA, I.A.; DIAS, N. A.; MARSIGLIA, D.A.P ZENEBON, O. .; Bromato de potssio em farinha de trigo e melhoradores de panificao. Bol. Inst. Adolfo Lutz, So Paulo, ano 6, n. 1, p. 4-6, 1996. 150/IV Identificao de bromatos pelo mtodo indireto com o reativo fucsina-bissulfito Aps a incinerao da amostra, realizada a identificao do brometo formado pela decomposio trmica do bromato. Material Balana semi-analtica, mufla, cpsula de porcelana, bquer de 50 mL, basto de vidro, pipetas graduadas de 1 e 5 mL e agitador magntico com barra magntica Reagentes gua oxigenada cido sulfrico Fucsina
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cido sulfrico 10% m/v gua oxigenada 30% m/v Soluo de brometo de potssio a 1% m/v Soluo descorada de fucsina a 0,1% m/v Dissolva 0,1 g de fucsina em pequenas pores de gua, triturando-a com basto de vidro, at atingir 100 mL. Adicione, com agitao, bissulfito de sdio em p at descorar totalmente a soluo. Caso a soluo no descore totalmente, filtre em papel de filtro contendo carvo ativado. Procedimento Incinere, aproximadamente, 50 g de amostra em uma cpsula de porcelana em mufla a 550C. Dissolva as cinzas obtidas em volume de cido sulfrico a 10% m/v suficiente para sua dissoluo, agitando com basto de vidro. Filtre, se necessrio. Em seguida, adicione 2 mL de gua oxigenada a 30% e 3 mL do reativo fucsina-bissulfito. Agite e aguarde aproximadamente 5 minutos. O aparecimento de colorao lils persistente, que pode aparecer em at 24 horas, indica a presena de brometos formados pela decomposio trmica do bromato. Faa paralelamente uma prova em branco com gua e uma prova com o padro de brometo de potssio a 1%. Referncia bibliogrfica YABIKU, H.Y.; KIMURA, I.A.; DIAS, N. A.; MARSIGLIA, D.A.P ZENEBON, O. .; Bromato de potssio em farinha de trigo e melhoradores de panificao. Bol. Inst. Adolfo Lutz, So Paulo, ano 6, n. 1, p. 4-6, 1996. 151/IV Identificao de bromatos por mtodo indireto com fluorescena Material Balana semi-analtica, mufla, estufa, cpsula de porcelana, placas para cromatografia em camada delgada de slica gel 60 G, papel de filtro qualitativo, bqueres de 100 e 250 mL, basto de vidro, funil de vidro, provetas de 25, 50 e 200 mL, tubo capilar de vidro para cromatografia, cuba de vidro para cromatografia e pulverizador. Reagentes Fase mvel: butanol-acetona-hidrxido de amnio (1:3:1) Soluo de cido actico glacial- gua oxigenada a 30% (10:1), recm preparada Soluo-padro de brometo de potssio a 1% m/v Soluo alcolica de fluorescena a 0,01% m/v Dissolva 0,01g de fluorescena em lcool a 50% at completar 100 mL.
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Procedimento Incinere, aproximadamente, 50 g da amostra em uma cpsula de porcelana. Dissolva as cinzas em 10 mL de gua. Filtre ou transfira o sobrenadante para outra cpsula de porcelana, reservando alguns mL para a cromatografia em camada delgada. Adicione uma gota de soluo de fluorescena a 0,01%, seguida de uma gota da mistura de cido actico glacial em gua oxigenada e evapore em banho-maria at secura. Faa, paralelamente, uma prova em branco utilizando gua. O aparecimento de uma colorao rsea persistente pode indicar a presena de brometos. Para confirmao, aplique a poro restante do sobrenadante em placa de camada delgada de slica gel 60 G com a fase mvel butanol-acetona-hidrxido de amnio (1:3:1), correndo paralelamente o padro de brometo de potssio a 1%. Revele com a mistura de partes iguais das solues de fluorescena a 0,01% e cido actico em gua oxigenada. Coloque em estufa a 105C, at o aparecimento de manchas. Na presena de brometo aparecer uma mancha rsea em Rf aproximado de 0,65, a qual pode aparecer em at 24 horas. Referncia bibliogrfica YABIKU, H.Y.; KIMURA, I.A.; DIAS, N. A.; MARSIGLIA, D.A.P ZENEBON, O. .; Bromato de potssio em farinha de trigo e melhoradores de panificao. Bol. Inst. Adolfo Lutz, So Paulo, ano 6, n. 1, p. 4-6, 1996. 152/IV Determinao de arsnio em aditivos O mtodo baseia-se, fundamentalmente, na liberao de arsina (um gs de odor desagradvel extremamente venenoso) a qual absorvida em uma soluo de dietilditiocarbamato de prata, formando um complexo de cor vermelha, cuja intensidade pode ser estimada a olho nu ou espectrofotometricamente. As reaes envolvidas so: As+5 + Sn+2 As+3 + Sn+4 (reduo do As+5 As+3) Zn0 + 2H+ Zn+2 + H2 (produo de H2 com adio de zinco metlico) 2 As+3 + 3 H2 2 AsH3 (formao de arsina) AsH3 + 6 (C2H5)2NCSSAg 6 Ag + 3 (C2H5)2NCSSH + [(C2H5)2NCSS]3As (complexo vermelho) Os metais ou sais de metais, a seguir mencionados, interferem na liberao da arsina: cromo, cobalto, cobre, mercrio, molibdnio, nquel, paldio e prata. O antimnio, que forma a estibina, (SbH3) o elemento que pode produzir interferncia positiva, porque d cor com o dietilditiocarbamato de prata. A estibina forma um complexo que tem mximo de absoro a 510 nm; entre 535 e 540 nm, a absorbncia deste
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complexo diminuda de tal maneira que os resultados de dosagem do arsnio no so alterados de uma maneira significativa. Por outro lado, o antimnio igualmente txico e indesejvel. Material Algodo hidrfilo, balana semi-analtica, aparelho para determinao de arsnio, frasco Erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada 24/40, bqueres de 10, 50, 150 e 600 mL, provetas graduadas de 100 mL, provetas graduadas de 100 mL com tampa, pipetas graduadas de 1, 2, 5 e 10 mL, pipetas volumtricas de 3, 5 e 10 mL, bales volumtricos de 100 e 1000 mL e frasco Kjeldahl de 800 mL. Reagentes cido sulfrico gua oxigenada a 30% cido clordrico Cloreto estanoso Iodeto de potssio Acetato de chumbo Piridina Dietilditiocarbamato de prata Trixido de arsnio Hidrxido de sdio Zinco granulado isento de arsnio
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Figura 2 - Aparelho para determinao de arsnio Soluo-padro estoque de arsnio Pese, com preciso, 0,132 g de trixido de arsnio finamente pulverizado e seco. Dissolva em 5 mL de soluo (1:5) de NaOH. Neutralize a soluo com cido sulfrico a 10% e adicione um excesso de 10 mL. Transfira para um balo volumtrico de 1 L e complete o volume com gua recentemente fervida. Soluo-padro de trabalho de arsnio No dia do uso, pipete 10 mL da soluo-padro estoque de arsnio para um balo volumtrico de 1000 mL, adicione 10 mL de cido sulfrico a 10% e complete o volume com gua recentemente fervida. Esta soluo contm 1 g de arsnio por mL. Conserve-a por at trs dias. Soluo de dietilditiocarbamato de prata 0,5% em piridina Pese 0,5 g de AgSCSN(C2H5)2
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em um balo mbar de 100 mL. Adicione piridina para dissolver e complete o volume. Conserve esta soluo at um ms, em frasco mbar. Soluo de cido sulfrico a 10% m/v Dilua, com as precaues habituais, 57 mL de cido sulfrico a 1000 mL com gua. Soluo de cloreto estanoso em cido clordrico - Dissolva 40 g de SnCl2.2H2O em 100 mL de cido clordrico concentrado. Conserve esta soluo at trs meses, em frasco de vidro. Soluo de iodeto de potssio a 15% m/v - Dissolva 15 g de iodeto de potssio em 100 mL de gua. Algodo contendo acetato de chumbo Embeba o algodo hidrfilo em uma soluo saturada de acetato de chumbo. Extraia o excesso de soluo e seque sobre vidro temperatura ambiente. Procedimento Instale o aparelho conforme a Figura 2. Introduza no tubo de absoro, com auxlio de pina, trs tampes de algodo nesta ordem: um hidrfilo, um embebido em soluo saturada de acetato de chumbo e outro hidrfilo. Dependendo da natureza da amostra, siga um dos seguintes procedimentos: no caso de substncias orgnicas que, em meio clordrico turvam, existe a necessidade da mineralizao por via mida; em caso contrrio (por ex. cido ctrico, cido lctico, cido actico, citrato de clcio, etc), a mineralizao no necessria. Em presena de sais de ferro (por ex. pirofosfato de ferro, citrato frrico amoniacal, sacarato de ferro, etc) adicione 1 g de cido ascrbico soluo de dosagem. O cido ascrbico reduz e complexa o ferro que interfere na liberao da arsina. Para matrias-primas solveis em meio clordrico, calcule a massa necessria para comparao com um padro conhecido de arsnio e dissolva de maneira a se obter sempre um volume final de (35 + 2) mL. Mineralizao por via mida Numa proveta com tampa, adicione 30 mL de gua oxigenada e 7 mL de cido sulfrico. Homogeneze e deixe em repouso uma noite. Pese a massa de amostra necessria (Nota 3) e transfira para o frasco Kjeldahl com auxlio da mistura: gua oxigenada/cido sulfrico. Aquea at que toda a gua oxigenada seja consumida (agite, de vez em quando). Esfrie. Caso a soluo ainda esteja escura, adicione mais gua oxigenada e aquea novamente. Quando houver forte desprendimento de fumaas brancas (SO3) e a soluo no mais escurecer, a mineralizao est terminada. Lave 3 vezes o frasco Kjeldahl com gua, aquecendo at reduzir o volume a mais ou menos 5 mL aps cada adio (caso a soluo escurea novamente, adicione mais gua oxigenada, aquea e lave novamente com gua (trs vezes). Esfrie o frasco e transfira a soluo para um frasco Erlenmeyer de 500 mL
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de boca esmerilhada. Lave as paredes do frasco Kjedahl e transfira para o frasco Erlenmeyer com auxlio de gua suficiente para completar o volume para 35 mL. Adicione, nesta ordem, nos frascos Erlenmeyer: 10 mL de cido clordrico, 2 mL da soluo de KI e 0,5 mL da soluo de cloreto estanoso. Conecte os tubos de absoro, agite e deixe repousar por 30 minutos temperatura ambiente. Pipete 3 mL da soluo de dietilditiocarbamato de prata em piridina nos tubos de absoro (parte superior). Aps os 30 minutos, introduza 4 g de zinco granulado nos frascos Erlenmeyer, conecte rapidamente os tubos de absoro nestes frascos, agite e deixe a reao ocorrer durante 45 minutos temperatura ambiente, compreendida entre 25C e 35C, com agitaes casuais de 10 minutos. A liberao de hidrognio deve ser regular e suficiente sem ser excessiva (a adio de uma pequena quantidade de isopropanol no frasco Enlermeyer pode melhorar e uniformizar a liberao do gs). Aps os 45 minutos, compare a intensidade de colorao nos tubos de absoro da amostra, branco e padro. A reao segue a Lei de Beer de 0 a 10 g de arsnio. possvel estabelecer uma curva-padro para um comprimento de onda mximo determinado entre 535 e 540 nm, com um espectrofotmetro ou colormetro, usando a soluo de dietiliditiocarbamato de prata em piridina como branco. Como a intensidade de colorao muito instvel, importante que se faa a medida em temperatura constante, no inferior a (25 + 2)C e logo aps os 45 minutos, tanto para as amostras como para os padres. Repetitividade: para comparao visual com os padres desenvolvidos conjuntamente com os testes, o limite visual de deteco de 0,2 mg/kg. Em trabalhos com espectrofotmetro, a diferena entre os resultados de duas determinaes executadas simultaneamente, pelo mesmo analista, no deve ser maior que 0,2 g. Nota 1 : necessrio fazer, conjuntamente com as determinaes, uma prova em branco (com os reagentes) e um padro de concentrao conhecida: prepare, simultaneamente, padres de 1, 2, 3, etc, g de arsnio por pipetagem de 1, 2, 3, etc., mL da soluo padro de 1 g/mL e dilua a aproximadamente 35 mL de gua. Nota 2: em presena de on frricos, o KI oxidado com liberao de iodo. Adicione um excesso de cloreto estanoso para uma reduo completa. A liberao de hidrognio da reao neste caso catalisada e acelerada. Nota 3: exemplo de clculo da massa de amostra a ser pesada: sabe-se por norma que o corante artificial pode conter no mximo 1 g de As por g de corante. Na dosagem comparativa usa-se um padro de 3 g de Arsnio. Desta maneira, a frmula que fornece a massa de amostra a ser pesada ser:
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ma = massa da amostra a ser pesada pa = padro para comparao n = limite de arsnio estabelecido na especificao de cada matria-prima Referncias bibliogrficas YABIKU, H. Y.; DIAS, N. A.; MARTINS, M.S. Estudo comparativo de mtodos usuais para determinao de arsnio. So Paulo, Rev. Inst. Adolfo Lutz, 49(1), p. 51-55, 1989. BABKO, A. K.; PILIPENKO, A. T. Photometric analysis. Methods of determining non-metals. Moscow: Mir Publishers. 1976. 374 p. COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX Food Chemicals Codex. 4. ed., Washington D. C.: National Academic Press, 1996. p. 755-757. 153/IV Determinao de benzo(a)pireno em aromas de fumaa e alimentos defumados Os hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPAs) representam um importante grupo de compostos qumicos, muitos dos quais tm elevado potencial carcingenico, dentre estas substncias, destaca-se o benzo(a)pireno , por ter sido o primeiro hidrocarboneto a ser identificado e reconhecido como carcingeno, e ser considerado um indicador da presena de outros do grupo. So formados principalmente devido combusto incompleta, altas temperaturas, de matrias orgnicas e esto distribudos no meio ambiente em baixas concentraes; podem ser encontrados em plantas terrestres e aquticas, solos, sedimentos, guas e na atmosfera. A contaminao nos alimentos normalmente resultado da defumao, contaminao dos solos, poluio do ar e da gua, processos de cozimento ou preparao de alimentos e dos aditivos alimentares. Este mtodo se aplica determinao de benzo(a) pireno em aromas de fumaa e alguns alimentos defumados, tais como: bacon, presunto, lingia, lombo, peru, chester, costela de boi, etc. Baseia-se na extrao do benzo(a)pireno, posterior separao e quantificao por CLAE em fase reversa, usando uma coluna analtica de octadecilsilano (C18) e detector de fluorescncia. Material Cromatgrafo lquido de alta eficincia, coluna analtica de 4,0 mm x 12,5 cm, Lichrosphere 100 RP-18 (5 m) ou equivalente, detector de fluorescncia, processador e registrador/ integrador de dados, balana analtica, processador de carnes ou equivalente, manta de aquecimento de 500 mL, rotavapor, membranas filtrantes descartveis de 0,45 m de dimetro de poro, filtros descartveis de 0,45 m de dimetro de poro, torpedo de nitrognio,
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pipetador automtico de 100 a 1000 L com respectiva ponteira, pipetador automtico de 1000 e 5000 L com respectiva ponteira, condensador de bola com junta esmerilhada 24/40, comprimento de 400 mm, funis de separao de 125, 250 e 500 mL com torneiras de teflon, balo de fundo chato de 250 mL com junta esmerilhada 24/40, coluna de vidro de 22 cm de comprimento, com reservatrio para 60 mL e torneira de teflon, funil de vidro, frascos de vidro tipo pra de 400 mL com junta esmerilhada 24/40, funil de Bchner, frasco concentrador graduado de 10 mL com tampa, seringas de 5 mL, bales volumtricos de 10, 50 e 100 mL e pipetas volumtricas. Reagentes gua ultra-pura lcool Metanol grau CLAE Acetonitrila grau CLAE 1,1,2-tricloro-1,2,2-trifluoretano (TCTFE) grau CLAE Dimetilsulfxido (DMSO) grau espectrofotomtrico Ciclohexano grau CLAE xido de alumnio 90, tamanho de partcula 70-230 mesh Slica gel 60 , tamanho de partcula 70-230 mesh Hidrxido de potssio Soluo-estoque Dissolva 1 mg de benzo(a)pireno (BaP) em 10 mL de ciclohexano e deixe em ultra-som por 15 minutos. Soluo-intermediria Pipete 0,5 mL da soluo-estoque, leve para um balo de 50 mL e complete o volume com acetonitrila-metanol (1:1). Soluo de trabalho Pipete 4 mL da soluo intermediria e leve para um balo de 100 mL, completando o volume com acetonitrila-metanol (1:1). Concentrao final de benzo(a) pireno: 0,04 g/mL. Alumina desativada Determine a perda aparente de peso da alumina, por aquecimento ao rubro com bico de Bnsen de 10 g de alumina em cpsula de porcelana ou platina tarada. Cubra a cpsula imediatamente e coloque em dessecador para esfriar, depois pese (as pesagens devem ser feitas rapidamente, pois a alumina adsorve imediatamente a gua atmosfrica). Calcule o contedo de gua. Descarte a alumina que tenha sido aquecida. Adicione suficiente quantidade de gua para molhar a alumina, desde que para o total de gua adicionado, se considere 10% do peso final da alumina desativada. Agite vigorosamente a alumina por 15 minutos e guarde em vidro mbar por no mnimo 4 horas antes do uso.
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Clculo
Y = quantidade de gua presente na alumina X = quantidade de gua a ser adicionada na alumina M = massa de alumina inicial Slica gel desativada Aquea pores de slica gel em frasco Erlenmeyer tarado a 160C por 16 horas e aquea tambm a tampa j tarada em um bquer. Remova o frasco Erlenmeyer da estufa, tampe imediatamente e esfrie em dessecador. Pese o frasco para determinar o peso da slica gel seca. Adicione quantidade suficiente de gua slica gel, desde que a soma das adies no ultrapasse 15% do peso final da slica gel desativada. Imediatamente tampe o frasco e agite vigorosamente por 15 minutos. Aguarde 4 horas ou mais antes do uso. Clculo
X = quantidade de gua a ser adicionada na slica; M = massa de slica inicial. Preparao da coluna cromatogrfica Adicione na coluna de vidro, contendo l de vidro na extremidade inferior, 5 g de slica gel desativada (contendo 15% de gua), 5 g de alumina desativada (contendo 10% de gua) e 10 g de sulfato de sdio, nesta ordem, batendo levemente durante cada adio. Lave a coluna com 50 mL de TCTFE. Pare o fluxo quando o nvel do lquido alcanar o topo da camada de sulfato de sdio Recuperao da coluna cromatogrfica Teste antes do uso. Prepare 2 colunas como descrito acima (uma coluna para o branco e uma para a recuperao). Adicione 40 mL de TCTFE uma coluna e outra adicione 40 mL de TCTFE contaminado com 2 mL de uma soluo de benzo(a)pireno (BaP) 0,25 g/mL. Deixe o solvente percolar as colunas e colete separadamente os eluatos em frascos tipo pra de 400 mL. Repita a eluio da coluna com duas pores de 25 mL de TCTFE. Deixe cada eluente escoar at o topo da camada de sulfato de sdio antes das prximas adies. Concentre as solues eludas de TCTFE a 5 mL em um rotavapor com banho-maria a 30C. Transfira os concentrados para um frasco concentrador graduado de 10 mL, com pipetador automtico ou pipeta tipo Pasteur. Lave cada frasco tipo pra com 3 pores de 1 mL de TCTFE e transfira para o frasco concentrador respectivo. ColoIAL - 275
que os frascos em um banho-maria a 30C e concentre as solues secura sob leve fluxo de nitrognio. Adicione 2 mL de acetonitrila-metanol (1:1) e leve ao ultra-som por 3 minutos. Filtre a soluo em membranas de 0,45 m. Submeta cromatografia lquida de alta eficincia. Os cromatogramas dos solventes devem estar livres de picos interferentes e a recuperao para o benzo(a)pireno (BaP) deve ser maior que 90%. Fase mvel Solvente A: acetonitrila-metanol (1:1) Solvente B: gua Filtre os solventes A e B atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique. Solventes para extrao gua saturada com TCTFE e gua saturada com ciclohexano. Em um funil de separao, sature a gua com o solvente especfico em excesso, agite e descarte a fase orgnica. Procedimento Ajuste o detector de fluorescncia para os seguintes comprimentos de onda: ex = 295 nm e em = 405 nm. Ajuste a proporo da fase mvel para 80% do solvente A e 20% do solvente B, o fluxo para 1 mL/min e a temperatura para 35C. Programe o gradiente da fase mvel como descrito abaixo: Tabela 10 Programao do gradiente da fase mvel
Tempo (min) 0 20 40 45 65 % Solvente A (acetonitrila-metanol 1:1) 80 100 100 80 80 % Solvente B (gua) 20 0 0 20 20
Triture a amostra e dissolva 25 g em 500 mL e m um balo de fundo redondo para ebulio, com algumas prolas de vidro. Adicione 100 mL de lcool e 4 g de hidrxido de potssio. Coloque o frasco na manta de aquecimento, adapte o condensador de bolas e deixe digerindo por 2 horas. Deixe esfriar temperatura ambiente. Coloque l de vidro em um funil e umedea com lcool, passe a soluo fria atravs da l de vidro e recolha o filtrado em um funil de separao de 500 mL. Faa lavagens seqenciais com 90 mL de gua saturada com TCTFE, 40 mL de TCTFE e 50 mL de lcool, recolha as solues no funil de separao de 500 mL. Feche o funil e ento inverta e abra a torneira enquanto agita suavemente o contedo por al276 - IAL
guns segundos para escape. Feche a torneira e extraia agitando o funil por 2 minutos. Deixe as camadas separarem e ento escoe a camada de TCTFE atravs da coluna cromatogrfica (como preparada anteriormente). Repita as extraes com 2 pores de 40 mL de TCTFE. Deixe cada extrato percolar a coluna e colete aproximadamente 300 mL em um frasco tipo pra. Quando o terceiro extrato atingir o topo da camada de sulfato de sdio, adicione 50 mL de TCTFE para lavagem da coluna e colete este eludo no frasco. Adicione 10 mL de DMSO soluo no frasco e evapore o TCTFE em um rotavapor com banho a 30C, deixando o DMSO. Transfira quantitativamente o concentrado de DMSO para um funil de separao de 125 mL, usando 5 mL de DMSO em pequenas pores. Lave o frasco com 50 mL e adicione as lavagens ao funil. Agite o funil para extrao por 2 minutos. Depois que as fases se separarem, descarte a camada inferior para um funil de separao de 250 mL contendo 25 mL de ciclohexano e 90 mL de gua saturada com ciclohexano. Repita a extrao de ciclohexano no funil de 125 mL com duas alquotas de 15 mL de DMSO. Adicione os extratos de DMSO ao funil de 250 mL, agite vigorosamente por 2 minutos para extrao. Depois da separao das fases, transfira a camada inferior para outro funil de 250 mL contendo 25 mL de ciclohexano e agite por 2 minutos para extrao. Depois da separao das fases, descarte a camada inferior, aquosa. Combine os dois extratos de ciclohexano no primeiro funil de 250 mL. Lave o segundo funil de 250 mL com duas alquotas de 10 mL de ciclohexano e adicione as lavagens ao primeiro funil de 250 mL. Lave a soluo, duas vezes, com suave agitao por 15 segundos com 100 mL de gua saturada com ciclohexano. Descarte a camada aquosa depois de cada lavagem. Coloque 10 g de alumina desativada (10% de gua) seguida por 50 g de Na2SO4 em um funil de Bchner de 60 mL. Lave com 50 mL de ciclohexano e descarte. Passe os extratos combinados de ciclohexano do funil de separao, atravs do funil de Bchner para um frasco tipo pra de 400 mL. Lave o funil de separao com duas alquotas de 25 mL de ciclohexano, e passe cada uma atravs do funil de Bchner para o frasco. Use um rotavapor com banho-maria a 40C, at reduzir o volume para cerca de (2-5) mL. Transfira o contedo quantitativamente para o frasco concentrador usando um pipetador automtico ou pipeta tipo Pasteur, utilizando 5 mL ou menos de ciclohexano para lavagem. Leve o contedo do tubo secura em banho-maria a 30C sob uma suave corrente de nitrognio. Leve para 2 mL com acetonitrila-metanol (1:1) e deixe no ultra-som por 3 minutos. Filtre o extrato para um flaconete de 2 mL. Injete 20 L do extrato de amostra ou da soluo-padro na coluna Lichrosphere 100 RP-18 (5 m) ou equivalente e inicie a programao de gradiente de fase mvel. Entre as injees, lave o loop de amostra. Compare os tempos de reteno do pico observado com o padro de benzo(a)pireno cromatografado sob as mesmas condies. Injete o padro a cada 3 amostras. Calcule a quantidade de benzo(a)pireno no extrato de amostra pelo procedimento de padro externo. Clculo
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Aa = rea do pico da amostra de benzo(a)pireno no extrato da amostra Ap = rea do pico de padro externo de benzo(a)pireno Mp = massa de padro externo de benzo(a)pireno na injeo Finalize o clculo, levando em considerao as diluies efetuadas e o peso inicial de amostra. Referncias bibliogrficas YABIKU, H.Y.; MARTINS, M.S.; TAKAHASHI, M.Y. Levels of benzo(a)pyrene and other polycyclic aromatic hydrocarbons in liquid smoke flavour and some smoked foods. Food Addit. and Contam., v. 10(4), p. 399-405, 1984. JOE Jr, F.L.; SALEMME, J.; FAZIO, T. Liquid chromatographic of trace residues of polynuclear aromatic hydrocarbons in smoked foods J. Assoc. Off. Anal. Chem., v. 67(6), p. 1076-1082, 1982.
Colaboradores: Iracema de A. Tamura; Maristela Satou Martins e Nelson Aranha Dias.

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Cap5 ADITIVOS

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= ndice de refrao temperatura de trabalho t = temperatura de trabalho t = 20C

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C = concentrao de nitrito de sdio encontrada na curva-padro a 355 nm P = massa da amostra 2. Em nitrato:

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A = Hidrxido de amnio-gua (1: 99) B = Cloreto de sdio a 2% em lcool a 50%

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A = absorbncia da soluo da amostra a = absortividade P = peso da amostra em g

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Tabela 2 - Caractersticas espectrofotomtricas de alguns corantes Colour Index

Absoro mxima no visvel (nm)

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Tabela 3 - Titulao com cloreto de titnio Corante

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dos corantes amarelo-crepsculo e bordeaux S, nos comprimentos (nm)

dos corantes bordeaux S e indigotina, nos comprimentos de

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dos corantes tartrazina e amarelo-crepsculo, nos comprimentos (nm)

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