Mtodos de Colorao em Microbiologia

Ziehl-Neelsen / Kinyoun Auramina O (Fluorocromo) Tinta da China (Tinta Nanquim)

Marcos Augusto
Instituto Clemente Ferreira SES-SP Hospital do Servidor Pblico Municipal -SP

BIOSSEGURANA
EPC EPI

COLETA : Amostras Viveis ou No

ESCARRO - 2 AMOSTRAS - 1- Consulta / 2- Manh

Conservao: 24 horas em Temperatura ambiente. 7 dias em refrigerao (2 a 8 graus )

URINA- Todo volume da primeira mico (manh) MNIMO 3 - MXIMO 6

No aceitar urina 24 horas (contaminao)

LQUOR, PLEURAL, ASCTICO, etc (Frascos estreis)

BIPSIA E MATERIAL DE RESSECO - NO ADICIONAR CONSERVANTES (FORMOL)

FEZES no aceitar, frequente falso POSITIVO, diagnstico se faz por bipsia.

LAVADO GSTRICO Crianas (Proc. Hospitalar)

ZIEHL-NEELSEN / KINYOUN lcool cido Resistente

Histrico da Colorao de Ziehl-Neelsen

Robert Koch s conseguiu sua colorao primria aps aproximadamente 270 tentativas Desenvolvida pelo bacteriologista alemo, Franz Ziehl (1857-1926) e pelo patologista alemo Friedrich Karl Adolf Neelsen(1854-1894), em 1882. Utilizado tambm na diferenciao de Bacilos Gram Positivos: lcool cido resistente (+) ou (-)

Fundamento da Colorao de Ziehl-Neelsen

Bactrias com paredes estruturalmente Grampositivas Modificao na parede: lipdeos em maior quantidade (cerca de 60% do peso seco da parede), entre eles os cidos miclicos. A ligao de alguns desses lipdeos com a Fucsina gera complexos responsveis pela Alcool cido Resistncia. Carter hidrofbico.

PAREDE CELULAR
GRAM (-)

GRAM (+)

COLORAO DE ZIEHL-NEELSEN

Fucsina
Fenicada a 0,3% Lavar com gua destilada

(5 minutos) 3 aquecimentos

lcool-cido
Clordrico 3%

(2 minutos)

Lavar com gua destilada

Azul de
Metileno a 0,1% (30 segundos)

Lavar com gua destilada

COLORAO DE KINYOUN

Fucsina
Fenicada a 4% Lavar com gua destilada

(20 minutos)

lcool-cido
Clordrico 3%

(2 minutos)

Lavar com gua destilada

Azul de
Metileno a 0,1% (30 segundos)

Lavar com gua destilada

RESULTADO - BAAR
NEGATIVO
No foram encontrados

BAAR em 100 campos

(+) Presena de menos de 1 BAAR por campo em 100 campos observados

(++) Presena de 1 a 10 BAAR por campo em 50 campos observados

(+++) Presena de mais de 10 BAAR por campo em 20 campos observados OBS: Diagnstico, 1 a 4 bacilos em 100 campos - ampliar para mais 100 campos. Resultado igual - negativo - cultura

Consideraes sobre a Colorao para BK

Mtodo de Ziehl-Neelsen:
Exame simples Rpido

Econmico
O mais utilizado no diagnstico da tuberculose pulmonar

Desvantagens: Necessita pelo menos de 5.000 bacilos por mililitro de amostra para ser positivo. Identifica o microorganismo apenas como BAAR. Existem outros BAAR sem ser o M. tuberculosis

Mycobacterium leprae
Agente etiolgico: Mycobacterium leprae (bacilo de Hansen) Descoberto por Hansen em 1873 No cultivado em vitro. O Brasil ocupa o segundo lugar em nmero de casos no mundo, apenas atrs da ndia. Os bacilos so vistos isoladamente ou em aglomerados chamados globias.

Mycobacterium leprae
O ndice Baciloscpico (IB), proposto por Ridley em 1962 (0) Ausncia de bacilos em 100 campos. (1+) Presena de 1 a 10 bacilos, em 100 campos. (2+) Presena de 1 a 10 bacilos, em cada 10 campos. (3+) Presena de 1 a 10 bacilos, em mdia, por campo. (4+) Presena de 10 a 100 bacilos, em mdia, por campo. (5+) Presena de 100 a 1.000 bacilos, em mdia, por campo. (6+) Presena de mais de 1.000 bacilos, em mdia, por campo . Os bacilos aglomerados e os contidos em globias no podem ser contados, porm,o seu nmero deve ser estimado. Globia Pequena - Apresenta em mdia 30 bacilos em seu corpo. Globia Mdia - Apresenta em mdia 60 bacilos em seu corpo. Globia Grande - Apresenta em mdia 100 bacilos em seu corpo.

Nocardia sp
Bactrias gram positivas do gnero Nocardia causadora da Nocardiose. Podem causar infeco localizada ou disseminada, mais freqentemente pulmo, pele e sistema nervoso central . Doena oportunista, acometendo pacientes portadores de imunossupresso sistmica, particularmente,da imunidade celular. Vive habitualmente na matria em decomposio que se encontra na terra. So transportadas atravs do ar contaminado com partculas de p e penetram nos pulmes ao respirar

Bacillus subtilis
Bactria gram-positiva. Saprfita, comum do solo e da gua. Esporulado, no patognico, graas sua termofilia utilizado no monitoramento e validao de ciclos de esterilizao

Rhodococcus sp
Causador da rodococose, um cocobacilo pleomrfico, gram-positivo e aerbio, que infecta humanos por via inalatria ou transcutnea e se manifesta como abscesso pulmonar. Poucas espcies do gnero so patolgicas.

Isospora Belli
Protozorio (Coccdeo) causador da isosporase Oocisto elipside, medindo em mdia 20 a 30m de comprimento e 10 a 19m de largura, com as extremidades afuniladas (regies polares), apresentando uma dupla parede lisa e hialina O Oocisto constitui a forma infectante da isosporase, pois eliminado nas fezes e possibilita a infeco por via fecal-oral As infeces humanas so geralmente assintomticas. No entanto, nos demais casos, h febre, diarria e clicas abdominais, sendo que em pacientes aidticos essas manifestaes tornam-se crnicas.

Cryptosporidium parvum
Protozorio (Coccideo) causador da criptosporidiose. Oocisto com estrutura geralmente esfrica de 3 a 6m de dimetro, com membrana externa fina e citoplasma finamente granulado. Descrito como parasito de animais inferiores em 1907. A infeco em seres humanos foi reconhecido em 1976, de ocorrncia rara. Em 1983 (AIDS) aumento no nmero de casos. Transmisso pela gua ou alimentos contaminados com oocistos eliminados nas fezes de seres humanos ou animais infectados.

PRINCIPAIS CAUSAS PARA QUE UMA AMOSTRA RESULTE FALSAMENTE POSITIVA

Partculas de alimentos Corantes precipitados Aquecimento excessivo Fibras (alimentares, vegetais, gaze) Riscos na lmina Utilizao da Fucsina sem filtrar Lente de imerso ou frasco conta-gotas do leo com
resduos de esfregaos positivos.

PRINCIPAIS CAUSAS PARA QUE UMA AMOSTRA RESULTE FALSAMENTE NEGATIVA

Coleta inadequada Conservao inadequada da amostra Preparao incorreta do esfregao (aquecimento excessivo ou
insuficiente na fixao)

Colorao inadequada (menor tempo de aquecimento da fuscina;

descolorao excessiva; corantes imprprios)

Erro de leitura (sobreposio e diminuio do nmero de campos

lidos)

Microscpio sem condies adequadas de uso/manuteno Presena de fungos nas lentes (embaamento)

MTODOS DE COLORAO

AURAMINA O

COLORAO DE AURAMINA O

Sol. de Auramina
Fenicada a 0,3% Lavar com gua destilada

(15 minutos)

lcool-cido
Clordrico

(2 minutos)

Lavar com gua destilada

Permanganato
de ptassio

Lavar com gua destilada

(2 minutos)

Consideraes sobre a Colorao para BK

Mtodo da AURAMINA O
Desempenho discutvel em termos de sensibilidade e exatido. Tempo de leitura menor. Recomendvel s para laboratrios que fazem mais de 100 baciloscopias por dia.
Exige

pessoal treinado e todas as lminas positivas precisam ser confirmadas por Ziehl Neelsen. O equipamento mais caro, portanto no est recomendado pelas II Diretrizes Brasileiras para a Tuberculose.

MTODOS DE COLORAO TINTA DA CHINA

Cryptococcus neoformans
Causador da Criptococose Levedura capsulada Infeco Primria no Homem via Pulmonar : inalao de propgulos de levedura Apresenta-se como infeco pulmonar, sistmica ou do SNC At anos 50 e 60 ocorrncias espordicas. Aumentaram com terapias imunossupressoras e na dcada de 80 com a AIDS. isolado frequentemente de fezes dessecadas de POMBOS; eventualmente em outras aves ou solo contaminado.

COLORAO TINTA DA CHINA

Os organismos so visualizados por contraste negativo, a cpsula rejeita as partculas deste corante, permitindo a observao das clulas descoradas sobre fundo negro. Cpsula possui composio Polissacardica Controle Negativo: Salina + Tinta da China Material capsular hidrossolvel Aquecimento induz a contrao celular criando uma zona ao redor do microrganismo (artefato) Ateno para artefatos como: Bolhas de ar , contaminantes (microrganismos ou partculas).

COLORAO TINTA DA CHINA

Material Biolgico

(1 gota)

Tinta Nanquim Preta + Lamnula

(1 gota)

Observar no aumento de 40 X

COLORAO TINTA DA CHINA

Caracterstica: Clulas Globosas ou em forma ovalada com cpsula polissacardica. Paredes espessas com contedo citoplasmtico globoso disperso no citoplasma, formados por substncias refringentes luz.

MTODOS DE COLORAO - Slides

Isospora belli

Mycobacterium leprae

Cryptosporidium parvum

Cryptococcus neoformans

MTODOS DE COLORAO - Slides

Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis

Cryptosporidium parvum

Mycobacterium tuberculosis FATOR CORDA

Muito Obrigado !

Marcos Augusto
Bilogo Espec. Anlises Clnicas markosaugusto@yahoo.com.br