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INSTITUTO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLGICAS - ICET ENGENHARIA INDUSTRIAL QUMICA ANLISE INSTRUMENTAL I

UNIDADE 1 CLASSIFICAO DOS MTODOS INSTRUMENTAIS

Profas. CARIN VON MHLEN E LIANE BIANCHIN

Eng. Industrial

Anlise Instrumental I

UNIDADE 1 CLASSIFICAO DOS MTODOS INSTRUMENTAIS INTRODUO A qumica analtica trata de mtodos para a determinao da composio qumica de amostras. Um mtodo qualitativo fornece informaes sobre a identidade das espcies atmicas ou moleculares da matria; um mtodo quantitativo fornece informaes numricas, tais como as quantidades relativas de um ou mais componentes. (Skoog, 2002). Anlise qumica: - Conjunto de tcnicas e manipulaes destinadas a propiciar o conhecimento da composio qualitativa e quantitativa de uma amostra, mediante mtodos de rotina. (P. Senise, 1993) Mtodos clssicos X Mtodos instrumentais Os mtodos analticos geralmente so classificados como sendo clssicos ou instrumentais. Esta classificao em grande parte histrica pois os mtodos clssicos, s vezes chamados de mtodos de via mida, precederam por um sculo ou mais os mtodos instrumentais (Skoog, 2002). Mtodos clssicos: envolvem medidas de massa, volume, reaes qumicas. Mtodos instrumentais: compreendem o uso de algum instrumento para monitorar qualquer alterao fsica nas espcies qumicas ou reaes (emisso ou absoro de luz, potencial eltrico, temperatura, corrente eltrica, condutividade, razo massa/carga, etc). A evoluo dos mtodos instrumentais deve-se ao desenvolvimento da eletrnica e da computao. Um instrumento para anlise qumica converte a informao armazenada nas caractersticas fsicas ou qumicas do analito em um tipo de informao que pode ser manipulada e interpretada pelo homem. Para conseguir a informao desejada do analito, necessrio fornecer um estmulo, que comumente tem a forma de energia eletromagntica, eltrica, mecnica ou nuclear, conforme est ilustrado na Figura 1. O estmulo obtm uma resposta do sistema em estudo, cujas natureza e intensidade so governadas pelas leis fundamentais da fsica e da qumica. A informao obtida est associada ao fenmeno que resulta da interao do estmulo com o analito (Skoog, 2002).

Figura 1. Instrumentos analticos. Domnios de dados O processo de medida auxiliado por uma variedade ampla de dispositivos que convertem a informao de uma forma outra. Para poder investigar como os instrumentos operam, importante compreender o modo no qual a informao est codificada, ou como transformada de um sistema de informao para outro, com 2

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caracterstica de sinais eltricos ou seja, como voltagem, corrente, carga ou variaes dessas grandezas. Os vrios modos de codificar a informao eletricamente so denominados domnios de dados. Um esquema de classificao foi desenvolvido, fundamentado neste conceito, que simplifica enormemente a anlise dos sistemas instrumentais e promove a compreenso dos processos de medidas. Conforme est mostrado no mapa de domnios de dados da Figura 2, pode-se estabelecer uma classificao geral para os domnios de dados em domnios no-eltricos e domnios eltricos (Skoog, 2002). 1 Domnios eltricos Domnios analgicos Domnios de tempo Domnios digitais 2 Domnios no eltricos Caractersticas fsicas e qumicas de interesse 3 Detectores, transdutores e sensores 4 Dispositivos de sada 5 Microprocessadores e Computadores

Figura 2. Domnios de dados (Skoog, 2002). CLASSIFICAO DOS MTODOS INSTRUMENTAIS. A Tabela 1 apresenta um resumo dos tipos de mtodos instrumentais (adaptada de Skoog, 2002). Alm desses apresentados na Tabela 1, existe um grupo de procedimentos instrumentais que so utilizados para a separao e resoluo de compostos, normalmente associados a cromatografia ou eletroforese. Uma ou mais das propriedades listadas complementam a anlise que segue a separao. Exemplo disso so os

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diferentes detectores utilizados em cromatografia, baseados, por exemplo, em condutividade trmica, absoro de radiao UV ou IV e ndice de refrao. Tabela 1. Propriedades fsicas e qumicas empregadas em mtodos instrumentais.
Propriedades Caractersticas Emisso da radiao Mtodos Instrumentais

Espectroscopia de emisso (raios X,UV, visvel, eltrons, Auger); fluorescncia, fosforescncia e luminescncia (raios X, UV e visvel) Espectrofotometria e fotometria (raios X, UV, visvel, IR); espectroscopia Absoro da radiao fotoacstica; espectroscopias de ressonncia magntica nuclear e de ressonncia de spin eletrnico Espalhamento da radiao Turbidimetria; nefelometria; espectroscopia Raman Espalhamento da radiao Espalhamento da radiao Difrao da radiao Rotao da radiao Potencial eltrico Carga eltrica Corrente eltrica Resistncia eltrica Massa Relao massa/carga Velocidade da reao Caractersticas trmicas Radioatividade Mtodos de difrao de raios X e de eltrons Polarimetria; disperso ptica rotatria; dicrosmo circular Potenciometria; cronopotenciometria Coulometria Amperometria; polarografia Condutimetria Gravimetria (microbalana de cristal de quartzo) Espectrometria de massa Mtodos cinticos Gravimetria e titulometria trmica; calorimetria diferencial exploratria; anlise trmica diferencial e mtodos de condutimetria trmica Mtodos de ativao e diluio de istopos

Para selecionar um mtodo analtico de forma inteligente, essencial definir claramente a natureza do problema analtico. Tal definio requer respostas para as seguintes questes: 1. Que exatido necessria? 2. Qual a quantidade de amostra disponvel? 3. Qual o intervalo de concentrao do analito? 4. Que componentes da amostra causaro interferncia? 5. Quais so as propriedades fsicas e qumicas da matriz da amostra? 6. Quantas amostras sero analisadas? Caractersticas de Eficincia dos Instrumentos - Figuras de Mrito A Tabela 2 lista os critrios de eficincia de instrumentos que podem ser usados para decidir se um determinado mtodo instrumental adequado na abordagem de um problema analtico. Essas caractersticas so expressas em termos numricos que so denominadas figuras de mrito. As figuras de mrito nos permitem restringir a escolha a relativamente poucos instrumentos para um dado problema analtico. A seleo entre estes poucos instrumentos pode ser baseada em critrios de eficincia qualitativa abaixo: 1. Velocidade 2. Facilidade e convenincia 3. Habilidade requerida do operador 4. Custo e disponibilidade do equipamento 5. Custo por amostra 4

Eng. Industrial Tabela 2. Figuras de Mrito Critrio 1. Preciso 2. Tendncia 3. Sensibilidade 4. Limite de deteco 5. Faixa de concentrao 6. Seletividade

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Figura de Mrito Desvio-padro absoluto, desvio-padro coeficiente de variao, variana. Erro sistemtico absoluto, erro sistemtico relativo. Sensibilidade de calibrao, sensibilidade analtica. trs vezes o desvio-padro do branco / inclinao da curva de calibrao. Limite de quantificao (LOQ) at a concentrao limite da linearidade (LOL). Coeficiente de seletividade. relativo,

TERMOS IMPORTANTES EXATIDO (accuracy): Grau de concordncia entre o resultado de uma medio e um valor verdadeiro do mensurando (analito). um conceito qualitativo e no deve ser confundido com preciso. PRECISO: Grau de concordncia entre os resultados obtidos.

ANALITO (ou mensurando): constituinte de uma amostra a ser determinado RUDO (background): proporo em uma medida decorrente de fontes diferentes daquela do analito AMOSTRA: Parte representativa do todo na qual se busca uma informao analtica MATRIZ: totalidade da amostra exceto o analito BRANCO: medida ou observao na qual a amostra substituda por uma matriz simulada (em condies de analise idnticas as da amostra) MTODO: descrio total das instrues para uma dada anlise PROCEDIMENTO: descrio das etapas prticas envolvidas em uma anlise. TCNICA: principio do qual um grupo de mtodos baseado CALIBRAO: o Procedimento para relacionar a resposta de um instrumento com a massa, volume ou concentrao do analito em uma amostra (uso de padres, curva de calibrao). o Determinao da exatido das marcas de graduao nos aparelhos volumtricos, pesos. CONCENTRAO: quantidade de uma substncia ou elemento presente em uma dada massa ou volume de amostra. 5

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LIMITE DE DETECO (LOD ou LD): a menor quantidade medida de um analito que pode ser determinado por um dado procedimento e com certo grau de confiana. Na prtica calculado com base no desvio-padro de medidas do branco. LD = 3 . sdbr / b Onde: LD= limite de deteco sdbr= desvio padro de 10 medidas do branco b = inclinao da curva de calibrao LIMITE DE QUANTIFICAO (LOQ ou LQ): definido como a menor concentrao do analito que pode ser quantificada na amostra, com exatido e preciso aceitveis, sob as condies experimentais adotadas. LQ = 10 . sdbr / b Onde: LQ= limite de quantificao sdbr= desvio padro de 10 medidas do branco b = inclinao da curva de calibrao CONCENTRAO LIMITE DA LINEARIDADE (LOL): Ponto mximo da curva de calibrao em que a resposta continua linear. REPETITIVIDADE: Grau de concordncia entre os resultados de medies sucessivas de um mesmo mensurando efetuadas sob as mesmas condies de medio. Estas condies so denominadas condies de repetitividade e incluem: - mesmo procedimento de medio; - mesmo observador; - mesmo instrumento de medio, utilizado nas mesmas condies; - mesmo local; - repetio em curto perodo de tempo. REPRODUTIBILIDADE: Grau de concordncia entre os resultados das medies de um mesmo mensurando efetuadas sob condies variadas de medio. As condies alteradas podem incluir: - princpio de medio; - mtodo de medio; - observador; - instrumento de medio; - padro de referncia; - local; - condies de utilizao; - tempo. ROBUSTEZ: sensibilidade do mtodo frente a variaes de fatores presentes na rotina analtica. SENSIBILIDADE: Capacidade do mtodo em distinguir, com determinado nvel de confiana, duas concentraes prximas. Sob o ponto de vista prtico, a sensibilidade constitui o coeficiente angular do grfico analtico. Em mtodos sensveis, uma pequena diferena na concentrao do analito causa grande variao no valor do sinal analtico medido. Esse critrio expressa a capacidade do procedimento analtico gerar 6

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variao no valor da propriedade monitorada ou medida, causada por pequeno incremento na concentrao ou quantidade do analito. Entretanto, tornou-se comum o uso errneo desse termo para designar mtodo com baixo limite de deteco. ETAPAS GERAIS DE UMA ANLISE QUMICA Uma anlise qualitativa ou quantitativa tpica envolve uma seqncia de etapas, conforme ilustrado na Figura 3.
Formular a questo Selecionar os procedimentos analticos Amostragem Preparao da Amostra Calibrao Anlise Relatrio e interpretaes Concluso/ao

Figura 3. Etapas gerais de uma anlise qumica PREPARAO DA AMOSTRA Estima-se que entre 65 e 85% do tempo e dos recursos financeiros so destinados etapa de preparo de amostra, em uma anlise laboratorial, conforme ilustrado na Figura 4.

65%

Preparo da Amostra Anlise da Amostra


15% 5% 15%

Aquisio dos Dados Interpretao dos Resultados

Figura 4. Distribuio percentual mdia do tempo envolvido em um ciclo analtico. Dependendo do estado fsico da amostra (slida, lquida, gasosa), concentrao dos analitos, tipo de matriz, presena de contaminantes, entre outros fatores, a tcnica de preparo de amostra poder ser diferente. Abaixo seguem alguns princpios de preparo de amostras mais utilizados. Injeo direta Anlise direta de slidos Suspenso 7

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Abertura Dissoluo Diluio Pr-concentrao Extrao Moagem, mistura, extrao Derivatizao Clean-up Eliminao de interferentes

CALIBRAO Conjunto de operaes que estabelece, sob condies especificadas, a relao entre as medidas obtidas pelo instrumento e a quantidade do analito. Os nicos mtodos que so absolutos e no necessitam de calibrao so a gravimetria e coulometria, uma vez que a relao entre a medida e a concentrao do analito pode ser calculada diretamente a partir de constantes fsicas conhecidas. Todos os outros mtodos analticos so relativos e necessitam de calibrao. Os mtodos mais comuns incluem as curvas de calibrao, uso de padres internos e mtodos de adio de padro. Curvas de Calibrao: Vrias solues de concentrao conhecida do analito so preparadas (padres) e introduzidas no instrumento. A resposta registrada e plotada em uma curva com o resultado da medida versus a concentrao do analito. Tambm chamadas de curvas de trabalho ou curvas analticas. A Figura 5 apresenta uma curva analtica tpica, linear em um intervalo significativo de concentrao. Geralmente so usadas curvas lineares por estarem menos sujeitas a erros do que as no-lineares e a equao ajustada curva de calibrao pelo mtodo dos mnimos quadrados. Muito importante: exatido com a qual so conhecidas as concentraes dos padres e a presena de concomitantes interferentes. A varivel independente (concentrao) corresponde ao eixo das abscissas. O Coeficiente de correlao (r) indica quo linearmente os valores de x e y esto correlacionados. Assume valores -1 r 1. Valores prximos da unidade indicam forte correlao (direta quando + e inversa quando -). A Figura 6 apresenta alguns exemplos de r. Regresso linear Onde a: intercepto b: inclinao (slope, sensibilidade) y = a + bx

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0,22 0,20 0,18 0,16

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Absorbncia

0,14 0,12 0,10 0,08 0,06 0,04 20 30 40 50 60 70

A 4.26667E-4 0.00177 B 0.00299 3.67644E-5 -----------------------------------------------------------R SD N P -----------------------------------------------------------0.9997 0.00154 6 <0.0001 ------------------------------------------------------------

pg Cd

Figura 5. Curva analtica plotada em regresso linear para a determinao de Cd em amostra de carvo mineral por GFAAS.

Figura 6. Exemplos de curvas de regresso linear e seus coeficientes de correlao.

Mtodos de calibrao externa: As curvas analticas so obtidas com solues de padres analticos, e a amostra analisada sob as mesmas condies. Esse mtodo mais utilizado quando os efeitos de matriz e a presena de interferentes no so significativos. Mtodos de adio de padro: Particularmente til quando a amostra complexa, nas quais a probabilidade de efeito de matriz alta. Consiste na adio crescente de quantidades conhecidas do analito em pores de amostra. O sinal medido antes e aps a adio o padro. A Fig. 7 apresenta exemplo de curva de calibrao para o mtodo de adio de padro. Muito importante: a resposta deve ser LINEAR.

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Figura 7. Exemplo de curva de calibrao para o mtodo de adio de padro. (adaptado de RIBANI, 2004)

Mtodo do padro interno: Padro interno (PI) um composto, geralmente com caractersticas estruturais similares ao analito, adicionado aos padres de calibrao e amostras em concentraes conhecidas e constantes, para facilitar a determinao do analito. Muito usado em cromatografia, pode tambm ser aplicado a outras tcnicas. A padronizao interna pode ser empregada em espectrometria de absoro atmica, espectrometria de emisso tica com fonte de plasma indutivamente acoplado (ICP-OES) e espectrometria de massas com fonte de plasma indutivamente acoplado (ICP-MS) para compensar vrios tipos de erros sistemticos e randmicos. O princpio desse mtodo baseia-se na comparao de um ou mais sinais analticos (analito) com um ou mais sinais de referncia de elementos previamente selecionados (padro interno). Um padro interno deve ser adicionado aos brancos, solues de referncia e s amostras, ou quando presente na amostra, deve-se adicionar uma quantidade elevada desse elemento amostra para anular o efeito da concentrao original da amostra. Quando a padronizao interna usada, todos os clculos so baseados na suposio de que tanto o analito como o padro interno sofrem influncias similares da matriz da amostra e de que ambos so perturbados igualmente pelas alteraes nas condies instrumentais ou operacionais. (Fernandes et al., 2003).

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Figura 8. Exemplo de curva de calibrao obtida por padronizao interna. LITERATURA CITADA SKOOG, D. A.; HOLLER, F. J.; NIEMAN, T. A. Princpios de anlise instrumental. 5. ed. Porto Alegre, RS: Bookman, 2002. 836 p. ISBN 8573079762. SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos da qumica analtica. So Paulo, SP: Pioneira Thomson Learning, 2006. 999, ca 70 p. em vria ISBN 8522104360. BRITO, N. M.; AMARANTE JUNIOR, O. P.; POLESE, L.; Ribeiro, M. L. Validao de mtodos analticos: estratgia e discusso. Pesticidas: Revista de Ecotoxicololgia e Meio Ambiente v. 13, p. 129-146, 2003. FERNANDES, K.G.; MORAES, M.; GOMES NETO, J. A.; NBREGA, J. A.; OLIVEIRA, P.V. Padronizao interna em espectrometria de absoro atmica. Qumica Nova v. 26, n. 2, p. 249-252, 2003. CURRIE, L. A. Detection and quantification limits: origins and historical overview Analytica Chimica Acta v. 391, p. 127-134, 1999. CURRIE, L. A. Nomenclature in evaluation of analytical methods including detection and quantification capabilities (IUPAC Recommendations 1995). Analytica Chimica Acta v. 391, p. 105-126, 1999. RIBANI, M.; BOTTOLI, C.B.G, COLLINS, C.H. et al. Validation for chromatographic and electrophoretic methods. Qumica Nova v. 27, n. 5, p. 771-780, 2004.

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