Validao

e Incerteza
na
Medio Analtica

Pierre Morel
Ministrio da Sade
ANVISA / GGLAS

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Programao do Curso (Validao e Certificado de Calibrao)

z Princpios da prtica Analtica z Exatido

z Boas prticas de medio z Exerccio
z Confiabilidade metrolgica de z Robustez
um laboratrio z Validao em microbiologia

z Validao :

z Definio z Certificado de calibrao :

z Planejamento
z Pontos importantes
z Definies
z Relao custo-benefcio
z Objetivos
z Critrios de aceitao
z Contedo
z Guias
z Fluxograma
z Fluxograma
z Exerccios
z Estabilidade
z Especificidade/Seletividade
z Limite de quantificao
z Linearidade
z Exerccio
z Preciso
z Exerccio

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 Programao do Curso (Incertezas)
z Por qu calcular a incerteza ? z Quantificao dos componentes
z Contexto atual z Exemplo
z Referncias deste curso z Exerccio
z Desmistificao do Clculo de
Incertezas z Clculo da Incerteza combinada
z Vocabulrio Internacional de z Exemplo
Metrologia z Exerccio
z Bases de um Clculo de Incertezas z Clculo da Incerteza expandida
z Roteiro de um Clculo de z Exemplo
Incertezas
z Especificao do mensurando
z Exemplo z Anlise das contribuies
z Exemplo
z Identificao das fontes de
Incerteza : Diagrama de Ishikawa z Apresentao dos resultados
z Exemplo
z Exerccio z Como calcular Incertezas

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 Princpios da Prtica
Analtica

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 Os 6 Princpios
1. As medies analticas devem ser realizadas para satisfazer
um requisito acordado entre ambas as partes.
2. As medies analticas devem ser realizadas utilizando
mtodos e equipamentos que tenham sido testados de maneira
a assegurar que eles atendam o seu propsito.
3. O pessoal deve ser qualificado e competente para suas
tarefas.
4. H uma avaliao independente, a intervales regulares, da
performance do laboratrio.
5. As medies analticas realizadas em um laboratrio so
consistentes com aquelas realizadas em outro laboratrio.
6. As organizaes realizando medies analticas devem ter
procedimentos de Controle de Qualidade e Garantia da
Qualidade.

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 Boas Prticas de Medio

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 Boas Prticas de Medio
z Estabelea uma especificao clara dos requisitos
de medio.
z Realize uma amostragem apropriada.
z Utilize Pessoal competente e treinado.
z Utilize um mtodo de medio validado.
z Estabelea a rastreabilidade atravs de padres
de calibrao.
z Estime a incerteza da medio.
z Utilize o Controle de Qualidade (QC) e participe
de programas interlaboratoriais.
z Estabelea e mantenha um Sistema credenciado da
Qualidade (QA).

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 Confiabilidade Metrolgica
de um Laboratrio

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 Qualidade de um Laboratrio

Qualidade
Prazo
Cientfica

Custo
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 do produto
Qualidade ESPECIFICAES

Cientfica NECESSIDADES qual grandeza ?

Processo DE MEDIO qual incerteza ?
de
medio escolha mtodo
DISPONIBILIZAO escolha eqtos
analtica RECURSOS recursos humanos

manuteno eqtos
VIGILNCIA rastreabilidade
DO PROCESSO (calibrao/ padro)

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 3 ltimos passos para
completar o ciclo
metrolgico...

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 do produto
Qualidade ESPECIFICAES

Cientfica NECESSIDADES qual grandeza ?

Processo DE MEDIO qual incerteza ?
de
medio escolha mtodo
DISPONIBILIZAO escolha eqtos
analtica RECURSOS recursos humanos

manuteno eqtos
VIGILNCIA rastreabilidade
DO PROCESSO (calibrao/ padro)

1
VALIDAO

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Passo 1 Estabilidade
Especificidade
Seletividade
Limite de deteco
Limite de quantificao
Linearidade
Sensibilidade
Faixa de trabalho
Preciso
VALIDAO Exatido
Robustez
Sendo exigido, h tempo, no contexto de
todos os sistemas da qualidade
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 do produto
Qualidade ESPECIFICAES

Cientfica NECESSIDADES qual grandeza ?

Processo DE MEDIO qual incerteza ?
de
medio escolha mtodo
DISPONIBILIZAO escolha eqtos
analtica RECURSOS recursos humanos

manuteno eqtos
VIGILNCIA rastreabilidade
DO PROCESSO (calibrao/ padro)

1
VALIDAO
2
INCERTEZA DA MEDIO ANALTICA

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 Passo 2 Especificao do mensurando
Identificao das fontes de
Incerteza da incerteza
Quantificao dos componentes
Medio Clculo da incerteza combinada
Clculo da incerteza expandida
Analtica Anlise das contribuies

Clculo obrigatrio no contexto da

ISO 17025; a REBLAS comeou a dar
treinamento e a exigir estes clculos.

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Referncias principais para o Clculo de
Incertezas
9 GUM Guide to the Expression of
Uncertainty in Measurement (Guia para a
Expresso da Incerteza de Medio).

9 Quantifying Uncertainty in Analytical

Measurement (Eurachem / CITAC).(Ser
divulgado em breve em portugus pela
REBLAS)

9 Para comear :
www.qualincert.com.br

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 do produto
Qualidade ESPECIFICAES

Cientfica NECESSIDADES qual grandeza ?

Processo DE MEDIO qual incerteza ?
de
medio escolha mtodo
DISPONIBILIZAO escolha eqtos
analtica RECURSOS recursos humanos

manuteno eqtos
VIGILNCIA rastreabilidade
DO PROCESSO (calibrao/ padro)

1
VALIDAO
3 2
INCERTEZA DA MEDIO ANALTICA

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 Passo 3 : INCERTEZA vs TOLERNCIA
2 X Incerteza 2 X Incerteza

LIE LSE

No ? ? OK ? ? No

Outras situaes possveis :

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 O Cliente
e/ou o rgo Fiscalizador
Passo 3 e o Laboratrio de anlises
definem a aceitabilidade
do produto ou da situao em funo
da posio do resultado da anlise

Definio da frente a :

aceitabilidade tolerncia
nvel de incerteza

ltimo passo para fechar o ciclo da confiabilidade

metrolgica : o laboratrio fornece um servio
compatvel com as necessidades do Cliente.
Aps esta etapa, ciclo PDCA de melhorias
contnuas consideradas pertinentes.
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 do produto
Qualidade ESPECIFICAES

Cientfica NECESSIDADES qual grandeza ?

Processo DE MEDIO qual incerteza ?
de
medio escolha mtodo
DISPONIBILIZAO escolha eqtos
analtica RECURSOS recursos humanos

manuteno eqtos
VIGILNCIA rastreabilidade
Fechamento
DO PROCESSO (calibrao/ padro)
do Ciclo
Metrolgico
1
VALIDAO
3 2
INCERTEZA DA MEDIO ANALTICA

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 Validao

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Programao do Curso (Validao e Certificado de Calibrao)

z Princpios da prtica Analtica z Exatido

z Boas prticas de medio z Exerccio
z Confiabilidade metrolgica de z Robustez
um laboratrio z Validao em microbiologia

z Validao :
z Certificado de calibrao :
z Definio
z Planejamento
z Pontos importantes z Definies
z Relao custo-benefcio z Objetivos
z Critrios de aceitao z Contedo
z Guias z Fluxograma
z Fluxograma z Exerccios
z Estabilidade
z Especificidade/Seletividade
z Limite de quantificao
z Linearidade
z Exerccio
z Preciso
z Exerccio

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A Validao de um mtodo o
processo de conseguir uma evidncia
documentada que o mtodo capaz
de medir o que ele tem como
finalidade medir.

Poderemos ter confiana em

resultados de uma medio somente
se utilizarmos um mtodo de foras
e fraquezas conhecidas.

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 Planejamento geral de uma validao
I. Especificar os requisitos da medio.
II. Selecionar um mtodo apropriado.
III. A no ser que o mtodo j seja validado, avaliar as informaes a
respeito da validao e selecionar uma das opes seguintes :
1. Verificao de um mtodo previamente validado;
2. validao de mudanas pequenas de mtodos;
3. validao de mudana de um mtodo para outro;
4. formalizao da validao de um mtodo conhecido;
5. validao de um novo mtodo.
IV. Decidir do rigor da validao.
V. Planejar a validao.
VI. Realizar os experimentos;
VII. Avaliar as informaes obtidas.
VIII. Adaptar o mtodo s necessidades.
IX. Documentar mtodo e validao.
X. Utilizar o mtodo com confiana.

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 Pontos importantes de uma validao
1) Objetivo e criticidade da medio.
2) Descrio do mensurando.
3) Amostragem, manuseio e transporte da amostra.
4) Tolerncias do equipamento, tais como resoluo e sensibilidade.
5) Calibrao e rastreabilidade da medio.
6) Especificidade.
7) Seletividade.
8) Faixa de trabalho.
9) Linearidade.
10) Sensibilidade.
11) Limite de deteco.
12) Limite de quantificao.
13) Exatido.
14) Preciso.
15) Robustez.
16) Registro do estudo de validao.
17) Confirmao que o mtodo atende os requisitos.
18) Controle de mudanas.

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 Relao (custo X benefcio)
da validao
A validao precisa ser desenvolvida com
um rigor adequado :

Rigor demasiado Custo alto

Rigorinsuficiente O mtodo no
atingir os requisitos.
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 Critrio de aceitao

Primeiro passo na validao : estabelecer

critrios de aceitao para cada um dos
parmetros :
internamente ao laboratrio;
ou por norma;
ou por imposio do rgo Fiscalizador
ou Credenciador.

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 Guias da Indstria Farmacutica
Guia para validao de mtodos ICH Q2B Validation of
analticos ANVISA. Contempla: Analytical Methodology
Mtodos bioanalticos : Aplicvel a produtos farmacuticos
determinao quantitativa de e biolgicos
frmacos e/ou metablitos em 9Especificidade
matrizes biolgicas; 9Preciso
mtodos microbiolgicos e 9Exatido
imunolgicos. 9Linearidade
9 Especificidade / Seletividade
9Faixa de trabalho
9 Preciso
9Limite de deteco
9 Exatido
9Limite de quantificao
9 Linearidade
9Robustez
9 Faixa de trabalho
9 Limite de deteco
9 Limite de quantificao
9 Robustez

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 Fluxograma Validao Mtodo validado
Atende
No atende
Robustez
Mtodo
Atende
No atende
Exatido
Instvel
Estabilidade
Atende
Estvel No atende
No Preciso
especfico Especificidade
/Seletividade Atende
ou seletivo
Especfico ou seletivo No atende Faixa de
No atende trabalho
Limite
de quantificao Atende
os requisitos
No atende
Linearidade
Atende os requisitos

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 Validao
Estabilidade

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 Estabilidade (1/2)

z Solues suficientemente estveis durante o tempo de medio.

Amostras e padres testados por 48 horas,por exemplo.

Estabilidade freqentemente conforme temperatura e tempo.
Quantificao determinada e comparada com solues novas.
Se h um problema de estabilidade, devem ser pesquisadas
outras condies de estocagem ou aditivos.que melhorem a
estabilidade.

Aceitabilidade : por exemplo,

9 desvio de 2 % em relao a soluo nova;
9 para impurezas, desvio de 20%.

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 Estabilidade (2/2)
Mtodos bioanalticos (FDA):
z A estabilidade de um frmaco em um fluido biolgico funo :
das condies de armazenamento;
Das propriedades qumicas do frmaco, da matriz e dos recipientes.
z A estabilidade de um analito em um sistema particular de matriz
e recipiente relevante somente para este sistema e no deve
ser extrapolado para outros sistemas.
z Os procedimentos devem contemplar a estabilidade do analito :
durante a amostragem;
durante o manuseio;
aps um longo prazo (congelamento) e curto prazo (temperatura
ambiente), aps ciclos de congelamento e descongelamento, aps o
processo analtico.
As condies utilizadas nos ensaios de estabilidade devem
refletir as stuaes encontradas normalmente no dia-a-dia.

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 Validao
Seletividade
/Especificidade

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 Seletividade /Especificidade (1/4)

z Um mtodo especfico um mtodo que produz uma resposta para um

nico analito.
z Um mtodo seletivo um mtodo que produz uma resposta para um
analito particular sem interferncias de outros componentes na matriz.
z Sendo que h poucos mtodos especficos, consideraremos somente a
seletividade.
z Vrias ferramentas so utilizadas para alcanar a seletividade :
reao preliminar;
extrao;
diferenas de distribuio, de mobilidade ou permeabilidade;
deteco;
combinao de sensores; respostas baseadas sobre interaes
avaliadas matematicamente (quimiometria seletividade
computacional).

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 Seletividade /Especificidade (2/4)
Para obter a seletividade, pode-se, por exemplo :
analisar a matriz sem o analito, verificando que nenhum interferente acabe
eluindo no tempo de reteno do analito de interesse;
ou, se no houver possibilidade conseguir a matriz sem o analito, dopar a matriz
com possveis interferentes;
ou utilizar a estatstica : podem ser aplicados os testes F(Snedecor) de
homogeneidades de varincias e o teste t (Student) de comparao de mdias.
Prepara-se dois grupos de, no mnimo, 7 amostras de teste, um com a matriz e
o outro sem :
1) Faz-se o teste F par verificar se as varincias das amostras podem ser
consideradas iguais e compara-se F=(s1)2/(s2)2 (com s2>s1) ao valor de F
tabelado : se o F calculado for menor que o F tabelado, a matriz no tem
efeito importante sobre a preciso do mtodo.
2) se o F calculado for maior que o F tabelado, as varincias podem ser
consideradas desiguais e calcula-se t, comparando com t tabelado. Se o t
calculado for menor que o t tabelado, a matriz no afeta o ensaio. Se o t
calculado for maior que o t tabelado, poe-se concluir que a matriz tem um
efeito estatisticamente significante sobre o resultado do ensaio.
ou comparar as inclinaes das curvas de adio padro, um grupo de amostras
contendo a matriz e o outro grupo no incluindo a matriz. Se as curvas forem
paralelas, o mtodo seletivo.
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 Seletividade /Especificidade (3/4)

z Freqentemente, trata-se de uma propriedade qualitativa. Porm,

existem vrios modelos complexos que permitem quantificar a
seletividade.

z Em cada caso, a recuperao do(s) analito(s) de interesse deve ser

determinada (aceitvel, por exemplo, entre 80 e 120 %) e as
influncias de interferncias suspeitas devidamente mencionadas.

z Se a seletividade no for assegurada, a linearidade, a exatido e a

preciso estaro comprometidas.

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 Seletividade /Especificidade (4/4)
Guia para Validao ANVISA : Seletividade / Especificidade :
z Para determinao do teor de frmaco, analisar a soluo padro
do mesmo, em presena de quantidades conhecidas de possveis
interferentes (impurezas, excipientes, produtos de degradao),
demonstrando-se que os resultados no so afetados pela
presena de tais componentes.
z Na ausncia de padro de produto de degradao, sub-produto
ou impureza, comparar os resultados de anlise com os
resultados de anlises das mesmas amostras utilizando-se outro
mtodo bem caracterizado e validado. Quando apropriado,
nestes casos, submeter as amostras a condies de estresse :
luz, umidade, hidrlise e oxidao.

Mtodos bioanalticos (FDA):

z Obter anlises de amostras-branco de matrizes biolgicas
apropriadas de, pelo menos, seis fontes. Cada branco deve ser
testado para seletividade no limite de quantificao.

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 Validao
Limite de deteco

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 Limite de deteco (1/2)

z A menor concentrao de analito que produza uma resposta

detectvel acima do rudo do sistema.
z Quando medies so realizadas a nveis muito baixos de analito,
importante conhecer qual a concentrao a mais baixa que
pode ser detectada de maneira confivel pelo mtodo.
z Requisito particularmente para baixos nveis de analito.

O limite de deteco pode ser baseado :

em avaliao visual para mtodos no instrumentais;
na relao sinal-rudo para os mtodos mostrando o rudo da
linha de base. Esta relao determinada comparando os sinais
de amostras com concentrao baixa conhecida com aqueles de
amostras-branco. A relao sinal-rudo de 3 considerada como
aceitvel.

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 Limite de deteco (2/2)

ou no desvio-padro da resposta e da inclinao : LD = 3,3 s/S,

sendo que s o desvio-padro da resposta e S a inclinao da
curva de calibrao; s pode ser obtido a partir:
do desvio-padro do branco;
da curva de calibrao realizada a partir de amostras com
analito na faixa do limite de deteco. O desvio-padro
residual ou o intercepto com o eixo do y poder ser utilizado
como sendo o desvio-padro.
ou o valor do branco + 3 s
ou o valor do branco + t s (t : Student) para (n-1) graus de
liberdade.

Guia para Validao ANVISA : Limite de deteco:

A relao sinal-rudo de 2 a 3 considerada como aceitvel;
ou LD = 3,3 s/S.

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 Validao
Limite de quantificao

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 Limite de quantificao (1/2)

z A menor concentrao de analito que possa ser medida com nvel

aceitvel de incerteza (ou com exatido e preciso aceitveis).
z Requisito particularmente para baixos nveis de analito.

O limite de deteco pode ser determinado :

em avaliao visual para mtodos no instrumentais;
reduzindo a concentrao do analito at que a preciso do
mtodo no seja mais aceitvel.
na relao sinal-rudo para os mtodos mostrando o ruido da
linha de base. Esta relao determinada comparando os sinais
de amostras com concentrao baixa conhecida com aqueles de
amostras-branco. A relao sinal-rudo de 10 considerada como
aceitvel.
ou o valor do branco + 5 a 10 s

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 Limite de quantificao (2/2)
ou no desvio-padro da resposta e da inclinao : LD = 10 s/S,
sendo que s o desvio-padro da resposta e S a inclinao da
curva de calibrao; s pode ser obtido a partir:
do desvio-padro do branco;
da curva de calibrao realizada a partir de amostras com
analito na faixa do limite de deteco. O desvio-padro
residual ou o intercepto com o eixo do y poder ser utilizado
como sendo o desvio-padro.
ou estabelecendo uma curva (s versus concentrao) a partir
de :
vrios nveis de concentrao;
7 replicatas;

Guia para Validao ANVISA : Limite de quantificao:

A relao sinal-rudo de 5 considerada como aceitvel;
ou LD = 10 s/S.

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 Validao
Linearidade

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 Linearidade (1/4)
z A resposta do analito linearmente proporcional concentrao.
no mnimo, 5 nveis de concentrao para permitir detectar alguma
faixa no linear;
por exemplo, de 50 a 150 % da concentrao-alvo; ou de 0,05 a 2,5
% em caso de concentraes baixas;
em replicata (no mnimo, duplicata ou triplicata).
Aceitabilidade :
visual;
coeficiente de correlao > 0,999;
intercepto com o eixo y;
inclinao da reta (sensibilidade);
curva [(y/x)=f(x)] ou [(y/x)=f(Logx)] para identificar a linearidade,
especialmente na faixa de trabalho : obtem-se uma linha horizontal.

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 Linearidade (2/4)
Guia para Validao ANVISA : Linearidade :
z 5 concentraes diferentes;
z resultados analisados por mtodo estatistco apropriado, como,
por exemplo, a regresso linear pelo mtodo dos mnimos
quadrados;
z deve-se apresentar :
as curvas obtidas;
o coeficiente de regresso linear;
o intercepto da reta.

Mtodos bioanalticos (FDA):

Curva de calibrao :
para cada analito na amostra;
na mesma matriz que as amostras, dopando a matriz com
quantidades conhecidas de analito;

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 Linearidade (3/4)
y = a + bx

( xi x )( yi y )
N

Inclinao = b = i =1

( xi x )
N 2

i =1

Intercepto = a = y bx

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 Linearidade (4/4)
S xy
Coeficiente decorrelao = r =
S xx S yy
com :
1
S xx = x ( x )
22
N
1
S yy = y ( y )
2 2

N
1
S xy = xy ( x )( y )
N
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 Validao
Faixa de trabalho

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 Faixa de trabalho
z Intervalo de concentrao com exatido, linearidade e preciso
aceitveis.
Intervalo obtido a partir dos ensaios de :
Linearidade, para obter a linearidade;
exatido para obter a exatido;
de preciso para obter a preciso;
ou de exatido para obter a preciso, esta sendo avaliada a partir dos
resultados em triplicata.
Aceitabilidade
9 Linearidade e exatido : mesmos critrios que aqueles j mencionados.
9 por exemplo : Preciso : > 97 % ; para impurezas : > 90 %

Guia para Validao ANVISA : Faixa de trabalho :

z Frmacos e medicamentos : 80-120 % da concentrao terica;
z uniformidade de contedo : 70-130 % da concentrao terica;
z teste de dissoluo : 20 % alm do intervalo especificado;
z determinao de impurezas : do nvel esperado at 120 % do
limite mximo especificado.

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 Validao
Preciso

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 Preciso
A preciso expressa o grau de disperso entre
medies independentes a partir de uma
mesma amostra, amostras semelhantes ou
padres sob condies definidas.

A preciso pode ser contemplada a dois

nveis:
z Repetitividade
z Reprodutibilidade

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 VIM Repetitividade (1/2)

Grau de concordncia entre os resultados

de medies sucessivas de um mesmo
mensurando efetuadas sob as mesmas
condies de medio.

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 VIM Repetitividade (2/2)

As condies de repetitividade incluem :

9 mesmo procedimento de medio;

9 mesmo observador;
9 mesmo instrumento de medio, utilizado nas mesmas
condies;
9 mesmo local;
9 repetio em curto perodo de tempo.

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 VIM Reprodutibilidade (1/2)

Grau de concordncia entre os resultados

de medies de um mesmo mensurando,
efetuadas sob condies variadas de
medio.

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 VIM Reprodutibilidade (2/2)
As condies alteradas podem incluir :

9 princpio de medio;
9 mtodo de medio;
9 observador;
9 instrumento de medio;
9 padro de referncia;
9 local;
9 condies de utilizao;
9 tempo.

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 Preciso (1/2)
z A preciso avaliada pela estimativa do desvio-padro :
1
(X j X )
n 2
s( X ) =
n 1 j =1
z ou pelo coeficiente de variao ;
s( X )
CV = 100
X
z No mnimo 10 determinaes em cada concentrao.

Aceitabilidade : conforme determinado previamente pelo

laboratrio.

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 Preciso (2/2)

Guia para Validao ANVISA : Faixa de trabalho :

z No mnimo 9 determinaes (3 concentraes com 3 rplicas ou
6 determinaes na concentrao mdia.
z Precises intracorrida e inter-corridas;
z Valor mximo de CV : 15 %

Mtodos bioanalticos (FDA):

Valor mximo de CV : 15 % e 20 % no L.Q.

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 Validao
Exatido

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 Exatido vs Preciso
Exato, Preciso,
porm porm inexato
impreciso

Inexato e
impreciso

Exato
e preciso

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 VIM Exatido de medio

Grau de concordncia entre o resultado de

uma medio e um valor verdadeiro do
mensurando.

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 Exato, Preciso,
porm porm inexato
impreciso

Erro
aleatrio

Erro
sistemtico
X
Exato
e preciso

Inexato e
impreciso
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 VIM Erro sistemtico

Mdia que resultaria de um infinito

nmero de medies do mesmo
mensurando, efetuadas sob condies de
repetitividade, menos o valor verdadeiro
do mensurando.

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 VIM Erro aleatrio

Resultado de uma medio menos a mdia

que resultaria de um infinito nmero de
medies do mesmo mensurando
efetuadas sob condies de
repetitividade.

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 Erro vs Erro sistemtico ERRO

Incerteza
Valor
verdadeiro
Erro aleatrio INCERTEZA

ERRO

INCERTEZA

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 Correo

INCERTEZA

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 Exatido (1/2)
z 3 maneiras de determin-la :
Analisando uma amostra de concentrao conhecida (padro) e
comparando o resultado ao valor verdadeiro;
comparando os resultados da anlise pelo novo mtodo ao
resultado por um mtodo de exatido conhecida;
dopando uma matriz branco com analito e calculando a taxa de
recuperao das quantidades conhecidas de dopante.

Amostras em triplicata;
Mnimo de 3 nveis (de 50 a 150 % ou de 80 a 120 %) da
concentrao-alvo; ou, para impurezas, de 0,1 a 2,5 % de
impureza.

Aceitabilidade (Exemplos)
9 Taxa de recuperao =100 2 %
9 para impurezas de 0,1 a 2,5 % : diferena de recuperao de 0,1
% absoluto ou 10 % relativo (o maior valor).

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 Exatido (2/2)
Guia para Validao ANVISA : Exatido :
z 3 concentraes (baixa, mdia e alta) com 3 rplicas cada;
z mesmo dia (exatido intradia) e em dias diferentes (exatido
inter-dias);
z Em uma mesma corrida analtica (exatido intracorrida) e em
corridas diferentes (exatido inter-corridas);

Concentrao mdia exp erimental

Exatido = 100
Concentraoterica

Mtodos bioanalticos (FDA):

No mnimo, 5 determinaes por concentrao.
Valor mdio dentro de 15 % do valor verdadeiro ou 20 % no L.Q.
recomendado um mnimo de 3 concentraes na faixa de
concentraes esperadas.

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 Exatido Taxa de recuperao (1/3)

Medio 1
Amostra Resultado R1
(R2 R1) Quantidade
medida
Medio 2
Amostra de dopante R3
Resultado R2
+ Dopante

Se R4 a quantidade adicionada de dopante, (R4 R3) = Erro

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 Exatido Taxa de recuperao (2/3)

Taxa de Re cuperao (%) =

( x
d x)
100
d
onde :
xd = mdia dos resultados de amostras dopadas
x = mdia dos resultados de amostras no dopadas
d = quantidade de dopante

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 Exatido Taxa de recuperao (3/3)
zA exatido depende da matriz, do processamento da amostra e da
concentrao de analito.
z Dados do manual AOAC (Peer verified Methods Program).

Unidade Recuperao mdia (%)

100 % 98-102
10 % 98-102
1% 97-103
0,1 % 95-105
100 ppm 90-107
10 ppm 80-110
1 ppm 80-110
100 ppb 80-110
10 ppb 60-115
1 ppb 40-120

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 Validao
Robustez

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 Robustez
z Capacidade de um mtodo permanecer inalterado frente a pequenas
alteraes nos parmetros, por exemplo :
Temperatura;
Tempo de extrao
pH;
concentrao de tampo;
volume de injeo;
diferentes colunas;
Velocidade do fluxo;
Composio da matriz;
etc...).
uma indicao da confiabilidade do mtodo durante seu uso normal.

Estes parmetros podem ser testados :

um por um;
ou simultaneamente via planejamento de experimentos (DOE).

Aceitabilidade : se os efeitos das alteraes no tornaram inaceitvel o

mtodo, estas alteraes sero incorporadas ao mtodo.

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 Validao
de mtodos em
Laboratrios de
Microbiologia

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 Validao em Microbiologia
A validao deve refletir as reais condies de trabalho.
Validao para o sistema (mtodo/analito/matriz).
Devem ser guardados os dados de validao dos kits.

Para mtodos qualitativos : Para mtodos quantitativos :

o especificidade;
o erro relativo;
o falso positivo;
o falso negativo;
o limite de deteco;
o efeito da matriz;
o repetitividade;
o reprodutibilidade.
o especificidade;
o sensibilidade;
o erro relativo;
o desvio positivo;
o desvio negativo;
o limite de deteco;
o limite de quantificao;
o efeito da matriz;
o repetitividade;
o reprodutibilidade.

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 Certificado de
Calibrao

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Programao do Curso (Validao e Certificado de Calibrao)

z Princpios da prtica Analtica z Exatido

z Boas prticas de medio z Exerccio
z Confiabilidade metrolgica de z Robustez
um laboratrio z Validao em microbiologia

z Validao :
z Certificado de calibrao :
z Definio
z Planejamento
z Pontos importantes z Definies
z Relao custo-benefcio z Objetivos
z Critrios de aceitao z Contedo
z Guias z Fluxograma
z Fluxograma z Exerccios
z Estabilidade
z Especificidade/Seletividade
z Limite de quantificao
z Linearidade
z Exerccio
z Preciso
z Exerccio

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 VIM - Calibrao
Conjunto de operaes que estabelece,
sob condies especificadas, a relao
entre os valores indicados por um
instrumento de medio ou sistema de
medio ou valores representados por
uma medida materializada ou um
material de referncia, e os valores
correspondentes das grandezas
estabelecidos por padres.
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 VIM - Ajuste

Operao destinada a fazer com que

um instrumento de medio tenha
desempenho compatvel com o seu
uso.

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 VIM Exatido de medio

Grau de concordncia entre o

resultado de uma medio e um
valor verdadeiro do mensurando.

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 Exato, Preciso,
porm porm inexato
impreciso

Erro
aleatrio

Erro
sistemtico
X
Exato
e preciso

Inexato e
impreciso
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Erro vs Incerteza Erro sistemtico ERRO

Valor
verdadeiro
Erro aleatrio INCERTEZA

ERRO

INCERTEZA

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 Principais objetivos da calibrao

1. Assegurar que as leituras de um instrumento

so consistentes com outras medies;

2. Determinar a exatido das leituras dos

instrumentos;

3. Estabelecer a confiabilidade do instrumento.

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Certificado de Calibrao

Contm informaes com o

propsito de garantir a
rastreabilidade das medidas.

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 Certificado de Calibrao
Deve:
z estabelecer a identidade e credibilidade do
Laboratrio de Calibrao;
z identificar de maneira nica o instrumento e o
seu proprietrio;
z identificar as medies realizadas;
z apresentar uma declarao no ambgua dos
resultados, incluindo uma declarao da
incerteza.

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Certificado de Calibrao

Informa sobre:
z o erro;
z a incerteza.

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 Certificado de Calibrao:
Informaes Necessrias 1/3
INFORMAES NECESSRIAS POR QU?
1. Ttulo: Certificado de Calibrao Para estabelecer o que o documento
pretende ser.

2. Nome e Endereo do Laboratrio de Para conhecer quem contatar para

Calibrao outras informaes.

3. Identificao nica do certificado, isto , Para poder ser rastreado todo o

um nmero de relatrio trabalho relacionado a calibrao e o
uso do instrumento.

4. Cada pgina deve ser numerada e o total Para saber se a informao est
de pginas informado. completa.
5. Nome e endereo do Cliente Para rastreabilidade

6. Identificao no ambgua do instrumento, Para saber ser o relatrio est

incluindo marca, modelo, nmero de srie e correto e o instrumento est
nmero de verso do software. completo.

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 Certificado de Calibrao:
Informaes Necessrias 2/3
INFORMAES NECESSRIAS
7. Data da calibrao ( e data de
recebimento quando isso for
crtico)
8. Identificao do mtodo de
calibrao usado ou descrio no
ambgua de qualquer mtodo no
padronizado usado, e/ou
modificaes a partir de mtodo
padronizado.
9. Condies nas quais a calibrao foi
realizada, por exemplo, temperatura
ambiental, condies operacionais e
opes de instrumentos.
10. Resultados de medies e
correlatos.
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POR QU?
Para saber at que ponto os resultados so
atuais.
Como os resultados foram obtidos? Como
estas e outras informaes se relacionam
s medies que eu realizo. Esta e a
prxima categoria de informao so
informaes importantes do relatrio: ler
com cuidado!
Para assegurar que voc pode reproduzir as
condies da calibrao e assegurar que os
resultados so aplicveis a sua situao.
Estes formam o corao do relatrio, o
investimento pago por estas informaes.
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 Certificado de Calibrao:
Informaes Necessrias 3/3
INFORMAES NECESSRIAS
11. Um enunciado da incerteza estimada
dos resultados da calibrao.
12. Assinatura(s) e nome da pessoa(s)
responsvel(ies) pelo contedo do
relatrio.
13. Declarao que o certificado no
pode ser produzido na ntegra, sem
aprovao por escrito do laboratrio.
14. Identificao da acreditao do
Laboratrio em NBR ISO 17025 na
calibrao.
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POR QU?
Para capacitar voc a calcular a incerteza
das suas medidas.
Para indicar que o relatrio foi realizado
de acordo com o sistema da qualidade do
laboratrio.
Para assegurar que todas as informaes
relevantes esto sempre disponveis para o
usurio do certificado, e que os dados do
certificado no podem ser corrompidos.
Para assegurar que o laboratrio
competente para prover todas as
informaes acima.
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 Resumindo:
Ttulo No. do Certificado
Nome e Endereo do Laboratrio de Calibrao
No. de Pginas
Nome e Endereo do Cliente
Identificao do Equipamento Datas
Mtodo do
relatrio
Condies nas quais a calibrao foi realizada
e da
Resultados de medies
calibrao
Incerteza estimada

Assinatura do responsvel
Declarao que o certificado no pode ser reproduzido
Identificao da Acreditao do Laboratrio para Calibrao

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 Fluxograma de Auditoria do Certificado de
Calibrao 1/3
Existe POP para a calibrao do equipamento? No Redigir

Sim
Neste POP constam os critrios de aceitabilidade
da calibrao do equipamento quanto ao erro No Determinar
permissvel?

Sim

Neste POP constam os critrios de aceitabilidade

da calibrao do equipamento quanto incerteza
permissvel?

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 Fluxograma de Auditoria do Certificado de
Calibrao 2/3
Neste POP constam os critrios de aceitabilidade calibrao do equipamento
quanto incerteza permissvel?
No

Esta incerteza um componente importante

Sim Determinar
da incerteza final?
Sim
No
Providenciar calibrao
Existe certificado de calibrao? No
e/ou certificado
Sim
A data est compatvel com o requisito do POP? No Calibrar
Sim
Providenciar
No
O certificado contm todas as informaes necessrias? outra cpia
Sim
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 Fluxograma de Auditoria do Certificado de
Calibrao 3/3
O certificado contm todas as Providenciar
No
informaes necessrias? outra cpia

Sim

O erro est dentro do permissvel? No Ajustar

Sim

A incerteza est dentro do permissvel? No Recalibrar

Sim

OK

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 Incerteza de
Medio

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 Programao do Curso (Incertezas)
z Por qu calcular a incerteza ? z Quantificao dos componentes
z Contexto atual z Exemplo
z Referncias deste curso z Exerccio
z Desmistificao do Clculo de
Incertezas z Clculo da Incerteza combinada
z Vocabulrio Internacional de z Exemplo
Metrologia z Exerccio
z Bases de um Clculo de Incertezas z Clculo da Incerteza expandida
z Roteiro de um Clculo de z Exemplo
Incertezas
z Especificao do mensurando
z Exemplo z Anlise das contribuies
z Exemplo
z Identificao das fontes de
Incerteza : Diagrama de Ishikawa z Apresentao dos resultados
z Exemplo
z Exerccio z Como calcular Incertezas

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 Por qu calcular a incerteza ?

z Os resultados analticos no so perfeitos

INCERTEZA DE MEDIO
z Possibilitar a tomada de deciso (aceitabilidade
por um Cliente ou um rgo Fiscalizador)

z Adaptar o Custo analtico Necessidade

z Assegurar a comparabilidade de resultados

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Rastreabilidade segundo o VIM

Propriedade do resultado de uma medio ou do

valor de um padro estar relacionado a
referncias estabelecidas, geralmente
nacionais ou internacionais, atravs de uma
cadeia contnua de comparaes, todas tendo
incertezas estabelecidas.

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 VIM Incerteza de medio

Parmetro, associado ao resultado de uma

medio, que caracteriza a disperso
dos valores que podem ser
fundamentalmente atribudos a um
mensurando.

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 rastreabilidade
comparabilidade

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 Contexto atual da incerteza de medio :
Documentos de base
Documento Origem Data

Recomendao INC-1 BIPM 1981

GUM Guide to the Expression of Uncertainty BIPM/IEC/IFCC/ 1993

in Measurement ISO/IUPAC/ 1995
IUPAP/OIML
Guia para a Expresso da Incerteza de Medio ABNT/Inmetro 08/2003
Guidelines for Evaluating and Expressing the NIST 1994
Uncertainty of NIST Measurements Results
Quantifying Uncertainty in Analytical Eurachem/CITAC 1995
Measurement 2000
NBR ISO/IEC 17025 ISO / IEC 1999
ABNT 2001
EA 4/16 EA Guidelines on the expression of European co-operation 12/2003
uncertainty in quantitative testing for Accreditation
APLAC-TC005- Interpretation and guidance on Asia Pacific 03/2004
the estimation of uncertainty of measurement Laboratory
in testing Accreditation
Cooperation

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 Referncias principais deste
curso
9 GUM Guide to the Expression of Uncertainty in
Measurement (Guia para a Expresso da Incerteza
de Medio).

9 Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement

(Eurachem / CITAC).

9 VIM Vocabulrio Internacional de Metrologia.

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Desmistificao do Clculo de Incertezas

S se aprende a desenvolver clculo de incertezas de

medio, calculando incerteza de medio.

No hesite ! Comea a calcular !

No necessrio conseguir um clculo perfeito na

primeira vez. Aprimora-se depois...

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 VIM - Mensurando

Objeto da medio.
Grandeza especfica submetida medio.

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 Bases do Clculo de Incertezas

z Um ERRO composto de erros sistemticos;

z A INCERTEZA composta principalmente de
erros aleatrios;
z A mdia dos valores medidos representa o
valor mais provvel;

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 Correo

INCERTEZA

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 VIM - Correo

Valor adicionado algebricamente ao

resultado no corrigido de uma medio
para compensar um erro sistemtico.

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 Erro vs Incerteza

Valor
verdadeiro

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 Bases do Clculo de Incertezas

z Um ERRO composto de erros sistemticos;

z A INCERTEZA composta principalmente de
erros aleatrios;
z A mdia dos valores medidos representa o
valor mais provvel;
z Os resultados em condies de
repetitividade apresentam uma distribuio
normal.

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 Distribuio normal

( x )2
1
f ( x) = e 2 2

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 Distribuio normal

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 Bases do Clculo de Incertezas
z Um ERRO composto de erros sistemticos;
z A INCERTEZA composta principalmente de erros
aleatrios;
z A mdia dos valores medidos representa o valor mais
provvel;
z Os resultados em condies de repetitividade
apresentam uma distribuio normal;
z A propagao das incertezas realizada
considerando distribuies normais e seus
respectivos desvios-padro.

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 Propagao como distribuies
normais
1

2

3

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 Roteiro do Clculo de Incertezas
1. Especificar o mensurando;
2. Identificar as fontes de incerteza;
3. Quantificar os componentes de
incerteza;
4. Calcular a incerteza combinada;
5. Calcular a incerteza expandida;
6. Analisar as contribuies de incerteza.

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Passo 1 : Especifiar o Mensurando
Declarar o que est sendo medido :
z passando por todas as fases intermedirias do
processo analtico;
z Mostrando :
a equao ou equaes sucessivas;
As unidades utilizadas nestas equaes, o que acaba
constituindo uma forma de validar estas equaes.

Definio do mensurando
Diagrama de blocos
Equao(es)

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?
Exemplo :

Determinao de cido flico

em farinha de trigo

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 Roteiro do Clculo de Incertezas
1. Especificar o mensurando;
2. Identificar as fontes de incerteza;
3. Quantificar os componentes de
incerteza;
4. Calcular a incerteza combinada;
5. Calcular a incerteza expandida;
6. Analisar as contribuies de incerteza.

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 Passo 2 : Identificar as fontes de
incerteza
z Elaborar simultaneamente o diagrama de
ISHIKAWA e a lista extensa de fontes de
incerteza, sem se preocupar por enquanto,
com a sua quantificao.

z O diagrama de ISHIKAWA inicia-se com os

termos da equao quando existe, e/ou com
os componentes mais importantes de
incerteza (dados da validao e/ou dados
principais de equipamentos), montando assim
as ramificaes principais.

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 Passo 2 : Identificar as fontes de incerteza
(continuao)

COMPONENTES DE INCERTEZA (Lista no exaustiva)

Origem Componente Exemplo

EQUAES Termos das equaes

Parmetros que no aparecem Amostragem

explicitamente
Preparao da amostra

Materiais de referncia Pureza

Incerteza

EQUIPAMENTOS Calibrao Incerteza

Erro (incluir na
incerteza
criteriosamente)

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 Passo 2 : Identificar as fontes de incerteza
(continuao)
COMPONENTES DE INCERTEZA (Lista no exaustiva)

Origem Componente Exemplo

EQUIPAMENTOS Dados do fabricante de Resoluo
instrumento
Exatido / Preciso

Linearidade

Compensaes de
temperatura, altitude,...
Vidraria Repetitividade

Caractersticas

Calibrao

Variao com
temperatura

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 Passo 2 : Identificar as fontes de incerteza
(continuao)
COMPONENTES DE INCERTEZA (Lista no exaustiva)

Origem Componente Exemplo

VALIDAO Repetitividade
INTRALABORATORIAL
Reprodutibilidade

Robustez

Exatido / recuperao
(incluir na incerteza
criteriosamente)

Curva de calibrao

VALIDAO Reprodutibilidade
INTERLABORATORIAL
Exatido (incluir na incerteza
criteriosamente)

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Passo 2 : Identificar as fontes de incerteza
(continuao)
z Diagrama de Ishikawa :
Evoluir em direo s extremidades das
ramificaes a partir dos efeitos principais.
Para cada ramificao, acrescentar fatores
contributivos at os efeitos se tornarem
desprezveis.
z Lista das fontes de incerteza, registrando
consideraes e hipteses.

Lista das fontes de incerteza;

Diagrama de ISHIKAWA.

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?
Exemplo :

Determinao de cido flico

em farinha de trigo

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 Soluo-padro HPLC Especificar o
mensurando

Identificar as
UV/Vis
fontes de
repe
incerteza

linearidade
Quantificar os
Componentes
Soluo de incerteza
me
[cido flico]
g/100g de Calcular a incerteza
amostra
combinada

Recuperao Calcular a incerteza

expandida

(Aa/Ap) Analisar as
contribuies
de incerteza
Concentrao amostra
injetada em g/mL

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 Roteiro do Clculo de Incertezas
1. Especificar o mensurando;
2. Identificar as fontes de incerteza;
3. Quantificar os componentes de
incerteza;
4. Calcular a incerteza combinada;
5. Calcular a incerteza expandida;
6. Analisar as contribuies de incerteza.

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 Passo 3 : Quantificar os componentes de
incerteza
Tipos de componentes de incerteza :
Os componentes de incerteza so de 2 tipos:

z Tipo A : So aqueles que so avaliados

atravs de uma srie de medies repetidas,
utilizando mtodos estatsticos.

z Tipo B : So aqueles que so avaliados

atravs de outros meios que no a anlise
estatstica de sries de observaes.

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Passo 3 : Quantificar os componentes de
incerteza (continuao)
Roteiro :
Estabelecer simultaneamente :

z A tabela de componentes de incerteza:

z O registro dos clculos para cada

componente, com respectivas consideraes
e hipteses.

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 Passo 3 : Quantificar os componentes de
incerteza (continuao)
Incerteza Tipo A :
Repetitividade com no mnimo, 10 medies :
z Mdia aritmtica : 1 n
q = qj
n j =1

z Desvio-padro experimental :
1
(q j q )
n 2
s(q) =
n 1 j =1

z Incerteza Tipo A = Incerteza padro

associada mdia =Desvio-padro experimental
da mdia :
s(q)
s(q ) =
Agncia Nacional n
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Passo 3 : Quantificar os componentes de incerteza
(continuao)
Principais distribuies Incerteza Tipo B
Desvio-padro s u=s

xc c/95 % de confiana u=c/2

xc c/99 % de confiana u=c/3

u=a/(3)1/2
xa sem especificar

2a dist e nvel confiana

xa (valores prximos u=a/(6)1/2

2a de x mais provveis)

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 Passo 3 : Quantificar os componentes
de incerteza (continuao)
Tabela de componentes

x Fonte Valor x Distribuio Fator Smbolo U(x) U(x)/x

de x Incerteza
Incerteza

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?
Exemplo :

Determinao de cido flico

em farinha de trigo

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 Roteiro do Clculo de Incertezas
1. Especificar o mensurando;
2. Identificar as fontes de incerteza;
3. Quantificar os componentes de
incerteza;
4. Calcular a incerteza combinada;
5. Calcular a incerteza expandida;
6. Analisar as contribuies de incerteza.

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 Passo 4 : Calcular a incerteza combinada
Equao geral com incertezas correlacionadas

2
y 2
n n 1 n
uc ( y ) = u ( xi ) + 2 ci c j u ( xi )u ( x j )r ( xi , x j )
i =1 xi i =1 j =1+1

onde :
y = f(x1, x2, ...,xn)

y
= ci : coeficente de sensibilidade : descreve
xi como o valor de y varia com as mudanas
nos parmetros x1, x2, etc...
r(xixj) : coeficiente de correlao (entre -1 e +1)

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Passo 4 : Calcular a incerteza combinada (continuao)
Equao geral com incertezas no correlacionadas

2
y 2
n
uc ( y ) = u ( xi )
i =1 xi
onde :
y = f(x1, x2, ...,xn)
y
= ci : coeficiente de sensibilidade : descreve
xi
como o valor de y varia com as mudanas
nos parmetros x1, x2, etc...

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Passo 4 : Calcular a incerteza combinada (continuao)
Clculos

Com ou sem equao disponvel, h 3 maneiras bsicas

de calcular a incerteza :

Mtodo por clculo de derivadas;

Mtodo por combinao de incertezas absolutas e

relativas;

Mtodo por simulao.

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Passo 4 : Calcular a incerteza combinada (continuao)
Mtodo por clculo de derivadas

2
n y 2 n 1 n
uc ( y ) = u ( xi ) + 2 ci c j u ( xi )u ( x j )r ( xi , x j )
i =1 xi i =1 j =1+1

2
y 2
n
ou : uc ( y ) = u ( xi )
i =1 xi

Este mtodo apresenta, em alguns casos, uma grande dificuldade.

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Passo 4 : Calcular a incerteza combinada (continuao)
Mtodo por combinao de incertezas absolutas e
relativas
Freqentemente, pode-se aplicar estas duas regras :

1. Para os modelos que incluem apenas uma soma ou

diferena de grandezas, por exemplo y=x1+x2+...:

2 2 2
uc ( y ) = u x1 + u x 2 ... + u xn
,ou seja, uma soma quadrtica de desvios-padro absolutos.

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 Passo 4 : Calcular a incerteza combinada
Mtodo por combinao de incertezas absolutas e
relativas (continuao)

2. Para os modelos que incluem apenas um produto ou

um quociente de grandezas,
por exemplo :
x1 x2
y=
x3 ... xn
2 2 2
u x1 u x 2 u xn
uc ( y ) = y + + ... +
x1 x2 xn
,ou seja, uma soma quadrtica de desvios-padro relativos.

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 Passo 4 : Calcular a incerteza combinada
Mtodo por combinao de incertezas
absolutas e relativas (continuao)
3. mais conveniente decompor o modelo matemtico
original em expresses, consistindo unicamente de
operaes cobertas por uma das regras acima.

( x1 + x2 )
Por exemplo, y= deve ser
( x3 + x4 )

decomposto em dois elementos :

( x1 + x2 ) e ( x3 + x4 )

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 Passo 4 : Calcular a incerteza combinada
Mtodo por combinao de incertezas
absolutas e relativas (continuao)

Este mtodo freqentemente o mais

conveniente para incertezas de medies
com muitas grandezas de entrada como o
caso na rea qumica.

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?
Exemplo :

Determinao de cido flico

em farinha de trigo

Incerteza combinada

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Passo 4 : Calcular a incerteza combinada (continuao)
Mtodo por simulao (Mtodo de Kragten)

Este mtodo muito cmodo mas apresenta limitaes:

z y equacionvel
VERIFICAR O RESULTADO
zy = f(xi) linear
z ou u(xi) pequeno em relao a xi

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 Roteiro do Clculo de Incertezas
1. Especificar o mensurando;
2. Identificar as fontes de incerteza;
3. Quantificar os componentes de
incerteza;
4. Calcular a incerteza combinada;
5. Calcular a incerteza expandida;
6. Analisar as contribuies de incerteza.

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Passo 5 : Calcular a incerteza expandida
Esta fase corresponde, conforme equao abaixo, em multiplicar
a incerteza padro combinada pelo fator de abrangncia k escolhido
a fim de obter uma incerteza expandida. A incerteza expandida fornece
um intervalo que abrange uma grande frao da distribuio de valores
que podem razoavelmente ser atribudos ao mensurando.
Intervalos de confiana :
zU = k uc 99,73 % : 3 : k=3

95,45 % : 2 : k=2
onde :
z U : Incerteza expandida
z uc : incerteza combinada
z k : Fator de abrangncia

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 Passo 5 : Calcular a incerteza expandida
(continuao)
Grau de liberdade efetivo

z Ao adotar o nvel de confiana de 95,45 % (

95%), k ser igual a 2 para quase todos os fins.
z Porm, quando o nmero de graus de liberdade
for pequeno, este valor de k dever ser
calculado, devido ao valor k=2, nestes casos, ser
insuficiente. Isto acontece na prtica quando a
contribuio dos componentes de tipo A
significativa em relao incerteza combinada.

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 Passo 5 : Calcular a incerteza expandida
Grau de liberdade efetivo (continuao)
z Calcula-se o grau de liberdade efetivo que o
nmero de graus de liberdade associado incerteza
padro combinada, utilizando a equao de Welch-
Satterthwaite : onde :
z ef : nmero de graus
de liberdade efetivo

( uc )
4
zi : nmero de graus

ef = de liberdade associado
a cada incerteza
n (u )
4

i z Tipo A : v = (n-1) (n:

i =1 i nmero de medies)
z Tipo B : v 6

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Passo 5 : Calcular a incerteza expandida (continuao)
Determinao do fator de abrangncia :
Tabela de Student para 95,45 % de confiana
ef t95(u) ef t95(u) ef t95(u)

1 13,97 10 2,28 35 2,07

2 4,53 12 2,23 40 2,06

3 3,31 14 2,20 45 2,06

4 2,87 16 2,17 50 2,05

5 2,65 18 2,15 60 2,04

6 2,52 20 2,13 80 2,03

7 2,43 25 2,11 100 2,02

8 2,37 30 2,09 > 100 2,00

Slide 087

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Passo 5 : Calcular a incerteza expandida (continuao)
Expresso da incerteza expandida

No mximo com 2 dgitos significativos.

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 Passo 6 : Anlise das contribuies
Se julgar pertinente, por exemplo em caso de incerteza
combinada (e consequentemente expandida) bastante
significativa, realizar uma anlise de contribuies de
incerteza (comparao entre os componentes); esta, se
necessrio, pode ser baseada em grficos retratando estas
contribuies, por exemplo :

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?
Exemplo :

Determinao de cido flico

em farinha de trigo

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 Apresentao dos resultados

R = q U
Acrescentar a observao de que a incerteza expandida
relatada baseada em uma incerteza padro combinada
multiplicada por um fator de abrangncia correspondendo a
um nvel de confiana de 95 % (ou 99 %).

Exemplo :

[x] = 1,2152 0,12 g/mL [x] = 1,22 0,12 g/mL

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?
CLCULO de INCERTEZAS da

DETERMINAO de CIDO FLICO

em
FARINHA de TRIGO

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?
CLCULO de INCERTEZAS da

DETERMINAO de FERRO em
FARINHA de TRIGO

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? Apresentao

CLCULO de INCERTEZAS
nas
GRANDEZAS de INFLUNCIA
em
ENSAIOS BIOLGICOS

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 Como clcular Incertezas
z calculando incertezas;

z analizando todos os dados disponveis e indo a procura de mais

dados se necessrio, junto ao fabricante de equipamentos,
fazendo novos ensaios de validao, etc...

z respeitando o roteiro, sem esquecer os diagramas de blocos e

de ISHIKAWA e a tabela de componentes;

z procurando equacionar;

z sendo muito atento coerncia de unidades;

z sendo rigoroso, no idealista.

z aprimorando, aprimorando, aprimorando...

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 Referncias
1. VIM Vocabulrio Internacional de termos fundamentais e gerais de
Metrologia.
2. The Manager Guide to VAM UK Departament of Trade and Industry, Valid
Analytical Measurement Program.
3. In-house method validation Bernard King VAM Bulletin 29.
4. A Practical Guide to Analytical Method Validation Mark Green. American
Chemical Society - 01/01/96.
5. ICH Q2A Text on Validation of Analytical Procedures 03/95.
6. Guia para validao de mtodos analticos jan/2002 ANVISA.
7. ICH Q2B Validation of Analytical Methodology 11/96.
8. Validao em anlise qumica Flvio Leite - 4a edio Ed. tomo.
9. Bioanalytical Method Validation FDA 05/2001.
10. Selectivity in analytical chemistry IUPAC Recommendations 2001.
11. Guia para Qualidade em Qumica Analtica ANVISA.
12. Orientaes sobre validao de mtodos de ensaios qumicos DOQ-CGCRE-
008 INMETRO Ver.01 maro 2003.
13. AOAC Manual for the Peer Verified Methods Program.
14. Acreditao para Laboratrios de Microbiologia Eurachem / Guia EA 04/10
15. Measurement Standards Laboratory (MSL). Nova Zelndia.
16. GUM Guide to the Expression of Uncertainty in Measurement (Guia para a
Expresso da Incerteza de Medio).
17. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement (Eurachem / CITAC).
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 Quando no est em nosso
poder seguir o que
verdadeiro, deveramos seguir
o que mais provvel.
Ren Descartes
Matemtico e filsofo
francs

1596-1650

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