Trabalho prático 4

Metabolismo dos aminoácidos.

Determinação da atividade da transaminase glutâmico-pirúvica (GTP)

Questões pós-aula
1. Faça um esquema da placa de cromatografia obtida.

2. Calcule os Rfs para os aminoácidos de referência.

3. Calcule o(s) Rf(s) da amostra A

4. Escreva a reação verificada em cada tubo. Nos tubos em que não se verifica reação, indique a razão

a) Tubo A (piruvato de sódio + L-glutamato)

Reação no sentido inverso
b) Tubo B (piruvato de sódio + L-leucina)
Sem reação, pois a GPT é específica, logo seria necessário L-glutamato e não L-leucina
c) Tubo C (piruvato de sódio + D-glutamato)
Sem reação, pois a GPT é esteroespecífica, logo seria necessário D-glutamato e não L-glutamato
d) Tubo D (L-glutamato + tampão fosfato)
Sem reação, pois a GPT necessita do par aminoácido/cetoácido correto logo seria necessário o cetoácido piruvato
e) Tubo E (L-glutamato + α-cetoglutarato)
Sem reação, pois a GPT necessita do par aminoácido/cetoácido correto, logo seria necessário piruvato para reagir
com o L-glutamato ou alanina para reagir com o α-cetoglutarato
f) Tubo F (L-alanina + α-cetoglutarato)
Reação no sentido direto
g) Tubo G (L-glutamato + L-alanina)
Sem reação, pois a GPT necessita do par aminoácido/cetoácido correto, logo seria necessário piruvato para reagir
com o L-glutamato ou α-cetoglutarato para reagir com a alanina
h) Tubo H (piruvato de sódio + α-cetoglutarato)
Sem reação, pois a GPT necessita do par aminoácido/cetoácido correto, logo seria necessário L-glutamato para
reagir com o piruvato ou alanina para reagir com o α-cetoglutarato
5. O que significa a reação ser reversível? Ilustre com um exemplo.
Uma reação que se pode dar em ambos os sentidos, isto é, no sentido de formação dos produtos (direto) ou no
sentido da formação dos reagentes (inverso). Um exemplo é o facto de a reação catalisada pela GPT ocorrer nos
tubos A e F, ocorrendo no sentido inverso e direto, correspondentemente
6. O que significa a enzima ser específica? Ilustre com um exemplo.
Uma enzima ser específica neste contexto significa que esta só atua quando está presente um par
aminoácido/cetoácido correto. Exemplos são as reações que foram catalisadas pela GPT nos tubos A e F, mas não
nos tubos D, E, G e H
7. O que significa a enzima ser estereoespecífica? Ilustre com um exemplo.
Uma enzima ser esteroespecífica significa que apenas catalisa reações em que o substrato é um isómero específico.
Um exemplo é o facto da GPT catalisar a reação no tubo A mas não no tubo C
8. Escreva, de um modo geral, uma reação de transaminação, mostrando quais os grupos que “migram” de um
composto para o outro.

9. Considere a reação de transaminação catalisada pela enzima GOT

Esboce o cromatograma que espera obter se incubar:

a) L-Aspartato e α-cetoglutarato na presença de GPT. Justifique.

Não ocorre reação, pois apesar do par aminoácido/cetoácido estar correto esta reação é catalisada pela GOT e não
pela GPT, logo obteríamos duas manchas: uma para o Aspartato e outra para o α-cetoglutarato
b) L-Aspartato e piruvato na presença de GPT. Justifique.
Não ocorre reação, pois não temos o par aminoácido/cetoácido nem para a reação catalisada pela GPT nem para a
reação catalisada pela GOT, logo obteríamos duas manchas: uma para o Aspartato e outra para o piruvato
c) L-Aspartato e piruvato na presença de GOT. Justifique.
Não ocorre reação, pois não temos o par aminoácido/cetoácido nem para a reação catalisada pela GPT nem para a
reação catalisada pela GOT, logo obteríamos duas manchas: uma para o Aspartato e outra para o piruvato
d) Oxaloacetato e D-glutamato na presença de GOT. Justifique.
Não ocorre reação pois temos o isómero errado do glutamato, sendo necessário o isómero L para ocorrer a reação
catalisada pela GOT, logo obteríamos duas manchas: uma para o oxaloacetato e outra para o glutamato
10. Porque é que o extrato de coração de vaca se encontrava congelado?
De modo a preservar a sua atividade até à realização da atividade prática
11. Qual a razão pela qual foram usados os padrões no cromatograma?
Para podermos comparar a posição das manchas obtidas e os Rfs calculados com os dos padrões, de modo a aferir
que compostos estavam presentes em cada tubo.
12. Para que foi usada a ninidrina?
A ninidrina foi usada para revelar as manchas na placa de TLC, visto que esta oxida aminas primárias presentes nos
aminoácidos formando um complexo púrpura visível
13. Qual a razão pela qual se usou o secador a quente?
Pois a reação da ninidrina com as aminas primárias ocorre muito lentamente à temperatura ambiente, logo o
secador de cabelo a quente foi usado para acelerar esta reação
14. Qual a fase móvel e qual a fase estacionária na cromatografia efetuada?
Fase móvel: mistura de propanol e amónia (7:3 v/v)
Fase estacionária: sílica presente na plana de TLC
15. O que é o Rf? De que fatores depende?
O Rf é o fator de retenção e depende da distância percorrida pelo solvente e da distância percorrida pelo analito,
que por sua vez depende da solubilidade, polaridade e tamanho do mesmo.