UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

LICENCIATURA: MÉDICO CIRUJANO
MÓDULO I: PIEL Y MÚSCULO-ESQUELÉTICO
MICROBIOLOGÍA PRÁCTICA II

PRÁCTICA 5: LEISHMANIA MEXICANA

GRUPO 1301

EQUIPO 3

ALUMNA:
LÓPEZ‌H
‌ ERNÁNDEZ‌‌ANA‌‌LIZBETH‌

DRA. ROSA IRENE MONDRAGÓN

FECHA DE ENTREGA: 17-2-2022

 CUESTIONARIO

1. Mencione el cuadro clínico de la úlcera de los chicleros.

Las úlceras son crónicas, sangrantes y afectan al cartílago, de manera que
va deformando las orejas.

2. Describa aspectos morfológicos del amastigote y promastigote de

Leishmania.
● Morfología del amastigote: Es ovalado o esférico, posee membrana
y un gran núcleo localizado en un extremo, aunque en ocasiones
también se encuentra en posición central. También cuenta con una
estructura, a veces muy evidente en los frotis, llamado cinetoplasto,
del cual también se forma el flagelo. Es inmovil, redondo y mide de
2.5-3.5 μm.
● Morfología del promastigote: Es alargado, mide entre 18 y 20 μm,
tiene su núcleo en un extremo y en el extremo contrario se localiza el
blefaroplasto o corpúsculo basal, de donde nace un flagelo corto,
anteronuclear.

3. Explique detalladamente el ciclo biológico del parásito.

Para el estudio del ciclo biológico se puede partir de un individuo que está
parasitado. En general, la localización de los parásitos en la leishmaniosis
(los amastigotes) están en las células del sistema fagocítico mononuclear. Lo
que varía de una especie a otra es el lugar donde se encuentran las células
parasitadas, es decir, L. mexicana se encuentra en células del sistema
fagocitico mononuclear localizadas en piel, L. donovani en las vísceras y L.
brasiliensis en la piel y las mucosas.Por esta razón se presentan diversos
cuadros clínicos. Esto significa que el ciclo biológico es el mismo para todas
estas especies.

Los amastigotes se multiplican dentro de las células infectadas. Cuando lo

requieren, rompen las células que los contienen, quedan libres e invaden
otras células. Se reproducen en estas y así se forma un ciclo. Si un mosquito
pica a un individuo infectado, junto con la sangre y el líquido circulante
aspirados, se lleva células parasitadas en cuyo interior tienen amastigotes o
incluso se llevan amastigotes libres, los cuales quedan libres en el intestino
del mosco. Específicamente, la hembra del mosquito, que requiere sangre
para el desarrollo de sus huevos, adquiere el parásito al ingerir sangre con
células infectadas del huésped. Los amastigotes en el intestino maduran y se
convierten en promastigotes procíclicos, que se adhieren al epitelio del
intestino medio y se transforman en promastigotes metacíclicos. Luego, el
parásito se desprende del epitelio intestinal y migra a la faringe y cavidad
bucal del díptero, o probóscide u órgano chupador o picador. Cuando el
díptero pica a otro huésped, le inocula los promastigotes metacíclicos. Por lo
tanto, la forma infectante del parásito es el promastigote, que se queda en el
tejido y rápidamente es fagocitado por macrolagos de la piel, células de
Langerhans o monocitos circulantes. Una vez, dentro de los fagolisosomas
de las células fagocíticas, los promăstigete, nuevamente se diferencian en
amastigotes, los cuales proliferan intensamente por fisión binaria llevando a
 la rotura de las células; penetran en otras células, el mosquito las adquiere
por picadura y se cierra su ciclo de vida.

4. Mencione los métodos de diagnóstico directos e indirectos para

Leishmaniasis. Las herramientas diagnósticas para las leishmaniasis varían
de acuerdo a las diferentes formas clínicas y debe hacerse para confirmar el
caso probable. Los métodos diagnósticos se clasifican de la siguiente
manera:
● Métodos directos:
➔ Impronta:
En México lo habitual es practicar una impronta, usando una laminilla
portaobjetos nueva, limpia y desengrasada, que se aplica una o varias
veces sobre el borde activo de la úlcera, previa asepsia y
levantamiento de la costra (en caso necesario), para obtener el
exudado. Estas impresiones se dejan secar y se fijan con metanol
absoluto, tiñéndose después con Giemsa para su observación
microscópica. En los primeros meses de evolución de LCL, el parásito
puede observarse en la impronta de las lesiones volviéndose difícil en
casos antiguos. Por lo anterior se debe seleccionar la lesión con
menor tiempo de evolución y sin infección. Tiene una sensibilidad de
50- 60 % para LC pero puede aumentar por la experiencia de quien la
toma. Es un procedimiento fácil, económico y rápido de realizar.
➔ Frotis o extendido:
El objetivo es visualizar las formas amastigotes de Leishmania, en
frotis de los materiales de linfa cutánea para LC y LM y aspirados de
médula ósea, ganglio o bazo para LVA, coloreadas con tinción de
Giemsa.Se considera positiva a toda muestra que presenta 1 forma
amastigote de Leishmania en por lo menos 1.000 campos observados,
utilizando el objetivo de 100 aumentos en el microscopio óptico. Se
debe observar el frotis por un mínimo de 1 hora para dar un resultado
negativo. En el caso de la LVA, si un frotis resulta negativo, se puede
aumentar la sensibilidad observando otros frotis del mismo paciente.
➔ Cultivo:
El cultivo del agente etiológico es determinante para el diagnóstico de
la leishmaniosis ya que en ello se puede observar la fase de
promastigote del parásito. Es un procedimiento más costoso y requiere
de tiempo para el diagnóstico (30 días o más) y tiene 70% de
sensibilidad. Su mayor utilidad es para el estudio epidemiológico y
conocer qué especies y subespecies de Leishmania están
involucradas. Son útiles para el diagnóstico los cultivos en el medio
bifásico Novy-Nicolle-Mac Neal (NNN), el cual se inocula con las
muestras obtenidas por raspado, biopsia, microbiopsia de lesiones o
médula ósea y se incuba entre 24 y 26%. Estos se revisan cada
semana al microscopio en busca de promastigotes.
➔ Biopsia:
Es un procedimiento más costoso y más demorado por ser un estudio
histopatológico. Consiste en la toma de una pequeña porción del
margen activo de la lesión, previa asepsia y anestesia local con
lidocaína al 2% vía subcutánea. Se recomienda que antes de su
 fijación con formol al 10% se hagan improntas, haciendo varias
impresiones de la muestra en la laminilla. La biopsia procesada y
teñida en la forma habitual, tiene una sensibilidad hasta del 80%,
mayor sensibilidad posee el aspirado de la lesión (microbiopsia)
colocada y teñida con Giemsa sobre una laminilla.
➔ PCR:
La técnica consiste en amplificar una región específica del ADN del
parásito mediante el uso de secuencias de oligonucleótidos que
funcionan como indicadores para la extensión de las nuevas cadenas
de ADN que se amplifican. Es un procedimiento costoso, cuya
sensibilidad y especificidad es elevada si se utilizan primers
apropiados. El material que se utiliza se puede obtener de raspado o
aspirado de la lesión, biopsia o sangre total.
● Métodos indirectos:
➔ Inmunofluorescencia indirecta (IFI):
Este método detecta anticuerpos específicos contra Leishmaniasis. La
toma de muestra es por medio de recolección de sangre, con posterior
separación del suero. El Instituto Nacional de Diagnóstico y Referencia
Epidemiológicos (INDRE) tiene implementada la prueba de
Inmunofluorescencia indirecta (IFI) que consiste en emplear como
antígeno un cultivo de Leishmania mexicana y un conjugado
fluoresceinado de anti-IgG humanas. Se llevan a cabo diluciones del
suero del sospechoso que se ponen en contacto con el antígeno y el
conjugado. Se leen con el microscopio de fluorescencia, todo suero
con título ³1:4 se considera positivo para LCL y LMC y ³1:32 para la L.
➔ Elisa:
Detecta anticuerpos específicos contra Leishmania en sangre. Se
realiza en laboratorio y la lectura de la prueba se hace en un
espectrofotómetro. La muestra se considera positiva cuando la
densidad óptica es igual o superior a la densidad óptica media de los
sueros controles negativos más dos desviaciones estándar.
➔ Prueba de Montenegro (IDR):
La IDRM es una prueba cutánea que mide la inmunidad celular en
contra de los antígenos de Leishmania, revelada por una induración.
Es un proceso de hipersensibilidad retardada (tipo IV), en el cual se
inyectan antígenos de Leishmania en la piel del paciente y después de
48 a 72 horas de la inoculación, se mide la induración producida por el
efecto inmunitario. La prueba detecta contacto previo del paciente con
parásitos del género Leishmania.

5. ¿En qué consiste la prueba de Leishmania y en qué tipo clínico de

Leishmaniasis es útil?
La Prueba de Montenegro o Leishmania consiste en la aplicación por vía
intradérmica de 0.1 ml de un antígeno de Leishmania (leishmanina) en la cara
anterior del antebrazo, debiendo efectuarse la lectura a las 48 o 72 horas en
la zona de aplicación. Se considera positiva la lectura cuando el diámetro de
la induración causada por la intradermorreacción es igual o mayor de 5mm.
La prueba es útil en caso de estar infectado por Leishmania cutánea o
Leishmania mucocutánea.
 REFERENCIAS
1. CENAPRECE. Manual para el diagnóstico, tratamiento y control de las
leishmaniasis. [en línea]. México: Secretaría de Salud; 2015. [consultado el
16 Feb 2022]. Disponible en :
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2. Canese A. Domingo J. Oddone R. Ministerio de Salud Pública y Bienestar

Social. Programa Nacional de Control de Leishmaniosis. Manual de
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2011. 27-34 p.

3. Montalvo A. Fraga J. Monzote L. García M. Diagnóstico de la leishmaniasis:

de la observación microscópica del parásito a la detección del ADN. Rev
Cubana Med Trop [en línea]. 2012. [consultado 15 Feb 2022]; 64(2).
Disponible en : http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375-
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4. Cabello R, Feregrino R, Feregrino RR.Microbiología y parasitología humana:

bases etiológicas de las enfermedades infecciosas y parasitarias [en línea]. 4
ed.Ciudad de México:Médica Panamericana; 2018 [citado 19 Ene
2021].Disponible en:https://www-medicapanamericana-
com.pbidi.unam.mx:2443/VisorEbookV2/Ebook/9786078546145