MANUTENÇÃO E CONSERVAÇÃO DE CEPAS

O laboratório de microbiologia deve assegurar a qualidade de todos os processos,

insumos e equipamentos utilizados no processamento de amostras, com o intuito de
que os resultados sejam os mais fidedignos possíveis.

As cepas utilizadas no controle de qualidade devem ser obtidas de fontes

confiáveis e que sejam rastreáveis. O mínimo de cepas a serem adquiridas é:

660672 - E.COLI LB 25922-1mL-FR 1UN

660673 - P.AERUGINOSA LB 27853-1mL-FR1UN
660674 - S.AUREUS LB 25923-1mL-FR 1UN

RECONSTITUIR CEPAS LIOFILIZADAS LABORCLIN

- Transferir para o frasco cerca de 1mL de meio TSB, aguardar aproximadamente

5 minutos e homogeneizar suavemente.
- Incubar o material em estufa bacteriológica a 35 a 37ºC por 4h com o intuito de
ativar a cepa.
- Semear o material ativado em meio não seletivo (TSA, Ágar Sangue, Água
Nutriente, etc.).
- Incubar o material em estufa bacteriológica a 35 a 37ºC por 18 a 24h.
- Analisar a pureza das colônias desenvolvidas e executar os procedimentos em que
se deseja realizar o controle da qualidade.

CONGELAMENTO

- Após a primeira semeadura do liofilizado, deve-se realizar mais um repique de

colônia isolada, e após incubação a 35 a 37ºC por 18 a 24h, as cepas devem ser
congeladas em meio crioprotetor, pois nele estarão protegidas contra o
descongelamento.

570202 - CRIOTUBO-TSB/GLICEROL-1mL-CX 6TB

- Realizar uma suspensão bem densa (bem esbranquiçada e turva) com a cepa a
ser conservada no Criotubo e homogeneizar, preferencialmente em vórtex, para
evitar grumos.
- Retirar o meio líquido com auxilio de uma pipeta estéril.
- Congelar os tubos em freezer (-20ºC) por até 2 anos para micro-organismos não
fastidiosos e até 1 ano para micro-organismos fastidiosos.
- Sugere-se que sejam feitos vários tubos para cada cepa a ser congelada.
- Identificar o Criotubo com nome e identificação da cepa, bem como da data da
semeadura.

Imunologia Laborclin produtos para laboratórios ltda

Microbiologia R. Cassemiro de Abreu 521 - Vargem Grande - Pinhais - Paraná
Bioquimica Fone/fax (41) 3661-9050 CEP 83.321-210
CNPJ 76.619.113/0001-31 - Inscrição Estadual 137.00129-26
Hematologia www.laborclin.com.br
OBS:
- Alguns micro-organismos conseguem sobreviver e manter suas características de
sensibilidade antimicrobiana por mais tempo.
- Bactérias fastidiosas são mais sensíveis ao congelamento como p. ex.
Streptococcus pneumoniae e Neisseria gonorrhoeae, neste caso é indicado a
adição de sangue de carneiro desfribrinado à suspensão.
- Para alguns micro-organismos é necessário adicionar antimicrobiano, p.ex.
penicilina (1µg/mL) para N.gonorrhoeae produtora de penicilinase, ou para
bactérias produtoras de ESBL onde existe risco de perda de plasmídeos.

DESCONGELAMENTO

- No momento do uso, retirar uma pérola do Criotubo e inocular diretamente em

meio não seletivo. Levar o Criotubo imediatamente para o freezer para evitar
descongelamento das outras pérolas.
- Incubar o material em estufa bacteriológica a 35 a 37ºC por 18 a 24h.

- Após descongelados, os tubo não devem ser re-congelados, pois este

procedimento pode alterar as características bioquímicas dos micro-organismos.
- Cepas congeladas devem ser repicadas, pelo menos por 2 vezes antes da
realização dos testes, pois no primeiro repique ainda encontram-se injuriadas.
- Após semedas em meios em placas ou em tubos inclinados, podem ser
armazenadas em refrigeração por no máximo 30 dias.

MANUTENÇÃO

- As cepas devem ser utilizadas no máximo até o 5º repique (ver certificado de

análise de cada cepa adquirida) para minimizar a contaminação e o potencial de
mutação e surgimento de linhagens diferentes da original.
- Aconselha-se fazer coloração de Gram e reações bioquímicas de identificação a
cada transferência.

MATERIAIS DISPONÍVEIS NA LABORCLIN

660672 - E.COLI LB 25922-1mL-FR 1UN
660673 - P.AERUGINOSA LB 27853-1mL-FR1UN
660674 - S.AUREUS LB 25923-1mL-FR 1UN
570202 - CRIOTUBO-TSB/GLICEROL-1mL-CX 6TB
510048 - TSB-CALDO-4mL-TB 13X100-CX 10TB
540162 - TSA-AGAR-20mL-PL 90X15-10PL

Imunologia Laborclin produtos para laboratórios ltda

Microbiologia R. Cassemiro de Abreu 521 - Vargem Grande - Pinhais - Paraná
Bioquimica Fone/fax (41) 3661-9050 CEP 83.321-210
CNPJ 76.619.113/0001-31 - Inscrição Estadual 137.00129-26
Hematologia www.laborclin.com.br