A coloração de Gram se baseia em algumas diferenças

estruturais existentes entre a parede celular de uma bactéria

Gram negativa e de uma Gram positiva.

A principal delas é que a parede celular de uma bactéria Gram

positiva, embora mais espessa, é quimicamente mais simples,
ou seja, apresenta predominantemente um único tipo de
macromolécula (90% peptidioglicano).
Já a parede celular de uma bactéria Gram negativa é mais
complexa. É formada por uma ou poucas camadas de
peptidioglicano e por uma membrana externa, separadas entre
si por um espaço periplásmico, contendo uma série de enzimas
e proteínas.

Enquanto nas Gram positivas o peptidioglicano representa de 15

a 50% da massa seca da célula, nas Gram negativas ele
representa no máximo 5%.
As bactérias Gram-negativas não fixam o composto iodo-pararrosalina e
se deixam descorar facilmente pela solução descorante (álcool etílico ou
álcool-acetona) e coram-se com o posterior tratamento pela safranina
(ou fucsina de Gram), por isso a coloração "rosa“ ou “vermelha”.
 *
A técnica consiste basicamente nas seguintes etapas:
Preparar uma lâmina de vidro com uma fina camada de bactérias fixa
(esfregaço);
Cobrir o esfregaço com cristal violeta por 1 minuto.
Enxaguar em água corrente;
Cobrir com lugol por 1 minuto.
Enxaguar em água corrente;
Descorar com solução de álcool-acetona por 30 segundos. Enxaguar em
água corrente;
Contra-corar com safranina (ou fucsina) por 30 segundos.
Enxaguar em água corrente.
Deixar secar ao ar.

1884- Christian Gram = rápida, baixo custo de diagnóstico do tipo de

parede celular da bactéria em estudo