01.

Qual a importância dos métodos de rompimento celular para a recuperação e

separação da biomolécula? Descreva os métodos de rompimento celular e
liste as vantagens e desvantagens de sua utilização.

O rompimento celular é aplicado após a separação e lavagem das células

métodos:
Mecânicos:
- Homogeneizador de alta pressão: Este tipo de rompimento provoca o aumento de
temperatura, precisa de sistema de refrigeração.
- Moinho de bolas: Consiste na passagem da suspensão celular por uma câmara de
trituração (vertical ou horizontal) provida de um eixo de discos de agitação e
preenchida com esferas de vidro O rompimento ocorre devido à força de
cisalhamento aplicada pelas esferas de vidro contra a parede celular das células
- Ultrassom: O rompimento ocorre quando ondas sonoras (~20kHz), são convertidas
em vibrações em um meio líquido e causam o fenômeno de cavitação (utilizado
somente em escala de laboratório

desvantagens: Elevadas forças de cisalhamento provocadas pelos rompimentos mecânicos

podem destruir organelas celulares e desnaturar enzimas. Além do fato que com o
rompimento integral das células todo o conteúdo intracelular (ácidos nucleicos, organelas e
fragmentos celulares) é liberado junto com a molécula alvo ( pode conter elevadas
quantidades de contaminantes e elevada viscosidade)

Não mecânicos:
- Choque osmótico: Não ocorre o rompimento total da célula. Permite a
permeabilidade seletiva da membrana celular e é indicado para bactérias gram
negativas pois possuem parede celular mais sensível. Ex de uso: encapsulação de
leveduras
- Congelamento e descongelamento: A célula passa por repetidos ciclos de
congelamento e descongelamento. É um processo demorado, de custo elevado e
inadequado para biomoléculas sensíveis ao congelamento. Indicado para
rompimento de patógenos
- Termólise: A elevação da temperatura da suspensão celular causa o rompimento.
Necessário cuidado para que a biomolécula-alvo não seja destruída. Vantagem:
gerar fragmentos celulares com maiores dimensões e, portanto, mais facilmente
removíveis por filtração ou centrifugação

Químico: Utiliza
- Álcalis: ideal quando a biomolécula alvo é estável a ph maior que 11. causam a
inativação de patógenos ou microorganismos geneticamente modificados, a
desvantagem é a geração de poluentes
- Detergentes: tem capacidade de dissolução de proteínas e lipoproteínas das
paredes celulares, formando poros e liberando as moléculas alvo. Desvantagem:
formação de espumas e pode desnaturar ou precipitar proteínas.
- Solventes: Atuam como desidratantes químicos das células.
02. O sistema de separação por membranas (SPM) é um processo de recuperação e
purificação de biomoléculas que dependem da força motriz e morfologia das
membranas filtrantes. Quais são os sistemas de separação e que se diferem entre si?

Separações de entre líquido/líquido e líquido/sólido: Microfiltração (MF);

Ultrafiltração (UF); Nanofiltração (NF); Osmose Reversa (OR).

MIcrofiltração:• É similar a uma filtração clássica que utiliza membranas sintéticas como
barreira seletiva; • Emprega membranas microporosas, isotrópicas ou anisotrópicas, com
tamanho de poros entre 0,05 a 5 µm • É empregada para reter partículas em suspensão,
tanto no ar quanto em misturas aquosas • São membranas totalmente permeáveis aos
compostos solúveis, independentemente do valor de suas massas molares;

aplicações Filtração estéril, tanto para líquidos quanto gases;

• Clarificação de vinhos e cervejas;
• É utilizada no tratamento de efluentes

ultrafiltração A pressão é usada para obter uma separação de moléculas utilizando uma
membrana polimérica semipermeável, que separa solutos de alto peso molecular como
proteínas e polímeros.

osmose: coloca-se uma membrana semipermeavel e de um lado temos o solvente e do

outro o soluto. Ocorre um transporte espontaneo de um solvente para um soluto, onde o
solvente flui para o soluto sob a pressão exercida pelo soluto (p. osmótica), na qual ocorre o
equilíbrio quando o potencial quimico se iguala

osmose reversa: reverter o fluco da solução para o solvente. Neste processo a membrana
impede a passagem de partículas de soluto de baixo peso molecular.
Aplicações:Dessalinização de águas marinhas e salobras;

Nanofiltração: utilizaz membranas anisotrópicas com limite de retenção entre 200 e 300
(sais e água)

03. Qual a função dos auxiliares de filtração no processo de separação? Cite três
materiais que podem ser utilizados como auxiliares de filtração.

Atuam reduzindo a compressibilidade ou a compactação da torta de filtração e, por

consequência, aumentam a permeabilidade do leito. Função: Proteção do meio filtrante;
Mudança das características da torta. Exemplos: perlita, carvão ativo

04. A extração líquido-líquido é empregada como alternativa a outros processos de

separação. Quando se pode aplicar esse sistema de separação? Descreva o
mecanismo da extração líquido-líquido. E qual sua importância para recuperação de
proteínas?
É o processo de separação que se utiliza da propriedade de miscibilidade de líquidos
A separação entre a molécula a ser purificada e os contaminantes decorre das diferentes
solubilidades apresentadas por esses solutos, em cada uma das fases A solução de
alimentação representa uma fase e o solvente a ser usado para efetuar a operação
representa a segunda fase. A transferência de massa do soluto líquido ocorre da solução de
alimentação para a fase solvente.

É utilizada quando se deseja remover de uma mistura de líquidos um ou mais componentes

(solutos) pelo contato direto com um líquido (solvente ou extratante) que é imiscível com a
mistura original e remove parcialmente os solutos desejados

05. A precipitação é uma das operações unitárias mais adotadas, tanto em escala
laboratorial quanto industrial, para purificação de proteínas de origem microbiana,
animal ou vegetal. Precipitados de proteínas são agregados de diferentes moléculas
proteicas, grandes o suficiente para sedimentarem sob alguma perturbação. Qual é o
princípio da precipitação para o processo de purificação de baixa resolução? Quais
são os processos de precipitação que podem ser adotados para recuperação de
proteínas e como eles se processam? Explique tais processos.
Componentes de mistura líquida ✓ Separados mediante contato com outro líquido ✓ Diferença de
solubilidade em solventes distintos ✓ Molécula extraída ser solúvel no solvente e os demais
insolúveis ✓ Transferência de massa → separação de fases

Técnicas de precipitação (reversível) de uma proteína presente em solução: ✓ A solubilidade da

proteína é reduzida por alteração do solvente: ✓ Diminuição na solubilidade por alterações na própria
proteína: Adição de altas concentrações de sais (sulfato de amônio), solventes orgânicos (etanol, éter
ou acetona), ou polímeros nãoiônicos (polietilenoglicol – PEG). Mudança de carga em virtude da
adição de ácidos, bases, precipitantes catiônicos ou aniônicos, no qual a adição em baixas
concentrações é efetiva

06. Qual é o princípio da sedimentação (gravitacional e centrífuga) de partículas ou

fluidos? Como é caracterizada a separação por centrifugação?

Centrifucação:Partículas em suspensão ou fragmentos de celulasem um meio líquido

sedimentam por ação daforça gravitacional. A centrifugação compreende a aceleração
dessa sedimentação por ação de um campo gravitacional centrífugo.

Inicialmente a partícula é acelerada pela força de flutuação resultante da diferença de

densidade entre a partícula e o fluido, a qual resulta da força da gravidade.
A partícula sofre redução da aceleração devido ao atrito entre ela e o fluido
Na centrifugação, a sedimentação é forçada, pois a força motriz é ampliada pela aplicação
da rotação angular.