Microbiologia Especial 03

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Microbiologia Especial
Vírus
Papilomavirus:
Pertencem à família Papillomaviridae (antigamente Papovaviridae) cujo o único

gênero é o Papillomavirus.
Deltapapilomavirus
Papiloma em bovinos
Xipapapillomavirus
-Características:
-Pequenos
-Não envelopados
-Oncogênicos (possuem genes que podem levar ao tumor)
-Partícula resistente ao meio ambiente e a solventes lipídicos,
-Genoma Viral: DNA fita dupla (dsDNA) circular de 7,3 a 8kpb.
-A maioria apresenta seis genes que codificam proteínas não-estruturais:

E1 a E7 (regulam processos de transcrição – proteínas precoces ‘early’). Duas proteínas
do capsídeo L1 e L2.
-São altamente espécie-tecido-específicos
-Difícil cultivo (porque se multiplicam in vivo no epitélio escamoso

estratificado, que não é reproduzido em culturas celulares monocamadas)
-Identificação por biologia molecular (PCR)
1
-Hospedeiros: bovinos, caninos, ovinos, felinos, aves, hamsters e eqüinos
-Distribuição: mundial
-Replicação:
-Adsorção as células basais do epitélio
-Receptor desconhecido
-Descapsidação e migração do DNA até o núcleo.
-Primeiros indicadores de transcrição são as expressões das proteínas E1

e E2.
-Proteína E6 liga-se ao p53

Tumores
-Proteína E7 liga-se ao pRB
*p53 e pRB são proteínas repressoras de tumores (controlam a formação de tumores –

impedem).
-O genoma é replicado no núcleo em fases distintas.
-Células basais (50 a 400 cópias)
-Junto com a divisão celular, número de cópias constante
-Nas células diferenciadas da epiderme (muitas cópias)
-Montagem coordenada pelas proteínas L1 e L2 (pode ocorrer a

formação de partículas sem material genético)
-Liberação por desestabilização da queratina intracelular (E4 – proteínas

precoces)
-Patogenia:
-É um vírus específico por espécie
-Pode haver infecção inter-espécie
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-Sarcóide eqüino: atinge normalmente membros, e são os
papilomavírus bovino tipo 1 e 2 (BPV 1 e 2) que podem infectar eqüinos, mas não é
produtiva (não produz mais partículas de vírus, não é transmissível).
-Tropismo por epitélio cutâneo ou mucoso
-O vírus necessita da diferenciação celular do epitélio para se replicar.
-Infecção ocorre através de microlesões.
-Célula sensível: tem receptores (células basais)
-Célula permissível: tem vias metabólicas (células escamosas)
-Período de Incubação:
-Varia de acordo com o local infectado
-Na pele (mãos e pés) em humanos – 6 a 18 meses
-Genitais em humanos – 2 a 6 meses
-Podem ser encontrados em PMN (células polimorfonucleares)
Ex.: BPV 1  cutâneo
BPV 4  mucosas
Papilomas e Tumores:
-Associados a neoplasias:
-Urogenitais e pulmonares em humanos
-Câncer de pele em humanos e coelhos
-Câncer do Trato Gastrointestinal superior e bexiga em bovinos
-Carcinoma oral em cães
*Células transformadas (tumorais), não permitem mais a maturação dos vírions (não
produzem mais vírus);
*Vírion: é a partícula viral completa, mas está fora das células hospedeiras.
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*Pode estar relacionado somente ao inicio do processo tumorgênico.
*A maior parte dos vírus não progride para câncer.
Diagnóstico:
-Observação de lesões
-Histológico: identifica neoplasia intra-epitelial
-Imunohistoquímica: baixa sensibilidade e especificidade
-Southern blot: ‘padrão ouro’. É um método da biologia molecular que serve para
verificar se uma determinada seqüência de DNA está ou não presente em uma amostra
de DNA analisada. Isso é feito por meio do realce do resultado de uma eletroforese em
gel de agarose.
-PCR (Reação em cadeia da polimerase): principal alvo é o gene L1.
-Muito usado na rotina laboratorial
-Níveis de sensibilidade e especificidade bons
-Permite avaliação por fragmento de restrição (enzimas de restrição)
Hibridização: sonda de DNA – não é rotina, é usado para classificar o grupo o qual
pertence. Precisa-se de pelo menos 10 a 20 cópias de genoma viral por célula. Não é
utilizado como rotina.
Imunologia:
-As lesões podem ocorrer em imunossuprimidos e imunocompetentes.
-Após a infecção primária, animais ficam mais resistentes
-Não existe resistência cruzada entres os tipos.
Herpesvirus:
-Pertencem a família Herpesviridae com subfamílias:
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-Alphaherpesviridae: ocasionam lesões na pele e mucosas
-Betaherpesviridae
ocasionam lesões sistêmicas
-Gamaherpesviridae
-Características:
-DNA fita dupla linear que varia de 125kb a 240kb.
-Capsídeo icosaédrico
-Possui tegumento (matriz – faz o preenchimento entre o envelope e o capsídeo), que

está localizado entre o capsídeo e envoltório
-Envoltório lipoproteíco e contém numerosas espículas glicoprotéicas (função de

ligação aos receptores celulares)
-São sensíveis a ácidos, solventes lipídicos, detergentes, radiação UV e desinfetantes

diversos.
-Álcool 70-70% por 5 minutos
-Formaldeido 0,2-0,8%
-Glutaraldeido 2%
-pH menor que 3 ou maior que 11 por 10 minutos
-Praticamente todos os herpesvírus causam latência
*Latência: ausência de replicação viral e de sinais clínicos.
-Uma vez infectado o animal, permanecerá com o vírus toda a vida.
-Um ancestral comum originou 2 linhagens:
-Herpesvírus de aves e mamíferos (α,β e γ)
-Herpevírus de animais de sangue frio.
Propriedades gerais:
-Codificam um grande número de enzimas
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-Síntese do DNA e montagem ocorrem no núcleo
-Envelope é adquirido na membrana nuclear ou de organelas (Ex.:

Complexo de Golgi)
-O vírus se mantém latente no hospedeiro (genoma na forma epissomal)
*Forma Epissomal: DNA viral permanece circular no núcleo da célula do

hospedeiro
-Estrutura:
-Molécula de DNA fita dupla e linear
-Capsídeo icosaédrico
-Presença de tegumento (matriz) envolvendo o capsídeo
-Envelope com glicoproteínas:
HSV-1 : 11 tipos, 9 identificados (gB, gC, gD, gE, gG, gH, gI, gK
e gM)
-Replicação:
De acordo com a função e a expressão dos genes foram divididos em:
-Genes Alfa (imediatamente precoces)

Produzidos até a replicação do genoma
-Genes Beta (precoces)
-Genes Gama (tardios) Produzidos após a replicação do genoma
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-Subfamília Alphaherpesviridae:
-Possuem vários hospedeiros
-Possuem um ciclo replicativo curto de 24h
-Destroem rapidamente as células em cultivo
-Estabelecem infecções latentes nos gânglios sensoriais e autonômicos
-Gêneros:
-Varicellovirus (VZV)
-Simplexvirus (HSV 1)
-Mardivirus (Marek)
-Iltovírus (ILTV)
-O herpesvírus simples, responsáveis por lesões cutâneas, penetram no

hospedeiro através de microfissuras ou escarificações da pele e mucosas. A primeira
multiplicação ocorre nas células epiteliais locais, seguida de disseminação pelas vias
hematogênica e neurogênica, para os órgãos alvo.
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-Nas células infectadas pode ocorrer a formação de células multinucleadas e com
corpúsculos de inclusão intranucleares.
-O estágio de vesícula é o estágio mais contagioso, devido ao elevado número de

partículas virais presentes no exsudato.
-Tratamento: uma das drogas antivirais mais utilizadas por herpesvirus simplex é
o Aciclovir (pomada ou injetável), é um análogo a desoxiguanosina que bloqueia a
síntese de DNA viral.
-Replicação:
Dois ciclos (produtivo ou lítico e latente)
-Ciclo Produtivo ou Lítico:
-Ocorre nos locais de penetração dos vírus
-Depois migra para os neurônios (entra em latência)
-Na reativação da infecção latente
-Ocorre a expressão de todos os genes virais
-Há produção de partículas infecciosas
-É incompatível com a sobrevivência das células
-Ciclo Latente:
-Ocorre em neurônios dos gânglios sensoriais e autossômicos
-Pode ocorrer em outros tipos celulares
-Caracterizado pela interrupção do ciclo produtivo
-Ocorre após a entrada no núcleo das células nervosas
-Não há produção de proteínas, genoma e nem partículas virais
-Genoma fica no núcleo pelo resto da vida do hospedeiro
-Ocorre reativação em determinadas situações (Ciclo Latente  Ciclo Lítico)
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*Corticóides: diminuem a imunidade do animal e ativam novamente o vírus que estava
latente.
-Proteínas nucleares inibem a transcrição dos genes α (interrompe o ciclo)
-Subfamília Betaherpesviridae: (sem interesse a medicina veterinária)
-Poucos hospedeiros
-Ciclo replicativo longo
-Células infectadas aumentam de volume (citomegalia)
-Podem ficar latente em tecidos glandulares, células linforreticulares, rins entre

outros
-Gêneros:
-Cytomegalovirus (HCMV)
-Muromegalovirus (cytomegalovirus murino)
-Roseolovirus (HHV-7)
-Subfamília Gamaherpesviridae:
-Poucos hospedeiros
-Estabelecem latência principalmente em células linfoblastóides.
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-Possuem potencial oncogênico
-Podem ser especificamente adaptados a linfócitos B e T.
-Gêneros:
-Lymphocryptovirus (HHV4)
-Rhadinovirus (herpesvirus Saimiri)
-Ictalurovirus (hepersvirus de Catfish)
Herpesvírus de Interesse Veterinário:
1-Herpesvírus Bovino (Alphaherpesviridae)
– BHV-1
• Rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR) – BHV 1.1
• Vulvovaginite/balanopostite (prepúcio) – BHV 1.2
– BHV-2
• Mamilite herpética bovina
– BHV-5
• Meningo encefalite
*Sorologicamente impossível diferenciar BHV1 de BHV5.
– Herpesvirus bovino (Gamaherpesviridae)
– BHV-4 (baixa morbidade – não se dissemina muito)
• Febre Catarral Maligna
• Atinge bovinos, cervídeos e ovinos
– Herpesvirus de Caprinos
– CpHV-1
• Sinais respiratórios e genitais
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• Relacionado ao BHV-1
• Geralmente infecção sub-clínicas
– Herpesvirus de suínos
– SHV-1
• Doença de Aujeszky ou pseudoraiva
• Importantes perdas na suinocultura
• Restrições no comércio internacional
• Em bovinos, ovinos, cães e gatos a infecção é fatal (não

contagiosa, pois são hospedeiros terminais)
– Herpesvirus de eqüinos
– EHV-1
• Mais relacionado a problemas reprodutivos (aborto)
– EHV-4
• Mais relacionado a problemas respiratórios
• Causa Rinopneumonite eqüina
– EHV-3
• Causa o exantema coital (lesões no trato genital)
– Herpesvirus canino
– CHV-1
• Possui somente um sorotipo viral
• Induz a formação de sincício (efeito citopatogênico caracterizado

por célula gigante multinucleada)
• Distribuído em todo o mundo.
• Causa aborto (animais se infectam no parto, há a morte dos fetos)
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– Herpesvirus de felinos
– FHV-1
– Causa rinotraqueíte infecciosa felina
– Herpesvirus de aves
– Vírus da Doença de Marek
– Altamente infecciosa
– Restrições de comércio
Diagnóstico:
– Herpesvírus bovino (BHV 1)
• Material – swab nasal, ocular, vaginal e prepucial.
• Na necropsia: traquéia, pulmão, tecidos fetais (rim, fígado e

pulmões).
• Soro – amostras pareadas (fase aguda X fase convalescente – 20 a

30 dias depois para comparação de títulos de anticorpos)
• Testes: soroneutralização (sorologia), imunofluorescência e

cultivo celular (fácil isolamento).
– Herpesvírus bovino (BHV 5) – tecido nervoso
– Herpesvírus bovino (BHV 2)
• Material – fluido vesicular, crostas
– Testes:
• Microscopia eletrônica
• Isolamento em cultivo de células (crescimento a baixas

temperaturas, 34 a 35ºC)
– Herpesvirus suino (SHV 1)
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• Material – cérebro, pulmão, tonsila, baço, fígado, rim e soro.
• Tecidos fetais – fígado e baço.
• Em outros animais – porções de tecido subcutâneo em regiões

com prurido e medula espinhal.
• Testes:
– Soroneutralização, aglutinação em látex, ELISA
– Imunofluorescência
– Inoculação em ovo embrionado (membrana

corioalantóide).
– Herpesvirus equino (EHV 1)
• Swab nasal, sangue total, fluido cérebro espinhal, soro pareado.

Tecido nervoso de animais com sinais nervosos.
• Tecidos fetais – fígado, pulmão, baço e timo
• Testes:
– Isolamento em cultivos celulares de origem eqüina e de

coelho (RK13).
– Quando associado a sintoma nervoso o isolamento é mais

difícil.
– Herpesvirus equino (EHV4)
• Material – swab nasal, sangue total (amostra pareada)
• Teste – inoculação em cultivos de origem eqüina e de coelho. O

EHV4 só replica em células de origem eqüina.
• Sorologicamente usar anticorpo monoclonal para diferenciar do

EHV 1
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Rhabdovírus:
-Pertence a ordem Monogavirales.
-Infectam plantas, artrópodes e vertebrados (peixes, aves e mamíferos).
-Principais vírus: vírus da raiva e da estomatite vesicular
-Gêneros:
-Vesiculovirus*: vírus da estomatite vesicular (VSV)
-Lyssavirus*: vírus da raiva (RabV)
-Ephemerovirus*: vírus da febre efêmera de bovinos (BEFV)
-Novirhabdovirus*: vírus da necrose hematopoiética em peixes (IHNV)
-Cytorhabdovirus: sem importância veterinária
-Nucleorhabdovirus: sem importância veterinária
-Características:
-Tem formato de bastão
-Possui genoma RNA de fita simples de 11 a 15 kpb
-Envelopado Nucleocapsídeo
-Ribonucleoproteína (RNP) Fosfoproteína
Polimerase Viral
*RNP: envolvem o RNA e dão formato ao vírus
Sequências intergênicas
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-Replicação:
-Ocorre no citoplasma da célula hospedeira
-Enzima viral faz a transcrição do RNA (Polimerase)
-A transcrição é regulada por um sistema chamado de ‘atenuação de transcrição’
-Gradiente de produção de transcrição
N>P>M>G>L
-A ‘região leader’ é transcrita e migra até o núcleo, inibindo a transcrição celular
-Vírus de Importância Veterinária:
1- Vírus da Raiva (RabV):
Características:
-Pertencem ao gênero Lyssavirus
-É uma das doenças mais documentadas da história
-Conhecida a mais de 2000 anos
-Primeiro registro de raiva canina – Demócrito 500 a.C.
-Possui 7 genótipos principais, de acordo com o local de distribuição
-Genótipo 1  Vírus da Raiva (RabV)
-Distribuição mundial (Austrália, Antártida, Ilha Britânicas e algumas ilhas da

Índia estão livres)
*Inglaterra, Japão, Irlanda e países Escandinavos – erradicaram
-É um vírus sensível por ser envelopado, é destruído por calor a 50ºC por 15
minutos, dessecamento, radiação UV, luz solar, Hipoclorito de sódio e soda caustica a
2% e solventes lipídicos
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-Hospedeiros naturais: morcegos, guaxinins, raposas, cães selvagens
-Hospedeiros terminais: bovinos, eqüinos, caninos e felinos
-Transmissão:
-Principal: por inoculação (mordedura)
-Via aerógena é rara (cavernas)
-Transplantes de doador com encefalite de causa desconhecida
-Ciclos:
-Urbano: caninos e felinos
-Rural: bovinos e eqüinos
-Aéreo: morcegos
-Silvestre: associado a espécies silvestres
-Patogenia:
O vírus é inoculado na musculatura, onde ocorre a replicação,

posteriormente ocorre o deslocamento para feixes nervosos, migrando até o SNC, onde
há uma nova replicação produzindo uma encefalite grave e freqüentemente fatal. Possui
um período de incubação bastante grande, que varia de 6 dias até 1 ano. A doença tem
um inicio por um período podrômico, com queixas incluindo irritabilidade, sensações
anormais no local do traumatismo e hiperplasia da pele. Patologicamente a raiva é uma
encefalite, com degeneração neuronal da medula espinhal e do cérebro. Os corpúsculos
de Negri, dentro dos neurônios afetados constituem a descoberta microscópica mais
característica.
*Corpúsculos de Negri: são inclusões virais citoplasmáticas localizadas nas células de

Purkinje (cerebelo) do animal afetado com raiva.
-Diagnóstico:
– Tecido – encéfalo (eqüinos também medula espinhal)
– Animais pequenos podem ser enviados ao laboratório inteiros.
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– Amostras devem ser mantidas sob refrigeração.
*Locais sem refrigeração imergir o tecido em líquido de Vallée (Tampão fosfato

(KH2PO4, K2HPO4), glicerina neutra 50%, ajustar pH em 7,4 a 7,8)
– O principal método utilizado é a Imunofluorescência.
– Inoculação intracerebral em camundongos lactentes – cultivos celulares.
– Histopatologia - observação dos corpúsculos de Negri
– PCR
– Sorológico: Utilizado para avaliar eficácia de vacinas (status sorológico

de população)
2- Vírus da Estomatite Vesicular (VSV):
Características:
-Hospedeiros: eqüinos, bovinos e suínos
-Confunde com febre aftosa (mas a febre aftosa não ataca eqüinos)
-Distribuição: mundial
-Três sorotipos importantes – Indiana, New Jersey e Alagoas (mais recente)
-Transmissão: não é bem conhecida
-Via oral ou através de abrasões
-Contato direto e indireto (fômites)
-Artrópodes
-Diagnóstico:
– Material: liquido vesicular, saliva, mucosa afetada.
– Deve ser feito rapidamente, diferencial de Febre Aftosa.
– ELISA (Antígenos ou IgG/IgM): positivo  alto nível de IgM
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– Fixação do Complemento
– RT-PCR
*Se na propriedade possui bovinos infectados e eqüinos saudáveis  pode indicar a

presença de febre aftosa
*Se na propriedade eqüinos e bovinos infectados  estomatite vesicular
Retroviridae:
-Subfamília Orthoretrovirinae que possui os 7 gêneros:
-Alpharetrovirus: vírus da leucose aviária
-Betaretrovirus: vírus Mason-Pfizer dos macacos
-Deltaretrovirus: vírus da leucose bovina
-Gammaretrovirus: vírus da leucemia felina
-Epsilonretrovirus: retrovírus de répteis tipo C
-*Lentivirus: FIV, BIV, SIV, HIV, MVV, CAEV e EIAV
-Características:
-Possuem a enzima transcriptase reversa (RNA  DNA)
-HIV possui similaridade clínica com o vírus da imunodeficiência felina (FIV)
-HIV possui similaridade genômica (estrutural) com o Maedi Visna em ovinos

(MVV)
-HTLV possui similaridade com o vírus da leucose bovina
-Infectam praticamente todos os vertebrados e está distribuído mundialmente
-Causam infecções persistentes devido a sua característica de replicação
-Alguns retrovírus podem causa tumores
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-Os vírions são esféricos e envelopados
-A superfície do envelope viral possui projeções ou espículas
-Genoma e estrutura:
-Genoma é um dímero RNA de fita simples de polaridade positiva, linear e de 10

kpb.
-4 genes principais que codificam as proteínas virais:
-Gag: codifica proteínas estruturais como a da matriz, do cápside e do

nucleocapsíde
-Pro: codifica as proteínas protease, transcriptase reversa e a integrase,
-Pol
-Env: codifica glicoproteínas de envelope (uma de superfície outra

transmembrana).
-Replicação:
Etapas:
1- Adsorção: receptor viral em contato com o receptor celular
2- Penetração: momento da entrada
3- Desnudação: cápside rompe com posterior exposição do material genético e

enzimas ao citoplasma
4- Transcrição: RNA  DNA pela ação da enzima transcriptase reversa, então

este DNA viral segue em direção ao núcleo onde há a incorporação deste
DNA viral com o DNA da célula hospedeira, havendo então a transcrição de
novos RNA virais.
5- Tradução: produção das proteínas estruturais e material genético
*Os vírus saem por brotamento para infectar outras células.
Vírus de Interesse Veterinário:
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1- Vírus da Leucose Bovina (BLV)
-Características:
-Infecta bovinos, búfalos, zebuínos e capivaras.
-Tem baixa transmissibilidade.
-Necessita contato direto entre animais em situação susceptível.
-Infecta linfócitos B.
-Mais comum forma iatrogênica.
-Pode causar tumores nos animais infectados, mas não possui genes tumorais.
-Diagnóstico:
-Sorologia por imunodifusão em ágar gel ou ELISA
2- Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) e Vírus da Leucemia Felina

(FeLV):
-Características:
-Infectam felinos domésticos e selvagens
-Distribuição mundial
-Via de transmissão: principal é a saliva
-O FeLV está associado à várias síndromes e aparecimento de tumores
-O FIV está relacionado a sintomatologia nervosa em casos avançados da

infecção.
-Diagnóstico:
-Imufluorescência a partir de esfregados sanguíneos ou dos tecidos alvos
-PCR a partir das células brancas do sangue
3- Vírus da Anemia Infecciosa Equina (EIAV):
-Características:
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-Distribuição mundial
-Infecta eqüídeos
-Pode ter reação sorológica cruzada com HIV
-Transmissão: principalmente por vetores mecânicos – tabanídeos
-Também por forma iatrogênica, através de materiais infectados com células

infectadas.
-Animais positivos são sacrificados, e todos os doentes devem ser notificados
-Diagnósticos:
-Imunodifusão em ágar gel
Reoviridae:
-Características:
-Vírus não envelopado
-Simetria icosaédrica
-Genoma de RNA fita dupla e segmentado
-Replicação ocorre no citoplasma
-3 gêneros de interesse veterinário:
-Orthoreovirus
-Rotavirus
-Orbivirus
1- Gênero Orthoreoviridae:
-Características:
-Capsídeo duplo
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-Bastante resistente ao meio ambiente
-Fontes de Infecção: excreções e secreções
-Os que atacam mamíferos possuem capacidade hemoaglutinante e os aviários

não
-Genoma de aproximadamente 23.500 pb divididos em 10 segmentos
-Segmentos divididos em 3 classes conforme o tamanho:
-L (large): L1 (precoce), L2 (tardia) e L3 (tardia)
-M (medium): M1 (tardia), M2 (tardia) e M3 (precoce)
-S (small): S1 (tardia), S2 (tardia), S3 (precoce) e S4 (precoce).
-Hospedeiros: bovinos, ovinos, suínos, cães e gatos
-Infectam tanto o trato respiratório como o intestinal, em geral sem produzir

doença.
-Produzem corpúsculos de inclusão citoplasmáticos característicos.
2- Gênero Rotavirus:
-Características:
-Capsídeo possui 3 camadas protéicas (capsídeo interno, intermediário e

externo).
Proteínas: -VP4 e VP7 são os do capsídeo externo
-VP6 do capsídeo intermediário
-VP1, VP2 e VP3 são os do capsídeo interno
-Genoma composto de 11 segmentos
-Os segmentos possuem tamanho de 600 a 3000 pb (importante no diagnóstico)
-São mais suscetíveis a recombinações.
-São estáveis no ambiente
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-resistente ao pH entre 3 e 9
-Sensível a formalina, cloro e etanol 95%
-Pode ser classificado por sorogrupos ou eletroferogrupos
-Associado a doença entérica e respiratória em várias espécies animais (suínos,

bovinos, caninos, eqüinos e ovinos) e humanos.
-Distribuído mundialmente.
-Classificação por sorogrupos:
-Baseada nas diferenças antigênicas das proteínas do capsídeo VP6.
-Forma 7 grupos (de A a G)
-A,B e C são mais encontrados em humanos e animais
-D e G: exclusivamente de animais
-A grande maioria das infecções em humanos e animais é por vírus do

grupo A.
-Do grupo B já foram identificadas infecções em humanos, bovinos,

suínos e roedores.
-No grupo C da foram identificadas infecções em humanos e suínos.
-Classificação por eletroferogrupos:
-Baseado no perfil de migração dos segmentos genômicos em PAGE

(eletroforese em gel de poliacrilamida).
-7 grupos distintos chamados eletroferotipos (A-G).
-A migração dos rotavirus A padrão, é distribuída em 4 classes de I a IV

onde:
– Segmentos 1 a 4 – classe I
– Segmentos 5 e 6 – classe II
– Segmentos 7, 8 e 9 - classe III
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– Segmento 10 e 11 – classe IV
-Diagnóstico:
-Material – fezes, secreções respiratória e do intestino.
-Testes utilizados
-PAGE (eletroforese em gel de poliacrilamida)
-Imunofluorescência
-ELISA
3-Gênero Orbivirus:
-Características:
-Infectam ruminantes domésticos e selvagens, eqüídeos, roedores, morcegos,

primatas, marsupiais e aves.
-Utilizam vetores biológicos no ciclo de infecção (mosquitos e carrapatos)
-Genoma composto por 10 segmentos de RNA, fita dupla.
-Vírus da Língua Azul (BTV)
Características:
– Doença clínica é mais comum em ovinos e cervídeos.
– Transmitido por mosquitos Culicoides.
– A infecção está distribuída em áreas tropicais e subtropicais
– No Brasil existe a evidência sorológica da infecção, entretanto sem casos

clínicos.
-Diagnóstico:
– O principal método de diagnóstico é a imunodifusão em gel de ágar.
– ELISA
– RT-PCR
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Flaviviridae:
-Características:
-Pequenos e envelopados
-RNA linear de polaridade positiva
-3 gêneros
-Flavivirus
-*Pestivirus
-Hepacivirus
-Replicação:
-Após a entrada na célula o genoma é liberado e traduzido.
-Após tradução é gerada uma poliproteína que é então clivada por enzimas
celulares e virais, dando inicio a replicação.
1- Gênero Pestivirus:
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-Características:
-Para classificação dentro do gênero pestivirus são levados em conta os

seguintes critérios:
-Hospedeiro de origem.
-Características antigênicas e reatividade cruzada.
-Homologia entre as seqüências de nucleotídeos
Espécie Abreviatura Hospedeiro
Vírus da Peste Suína Clássica CSFV Suínos
Vírus da Diarréia Viral Bovina tipo 1 BVDV – 1 Ruminantes e suínos
Vírus da Diarréia Viral Bovina tipo 2 BVDV – 2 Ruminantes e suínos
Vírus da Doença da Fronteira BDV Ovinos, caprinos e cervídeos
1- Diarréia Viral Bovina (BVDV 1 e 2)
-Características:
-Distribuição: Mundial
-Hospedeiros: Bovinos, ruminantes silvestres
-Transmissão
– Através das mucosas (oronasal/genital)
– Transplacentária
– Dois Biotipos: Citopatogênico (CP) e não-citopatogênico (NCP)
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– Dois Genótipos Tipo I e Tipo II
-Diagnostico Pestivirus:
– Material: órgãos afetados (rim, fígado, encéfalo, pulmão, abortos)e soro.
– Testes
– Isolamento e cultivo células.
– Imunofluorescência em cortes de tecido congelado.
– Soroneutralização, ELISA
Coleta e Remessa de Material para exame Laboratorial Virológico:
-Porque enviar um material para exame virológico:
-Determinar o agente causador da enfermidade
-Prevenção/intervenção – evitar a disseminação de um surto de uma determinada

doença
-Esquema de vacinas a ser adotado num plantel ou individual
-Para doenças em que o manejo do animal ou rebanho podem influenciar o

prognóstico da doença (doenças respiratórias)
-Para certificação de região (zona) livre em casos específicos (Ex.: Febre Aftosa)
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-Em inseminação artificial, transferência de embriões e transfusões sangüíneas
(BHV, BVDV e FeLV).
Fatores que afetam um diagnóstico preciso:
-Selecionar corretamente uma amostra tanto na qualidade quanto na quantidade.
-Má conservação da amostra

Falsos-negativos
-Erros na coleta dos materiais
Requisitos necessários para uma boa amostra:
-Condição da amostra:
-Boas condições de assepsia;
-Materiais realmente representativos da doença;
-As amostras devem ser coletadas das bordas das lesões, incluindo tecido
macroscopicamente normal;
-Coletar na fase aguda da doença;
-Animais vivos ou necropsiados;
-Evitar coletar material de animais que tenham sido recentemente medicados;
-Recepientes estéreis.
-Quantidade da Amostra:
-Swabs
-5 a 10 mL de sangue (soro)
-20 a 50 mL de fluídos
-30 a 100g de tecidos/órgãos
-Embalagem:
-Individualizada
-Frasco estéril
28
-Hermeticamente fechado
-Sacos plásticos
-Seringas
-Conservação da Amostra:
-Rápido processamento da amostra
- Evitando dessecação, oxidação, aquecimento, atividade enzimática
-Refrigeração em trânsito
-Swab com meio de transporte – MEM
-Tamponado e refrigerado
-Acondicionamento:
-Caixa isotérmica
-Tampa vedada com fita adesiva
-Identificação:
-Informações identificando o material ou propriedade onde se origina a amostra
-Histórico completo
-Dados: nome, telefone, e-mail, endereço, etc. O mais completo possível
Problemas no Envio do Material:
-Materiais para isolamento fixados em formol;
-Vísceras em putrefação;
-Remessa de vísceras não relacionadas com os locais de atividade ou

multiplicação dos agentes infecciosos que se deseja detectar.
Forma Correta de Envio:
29
-Coleta de material:
-durante o curso inicial da doença
-condições de assepsia (viabilizar isolamento)
-material de animais vivos ou recentemente mortos/ necropsiados
Remessa do material:
-não congelar e sim refrigerar
-swabs em meios de transporte c/ Atbs
-identificação e histórico
Urina:
Remessa do material:
-remeter no prazo máximo de 24 horas
-caixa isotérmica com gelo reciclável
Fezes:
Coleta de material:
-diretamente do reto
30
-coletar com luvas ou sacos plásticos
-conservar em geladeira a 2-8 ºC
-Remessa do material:
-em gelo
-caixa isotérmica
Carrapatos, mosquitos, etc.
Coleta de material:
-vivos → leve tração e torção (manual)
-larvas
-mortos
-Remessa do material:
-vivos → cx de papelão ou frasco de vidro ou plástico com furos na tampa
-mortos → refrigerados/congelados
Referências Bibliográficas
TRABULSI, L. R., ALTERTHUM, F. Microbiologia. 4. ed. São Paulo: Editora

Atheneu, 2005.
DULBECCO, R., GINSBERG, H. S. Microbiologia de Davis – Virologia. 2. ed. São

Paulo: Editora Harper & Row do Brasil, 1980.
31

Microbiologia Especial 03

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Pertencem à família Papillomaviridae (antigamente Papovaviridae) cujo o único

-Oncogênicos (possuem genes que podem levar ao tumor)

-Partícula resistente ao meio ambiente e a solventes lipídicos,

-Genoma Viral: DNA fita dupla (dsDNA) circular de 7,3 a 8kpb.

-A maioria apresenta seis genes que codificam proteínas não-estruturais:

-São altamente espécie-tecido-específicos

-Difícil cultivo (porque se multiplicam in vivo no epitélio escamoso

-Identificação por biologia molecular (PCR)

-Adsorção as células basais do epitélio

-Descapsidação e migração do DNA até o núcleo.

-Primeiros indicadores de transcrição são as expressões das proteínas E1

-Proteína E6 liga-se ao p53

*p53 e pRB são proteínas repressoras de tumores (controlam a formação de tumores –

-O genoma é replicado no núcleo em fases distintas.

-Células basais (50 a 400 cópias)

-Junto com a divisão celular, número de cópias constante

-Nas células diferenciadas da epiderme (muitas cópias)

-Montagem coordenada pelas proteínas L1 e L2 (pode ocorrer a

-Liberação por desestabilização da queratina intracelular (E4 – proteínas

-É um vírus específico por espécie

-Pode haver infecção inter-espécie

-Tropismo por epitélio cutâneo ou mucoso

-O vírus necessita da diferenciação celular do epitélio para se replicar.

-Infecção ocorre através de microlesões.

-Célula sensível: tem receptores (células basais)

-Célula permissível: tem vias metabólicas (células escamosas)

-Varia de acordo com o local infectado

-Na pele (mãos e pés) em humanos – 6 a 18 meses

-Genitais em humanos – 2 a 6 meses

-Podem ser encontrados em PMN (células polimorfonucleares)

Ex.: BPV 1  cutâneo

-Urogenitais e pulmonares em humanos

-Câncer de pele em humanos e coelhos

-Câncer do Trato Gastrointestinal superior e bexiga em bovinos

-Carcinoma oral em cães

*A maior parte dos vírus não progride para câncer.

-Histológico: identifica neoplasia intra-epitelial

-Imunohistoquímica: baixa sensibilidade e especificidade

-PCR (Reação em cadeia da polimerase): principal alvo é o gene L1.

-Muito usado na rotina laboratorial

-Níveis de sensibilidade e especificidade bons

-Permite avaliação por fragmento de restrição (enzimas de restrição)

-As lesões podem ocorrer em imunossuprimidos e imunocompetentes.

-Após a infecção primária, animais ficam mais resistentes

-Não existe resistência cruzada entres os tipos.

-Pertencem a família Herpesviridae com subfamílias:

-DNA fita dupla linear que varia de 125kb a 240kb.

-Possui tegumento (matriz – faz o preenchimento entre o envelope e o capsídeo), que

-Envoltório lipoproteíco e contém numerosas espículas glicoprotéicas (função de

-São sensíveis a ácidos, solventes lipídicos, detergentes, radiação UV e desinfetantes

-Álcool 70-70% por 5 minutos

-pH menor que 3 ou maior que 11 por 10 minutos

-Praticamente todos os herpesvírus causam latência

*Latência: ausência de replicação viral e de sinais clínicos.

-Uma vez infectado o animal, permanecerá com o vírus toda a vida.

-Um ancestral comum originou 2 linhagens:

-Herpesvírus de aves e mamíferos (α,β e γ)

-Herpevírus de animais de sangue frio.

-Codificam um grande número de enzimas

-Envelope é adquirido na membrana nuclear ou de organelas (Ex.:

-O vírus se mantém latente no hospedeiro (genoma na forma epissomal)

*Forma Epissomal: DNA viral permanece circular no núcleo da célula do