Anexo 1 - Diluições

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 1. PROTOCOLO DE DILUIÇÃO
1.1. Esquema de diluição

NOTA:

 Use o mesmo diluente para a diluição inicial.

 Para a maioria dos parâmetros: obtenha 1,0 mL de inóculo da diluição decisiva.

Fórmula geral:

Volume transferido (mL)

Diluição=
Volume total (mL)∗diluição anterior

Onde:
 Volume total = soma do volume transferido e volume do diluente usado
para diluição em série;
 Diluição anterior = diluição de referência do cálculo.

Exemplo: determine a diluição do tubo x, dado que o volume transferido é de

1,0 mL e esta amostra é do tubo 10-3 de volume de diluição de = 9,0 mL.
Fórmula geral:

𝑐𝑓𝑢 ⁄ 𝐴
𝑔= 𝑉 ∗𝐷𝑓

Onde:

A = Média de contagem de colônias dentro da mesma diluição e simples.

V = Volume plaquedo.

Df = fator de diluição; recíproca de diluição (exemplo 10-3 é 1/10-3 = 1000)

LEMBRETE: No método convencional, a contagem aceitável para bactérias e

bolores e leveduras deve estar entre 30 - 300 e 15 -150, respectivamente. Este
limite baseia-se na análise estatística em que o tamanho da placa é considerado
versus o espaço mínimo de diferentes colônias que podem crescer na placa,
com a mesma sobreposição. Evitando assim a subestimação.

A) Uma amostra usando diluição (revestimento único).

DILUIÇÃO
10-1
CONTAGEM 47

Contagem:

B) Uma amostra usando única diluição (placa duplicada).

 Diluição
10-1 10-2 10-3
Contagem 500 470 52 47 4 3

Contagem:

Diluições sucessivas:

Onde:

ΣC= Somatório de colônias que atingem a faixa.

n1= Número de placas com contagens dentro da faixa na primeira diluição.

n2= Número de placas com contagens dentro da faixa na segunda diluição.

D= menor diluição com contagens dentro da faixa.

C) Uma amostra usando diluições em série (revestimento duplicado).

DILUIÇÃO 10-1 10-2 10-3

CONTAGEM 500 470 52 47 4 3

Contagem:
Fórmula 2: Diluições sucessivas

Onde:

ΣC= somatório de colônias (dentro da faixa).

n1= número de placas com contagens dentro da faixa na primeira diluição.

n2= número de placas com contagens dentro da faixa na segunda diluição.

D= menor diluição com contagens dentro da faixa.

D) Uma amostra com duas diluições sucessivas (revestimento duplicado)

DILUIÇÃO 10-1 10-2 10-3

CONTAGEM 325 275 34 35 4 3

Contagem:

Fórmula para contagem em placas Compact Dry usando linhas de grade:

Onde:

A = contagem média de colônias (em pelo menos 3 grades) dentro da

mesma diluição e amostra.
 V= volume plaqueado.

m= multiplicador (para redes grandes = 20; para redes pequenas = 80).

Df = Fator de diluição recíproco da diluição (o exemplo 10-3 é 1 / 10-3 =

1000).

LEMBRETE: O cliente só pode usar as grades se houver uma distribuição

uniforme do crescimento na placa. Também, é decisão do cliente
se eles contarão as colônias usando redes pequenas ou grandes.

E) Contagem usando grandes grades:

DILUIÇÃO 10-2
CONTAGEM 4 5 7

Contagem:

F) Contagem usando grades pequenas:

DILUIÇÃO 10-2
CONTAGEM 1 2 3