Cromatografia

Aula 9
Professora Nathália Araújo
araujo.nathalia@ifro.edu.br
 Livro base

Disponível na “Minha
biblioteca”

Capítulos: de 08 a 14.
 Para que?

As operações cromatográficas têm

por objetivo isolar o metabólito de
interesse em relação a essa variedade
de moléculas, levando-o à pureza
adequada ao seu uso.
 Conceito básicos
Fase móvel ou eluente: é um solvente usado para carregar
as moléculas a serem separadas.
Fase estacionária ou fixa: não se mistura com a fase móvel,
tem a capacidade de interagir com as moléculas a serem
separadas.
 Conceito básicos
De acordo com o estado físico da fase móvel:
● Cromatografia líquida
● Cromatografia gasosa
Principais tipos de Cromatografia

Exclusão Troca iônica

01 molecular 02

Interação
03 Afinidade 04 hidrofóbica
01
Exclusão
molecular
 Exclusão molecular
Também conhecida como cromatografia de exclusão por tamanho,
cromatografia de peneira molecular, cromatografia de permeação ou
filtração em gel.
 Exclusão molecular
Príncipio:

https://www.youtube.com/watch?v=ykgXkyylvXk
02
Troca
iônica
 Troca iônica
● Baseada num processo de adsorção química entre íons com carga
positiva ou negativa, associados a uma matriz, e moléculas de carga
opostas.

● Separa as moléculas pela carga elétrica:

❖ Troca aniônica (+)
❖ Troca catiônica (-)
 Troca iônica
● Separa as moléculas pela carga elétrica:
❖ Troca aniônica (+)
❖ Troca catiônica (-)
https://www.youtube.com/watch?v=tqianb7AvnU
03

Afinidade
 Afinidade
É uma técnica de separação de espécies geralmente biológicas que se
baseia em interações altamente específicas como: enzima-substrato,
enzima-inibidor, proteína-cofator, antígeno-anticorpo, dentre outras.

❖ Ligante: imobilizado na fase estacionária.

https://www.youtube.com/watch?v=ezj9MVGCf8c
04
Interação
hidrofóbica
 Interação hidrofóbica
Moléculas proteicas em solução salina são adsorvidas por um ligante
hidrofóbico imobilizado em um suporte, para em seguida serem eluídas
por um agente tensoativo.
https://www.youtube.com/watch?v=ph8g4pHUD1w
 Questões

A cromatografia de troca iônica permite a separação de

moléculas com base em diferenças de

A) peso molecular.
B) carga elétrica.
C) tamanho e formas.
D) pH.
E) ponto isoelétrico.
 Questões
Marque V para as afirmativas verdadeiras e F para as falsas.

( ) Interação por afinidade: técnica, por exemplo, muito usada para purificação de
anticorpos. Nesse procedimento, as moléculas (anticorpos) ligam-se às partículas da
matriz que contêm o respectivo antígeno.
( ) Interação de troca iônica: a matriz é constituída por partículas com carga positiva ou
negativa e na qual a separação das proteínas depende das cargas elétricas no interior
de suas moléculas.
( ) Interação hidrofóbica: as partículas da matriz apresentam superfície hidrofóbica,
retardando a migração das proteínas hidrofílicas, que têm afinidade pelas partículas
da matriz.
( ) Filtração em gel: a matriz atua apenas como uma peneira, por onde as proteínas
migram com velocidade variável, dependendo do tamanho e forma de suas moléculas.
( ) Interação por afinidade: muitas moléculas biológicas interagem com alto grau de
especificidade, como ocorre entre enzimas e seus substratos.

A sequência está correta em

A) F, V, F, F, V. B) F, V, V, V, F. C) V, F, F, V, F.
D) V, F, F, V, V. E) V, V, V, F, F.
 Questões

Para separação de uma glicoproteína específica em um

homogeneizado tecidual pode ser utilizada uma coluna contendo
uma lecitina que reage com o carboidrato presente na molécula
de interesse. Essa descrição refere-se à qual técnica de
purificação de proteínas?

A) Cromatografia por troca iônica.

B) Eletroforese em gel de poliacrilamida.
C) Cromatografia por afinidade.
D) Eletroforese por focalização isoelétrica.
 Questões
Abaixo encontram-se explicações sobre os diferentes tipos de cromatografia em
coluna que podem ser utilizados na separação de moléculas.A esse respeito,
assinale a afirmativa incorreta.

A) Cromatografia de gel filtração separa moléculas de acordo com diferenças de

tamanho molecular.
B) Na cromatografia de interação hidrofóbica, a separação é baseada na
interação reversível entre a proteína e a superfície hidrofílica de um meio
cromatográfico.
C) A cromatografia de afinidade pode ser usada sempre que um ligante esteja
disponível para a proteína de interesse.
D) Na cromatografia de troca iônica, a separação é baseada na interação
reversível entre a proteína carregada e um meio cromatográfico com carga
oposta.
E) Na cromatografia de gel filtração, as amostras são eluídas isocraticamente e o
tampão varia de acordo com a amostra ou necessidade de outros passos de
purificação.
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