Questões – proteínas

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde -
Desenvolvimento de Vacinas Bacterianas
A respeito dos métodos de separação de biomoléculas por tamanho, assinale a
afirmativa incorreta.
Alternativas
A Cromatografia de gel filtração separa moléculas de acordo com tamanho e carga.
B Na cromatografia de gel filtração, moléculas com massa molecular abaixo do limite
de exclusão do gel vão eluir em ordem decrescente de massa molecular.
C O limite de exclusão da fase estacionária na cromatografia de gel filtração
corresponde à massa molecular da menor molécula capaz de penetrar nos poros do
gel.
D A dessalinização de uma solução de proteínas após precipitação com sulfato de
amônio pode ser feita por cromatografia de gel filtração.
E Diálise é um processo que pode ser usado para dessalinizar e concentrar soluções
de macromoléculas.

Gabarito: C. O limite de exclusão é a massa molecular da menir molécula incapaz de penetrar.

Ano: 2016 Banca: CESPE / CEBRASPE Órgão: POLÍCIA CIENTÍFICA - PE Prova: CESPE - 2016 - POLÍCIA
CIENTÍFICA - PE - Perito Criminal - Ciências Biológicas e Biomedicina
Na purificação de proteínas, são empregadas diferentes técnicas, como a
cromatografia líquida por troca iônica, na qual, as proteínas de uma mistura complexa
podem ser separadas em função de diferenças na sua carga líquida em determinados
pHs. Considerando que tenha sido realizada uma cromatografia por troca iônica
empregando-se uma resina que realiza trocas de cátions e apresenta grupos
funcionais negativamente carregados, assinale a opção que apresenta o pH
recomendado para fracionar uma mistura de proteínas a fim de se obter o melhor
perfil de separação para purificar as proteínas com ponto isoelétrico igual a 5 que
tenham interagido com essa resina.
Alternativas
A pH 8,0
B pH 3,0
C pH 12,0
D pH 7,0
E pH 10,0

Se a proteína em questão apresenta ponto isoelétrico igual a 5, então ela possui carga
neutra quando o pH=5. Assim, quanto mais ácido o meio, mais positiva a carga da
molécula, uma vez que em pH menores há maior concentração de H+ e a proteína
assume carga mais positiva. Portanto, se a questão diz que a proteína reagiu com a
resina, previamente dita de carga negativa, conclui-se que a proteína em questão
apresentava carga positiva. Tendo ela ponto isoelétrico igual a 5, conclui-se que o meio
estava mais ácido do que seu ponto isoelétrico, ou seja, com pH menor do que 5,0. A
única alternativa que apresenta pH < 5 é a letra “B”, pH=3,0.

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde -
Proteômica
Encarregado de realizar a purificação de uma proteína de interesse farmacológico,
você chegou a um protocolo de purificação que resulta em uma mistura de quatro
proteínas, com as seguintes características:

Visando purificar a proteína de interesse farmacológico (Proteína 2), você realizou uma
cromatografia de gel filtração. Após acompanhar o perfil de eluição desta
cromatografia, você identificou uma sequência de picos, que foram coletados e
analisados. Com base nos seus conhecimentos sobre separação de proteínas, assinale
a alternativa que melhor corresponde ao i.) número de picos indentificados na análise
do cromatograma desta cromatografia; ii.) qual seria o pico que conteria a proteína de
interesse; iii) e, no caso de existir a necessidade de passos adicionais em seu protocolo
de purificação. Assinale a alternativa que indica uma opção viável de método
subsequente a ser utilizado para o isolamento da proteína 2.

Alternativas
A -Cromatograma com dois picos; segundo pico na ordem de eluição conteria a
proteína de interesse; uma cromatografia de focalização isoelétrica poderia ser
utilizada para isolar a proteína de interesse.
B -Cromatograma com três picos; terceiro pico na ordem de eluição conteria a proteína
de interesse; uma cromatografia de focalização isoelétrica poderia ser utilizada para
isolar a proteína de interesse.
C -Cromatograma com quatro picos; terceiro pico na ordem de eluição conteria a
proteína de interesse; não seria necessária purificação adicional pois a proteína estaria
isolada nesta fração.
D -Cromatograma com quatro picos; terceiro pico na ordem de eluição conteria a
proteína de interesse; seria necessária uma etapa de purificação adicional por meio de
uma coluna de troca iônica.
E -Cromatograma com três picos; o segundo pico na ordem de eluição conteria a
proteína de interesse; uma cromatografia de focalização isoelétrica poderia ser
utilizada para isolar a proteína de interesse.

Gabarito:B

A cromatografia de filtração em gel separa proteínas de acordo com o tamanho. As

proteínas maiores não conseguem penetrar nos grânulos de polímeros com poros
projetados de determinado tamanho e eluem mais cedo, ao contrário das proteínas
menores, que penetram nas cavidades e são retardadas em seu caminho de labirintos
através da coluna.

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde -
Desenvolvimento de Vacinas Bacterianas
Abaixo encontram-se explicações sobre os diferentes tipos de cromatografia em
coluna que podem ser utilizados na separação de moléculas.
A esse respeito, assinale a afirmativa incorreta.
Alternativas
A A cromatografia de gel filtração separa moléculas de acordo com diferenças de
tamanho molecular.
B Na cromatografia de interação hidrofóbica, a separação é baseada na interação
reversível entre a proteína e a superfície hidrofílica de um meio cromatográfico.
C A cromatografia de afinidade pode ser usada sempre que um ligante esteja
disponível para a proteína de interesse.
D Na cromatografia de troca iônica, a separação é baseada na interação reversível
entre a proteína carregada e um meio cromatográfico com carga oposta.
E Na cromatografia de gel filtração, as amostras são eluídas isocraticamente e o
tampão varia de acordo com a amostra ou necessidade de outros passos de
purificação.

Gabarito: B

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde -
Desenvolvimento de Vacinas Bacterianas
Abaixo encontram-se explicações sobre os diferentes tipos de cromatografia em
coluna que podem ser utilizados na separação de moléculas.
A esse respeito, assinale a afirmativa incorreta.
Alternativas
A A cromatografia de gel filtração separa moléculas de acordo com diferenças de
tamanho molecular.
B -Na cromatografia de interação hidrofóbica, a separação é baseada na interação
reversível entre a proteína e a superfície hidrofílica de um meio cromatográfico.
C -A cromatografia de afinidade pode ser usada sempre que um ligante esteja
disponível para a proteína de interesse.
D Na cromatografia de troca iônica, a separação é baseada na interação reversível
entre a proteína carregada e um meio cromatográfico com carga oposta.
E -Na cromatografia de gel filtração, as amostras são eluídas isocraticamente e o
tampão varia de acordo com a amostra ou necessidade de outros passos de
purificação.

Gabarito: B

Na cromatografia de interação hidrofóbica, as proteínas que passam pela coluna e que

possuem cadeias laterais de aminoácidos hidrofóbicos em suas superfícies são capazes de
interagir e se ligar aos grupos hidrofóbicos da coluna.

Ano: 2009
Banca: Fundação Getúlio Vargas - FGV
Prova: FGV - PC RJ - Perito Criminal - Área Biologia - 2009
A eletroforese de proteínas por eletroforese em gel de poliacrilamida –SDS ou SDS PAGE é considerada o mais
importante procedimento de separação, sendo indicada para proteínas insolúveis, proteínas complexadas em
grandes agregados ou até para lipídeos. Duas versões do método estão disponíveis: a eletroforese
monodimensional e a bidimensional. Na eletroforese bidimensional, as proteínas são separadas pelo seu ponto
isoelétrico, em um tubo de gel de poliacrilamida. Após a separação, esse gel é colocado deitado sobre um gel
maior, no sistema SDS-PAGE. Assinale a alternativa que descreve corretamente a função dos compostos
utilizados nesse método.
A -O duodecilsulfato de sódio (SDS) é um detergente forte, carregado positivamente, que se liga a regiões
hidrofóbicas das moléculas protéicas. Já o βmercaptoetanol, o agente redutor, ocasiona a estabilização das
pontes disulfeto (S-S). Desse modo é garantido a compactação das cadeias polipeptídicas e a sua a separação
pela forma.
B-O duodecilsulfato de sódio (SDS) é um detergente forte, carregado negativamente, que se liga a regiões
hidrofóbica das moléculas protéicas. Já a uréia, o agente redutor, ocasiona a estabilização das pontes disulfeto
(S-S). Desse modo é garantida a compactação das cadeias polipeptídicas e a sua separação pela forma;
C-O duodecilsulfato de sódio (SDS) é um detergente forte, carregado negativamente, que se liga a regiões
hidrofóbicas das moléculas protéicas. Já o βmercaptoetanol, o agente redutor, ocasiona a quebra das pontes
disulfeto (S-S). Desse modo é garantido o desdobramento das cadeias polipeptídicas e sua separação pelo
tamanho.
D -O duodecilsulfato de sódio (SDS) é um composto, produzido pela polimerização do gel de poliacrilamida em
presença de uréia, que atua como um redutor forte, carregado negativamente, que se liga a regiões hidrofóbica
das moléculas protéicas, retardando seu deslocamento no gel. Já a o βmercaptoetanol, o agente desnaturante,
ocasiona a estabilização das pontes disulfeto (S-S). Desse modo é garantido o desdobramento das cadeias
polipeptídicas e sua separação pelo tamanho.
E -O duodecilsulfato de sódio (SDS) é um composto, produzido pela polimerização do gel de poliacrilamida em
presença de uréia, que atua como um redutor forte, carregado positivamente, que se liga a regiões hidrofóbica
das moléculas protéicas, retardando seu deslocamento no gel. Já a uréia, o agente redutor, ocasiona a
estabilização das quebra das disulfeto (S-S). Desse modo é garantida a compactação das cadeias polipeptídicas e
sua separação pelo tamanho.

Gabarito: C

A eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) com dodecilsulfato de sódio (SDS)

possibilita a separação de proteínas com base em suas massas moleculares. Neste
método, o detergente SDS é incorporado ao tampão de corrida. O SDS confere uma
carga negativa líquida às proteínas, mascarando sua carga intrínseca. À medida que as
proteínas são separadas na presença de SDS e reagentes desnaturantes, elas se tornam
menos globulares e mais lineares. Como resultado, a velocidade na qual as proteínas
ligadas ao SDS migram através do gel depende principalmente de seu tamanho,
permitindo estimar o peso da molécula comparando-a a padrões de proteínas.

Ano: 2010 Banca: FGV Órgão: FIOCRUZ Prova: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde -
Proteômica
A análise proteômica e a proteômica quantitativa são áreas da química de proteínas
que vem se desenvolvendo com grande rapidez ao longo dos últimos anos. Sobre o
tema, assinale a alternativa incorreta.
Alternativas
A Uma vantagem da análise proteômica sobre a análise da expressão gênica no nível
de RNA é que a proteômica identifica produtos gênicos que são de fato expressos e
não apenas mRNAs que podem não ser traduzidos.
B Uma das grandes limitações atuais da análise proteômica reside no número de
proteínas que pode ser analisada em cada experimento, que sempre representará
apenas uma fração das proteínas expressas em determinada situação.
C A análise proteômica é limitada a proteínas solúveis, não sendo aplicável a proteínas
mais complexas como as proteínas de membrana.
D A análise proteômica permite a detecção de modificações pós-traducionais, o que
amplia a relevância biológica dos dados obtidos.
E Um dos pré-requisitos básicos da proteômica é que o organismo analisado já tenha
seu genoma sequenciado, ou pelo menos uma boa coleção de cDNAs esteja
disponível.
Gabarito: C

INMETRO 2010 -QUESTÃO 41 Para entender a função das proteínas é fundamental

compreender sua estrutura e as relações entre os átomos que as compõem. Acerca da
estrutura das proteínas, assinale a opção correta.

A A estrutura primária de uma proteína refere-se ao arranjo espacial de suas

subunidades.

B Para identificar a extremidade aminoterminal da cadeia polipeptídica empregam-se as

exopeptidases, que pertencem à classe das carboxipeptidases.

C O número de polipeptídios quimicamente distintos de uma proteína é definido a

partir da identificação dos grupos terminais da cadeia polipeptídica.

D A estrutura terciária da proteína envolve um arranjo espacial local do esqueleto de um

polipeptídio.

E O método de degradação de Edman consiste na liberação de todos os resíduos

terminais, fato que afeta o restante da cadeia polipeptídica.

Gabarito: C. A estrutura quaternária refere-se ao arranjo espacial de subunidades e à

natureza de seus contatos. Um método conhecido para determinar a ordem em que os
aminoácidos estão ligados é a degradação de Edman, utilizando como reagente o isotiocianato
de fenila. A degradação de Edman só permite o seqüenciamento de polipeptídeos pequenos
(com até 50 aminoácidos). No caso de peptídeos maiores, quebra-se as cadeias longas em
fragmentos menores, utilizando enzimas hidrolíticas. Embora a degradação de Edman ainda
seja utilizada, a espectrometria de massas é atualmente o método escolhido para a
determinação da sequência de aminoácidos.