Princípios e Métodos de análise de Proteínas

Atividade de fixação:

1- Em que se baseia a técnica de eletroforese? Explique o seu funcionamento na separação de proteínas.

R-A eletroforese é uma técnica que visa separar determinados elementos através do movimento de partículas
em um meio que pode ser um gel ou um fluído submetido a um campo magnético pelo tipo de carga, massa
molecular e força de ligação que possuem

2- Qual a importância da eletroforese nas análises de proteínas?

R- Possuem papel importante na análise laboratorial e também em pesquisas científicas

3- Por que a eletroforese não é o método mais adequado para purificar proteínas? Qual seria o método mais
adequado para purificar e qual a diferença entre eles?
R- A eletroforese não é muito indicada porque tem um potencial neuro tóxico, o preparo do gel é difícil e
demorada e afeta sua estrutura e a funçã
o
4- Qual a importância do pH isoelétrico em estudos com proteínas?
R - O ponto isoelétrico de uma proteína corresponde ao valor de pH em que a molécula se encontre
eletricamente neutra, ou seja, quando o número de cargas positivas for igual ao número de cargas negativas.
Em pH diferentes do ponto isoelétrico ocorre um aumento da solubilidade protéica, devido ao aparecimento
de cargas positivas ou negativas em excesso sobre as cadeias de proteínas.

Espectroscopia de absorção
1. Do que consiste a espectroscopia de absorção?
R- Quando a radiação passa através de uma camada de um sólido, líquido ou gás, certas frequências podem
ser seletivamente removidas por absorção, um processo pelo qual a energia eletromagnética é transferida
para átomos, íons ou moléculas que compõem a amostra.

2. Quais as vantagens?
R- Boa sensibilidade, Baixo custo de análise, Fácil operação, Equipamentos robustos

3. Quais as aplicações da espectrofotometria UV-VIS?

R- A técnica espectrofotométrica no UV-Vis tem diversas aplicações, principalmente na identificação de grupos
orgânicos cromóforos e íons de metais de transição que absorvem radiação nesses comprimentos de ondas.

4. Quais as variáveis que afetam a absorbância:

R- Variáveis que influenciam a Absorbância: As variáveis como efeito do solvente, temperatura, e outras
substancias presentes na amostra, devem ter seus efeitos conhecidos e as condições para a análise, escolhidas
de maneira que a absorbância não seja afetada.

5. Qual a relação entre absorbância e concentração?

R- Relação entre absorbância e Concentração: Os padrões de calibração para uma análise estrofotometrica
devem ser os mais semelhantes possíveis em relação a composição global das amostras verdadeiras e devem
abranger uma faixa razoável de concentrações do analito.

Métodos de Dosagem Hormonal

1. Quais os métodos de dosagem hormonal?
R-Métodos colorimétricos; Métodos radioativos; Imunoensaios; HPLC

2. Defina o método colorimético com suas principais características:

R- Métodos colorimétricos: Dosagens obtidas de reações entre o hormônio e um reagente químico,
provocando alteração de cor na solução.São baseados nas propriedades químicas das moléculas/ São pouco
específicos / Dosagem de 17-cetoesteróides e ácido vanil-mandélico – se encontra em desuso

5. Quais os tipos de imunoensaios ? R- Imunoensaios: Métodos radioativos Radioimunoensaio (RIA), Métodos

não-radioativos Imunoenzimaticos (ELISA)

6. Como é construído o anticorpo?

R- O anticorpo é constituído por quatro cadeias polipeptídicas, possuindo dois sítios de ligação para o
antígeno. O anticorpo é formado de duas cadeias leves e duas cadeias pesadas unidas por pontes dissulfeto.

7. Quais as características dos anticorpos?

Afinidade, Avidez, Reação cruzada

8. Como ocorre a quantificação de Homônimos e outras moléculas por Imunoensaios ?

Elisa:
-O teste é feito em placas plásticas de microtitulação ou em tubos (suporte sólido ), onde se coloca o
anticorpo em concentrações adequadas. -O teste identifica e quantifica Ag ou hormônio presente na
amostra utilizando anticorpos, conjugados com enzimas.
-A reação ocorre em meio líquido. A atividade enzimática é proporcional à concentração de Ag ou hormônio
da amostra
. -A quantidade de Ag ou hormônio da amostra é mensurada pela determinação da quantidade de produto
final corado, através de leitura em fotocolorímetro.
-O produto final corado surge por ação da enzima que converte um substrato incolor em um produto
colorido (ou o substrato alterado pela enzima induz mudança de cor de uma substância indicadora).
-Principais tipos de ELISA: indireto, sanduíche, competição e captura.

9. Defina os tipos diferentes de ELISA:

ELISA Direto: Quando o antígeno/alvo está ligado na placa, e um anticorpo (AC) primário já conjugado com
um emissor de cor ou fluorescência é colocado diretamente sobre o alvo. A sensibilidade é a mais baixa e
quase não é usado.
ELISA Indireto: Se utiliza um AC secundário marcado. Apresenta maior especificidade no teste, por usar o AC
secundário
ELISA Sanduíche: Este provavelmente é o ELISA mais comum, e parte do princípio de ter o anticorpo de captura
específico para o alvo já adsorvido em uma placa (ou deixado para se ligar à placa overnight, o que chamam
de sensibilizar a placa), e a amostra é adicionada na placa, incubada, e os analitos-alvo se ligam ao seu AC de
captura, e ficam aderidos à placa. Então um outro AC específico para o alvo é adicionado, e um AC secundário
marcado, que tem como alvo o AC colocado anteriormente é adicionado. Possui grande sensibilidade e poder
de amplificação do sinal.
ELISA de Competição: Utiliza um antígeno marcado para competir com o alvo. O antígeno marcado se liga
menos quando houver mais antígeno não marcado (da amostra) e assim, a cor fica mais fraca quando houver
muito do alvo na amostra. É utilizado principalmente quando o alvo possui poucos epítopos de ligação ou é
muito pequeno