CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI

NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD

RELATÓRIO DE PRÁTICA VIRTUAL

IDENTIFICAÇÃO
1. Acadêmico: Rafael Lourenço de Oliveira
2. Matrícula: 6507268
3. Curso: Farmácia 4. Turma: FLC0273BFR
5. Disciplina Imunologia Clínica
6. Tutor(a) Externo(a): Paloma Coelho

DADOS DA PRÁTICA
1. Título: ELISA para detecções de doenças virais(HIV)
2. Semestre: 8° Semestre
3. Data: 13/03/2024

INTRODUÇÃO

O vírus da imunodeficiência humana (HIV) corresponde a um retrovírus pertencente à

família Retroviridae, subfamília Lentivirinae. Dois tipos de vírus foram associados à síndrome
da imunodeficiência adquirida, mais conhecida pela sigla aids, do inglês acquired
immunodeficiency syndrome. Esses vírus, mesmo relacionados, apresentam diferenças
significativas a nível genômico e biológico (PINTO & STRUCHINER, 2006).

Anualmente, entre 2,5 e 3 milhões de pessoas se infectam com o vírus HIV. Muitas delas
levam anos até descobrirem que estão contaminadas. Na verdade, cerca de um terço dos
indivíduos atualmente contaminados pelo HIV não sabem que são soropositivos, pois nunca
realizaram o teste para o diagnóstico, chamado sorologia para o HIV. Isso corresponde a mais
de 10 milhões de pessoas em todo o mundo. Desde a década de 1980, quando os primeiros
testes para o HIV foram desenvolvidos, muita coisa mudou, principalmente em relação à
janela imunológica, que inicialmente era de até 6 meses e hoje caiu para apenas 4 semanas.
Neste tipo de teste não se pesquisa diretamente a presença do vírus, mas sim a existência de
anticorpos contra o mesmo. Existem outras metodologias além do ELISA para se detectar
anticorpos contra o vírus HIV, como o MEIA, EQL e ELFA e CMIA, mas o ELISA ainda é o método
mais popular.

OBJETIVOS
Será ultilizado o ensaio imunoenzimático (ELISA) de terceira geração para o diagnóstico do
vírus HIV. Esse ensaio consegue detectar, com elevada especificidade e sensibilidade, anticorpos
do tipo IgM, IgG e IgA presentes em amostras de soro ou plasma, os quais foram produzidos
contra diversos antígenos virais.
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• Aplicar a metodologia padrão utilizada em diversos ensaios imunoenzimáticos;

• interpretar e compreender os resultados obtidos individualmente na análise das
amostras;
• organizar o procedimento do ensaio imunoenzimático para a análise de diferente
número de amostras;
• identificar as medidas de biossegurança necessárias para o diagnóstico por ensaios
imunoenzimáticos.
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MATERIAIS
• Adhesive PCR film;
• Bancada com pia;
• Béquer de 500 mL com hipoclorito de sódio;
• Conjugado;
• Controle negativo;
• Controle positivo;
• Cuba para reagente;
• Espectrofotômetro para leitura de policubeta;
• Estufa bacteriológica;
• Lavadora de microplaca;
• Micropipeta de 50 µL;
• Micropipeta multicanal de 1000 µL;
• Microplaca de 96 poços;
• Papel toalha;
• Ponteira para micropipeta de 50 µL;
• Ponteira para micropipeta multicanal de 1000 µL;
• Revelador;
• Stopper;
• Suporte para micropipeta;
• Suporte para tubo de coleta;
• Tampão de lavagem;
• Tubo de coleta com amostra de soro.

METODOLOGIA
No experimento, será utilizado um kit comercial de ELISA de terceira geração para
diagnóstico de HIV, o qual permite a detecção de anticorpos do tipo IgM, IgG e IgA produzidos
contra antígenos do HIV. No procedimento, serão analisadas amostras de soro ou plasma de
pacientes utilizando os componentes do kit comercial, como as policubetas de poliestireno
sensibilizadas com antígenos recombinantes, o conjugado de antígenos recombinantes
ligados à enzima peroxidase e a solução reveladora contendo peroxido de hidrogênio. O
experimento consiste em três períodos de incubação e dois períodos de lavagem das placas
de ensaio, concluindo com a adição da solução de parada da reação enzimática. Finalmente,
os resultados serão obtidos pela leitura da densidade óptica da reação enzimática em
espectrofotômetro.
 RESULTADOS E DISCUSSÕES

1. Conceitue o ensaio imunoenzimático.

É um método utilizado para detectar a presença de uma molécula ligante (comumente uma
proteína) em amostra líquida usando anticorpos específicos ligados a uma fase sólida. Em sua
forma mais simples, os antígenos são ligados numa superfície sólida neutra.

2. Cite exames que podem ser realizados pelo método de ELISA.

Artrite Reumatoide), alergias, patologias que desencadeiam produção de imunoglobulinas,

doenças infectocontagiosas (ex.: Doença de Chagas, HIV), dosagem de hormônios (ex.: teste de
gravidez, T3, T4, testosterona, estradiol e progesterona), marcadores tumorais e proteínas séricas,
doenças virais, doenças bacterianas e de protozoários (ex.: Rubéola, Toxoplasmose e Herpes). E
para atender essas diversas funções, tem-se diversos tipos de teste,
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REGISTRO FOTOGRÁFICO

REFERÊNCIAS
YUAN, Y. [et al.]. Design and characterization of a novel artificial peroxidase. Catalysts,
v. 9, n. 2, p. 168, Fev. 2019.